Name: simultaneous isolation and culture of atrial myocytes, ventricular myocytes, and non-myocytes from an adult mouse heart
Uploaded: 2020-06-14T15:00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Simultaneous Isolation and Culture of Atrial Myocytes, Ventricular Myocytes, and Non-Myocytes from an Adult Mouse Heart at JoVE.com

E.A.B تم بدعم من المعاهد الوطنية للصحة (1F31HL140850)، ومؤسسة ARCS، وشركة، سان دييغو الفصل، وهو Rees-Stealy مؤسسة البحوث فيليبس Gausewitz، دكتوراه في معهد القلب SDSU. وتتلقى .B و A.S..B الدعم من مؤسسة إناموري. CCG من قبل (NIH) يمنح R01 HL135893، R01 HL141463 و HL149931.

<ol>
	<li>Peter, A. K., Bjerke, M. A., Leinwand, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+the+cardiac+myocyte+in+heart+disease.">Biology of the cardiac myocyte in heart disease.</a> Molecular Biology of the Cell. 27 (14), 2149-2160 (2016).</li><li>Kruppenbacher, J. P., May, T., Eggers, H. J., Piper, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyocytes+of+adult+mice+in+long-term+culture.">Cardiomyocytes of adult mice in long-term culture.</a> Naturwissenschaften. 80 (3), 132-134 (1993).</li><li>Ackers-Johnson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simplified,+Langendorff-Free+Method+for+Concomitant+Isolation+of+Viable+Cardiac+Myocytes+and+Nonmyocytes+From+the+Adult+Mouse+Heart.">A Simplified, Langendorff-Free Method for Concomitant Isolation of Viable Cardiac Myocytes and Nonmyocytes From the Adult Mouse Heart.</a> Circulation Research. 119 (8), 909-920 (2016).</li><li>Jin, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATF6+decreases+myocardial+ischemia/reperfusion+damage+and+links+ER+stress+and+oxidative+stress+signaling+pathways+in+the+heart.">ATF6 decreases myocardial ischemia/reperfusion damage and links ER stress and oxidative stress signaling pathways in the heart.</a> Circulation Research. 120 (5), 862-875 (2017).</li><li>Judd, J., Lovas, J., Huang, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+Culture+and+Transduction+of+Adult+Mouse+Cardiomyocytes.">Isolation, Culture and Transduction of Adult Mouse Cardiomyocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (114), e54012 (2016).</li><li>Li, D., Wu, J., Bai, Y., Zhao, X., Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Culture+of+Adult+Mouse+Cardiomyocytes+for+Cell+Signaling+and+in+vitro+Cardiac+Hypertrophy.">Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy.</a> Journal of Visualized Experiments. (87), e51357 (2014).</li><li>O'Connell, T. D., Ni, Y. G., Lin, K. M., Han, H. P., Yan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+adult+cardiac+myocytes+for+signaling+studies.">Isolation and culture of adult cardiac myocytes for signaling studies.</a> AfCS Research Reports. 1 (5), 1-9 (2003).</li><li>Pinz, I., Zhu, M., Mende, U., Ingwall, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improvised+isolation+procedure+for+adult+mouse+cardiomyocytes.">An improvised isolation procedure for adult mouse cardiomyocytes.</a> Cell Biochemistry and Biophysics. 61 (1), 93-101 (2011).</li><li>Piper, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+of+calcium+stable+adult+cardiac+myocytes.">Culturing of calcium stable adult cardiac myocytes.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 14 (7), 397-412 (1982).</li><li>Shioya, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+for+isolating+healthy+heart+cells+from+mouse+models.">A simple technique for isolating healthy heart cells from mouse models.</a> Journal of Physiological Sciences. 57 (6), 327-335 (2007).</li><li>Omatsu-Kanbe, M., Yoshioka, K., Fukunaga, R., Sagawa, H., Matsuura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+antegrade+perfusion+method+for+isolating+viable+single+cardiomyocytes+from+neonatal+and+aged+mice.">A simple antegrade perfusion method for isolating viable single cardiomyocytes from neonatal and aged mice.</a> Physiological Reports. 6 (9), 13688 (2018).</li><li>Jansen, H. J., Rose, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Atrial+Myocytes+from+Adult+Mice.">Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (149), e59588 (2019).</li><li>Yao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Cardiomyocyte+NLRP3+Inflammasome+Signaling+Promotes+Atrial+Fibrillation.">Enhanced Cardiomyocyte NLRP3 Inflammasome Signaling Promotes Atrial Fibrillation.</a> Circulation. 138 (20), 2227-2242 (2018).</li><li>Cha, Y., Redfield, M. M., Shen, W., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atrial+Fibrillation+and+Ventricular+Dysfunction:+A+Vicious+Electromechanical+Cycle.">Atrial Fibrillation and Ventricular Dysfunction: A Vicious Electromechanical Cycle.</a> Circulation. 109 (23), 2839-2843 (2004).</li><li>Issa, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Left+atrial+size+and+heart+failure+hospitalization+in+patients+with+diastolic+dysfunction+and+preserved+ejection+fraction.">Left atrial size and heart failure hospitalization in patients with diastolic dysfunction and preserved ejection fraction.</a> Journal of Cardiovascular Echography. 27 (1), 1-6 (2017).</li><li>de Bold, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atrial+natriuretic+factor:+a+hormone+produced+by+the+heart.">Atrial natriuretic factor: a hormone produced by the heart.</a> Science. 230 (4727), 767-770 (1985).</li><li>McGrath, M. F., de Bold, M. L., de Bold, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+endocrine+function+of+the+heart.">The endocrine function of the heart.</a> Trends in Endocrinology and Metabolism. 16 (10), 459-477 (2005).</li><li>Doevendans, P. A., Daemen, M. J., de Muinck, E. D., Smits, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+phenotyping+in+mice.">Cardiovascular phenotyping in mice.</a> Cardiovascular Research. 39 (1), 34-49 (1998).</li><li>Banerjee, I., Fuseler, J. W., Price, R. L., Borg, T. K., Baudino, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+cell+types+and+numbers+during+cardiac+development+in+the+neonatal+and+adult+rat+and+mouse.">Determination of cell types and numbers during cardiac development in the neonatal and adult rat and mouse.</a> American Journal of Physiology. 293, 1883-1891 (2007).</li><li>Jugdutt, B. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventricular+remodeling+after+infarction+and+the+extracellular+collagen+matrix:+when+is+enough+enough.">Ventricular remodeling after infarction and the extracellular collagen matrix: when is enough enough.</a> Circulation. 108, 1395-1403 (2003).</li><li>Omatsu-Kanbe, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+cardiac+progenitors+that+survive+in+the+ischemic+human+heart+after+ventricular+myocyte+death.">Identification of cardiac progenitors that survive in the ischemic human heart after ventricular myocyte death.</a> Scientific Reports. , 7 (2017).</li><li>Song, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+repair+by+reprogramming+non-myocytes+with+cardiac+transcription+factors.">Heart repair by reprogramming non-myocytes with cardiac transcription factors.</a> Nature. 485, 599-604 (2012).</li><li>Limana, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=bcl-2+overexpression+promotes+myocyte+proliferation.">bcl-2 overexpression promotes myocyte proliferation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99, 6257-6262 (2002).</li><li>Pinto, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+cardiac+cellular+composition.">Revisiting cardiac cellular composition.</a> Circulation Research. 118 (3), 400-409 (2015).</li><li>Chen, W., Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+inflammatory+and+fibrogenic+pathways+in+heart+failure+associated+with+aging.">The role of inflammatory and fibrogenic pathways in heart failure associated with aging.</a> Heart Failure Reviews. 15, 415-422 (2010).</li><li>Daly, M. J., Elz, J. S., Nayler, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contracture+and+the+calcium+paradox+in+the+rat+heart.">Contracture and the calcium paradox in the rat heart.</a> Circulation Research. 61 (4), 560-569 (1987).</li><li>Li, Z., Sharma, R. V., Duan, D., Davisson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus-mediated+gene+transfer+to+adult+mouse+cardiomyocytes+is+selectively+influenced+by+culture+medium.">Adenovirus-mediated gene transfer to adult mouse cardiomyocytes is selectively influenced by culture medium.</a> Journal of Gene Medicine. 5 (9), 765-772 (2003).</li></ol>

ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

نوعية الخلايا المعزولة باستخدام الإجراء الموصوف هنا، كما يحددها الغلة الخلية والصحة العامة للخلايا في الثقافة، يعتمد على العديد من العوامل التي يمكن السيطرة عليها. بدءا من الفأرة نفسها، وقد تم توثيق أن الإجهاد المفروض على الحيوان يمكن أن تؤثر سلبا على انتاج الخلية وقابليتها للحياة في الثقافة، ويفترض أن يرجع ذلك إلى الكورتيزول النظامية الزائدة، catecholamines، وحالة hypercontractile من أنسجة القلب2،5،7. لهذه الأسباب، ينبغي اتخاذ تدابير لتجنب إثارة الذعر الحيوان قبل التضحية. وتشمل هذه التدابير تغطية قفص الحيوان والحد من الوقت خارج فيفاريوم قبل التضحية. الهيبارين والعديد من الباربيتيورات المستخدمة عادة للقتل الرحيم يمكن أن تؤثر على مسارات الإشارات; وهكذا، ينبغي تخصيص الطريقة المثلى للقتل الرحيم وفقا لذلك. عمر الحيوان له تأثير كبير على نوعية و صلاحية الخلايا المعزولة، على الأرجح بسبب تراكم تدريجي للتليف الخلالي يحدث بالتزامن مع عملية الشيخوخة، والتي يمكن أن تؤثر على هضم الأنسجة25. في البيانات غير المعروضة هنا ، في حين أن الطريقة المذكورة أعلاه تعمل في الفئران التي تصل إلى 78 أسبوعًا ، كانت جودة الخلايا أقل في هذه الحيوانات القديمة.
الخطوة الأكثر أهمية في عملية العزل الموصوفة ، فضلا عن بروتوكولات أخرى تتميز جهاز Langendorff للانفورل ، هو التكنغي والقذف الأولي للقلب. للحصول على أفضل النتائج، ينبغي أن يستغرق الوقت من الزرع القلبي إلى التكبل من الشريان الأبهر الصاعد والشروع في ضخ لا أكثر من 90 s. بالإضافة إلى الوقت، هناك عاملان مهمان إضافيان هما عمق الكانولا وإمكانية إدخال emboli الهواء من جهاز الضخ. وبناء على ذلك، ينبغي أن تقدم كانولا في الشريان الأورطي التصاعدي حتى لا يدخل جذر الأبهر وعرقلة الصمام الأبهري، والتي من شأنها أن تضعف ضخ الأوعية التاجية.
أثناء عملية الهضم ، من المهم اختبار صلابة القلب بانتظام لتجنب التعرض لفترات طويلة لانزيم الكولاجيناز الهضمي ، مما يقلل من تحمل الكالسيوم في عضلة القلب. تم تصميم البروتوكول الموصوف أعلاه لإعادة إدخال الكالسيوم في ثقافات myocyte البطينية المعزولة للحد من موت الخصيتين القلبية عن طريق تدفق الكالسيوم غير المناسب عبر قنوات الكالسيوم المخزنية التي تعمل. وتجدر الإشارة إلى أن إعادة إدخال الكالسيوم خطوة لا ينبغي أن يتم لثقافات myocyte الأذينية المعزولة، وهذا من شأنه أن يعزز موت الخلايا خلال الثقافة قصيرة وطويلة الأجل12. لمزيد من الاحتياطات، وتشمل المخازن المؤقتة الضخ والهضم المستخدمة هنا مثبط تقلص عضلة القلب butanedione monoxime (BDM) لتجنب فرط الاحتقان من myocytes المعزولة، فضلا عن مفارقة الكالسيوم، وكلاهما تأثير myocyte قابلية البقاء26. ومع ذلك، ينبغي ملاحظة التحول من BDM إلى blebbistatin، كما هو العامل المفضل المضادة للانكماش في الحفاظ على وسائل الإعلام ل myocytes القلب المعزولة. في البيانات غير المعروضة، blebbistatin يمنح قابلية أكبر للحياة لثقافة طويلة الأجل من myocytes القلب المعزولة.
بعد العزلة مباشرة ، من المهم النظر في تداعيات الثقافة طويلة الأجل للخلايا القلبية ، وخاصة الخلايا myocytes. ويستند القلب غير myocyte عزل وعبادة البروتوكول الموصوفة هنا على الطرق الشائعة التي تستفيد من الكثافات المختلفة والخصائص اللاصقة للخلايا القلبية المختلفة. فائدة غير myocytes هي إمكاناتها التوسعية العالية في الثقافة. وهكذا، على عكس myocytes القلب، فهي قابلة لتمرين لإدامة. ومع ذلك، فمن المعروف أن ظروف زراعة، بما في ذلك مكملات المتوسطة مع FBS، يمكن أن تؤثر على وظائف myocyte القلب27. تم تصميم وسائل الإعلام الثقافية الموصوفة هنا لتحسين الجدوى والحد من الاضطرابات الوظيفية ، خاصة بالنسبة للوسيعات الأذينية المعزولة. في حين لم يلاحظ أي ضعف القدرة على الانقبال في الخلايا العضلية القلبية المعزولة بعد الثقافة في غياب مكملات blebbistatin ، يجب إجراء الدراسات التي تركز على الفيزيولوجيا الكهربائية ، والانقبالية ، وغيرها من الخلايا المفردة في الإشارات الجزيئية القائمة على الجسم الحي بعد وقت قصير من العزلة ، عندما لا يزال الهيكل الساركومبي والتوقيع الجزيئي يحاكي ذلك القلب السليم.
السمة المميزة ل myocyte الأذيني هو قدرته على ضوء القمر كخلية الغدد الصماء مع قدرة إفرازية هائلة، بالإضافة إلى وظيفة انكماشها. في ظل الظروف الفسيولوجية، myocytes الأذينية تنتج كميات كبيرة من ANP، والتي يتم تخزينها في إندوبلاسميك ريتيكولوم وفي حبيبات إفرازية كثيفة كبيرة تستعد ل exocytosis منظم على تلقي حافز16،17. في حين أن العديد من الدراسات المعزولة الأذينية تركز على خصائصها الكهربائية الفريدة ، فهذه هي الدراسة الأولى لتصميم وسائل الإعلام الثقافية. وهذا يسمح لقابلية البقاء على المدى الطويل، فضلا عن تعزيز الوظائف المحافظة على خصائص الغدد الصماء والانكماش من myocytes الأذينية. هذه الطريقة الجديدة للاستزراع ، وكذلك العزل المتزامن لجميع أنواع الخلايا من الغرف الأذينية والبطينية من قلب فأر واحد ، ستكون مفيدة وفعالة للدراسات حول الخصائص الفسيولوجية والفيزيولوجية لعضليات الأذينية والفيني.

ثقافة الخلية الأساسية هي مورد متكامل يوفر بيئة خاضعة للرقابة للدراسات الميكانيكية التفصيلية لوظيفة myocyte القلبية. نظرا لطبيعتها أكثر دواما وسهولة العزلة، الفئران حديثي الولادة الأذينية والعضية البطينية كانت المصدر الشائع لثقافات الخلايا هذه1. ومع ذلك، فإن الماوس البالغ الأذيني والبطيني (AMAMs و AMVMs) مرغوب فيه للغاية للدراسات المختبرية، لأن خصائصها الجزيئية والوظيفية تحاكي أفضل خصائص خلايا القلب البالغة. وهكذا ، فقد أصبحت ذات صلة للدراسات المتعلقة بأمراض القلب ، ومعظمها يتطور في البالغين2.
وعلاوة على ذلك، فإن توافر واستخدام نماذج الماوس المعدلة وراثيا والمرض يوسع فائدة myocytes القلبية للبالغين المعزولة. وقد تم وصف بروتوكولات لعزل وثقافة الماوس AMVMs للدراسات قصيرة وطويلة الأجل في العديد من المنشورات السابقة2،3،4،5،6،7،8،9،10،11. وبالمقارنة، تم وصف عدد قليل من البروتوكولات لعزل AMAMs. وعلاوة على ذلك، هي الأمثل في المقام الأول تلك التي يتم وصفها لإجراء دراسات حادة للخلايا المعزولة حديثا، مع عدم وجود بروتوكول زراعة طويلة الأجل وصفها حتى الآن11،12،13. وعلى هذا النحو، لم تصمم بروتوكولات العزل في AMM لتوفير فائدة ومرونة البروتوكولات المنشورة لعزل وثقافة المركبات المُمَرَّكة. وعلاوة على ذلك، في حين أن الدراسات الرائدة لعزل AMAMs و AMVMs قد ثبت الحيلة، لا توجد بروتوكولات لعزلة متزامنة مثلى وثقافة كل من AMAMs و AMVMs، مما يؤدي إلى الاستخدام الفعال للقلب كله لكل إعداد.
حتى الآن، لم يتم تصميم بروتوكولات العزل AMAM و AMVM المنشورة لعزل كلا النوعين من الخلايا في وقت واحد، لأن معظم الدراسات على وظيفة الأذينية والبطينية لها تركيز خاص بغرفة معينة. على سبيل المثال، يتم استخدام AMAMs في الغالب لدراسة الفيزيولوجيا الكهربائية الأذينية، ويرجع ذلك جزئيًا إلى الاهتمام بالرجفان الأذيني (AF)، وهو أكثر حالات عدم انتظام ضربات القلب شيوعًا في الولايات المتحدة. ومع ذلك، AF ليس المرض الذي يؤثر على الأذين في عزلة، وقد تورط على أنه له دور سببي في ضعف البطين الأيسر خفيفة إلى شديدة14. وعلاوة على ذلك، فإن تخطيط القلب من المرضى الذين يعانون من قصور القلب مع الحفاظ على كسر طرد (HFpEF) قد أوضحت أن اليسار حجم الأذينية هي واحدة من أقوى التنبؤات للقابلية للقابلية لفشل القلب15.
بالإضافة إلى دورها في الفيزيولوجيا الكهربائية والتقلص، الأذين هو أيضا جهاز الغدد الصماء، إفراز القلب (أي، الببتيد الأذيني natriuretic [ANP]) أن تنظيم ضغط الدم بشكل عام وحجم16،17. وعلاوة على ذلك، ANP (يفترض من myocytes الأذيني) له دور بارز واقية ومكافحة الضخع في myocytes البطيني16،17. في حين أن هناك تأثير قوي على الاتصال العصبي بين الأذينين والبطينين في حالات الأمراض المختلفة ، فإن الآليات التي يستند لديها هذا الاتصال لم تستكشف بشكل كامل. وتجسد هذه النقطة كذلك من خلال الزيادة في البحوث التي تركز على 1) دور غير myocytes (الليفية القلبية والخلايا المناعية على وجه التحديد) في القلب المريض و 2) كيف يعيد تشكيل القلب كدالة للمرض يؤثر مباشرة على قدرة القلب على البقاء العضلية والوظائف القلبية العالمية18،19،21،22. وهكذا، دراسة الخلايا القلبية من كل من الأذينين والبطينين هو نهج ضروري للحصول على صورة أكثر اكتمالا لأدوارهم في الفيزيولوجيا القلبية.
يصف البروتوكول التالي العزل المتزامن للوميوسيات الأذينية والبطينية وغير العضلية من قلب فأر واحد في ظل الظروف الفسيولوجية والفيزيولوجية. بالإضافة إلى ذلك، هذه الطريقة هي أول من يصف الظروف المثلى اللازمة للحفاظ على ثقافات myocytes القلبية الأذينية، كما تم بالفعل نشر شروط للحفاظ على الثقافات من myocytes البطين.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:668px;" width="669">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">(-)-Blebbistatin</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:116px;">B0560</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">1 Liter Water Jacketed Reservoir</td>
			<td style="width:175px;">Radnoti</td>
			<td style="width:116px;">120142-1</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">2,3-Butanedione monoxime</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:116px;">B0753</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">5-0 Silk Suture Thread</td>
			<td style="width:175px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:116px;">18020-50</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Adenosine</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:116px;">A9251</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:116px;">A6003</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Bubble Trap Compliance Chamber</td>
			<td style="width:175px;">Radnoti</td>
			<td style="width:116px;">130149</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Calcium Chloride Anhydrous</td>
			<td style="width:175px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:116px;">C614-500</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Carnitine hydrochloride</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:116px;">C9500</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Collagenase type 2</td>
			<td style="width:175px;">Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td style="width:116px;">LS004176</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Creatine</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:116px;">C0780</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Dexamethasone</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:116px;">D2915</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">DMEM/F12 (1:1; 1X)</td>
			<td style="width:175px;">Gibco</td>
			<td style="width:116px;">11330-032</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Dumont #7 - Fine Forceps</td>
			<td style="width:175px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:116px;">11274-20</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Epifluorescent micropscpe</td>
			<td style="width:175px;">Olympus X70</td>
			<td style="width:116px;">IX70</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Fetal Bovine Serum (Heat Inactivated)</td>
			<td style="width:175px;">Omega Scientific</td>
			<td style="width:116px;">FB-12</td>
			<td style="width:163px;">Lot# 206018</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Fine Scissors - Sharp</td>
			<td style="width:175px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:116px;">14060-09</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Graefe Forceps</td>
			<td style="width:175px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:116px;">11051-10</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Headband Magnifiers</td>
			<td style="width:175px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:116px;">28030-04</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Hemacytometer (Bright-Line)</td>
			<td style="width:175px;">Hausser Scientific</td>
			<td style="width:116px;">1475</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">HEPES (1M)</td>
			<td style="width:175px;">Gibco</td>
			<td style="width:116px;">15630-080</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Inosine</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:116px;">I4125</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Insulin-Transferrin-Selenium-X</td>
			<td style="width:175px;">Gibco</td>
			<td style="width:116px;">51500-056</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Isotemp 105 Water Bath</td>
			<td style="width:175px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:116px;">NC0858659</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Isotemp 3006</td>
			<td style="width:175px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:116px;">13-874-182</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Joklik Modified Minimum Essential Media</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:116px;">M-0518</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Laminin (Natural, Mouse)</td>
			<td style="width:175px;">Gibco</td>
			<td style="width:116px;">1795024</td>
			<td style="width:163px;">Lot# 1735572</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:116px;">G8540</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Masterflex C/L Single-Channel Variable-Speed Compact Pump</td>
			<td style="width:175px;">Cole-Palmer</td>
			<td style="width:116px;">EW-77122-24</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Minimum Essential Medium (MEM 1X)</td>
			<td style="width:175px;">Gibco</td>
			<td style="width:116px;">12350-039</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Molecular Biology Grade Water</td>
			<td style="width:175px;">Corning</td>
			<td style="width:116px;">46-000-CM</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Pen Strep Glutamine (100X)</td>
			<td style="width:175px;">Gibco</td>
			<td style="width:116px;">10378-016</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Spring Scissors - 6mm Cutting Edge</td>
			<td style="width:175px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:116px;">15020-15</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Taurine</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:116px;">T-8691</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

simultaneous isolation and culture of atrial myocytes, ventricular myocytes, and non-myocytes from an adult mouse heart

كانت عزلة واستزراع الخلايا العضلية القلبية من الفئران ضرورية لتعزيز فهم فسيولوجيا القلب والفيزيولوجيا المرضية. في حين أن عزل الخلايا الميوسية من قلوب الماوس حديثي الولادة هو بسيط نسبيا، يتم تفضيل myocytes من قلب مورين الكبار. وذلك لأن بالمقارنة مع خلايا حديثي الولادة، myocytes الكبار بشكل أكثر دقة تمدد الخلية وظيفة كما يحدث في قلب الكبار في الجسمالحي. ومع ذلك ، من الصعب من الناحية الفنية عزل الخلايا القلبية الماوس الكبار في الكميات اللازمة ومقومات البقاء ، مما يساهم في مأزق تجريبي. وعلاوة على ذلك، فإن الإجراءات المنشورة محددة لعزل الخلايا العضلية الأذينية أو البطينية على حساب الخلايا الأذينية والبطينية غير العضلية. هو موضح هنا طريقة مفصلة لعزل كل من الأذينية والبطينية القلبية myocytes، جنبا إلى جنب مع الأذينية والبطين غير myocytes، في وقت واحد من قلب فأر واحد. كما تتوفر تفاصيل عن أساليب زراعة الخلايا المثلى، التي تعزز صلاحية الخلية ووظيفته. هذا البروتوكول يهدف ليس فقط إلى تسريع عملية عزل خلايا القلب مورين الكبار، ولكن أيضا إلى زيادة العائد و قابلية الخلايا للتحقيقات في الخلايا القلبية الأذينية والبطينية.

نمط البرية 10 أسابيع من العمر C57b6/ ي القلب الماوس عادة ما يؤدي إلى ما بين 75،000-150،000 myocytes الأذيني و 1.0-1.5 × 106 6 myocytes البطيني، يعادل العائد التقريبي من 30٪ −50٪ للعضاليات الأذينية والبطينية18,19. أثناء وبعد العزل مباشرة, يجب أن تظهر myocytes القلب قابلة للحياة على شكل قضيب وعدم التعاقد. وينبغي أن غالبية myocytes القلب المعزولة التكيف هذا مورفولوجيا، وهو مؤشر على الضخ الفعال. يمكن أن يكون مورفولوجيا شكل القضيب أيضًا مؤشرًا على الجدوى. يهدف البروتوكول إلى تعزيز العائد وقابلية صلاحية الخلايا myocytes وغير myocytes المعزولة من قلب الماوس المريض. وعلاوة على ذلك، فقد تم اختباره في نموذج للضغط الزائد الناجم عن فشل القلب (البيانات غير مبينة).
لتأكيد عزل كافية وقابلة للتكرار من myocytes وغير myocytes من الأنسجة الأذينية والبطين، وقد لوحظت الخلايا وتصويرها في أيام مختلفة في الثقافة (الشكل 2). بالإضافة إلى ذلك، تم تنفيذ تفاعل سلسلة البوليمرات العكسية الكمية (qRT-PCR) لقياس مستويات النصوص التي كانت محددة بنوع الخلية. القلب عضلة تروبونين T (Tnnt2) هو علامة من myocytes القلب وأعرب بقوة في كل من الأذيني والبطين الثقافات myocyte القلب (الشكل 3A). في المقابل، الببتيد الأذيني الناتريوري(Nppa، والذي يعبر عنه عادة بشكل حصري في myocytes القلب الأذيني البالغين تحت الظروف الفسيولوجية) وسلسلة الضوء myosin 2 (Myl2، وهو جين ميثي البطينية محددة) كانت قوية وتحديدا في الأذينة والبطين الثقافات العضلية القلبية ، على التوالي (الشكل 3B، C).
علامات الخلايا الليفية، عامل النسخ 21 (Tcf21، مستقبلات عامل النمو المشتق من الصفائح الدموية A (Pdgfra) ، ومجموعة علامات الخلايا المشتقة من أحادية الخلايا من التمايز 68 (Cd68) تم التعبير عنها حصريًا في الثقافات غير العضلية المعزولة عن كل من الغرف الأذينية والبينية (الشكل 3D−F). ويقدر أن غير myocytes تسوية ~ 65 ٪ من جميع خلايا القلب ، وأن غالبية هذه تنشأ من الليفية أو monocyte مشتقة النسب18،19،23،24. وهكذا، تم اختيار علامات لهذين النسب ليكون تمثيليا، نظرا للاهتمام في هذه المجموعات الخلوية في دراسات من مختلف النماذج و etiologies من أمراض القلب.
مناعة من AMAMs وAMVMs لعلامة تي-أنبوب ديهي دروبريدين (DHPR، وهو يعتمد على الجهد (L) من نوع قناة الكالسيوم) وكذلك مستقبلات RYR2 اليود أظهرت سليمة t-tubules طوال العزلة والثقافة على المدى الطويل(الشكل 4A, B). وفرة DHPR والتوطين التي كانت مميزة وفريدة من نوعها لالعضيات العضلية الأذينية والبطينية تشير إلى وجود تي-أنابيب. وعلاوة على ذلك، كان التكلس من DHPR مع RYR2 المثبطة للمناعة مؤشرا على هياكل دياد سليمة. أدى الكبت المناعي للبروتين الساركميري ألفا أكتينين في الخلايا العضلية القلبية الأذينية والبطينية إلى نمط التصدع الساركميرتي المتوقع. تم استخدام نمط التصدع الساركميري لتقييم نقاء وقابلية البقاء من الخلايا الميوسيولوجية المعزولة القلبية بالتزامن مع شكل شكل شكل قضيب وصبغ نووي مع TOPRO-3(الشكل 4C, D; الأرجواني والأحمر). كما هو متوقع، كانت الخلايا العضلية القلبية البطينية كبيرة، وعرض متوسط طول ~ 150 ملم، في حين أن العضلة العضلية القلبية الأذينية متوسط ~ 75 ملم. وعلاوة على ذلك، عند تحليل المناعة، أظهر myocytes القلبية الأذينية (ولكن ليس myocytes القلبية البطينية) التعبير القوي عن الببتيد الأذيني النتري يوريك (ANP) في نمط تلطيخ التي كانت سمة من سمات التوطين إلى التشنج endoplasmic والحبيبات إفرازية(الشكل 4C, D; الأخضر).
سمة فريدة من نوعها ل myocytes القلبية الأذينية هو تصنيفها كخلية الغدد الصماء بالإضافة إلى خلية انكماشية. بينما يفرز myocytes الأذيني ANP في ظل الظروف القاعدية ، يزيد الإفراز استجابة للسراغوجيات (أي ، ناهض ألفا -adrenergic ، فينيليفرين [PE]). وعلاوة على ذلك، الأذينيات القلبية myocytes تفرز ANP وco-إفراز عملية جزء من هرمون من حالته السلائف (برو ANP، 15 KD) إلى ببتيد المنتج (ANP 3kD)16،17. ويمكن تحديد هذه القدرة على إفرازية عن طريق الكشف المناعي من ANP في وسائل الإعلام من myocytes القلبية الأذيناة المعزولة استجابة لعلاج PE الحاد(الشكل 4E). تم العثور على هذه القدرة على إفراز ومعالجة myocyte القلب الأذيني لتكون حساسة لظروف الاستزراع. وبالتالي، فمن الضروري أن يتم استكمال الأذيني الأذينية الاسطونية المتوسطة مع dexamethasone، الأنسولين، transferrin، والسيلينيوم.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61224/61224fig1.jpg"> الشكل 1: نظرة عامة تخطيطية للقلب الرجعي، والهضم، وعزل الخلية. تظهر هي الخطوات الرئيسية التي ينطوي عليها عزل الخلية عن كل من الغرف الأذينية والبطينية في وقت واحد من قلب فأر واحد. (A) يتم قذف قلب فأر واحد بسرعة عبر الشريان الأورطي الصاعد و perfused بطريقة رجعية. (B) يتم فصل القلب إلى أنسجة الأذينية والفينية لمزيد من الهضم والفصل الجسدي. (C)بعد الهضم الكافي، يتم فصل الخلايا عن طريق الترشيح الجاذبية إلى ما مجموعه أربعة كسور الخلوية التي يتم استزراعها للتجريب اللاحقة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61224/61224fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61224/61224fig2.jpg"> الشكل 2: التحليل المورفولوجي للأوعية القلبية الأذينية والبطينية المعزولة وغير myocytes في الثقافة. (A) الماوس البالغ المعزولة الأذينية myocytes (AMAMs)،(ب)الكبار الماوس الأذيني غير myocytes (AMANMs)، (C) الكبار الماوس myocytes البطينية (AMVMs)، أو (D)الكبار الماوس بطين غير myocytes (AMVNMs) مطلية في 5 × 105 الخلايا / الغرفة على أربع غرف (1.7 سم2) الشرائح الزجاجية في وسائط مطلية على التوالي. تم الحصول على صور المرحلة في الأيام المشار إليها في الثقافة باستخدام هدف 10x تحت مجهر epifluorescence. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61224/61224fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61224/61224fig3.jpg"> الشكل 3: تحليل تمثيلي لـ qRT-PCR لثقافات الخلايا المعزولة. تم استخراج الحمض النووي الريبي من الخلايا القلبية المعزولة حديثا وغير myocytes، وتم تحديد مستويات مرنا لعلامات الجينات الخلية محددة من قبل qRT-PCR4. (A) Tnnt2, القلب العضلات تروبونين تي (القلب علامة myocyte); (B) Nppa، الببتيد الأذيني الناتري يوريك (علامة الأذينية الفلورية) ؛ (C) Myl2، سلسلة ضوء myosin 2 (علامة myocyte البطين) ؛ (D) Tcf21، عامل النسخ 21 (علامة الخلايا الليفية) ؛ (E) Pdgfra, الصفائح الدموية المشتقة مستقبلات عامل النمو A (علامة الخلايا الليفية); (F) Cd68، مجموعة من التمايز 68 (علامة الخلية المشتقة من أحادية الخلية). تمثل البيانات ± SEM (* p ≤ 0.05 مختلفة عن جميع القيم الأخرى، كما تحددها ANOVA متبوعة بتحليل نيومان كيلو بعد المخصص). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61224/61224fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61224/61224fig4.jpg"> الشكل 4: التحليل المورفولوجي والوظيفي للمناظير المعزولة والبطينية القلبية. (أ)AMAMs أو (B) AMVMs مطلية في 5 × 105 الخلايا / الغرفة على أربع غرف (1.7 سم2) الشرائح الزجاجية في وسائل الاعلام الطلاء على التوالي لمدة 1 ساعة للسماح للالتصاق. وأعقب ذلك إما إعادة تغذية الأذينية myocyte وسائل الاعلام الطلاء أو تغيير إلى myocyte البطينية الحفاظ على وسائل الإعلام تكمل مع blebbistatin لمدة 16 ساعة إضافية. تم تثبيت الثقافات في وقت لاحق ثم المثبطة للمناعة RYR2 (الأرجواني)، DHPR (الأخضر)، واللطخة النووية TOPRO-3 (الأحمر). (C)AMAMs أو (D) AMVMs كانت معزولة ومطلية ، ثم مناعة لـ a-actinin (الأرجواني) ، ANP (الأخضر) ، و TOPRO-3 (أحمر). تظهر صورتان تمثيليتان لكل نوع خلية. (E)مطلية AMAMs في 5 × 105 الخلايا / جيدا على 12 طبق ثقافة جيدة لمدة 16 ساعة في الأذينية وسائط طلاء. وعولجت الأمهات في وقت لاحق ل0.5 ساعة مع السيارة أو إفراز ANP (فينيليفرين، 50 مللي أم) قبل أن يتم جمع وسائل الإعلام وإخضاعها لتحليل مناعي ل ANP. وقبل تحليل النبع المناعي، كانت عينات الوسائط تُجرى بالطرد المركزي عند 500 x غم لمدة 5 دقائق لإزالة الحطام الخلوي وضمان أن يكون عنصر ANP المرصود نتيجة للإفراز النشط من المركبات AMAMs. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61224/61224fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Simultaneous Isolation and Culture of Atrial Myocytes, Ventricular Myocytes, and Non-Myocytes from an Adult Mouse Heart at JoVE.com

Simultaneous Isolation and Culture of Atrial Myocytes, Ventricular Myocytes, and Non-Myocytes from an Adult Mouse Heart

يتم وصف طريقة لعزل في وقت واحد من myocytes وغير myocytes من كل من الأذينين والبطينين من قلب الماوس الكبار واحد. هذا البروتوكول يؤدي إلى نتائج متسقة من myocytes القلب قابلة للحياة للغاية وغير myocytes وتفاصيل الظروف المثلى ثقافة الخلية محددة للphenotyping وفي المختبر التحليل.

العزلة المتزامنة وثقافة Myocytes الأذينية، myocytes البطينية، وغير Myocytes من قلب فأرة البالغين

The isolation and culturing of cardiac myocytes from mice has been essential for furthering the understanding of cardiac physiology and pathophysiology. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

الابتدائية ثقافة الكبار Myocytes قلب فأر

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging

العزلة والتلاعب الجيني لأمراض القلب للبالغين Myocytes التصوير متحد البؤر

Cardiac myocytes isolated from adult hearts are widely accepted as a model somewhere half way between embryonic and neonatal muscle cells on one side and ...

Isolation and Kv Channel Recordings in Murine Atrial and Ventricular Cardiomyocytes

العزلة وتسجيلات قناة كيلو فولت في الفئران Cardiomyocytes الأذيني البطيني و

KCNE genes encode for a small family of Kv channel ancillary subunits that form heteromeric complexes with Kv channel alpha subunits to modify their ...

Isolation of Human Atrial Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and Membrane Currents

Isolation of Human Atrial Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and Membrane Currents

عزل Myocytes الأذيني الإنسان للقياسات في وقت واحد من الكالسيوم<sup&gt; 2 +</sup&gt; العابرون والتيارات غشاء

The study of  electrophysiological properties of cardiac ion channels with the patch-clamp  technique and the exploration of cardiac cellular Ca2+ ...

Isolation, Culture, and Functional Characterization of Adult Mouse Cardiomyoctyes

العزلة والثقافة، وتوصيف وظيفي من الكبار ماوس Cardiomyoctyes

The use of primary cardiomyocytes (CMs) in culture has provided a powerful complement to murine models of heart disease in advancing our understanding of ...

Isolation of Embryonic Ventricular Endothelial Cells

عزلة الجنينية البطيني الخلايا البطانية

Cell culture has greatly enhanced our ability to assess individual populations of cells under myriad culture conditions. While immortalized cell lines ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

العزلة وثقافة الأسنان طلائي الخلايا الجذعية من الكبار ماوس القاطعة

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation, Culture and Transduction of Adult Mouse Cardiomyocytes

العزلة والثقافة وتنبيغ الخلايا العضلية ماوس الكبار

Cultured cardiomyocytes can be used to study cardiomyocyte biology using techniques that are complementary to in vivo systems. For example, the purity and ...

Methods for the Isolation, Culture, and Functional Characterization of Sinoatrial Node Myocytes from Adult Mice

طرق لعزل والثقافة، وتوصيف الوظيفي للالجيبية الأذينية عقدة Myocytes من الفئران الكبار

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). ...

Simultaneous Isolation of High Quality Cardiomyocytes, Endothelial Cells, and Fibroblasts from an Adult Rat Heart

العزلة في وقت واحد من كارديوميوسيتس عالية الجودة، الخلايا البطانية، والألياف الليفية من القلب الجرذ الكبار

The rat is an important animal model used in cardiovascular research, and rat cardiac cells are used routinely for in vitro analysis of the molecular ...