Name: y-27632 enriches the yield of human melanocytes from adult skin tissues
Uploaded: 2020-07-08T13:00:00
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इस काम को चीन के राष्ट्रीय प्रमुख अनुसंधान और विकास कार्यक्रम (2017YFA0104604), चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (81772093), सैन्य रसद अनुसंधान परियोजना (AWS17J005), शेंडोंग प्रांत प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (ZR2019ZD36) के प्रमुख कार्यक्रम द्वारा समर्थित किया गया था और शेंडोंग प्रांत के प्रमुख अनुसंधान और विकास कार्यक्रम (२०१९GSF108107) X.W. गुआंगदोंग बेसिक और एप्लाइड बेसिक रिसर्च फाउंडेशन (2019A151110833) और शेंडोंग विश्वविद्यालय (२०१९GN043) के मौलिक अनुसंधान कोष जेएम के लिए

इस प्रोटोकॉल में वयस्क चमड़ी ऊतकों के उपयोग को मानव अनुसंधान आचार समिति (संख्या 2015120401, तिथि: 12 मई, 2015) द्वारा अनुमोदित किया गया है।
नोट: कोशिकाओं और संस्कृतियों के संदूषण को रोकने के लिए बाँझ वाता...

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	<li>Costin, G. E., Hearing, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+pigmentation:+melanocytes+modulate+skin+color+in+response+to+stress.">Human skin pigmentation: melanocytes modulate skin color in response to stress.</a> FASEB Journal. 21 (4), 976-994 (2007).</li><li>Battyani, Z., Xerri, L., Hassoun, J., Bonerandi, J. J., Grob, J. 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(138), e7862 (2018).</li><li>Terunuma, A., Limgala, R. P., Park, C. J., Choudhary, I., Vogel, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+procurement+of+epithelial+stem+cells+from+human+tissue+specimens+using+a+Rho-associated+protein+kinase+inhibitor+Y-27632.">Efficient procurement of epithelial stem cells from human tissue specimens using a Rho-associated protein kinase inhibitor Y-27632.</a> Tissue Engineering Part A. 16 (4), 1363-1368 (2010).</li><li>Cerqueira, M. T., Frias, A. M., Reis, R. L., Marques, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interfollicular+epidermal+stem+cells:+boosting+and+rescuing+from+adult+skin.">Interfollicular epidermal stem cells: boosting and rescuing from adult skin.</a> Methods in Molecular Biology. 989, 1-9 (2013).</li><li>Zhou, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROCK+inhibitor+Y-27632+increases+the+cloning+efficiency+of+limbal+stem/progenitor+cells+by+improving+their+adherence+and+ROS-scavenging+capacity.">ROCK inhibitor Y-27632 increases the cloning efficiency of limbal stem/progenitor cells by improving their adherence and ROS-scavenging capacity.</a> Tissue Engineering Part C, Methods. 19 (7), 531-537 (2013).</li><li>Yokoyama, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+suppression+of+MITF+expression+via+HDAC+inhibitors+in+the+melanocyte+lineage.">Pharmacologic suppression of MITF expression via HDAC inhibitors in the melanocyte lineage.</a> Pigment Cell &amp; Melanoma Rresearch. 21 (4), 457-463 (2008).</li><li>Mi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+ROCK+inhibitor+promotes+keratinocyte+survival+and+paracrine+secretion,+enhancing+establishment+of+primary+human+melanocytes+and+melanocyte-keratinocyte+co-cultures.">A ROCK inhibitor promotes keratinocyte survival and paracrine secretion, enhancing establishment of primary human melanocytes and melanocyte-keratinocyte co-cultures.</a> Pigment Cell &amp; Melanoma Research. 33 (1), 16-19 (2020).</li></ol>

यहां वर्णित प्रोटोकॉल हाल ही में16के प्रकाशन पर आधारित था । नई विधि के साथ सर्वोत्तम परिणाम प्राप्त करने के लिए निम्नलिखित महत्वपूर्ण चरणों पर कुछ ध्यान दिया जाना चाहिए। सबसे पहले, एपिडर्मिस ?...

इस अध्ययन का लक्ष्य जैविक अनुसंधान और नैदानिक अनुप्रयोगों के लिए वयस्क त्वचा के एपिडर्मिस से मेलानोसाइट्स को अलग करने के लिए एक सरल और प्रभावी प्रोटोकॉल विकसित करना था। मेलानोसाइट्स, जो त्वचा के बेसल एपिडर्मिस और बालों के रोम में स्थित हैं, मेलेनिन1का उत्पादन करके त्वचा और बालों के पिगमेंटेशन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। एपिडर्मल मेलानोसाइट्स से परिणामस्वरूप त्वचा का पिगमेंटेशन एक पराबैंगनी विकिरण फिल्टर के रूप में कार्य करता है जो त्वचा में अंतर्निहित कोशिकाओं को डीएनए क्षति को कम/रोकता है2। त्वचा में मेलानोसाइट्स का असामान्य प्रसार काफी आम है, जैसे सौम्य नेवी (मॉल) के गठन में, जिसमें मेलानोसाइट्स संभावित रूप से ऑन्कोजेनिक विकास में बदल जाते हैं जिसके बाद सेलुलर सेनेसेंस3होता है।
1957 के बाद से, मानव प्राथमिक मेलानोसाइट्स का अलगाव और बाद की संस्कृति4संभव हो गई है, लेकिन 1982 के बाद से ही एक कुशल तरीका रहा है जो एपिडर्मिस5से मानव मेलानोसाइट्स की संस्कृतियों को पुन: स्थापित कर सकता है। एपिडर्मिस से प्राथमिक मेलानोसाइट्स को अलग करने की पारंपरिक विधि में दो-चरण एंजाइमेटिक पाचन शामिल है। संक्षेप में, त्वचा को शुरू में डर्मिस से एपिडर्मिस को अलग करने के लिए डिस्पास के साथ पचाया जाता है, जिसके बाद एपिडर्मिस को मेलानोसाइट्स और केराटिनोसाइट्स युक्त निलंबन का उत्पादन करने के लिए ट्रिप्सिन के साथ पचाया जाता है, जिसे फिर चुनिंदा मीडिया में उगाया जा सकता है। वर्तमान में, प्रारंभिक संस्कृति आमतौर पर पारंपरिक विधि का उपयोग करके मेलानोसाइट्स तक पहुंचने में लगभग 3 से 4 सप्ताह लगती है, जो उनके अलगाव की कम दक्षता के कारण होने की संभावना है। इसलिए, वयस्क त्वचा ऊतकों से मेलानोसाइट्स के प्रारंभिक उत्पादन में वृद्धि प्रयोगशाला अनुसंधान और नैदानिक अनुप्रयोगों दोनों के लिए काफी मददगार होगी।
कई विकास कारक, जिनमें से अधिकांश को केराटिनोसाइट्स (उदाहरण के लिए, α-MSH, ACTH, bFGF, NGF, ET-1, GM-CSF, HGF, LIF और एससीएफ)5-8-8द्वारा स्रावित दिखाया गया है, जो स्तनधारी मेलानोसाइट्स के भेदभाव और प्रसार को विनियमित करता है। फीडर परतों के अभाव में, उन विकास कारकों की कमी से मेलानोसाइट्स का प्रसार कम हो जाता है और उनके बढ़े हुए एपोप्टोसिस9। फीडर कोशिकाओं और मेलानोसाइट्स के रूप में केराटिनोसाइट्स की सह-संस्कृति त्वरित मेलानोसाइट प्रसार और कम एपोप्टोसिस का कारण बन सकती है। हालांकि, सह-संस्कृति विधि न केवल केराटिनोसाइट्स तैयार करने के लिए अधिक त्वचा ऊतकों की मांग करती है, जो व्यावहारिक नहीं है, बल्कि कुशलता से काम नहीं कर सकती है क्योंकि मेलानोसाइट्स द्वारा आवश्यक संस्कृति की स्थिति केराटिनोसिटे विकास के पक्ष में नहीं है, और इसके विपरीत।
पिछले अध्ययनों से पता चला है कि विकास माध्यम में वाई-27632, एक रॉक अवरोधक के अलावा त्वचा के ऊतकों10--14से मानव प्राथमिक एपिडर्मल कोशिकाओं की उपज को बढ़ा सकते हैं। इसलिए, यह परीक्षण करना दिलचस्प होगा कि क्या मानव प्राथमिक मेलानोसाइट्स के अलगाव को वाई-27632 की उपस्थिति से लाभ होगा। दरअसल, टीका TIVA माध्यम15में वाई-27632 के अलावा, जिसमें टीपीए, आईबीएमएक्स,एनए 3वीओ4 और डीबीएएमपी शामिल हैं, ने प्रारंभिक संस्कृतियों में चमड़ी ऊतकों से अलग प्राथमिक मेलानोसाइट्स की उपज में काफी वृद्धि की16। पारंपरिक प्रोटोकॉल की तुलना में, यह नया प्रोटोकॉल मेलानोसाइट्स16की उपज बढ़ाने में काफी अधिक कुशल है। इसलिए, यह प्रोटोकॉल बुनियादी और लागू जैविक अनुसंधान में अपने आवेदन को बढ़ावा देने के लिए पिछले अध्ययन16 के आधार पर वयस्क त्वचा ऊतकों का उपयोग करके विस्तार से नई विधि का वर्णन करता है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa fluor-594 donkey anti-mouse IgG</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21203</td>
			<td>For Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa fluor-594 donkey anti-rabbit IgG</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>R37119</td>
			<td>For Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Dish</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30702115</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer</td>
			<td>Corning incorporated</td>
			<td>431792</td>
			<td>Cell filtration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Centrifuge Tube</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>171003</td>
			<td>For cell centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Centrifuge Tube</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>171003</td>
			<td>For cell centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>51026333</td>
			<td>For cell incubating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Temperature Shaker</td>
			<td>Shanghai Boxun</td>
			<td>150036</td>
			<td>For water bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104139</td>
			<td>For Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17105-041</td>
			<td>For melanocyte isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>C11995500</td>
			<td>Component of neutralization medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-001-1AC5</td>
			<td>Component of neutralization medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>5E44316</td>
			<td>For Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>MCE</td>
			<td>HY-15371</td>
			<td>Induce pigmentation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25030081</td>
			<td>melanocyte culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#39;s F12</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>11330032</td>
			<td>melanocyte culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>5C42258</td>
			<td>For cell microscopic observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-isobutyl-1-methyl xanthine (IBMX)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>17018</td>
			<td>melanocyte culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human MITF</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab12039</td>
			<td>For Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na3VO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6508</td>
			<td>melanocytes culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N6,2&#39;-O-dibutyryladeno-sine 3&#39;,5&#39;-cyclic monophosphate (dbcAMP)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D0627</td>
			<td>melanocyte culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate (TPA&#65289;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>79346</td>
			<td>melanocyte culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Antibiotics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit anti-human Ki-67</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab15580</td>
			<td>For Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered solution</td>
			<td>Solarbio Life Science</td>
			<td>P1020-500</td>
			<td>Washing solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall ST 16R Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75004380</td>
			<td>Cell centrifugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC20TM automated cell counter</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1450102</td>
			<td>Automatic cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.05% Trypsin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25300-062</td>
			<td>For melanocyte dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Y0503</td>
			<td>For melanocyte isolation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

y-27632 enriches the yield of human melanocytes from adult skin tissues

अलगाव और त्वचा के ऊतकों से प्राथमिक मेलानोसाइट्स की संस्कृति जैविक अनुसंधान के लिए बहुत महत्वपूर्ण है और व्यापक रूप से नैदानिक अनुप्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया गया है। पारंपरिक विधि द्वारा त्वचा के ऊतकों से प्राथमिक मेलानोसाइट्स को अलग करने में आमतौर पर पर्याप्त रूप से पारित होने में लगभग 3 से 4 सप्ताह लगते हैं। इससे भी महत्वपूर्ण बात, उपयोग किए जाने वाले ऊतक आमतौर पर नवजात पूर्वेखाल होते हैं और वयस्क ऊतकों से प्राथमिक मेलानोसाइट्स को कुशलतापूर्वक अलग करना अभी भी एक चुनौती है। हमने हाल ही में मेलानोसाइट्स के लिए एक नई अलगाव विधि विकसित की है जो पारंपरिक प्रोटोकॉल की तुलना में 48 एच के लिए प्रारंभिक संस्कृति माध्यम में वाई-27632, एक रो किनेज़ अवरोधक जोड़ती है, यह नई विधि नाटकीय रूप से मेलानोसाइट्स की उपज को बढ़ाती है और फोरस्किन ऊतकों से मेलानोसाइट्स को अलग करने के लिए आवश्यक समय को कम करती है। अब हम प्राथमिक मेलानोसाइट्स को कुशलतापूर्वक संस्कृति के लिए वयस्क एपिडर्मिस का उपयोग करके इस नई विधि का वर्णन करते हैं। महत्वपूर्ण बात, हम बताते हैं कि इस नई विधि द्वारा तैयार वयस्क ऊतकों से प्राप्त मेलानोसाइट्स सामान्य रूप से कार्य कर सकते हैं। इस नए प्रोटोकॉल से आसानी से एक्सेस किए गए वयस्क त्वचा ऊतकों से तैयार प्राथमिक मेलानोसाइट्स का उपयोग करके पिगमेंटेशन दोषों और मेलानोमा के अध्ययनों को काफी लाभ होगा।

चित्रा 1 पारंपरिक और नए तरीकों की तुलना में एक योजनाबद्ध आरेख दिखाता है। नई विधि के साथ ऊतक तैयारी और पाचन के लिए प्रक्रिया पारंपरिक विधि के लिए प्रक्रिया के समान है, फर्क सिर्फ इतना है कि अलग...

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Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

इस पत्र में बताया गया है कि टीवीए माध्यम में वाई-27632 के अलावा वयस्क त्वचा ऊतकों से मेलानोसाइट्स की उपज में काफी वृद्धि हो सकती है।

वाई-27632 वयस्क त्वचा ऊतकों से मानव मेलानोसाइट्स की उपज को समृद्ध करता है

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

कोशिकाओं आधारित प्रोटोकॉल का सामान्य लक्ष्य पारंपरिक तरीकों की कमियों में सुधार करते हुए मानव मेलानोसाइट्स कोशिकाओं को अलग और संस्कृति देना है। नई विधि से हम सामग्री और उपकरणों के आधार पर अपेक्षाकृत कम समय में प्राथमिक मेलानोसाइट्स कोशिकाओं की बड़ी मात्रा प्राप्त कर सकते हैं। मानव ऊतकों इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किया त्वचा अस्पताल में खतना सर्जरी से खारिज कर दिया ऊतकों के लिए ताजा वयस्क है और संस्था के मानव अनुसंधान नैतिकता समिति संख्या २०१५१२०४०१, तारीख मई १२ २०१५ के दिशा निर्देशों के अनुसार संभाला ।यह सभी आवश्यक अभिकर्णों का प्रदर्शन है। पहले से बाँझ उपकरणों और सामग्री तैयार करें और ऊतक को एक डिश में सेट करें, ऊतक को 30 सेकंड के लिए 75% इथेनॉल से धोएं और वॉश समाधान संबंधों के साथ पांच मिनट प्रत्येक ऊतक को सुविधाजनक टुकड़ों में काटता है और वसा परत को हटाने के लिए सर्जिकल ब्लेड के साथ ऊतक को स्क्रैप करता है। डर्मिस साइड के साथ ऊतकों को समतल करें त्वचा के ऊतकों के लिए अंतरिक्ष समाधान प्रति मिलीलीटर 2.5 मिलीग्राम जोड़ें।टुकड़ों को चार डिग्री सेंटीग्रेड पर रात भर कवर करें और स्टोर करें। दूसरे दिन, डर्मिस से एपिडर्मिस को छील लें और तुरंत एपिडर्मिस को धोने के समाधान के साथ एक और तीन व्यंजनों में स्थानांतरित करें, जो ट्यूब में 0.05% ट्राइप्सिन को 37 डिग्री सेंटीग्रेड पर पानी के स्नान में 30 मिनट के लिए जलमग्न कर देता है। बेअसर समाधान की बराबर मात्रा जोड़ें।पिपेट समाधान को 10 से 15 बार ऊपर और नीचे करता है। 100 माइक्रोमीटर मैश फिल्टर के माध्यम से समाधान पास करें। पांच मिनट के लिए 200 बार जी पर सेंट्रलाइज तिवा माध्यम के 10 मिलीलीटर में सेल पैलेट को फिर से निलंबित कर दें।वाई-27632 का 10 माइक्रोमीटर जोड़ें। जानकारी को चिह्नित करें यह माइक्रोस्कोप के नीचे देखने का क्षेत्र है। यह 37 डिग्री सेंटीग्रेड इनक्यूबेटर में मीडियम इनक्यूबेट में तैरने वाली कोशिकाओं को दिखाता है।यह दृश्य दो दिन पर दृश्य दिखाता है कोशिकाओं को पकवान के नीचे संलग्न करने के लिए शुरू कर दिया है । और नौ दिन पर देखने से पता चलता है मेलानोसाइट्स के स्पष्ट जमा मौजूद हैं । पीबीएस के साथ कोशिकाओं को धोने के लिए दो मिलीमीटर 0.05% ट्राइप्सिन दो मिनट के लिए कोशिकाओं को इनक्यूबेट करने के दो मिलीमीटर जोड़ें बेअसर समाधान के दो मिलीलीटर जोड़ें।पांच मिनट के लिए 200 बार जी पर अपकेंद्रित्र। सुपरनेट धीरे-धीरे 10 मिलीमीटर तिवा माध्यम के साथ सेल पैलेट को फिर से निलंबित करें। हर दो दिन में माध्यम बदलें।इन चित्रों को पारित होने के विचारों को दिखाने के एक योजनाबद्ध आरेख तो नई विधि और पारंपरिक विधि इस आंकड़े में प्रस्तुत कर रहे हैं । ऊतक तैयार करने और नई विधि के पाचन के लिए प्रक्रिया पारंपरिक विधि के समान है। फर्क सिर्फ इतना है कि अलग वसा कोशिकाओं 10 माइक्रोमीटर वाई-२७६३२ की उपस्थिति के साथ उसके tiva माध्यम में 10 मिनट में टीका लगाया ।दो दिनों के बाद वाई-27632 में पूरक के बिना तिवा माध्यम के साथ मीडिया की जगह। इस पैनल पारंपरिक विधि शीर्ष पंक्ति द्वारा तैयार मेलानोसाइट्स के प्रतिनिधि छवियों से पता चलता है और तीन दिन में नई विधि नीचे पंक्ति से, छह दिन और दिन आठ प्रारंभिक टीका के बाद हम तीन दिन, छह और आठ दिन में मेलानोसाइट्स की संख्या कहते हैं, हमने पाया कि नई विधि के बारे में पांच गुना से मेलानोसाइट्स उपज में वृद्धि हुई । आठ दिनों के काउंटर के बाद हम दर्जन किया और प्रत्येक एक डिश में मेलानोसाइट्स की संख्या गिनती ।परिणामों से पता चला है कि नई विधि से अलग मेलानोसाइट्स की संख्या पारंपरिक विधि की तुलना में बहुत अधिक है। Ki67 खड़े इस बात की पुष्टि करते हैं कि नई विधि से अलग किए गए मेलानोसाइट्स सामान्य रूप से अधिक महत्वपूर्ण रूप से हमने नई विधि के साथ मेलानोसाइट्स के सामान्य कार्य प्राप्त किए हैं। हमने अलगाव से प्रारंभिक मार्ग के बाद मेलानोसाइट्स की शुद्धता की जांच की।एमआईटीएफ अभिव्यक्ति के लिए स्टैंड के लिए एक मेलानोसाइट्स मार्ग जो केवल मेलानोसाइट्स में व्यक्त किया गया है। और हमने पाया कि लगभग 100% कोशिकाएं एमआईटीएफ के लिए सकारात्मक थीं जो पहले मार्ग के बाद प्राप्त शुद्ध मेलानोसाइट्स का संकेत देती थीं। नए तरीकों से अलग मेलानोसाइट्स का परीक्षण करने के लिए सामान्य रूप से कार्य कर सकते हैं।हमने 90 से अधिक इन विट्रो के लिए फोर्स कूलिंग के साथ मेलानोसाइट्स का इलाज किया और देखें कि फोर्स कूलिंग मेलानोसाइट्स के पिगमेंटेशन को प्रेरित कर सकती है। इन आंकड़ों को एक साथ लेने से पता चलता है कि नई विधि से अलग किए गए मेलानोसाइट्स सामान्य रूप से पिगमेंटेशन का उत्पादन कर सकते हैं। प्राथमिक मेलानोसाइट्स, जैसा कि त्वचा के ऊपर कहा गया है और संस्कृति में विस्तारित प्रयोगशाला अनुसंधान और नैदानिक अनुप्रयोगों के लिए आसानी से उपयोग किया गया है।दो दिनों से पहले प्रारंभिक संस्कृति माध्यम में आईडी वाई-27632 की रिपोर्ट करने के बाद नाटकीय रूप से मेलानोसाइट्स से बाहर बढ़ सकता है। संक्षेप में, हमने वयस्क ऊतकों से शुद्ध प्राथमिक मेलानोसाइट्स को अलग करने के लिए एक नई सरल और अत्यधिक कुशल विधि की सफलतापूर्वक स्थापना की।

Research

JoVE Journal

Biology

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और वयस्क मानव त्वचा से उपकला स्टेम सेल के अलगाव संस्कृति

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Selecting and Isolating Colonies of Human Induced Pluripotent Stem Cells Reprogrammed from Adult Fibroblasts

मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल का चयन और अलग कालोनियों वयस्क Fibroblasts से reprogrammed किया

Herein we present a protocol of reprogramming human adult fibroblasts into human induced pluripotent stem cells (hiPSC) using retroviral vectors encoding ...

Selective Capture of 5-hydroxymethylcytosine from Genomic DNA

जीनोमिक डीएनए से 5-hydroxymethylcytosine के चुनिंदा कब्जा

5-methylcytosine (5-mC) constitutes ~2-8% of the total cytosines in human genomic DNA and impacts a broad range of biological functions, including gene ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

प्राथमिक मानव तंतुकोशिका संस्कृति से भोले वयस्क स्टेम सेल अलगाव

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

वयस्क माउस छेनी से चिकित्सकीय उपकला स्टेम कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

माउस भ्रूणीय त्वचा और Melanoblast प्रवासन के रहते इमेजिंग के पूर्व vivo संस्कृति

Melanoblasts are the neural crest derived precursors of melanocytes; the cells responsible for producing the pigment in skin and hair. Melanoblasts ...

Isolation of Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High Throughput Microplate Respiratory Measurements

उच्च Throughput Microplate श्वसन माप के लिए माउस कंकाल की मांसपेशी की कम मात्रा से माइटोकॉन्ड्रिया के अलगाव

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial ...

High Yield Expression of Recombinant Human Proteins with the Transient Transfection of HEK293 Cells in Suspension

निलंबन में HEK293 कोशिकाओं के क्षणिक अभिकर्मक के साथ पुनः संयोजक मानव प्रोटीन की उच्च उपज अभिव्यक्ति

The art of producing recombinant proteins with complex post-translational modifications represents a major challenge for studies of structure and ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

नवजात और वयस्क माउस त्वचा से प्राथमिक माउस केराटिनोसाइट्स के अलगाव और संस्कृति

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...