Name: longitudinal in vivo imaging and quantification of human pancreatic islet grafting and contributing host cells in the anterior eye chamber
Uploaded: 2020-06-11T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Longitudinal In Vivo Imaging and Quantification of Human Pancreatic Islet Grafting and Contributing Host Cells in the Anterior Eye Chamber at JoVE.com

इस अध्ययन को स्वीडिश रिसर्च काउंसिल, स्ट्रैटेजिक रिसर्च एरिया पलायन, डीएनआर 2009-1039, स्वीडिश फाउंडेशन फॉर स्ट्रैटेजिक रिसर्च डीएनआर आईआरसी15-0067 को लुंड-आईआरसी, लुंड में रॉयल फिजियोग्राफिक सोसायटी, डायबिटीजफ्रबंडडेट और बार्नडायबिटेसफोर्डेट द्वारा समर्थित किया गया था।

लुंड, स्वीडन में क्षेत्रीय आचार समिति, मानव शामिल अनुसंधान की नैतिक समीक्षा के विषय में अधिनियम के अनुसार अध्ययन को मंजूरी दे दी । पशु प्रयोगों को स्वीडिश नैतिकता के साथ सख्त अनुसार पशु प्रयोगों के सा?...

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प्राप्तकर्ता और दाता ऊतक की भागीदारी को देख कर मानव अग्नाशय आइलेट सेल ग्राफ्टिंग प्रक्रिया का अध्ययन करने के लिए एक विधि प्रस्तुत की जाती है। एक इम्यूनोडिफिशिएंसी माउस आंख के पूर्वकाल कक्ष में मानव ?...

मधुमेह मेलिटस मेटाबोलिक रोगों के एक समूह का वर्णन करता है जो रक्त ग्लूकोज के ऊंचा स्तर की विशेषता है, जो अग्नाशय के आइलेट बीटा कोशिकाओं के नुकसान या शिथिलता से अपर्याप्त इंसुलिन उत्पादन के परिणामस्वरूप होता है, अक्सर इंसुलिन प्रतिरोध के साथ। टाइप 1 (T1D) और टाइप 2 डायबिटीज (T2D) जटिल बीमारियां हैं जिनमें बीटा कोशिकाओं की प्रगतिशील शिथिलता रोग विकास का कारण बनती है। T1D बीटा कोशिकाओं पर एक ऑटोइम्यून हमले से उपजी है, जबकि T2D मेटाबोलिक कारकों से प्रेरित माना जाता है, हालांकि कम ग्रेड प्रणालीगत सूजन1के बढ़ते सबूत के साथ । दाता मानव आइलेट्स का प्रत्यारोपण, विशेष रूप से T1D रोगियों के लिए, शारीरिक ग्लाइसेमिक नियंत्रण प्रदान करने की क्षमता प्रदान करता है। हालांकि, ऊतक दाताओं और गरीब आइलेट engraftment की कमी आइलेट प्रत्यारोपण को रोका गया है एक मुख्यधारा के चिकित्सीय विकल्प बन जाते हैं । हाइपोक्सिक, भड़काऊ, इम्यूनोजेनिक होस्टपर्यावरण2,3के कारण तत्काल पोस्टट्रांज्लांटेशन अवधि (24-48 एच) में कार्यात्मक आइलेट भ्रष्टाचार का एक बड़ाहिस्साखो जाता है। आइलेट अस्तित्व में सुधार के लिए हस्तक्षेप विधियों की दक्षता का मूल्यांकन करने के लिए, ऐसे प्रत्यारोपण की निरंतर निगरानी आवश्यक है।
प्रत्यारोपण के बाद प्रत्यारोपित मानव अग्नाशय के आइलेट्स की छवि और ट्रैक करने के लिए वीवो तकनीकों में अभी भी मधुमेह अनुसंधान के लिए एक चुनौती बनी हुई है4,5 ,5. आज तक, पॉजिट्रॉन उत्सर्जन टोमोग्राफी (पीईटी), चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई), या अल्ट्रासाउंड (यूएस) सहित गैर-निवास इमेजिंग तकनीकें प्रायोगिक परिस्थितियों में प्रत्यारोपित आइलेट्स के क्वांटिफिकेशन और कार्यात्मक मूल्यांकन के लिए क्षमता दिखाती हैं5। हालांकि, छोटे आइलेट आकारों को देखते हुए, उन तौर-तरीकों द्वारा मात्रात्मक माप अपर्याप्त संकल्प से पीड़ित हैं । अवलोकन के लिए प्रत्यारोपण स्थल के रूप में आंखों का पूर्वकाल कक्ष (एसीई) एक आशाजनक नॉनइनवेसिव इमेजिंग समाधान है जो प्रभावी रूप से उच्च स्थानिक संकल्प और लंबे समय तक लगातार निगरानी की पेशकश करता है6। माउस आइलेट बायोलॉजी (यांग एट अल7में समीक्षा) का अध्ययन करने के लिए इस विधि का सफलतापूर्वक दोहन किया गया है , ऑटोइम्यून प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं8,साथ ही मानव आइलेट ग्राफ्टिंग9,,10।
यहां ऐस प्रत्यारोपण विधि प्रत्यारोपण के बाद 10 महीने तक के लिए व्यक्तिगत आइलेट ग्राफ्ट पर निरंतर और दोहराया रिकॉर्डिंग द्वारा मानव अग्नाशय आइलेट engraftment प्रक्रिया की गतिशीलता की जांच करने के लिए एक 2-फोटॉन इमेजिंग दृष्टिकोण के साथ संयुक्त है । अधिक इमेजिंग गहराई के मल्टीफोटॉन इमेजिंग गुण और समग्र फोटोब्लैचिंग और फोटो क्षति को कम करने से कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी11की इमेजिंग सीमाओं को दूर किया जाता है। फ्लोरोसेंट इमेजिंग के क्वांटिफिकेशन में कई चरण शामिल हैं, जिनमें आइलेट नमूना तैयारी, आइलेट प्रत्यारोपण, छवि अधिग्रहण, आइलेट शोर या पृष्ठभूमि को हटाने के लिए इमेज फ़िल्टरिंग, विभाजन, क्वांटिफिकेशन और डेटा विश्लेषण शामिल हैं। सबसे चुनौतीपूर्ण कदम आमतौर पर कई हिस्सों या क्षेत्रों में एक छवि को विभाजित या विभाजित करना है। इसमें पृष्ठभूमि शोर से सिग्नल को अलग करना, या रंग या आकार में समानताओं के आधार पर स्वरों के क्लस्टरिंग क्षेत्र शामिल हो सकते हैं ताकि 3 डी वॉल्यूम के स्वरों का पता लगाया जा सके और लेबल किया जा सके, जो आइलेट वेक्यूलेचर का प्रतिनिधित्व करता है, उदाहरण के लिए। एक बार खंडित होने के बाद, ऑब्जेक्ट वॉल्यूम आकार जैसे आंकड़े आमतौर पर निकालने के लिए सरल होते हैं। बशर्ते इमेजिंग डेटा की मात्रा और निष्कर्षण के लिए एक विधि है, जैसे विभाजन और डेटा विज़ुअलाइज़ेशन। विशेष ध्यान मानव आइलेट्स में ऑटोफ्लोरेसेंस को हटाने और आइलेट वैक्यूलेचर और आइलेट कैप्सूल बनाने प्राप्तकर्ता कोशिकाओं के बीच अंतर पर ध्यान दिया जाता है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anasthesia machine, e.g. Anaesthesia Unit U-400</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>8323001</td>
			<td>used for isofluran anasthesia during surgery and imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-induction chamber 1.4 L</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>8329002</td>
			<td>connect via tubing to U-400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-gas routing switch</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>8433005</td>
			<td>connect via tubing to U-400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AngioSense 680 EX</td>
			<td>Percin Elmer</td>
			<td>NEV10054EX</td>
			<td>imaging agent for injection, used to image blood vessels in human islet grafts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator tubes assemblies</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5177-5EA</td>
			<td>connect with pulled capillary pipettes for manual islet picking</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (Temgesic) 0.3mg/ml</td>
			<td>Schering-Plough Europ&#233;</td>
			<td>64022</td>
			<td>fluid, for pain relief</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capillary pipettes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>321242C</td>
			<td>used together with Aspirator tubes assemblies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran-Texas Red (TR), 70kDa</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D1830</td>
			<td>imaging agent for injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye cannula, blunt end , 25 G</td>
			<td>BVI Visitec/BD</td>
			<td>BD585107</td>
			<td>custom made from Tapered Hydrode lineator [Blumenthal], dimensions: 0.5 x 22mm (25G x 7/8in) (45&#8304;), tip tapered to 30 G (0.3mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye gel</td>
			<td>Novartis</td>
			<td></td>
			<td>Viscotears, contains Carbomer 2 mg/g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe 0.5 ml, Model 1750 TPLT</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>81242</td>
			<td>Plunger type gas-tight syringe for islet injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Head holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Head holding adapter</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>SG-4N-S</td>
			<td>assemled onto metal plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-gas mask</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>GM-4-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-UST-2 Solid Universal Joint</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>UST-2</td>
			<td>assemled onto metal plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-custom made metal plate for head-holder assembly</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Dumont #5, straight</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>0207-5TI-PS or 0208-5-PS</td>
			<td>attached to UST-2 (custom made)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad, custom made</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>taped to the stereotaxic platform</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human islet culture media</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-CMRL 1066</td>
			<td>ICN Biomedicals</td>
			<td></td>
			<td>cell culture media for human islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-HEPES</td>
			<td>GIBCO BRL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-L-glutamin</td>
			<td>GIBCO BRL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Gentamycin</td>
			<td>GIBCO BRL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Fungizone</td>
			<td>GIBCO BRL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Ciproxfloxacin</td>
			<td>Bayer healthcare AG</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Nicotinamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image analysis software</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td>Imaris 9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Aquisition software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>ZEN 2010</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infrared lamp</td>
			<td>VWR</td>
			<td>1010364937</td>
			<td>used to keep animals warm in the wake-up cage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane Isoflo</td>
			<td>Abott Scandinavia/Apotek</td>
			<td></td>
			<td>fluid, for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 25 G (0.5 x 16mm), orange</td>
			<td>BD</td>
			<td>10442204</td>
			<td>used as scalpel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, 90mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>391-0440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Photon/confocal microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-LSM7 MP upright microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Ti:Sapphire laser Tsunami</td>
			<td>Spectra-Physics, Mai Tai</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-long distance water-dipping lens 20x/NA1.0</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-ET710/40m (Angiosense 680)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>288003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-ET645/65m-2p (TR)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>NC528423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-ET525/50 (GFP)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-ET610/75 (tomato)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-main beam splitter T680lpxxr</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>T680lpxxr</td>
			<td>Dichroic mirror to transmit 690 nm and above and reflect 440 to 650 nm size 25.5 x 36 x 1 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polythene tubing (0.38mm ID, 1.09 mm OD)</td>
			<td>Smiths Medical Danmark</td>
			<td>800/100/120</td>
			<td>to connect with Hamilton syringe and eye canula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Model SMZ645, for islet picking</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope (Flourescence)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for islet graft imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-AZ100 Multizoom</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>wide field and long distance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-AZ Plan Apo 1x</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-AZ Plan Apo 4x</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-AZ-FL Epiflourescence with C-LHGFI HG lamp</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-HG Manual New Intensilight</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Epi-FL Filter Block TEXAS RED</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>contains EX540-580, DM595 and BA600-660</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Epi-FL Filter Block G-2A</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>(EX510-560, DM575 and BA590)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Epi-FL Filter Block B-2A</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>(EX450-490, DM505 and BA520)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-DS-Fi1 Colour Digital Camera (5MP)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1-ml, Omnitix</td>
			<td>Braun</td>
			<td>9161406V</td>
			<td>for Buprenorphine injection, used with 27 G needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tape</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

longitudinal in vivo imaging and quantification of human pancreatic islet grafting and contributing host cells in the anterior eye chamber

इमेजिंग बीटा कोशिकाओं आइलेट प्रत्यारोपण को समझने की दिशा में एक महत्वपूर्ण कदम है। हालांकि बीटा सेल जीव विज्ञान की रिकॉर्डिंग के लिए विभिन्न इमेजिंग प्लेटफार्मों को विकसित किया गया है और वीवो मेंउपयोग किया गया है, वे एकल सेल संकल्प और निरंतर देशांतर रिकॉर्डिंग की अनुमति देने के मामले में सीमित हैं। कॉर्निया की पारदर्शिता के कारण, चूहों में आंख (एसीई) का पूर्वकाल कक्ष मानव और माउस अग्नाशय आइलेट सेल जीव विज्ञान का अध्ययन करने के लिए अच्छी तरह से अनुकूल है। यहां इस बात का वर्णन दिया गया है कि व्यक्तिगत मानव आइलेट ग्राफ्ट के ग्राफ्टिंग और पुनर्संवहन की निरंतर देशांतर रिकॉर्डिंग करने के लिए इस दृष्टिकोण का उपयोग कैसे किया जा सकता है। मानव आइलेट ग्राफ्ट को एसीई में डाला जाता है, जो मंजूरी का उपयोग करके होता है। (सीजी)-जीटी(रोजा) 26Sortm4-Rag2-/-प्राप्तकर्ताओं के रूप में चूहों ।Rag2-/-tm4 यह प्राप्तकर्ता बनाम दाता कोशिकाओं के विस्तार की जांच और भ्रष्टाचार के एनकैप्सुलेशन और संवहनी को बढ़ावा देने में प्राप्तकर्ता कोशिकाओं के योगदान के लिए अनुमति देता है। इसके अलावा, आइलेट वॉल्यूम या खंडित वैक्यूलेचर और आइलेट कैप्सूल बनाने वाले प्राप्तकर्ता कोशिकाओं के छवि विश्लेषण और मात्राकरण के लिए एक कदम-दर-कदम दृष्टिकोण रेखांकित किया गया है।

गैर लेबल मानव आइलेट्स 8 सप्ताह पुरानी महिला NOD के इक्का में प्रत्यारोपित किया गया । (सीजी)-जीटी (रोजा) 26Sortm4-Rag2-/--(NOD।tm4Rag2-/- रोजा- टमाटर। Rag2−/−)प्राप्तकर्ता चूहों। मानव ऊतक अस्वीकृति क...

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Longitudinal In Vivo Imaging and Quantification of Human Pancreatic Islet Grafting and Contributing Host Cells in the Anterior Eye Chamber

इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य मानव अग्नाशय आइलेट एनग्रेफ्टमेंट प्रक्रिया और योगदान मेजबान बनाम दाता कोशिकाओं की गतिशीलता की लगातार निगरानी करना है। यह एक मंजूरी के आंख (ACE) के पूर्ववर्ती कक्ष में मानव आइलेट्स प्रत्यारोपण द्वारा पूरा किया जाता है । (Cg)-gt (ROSA) 26Sortm4-Rag2-/-माउसप्राप्तकर्ता दोहराया 2-फोटॉन इमेजिंग के बाद ।Rag2-/-

वीवो इमेजिंग में देशांतर और मानव अग्नाशय आइलेट ग्राफ्टिंग और पूर्वकाल नेत्र कक्ष में मेजबान कोशिकाओं का योगदान

Imaging beta cells is a key step towards understanding islet transplantation. Although different imaging platforms for the recording of beta cell biology ...

ऐस एक इष्टतम इमेजिंग स्थलों है। यह एक ग्राफ्टिंग स्थिति में उनके कार्य और व्यवहार्यता का अध्ययन करने के लिए आइलेट कोशिकाओं के वीवो इमेजिंग में लंबे समय तक इसे दोहराने का समर्थन करता है। इसे वास्तविक समय में शारीरिक और रोग स्थितियों के तहत अन्य पहलुओं का अध्ययन करने के लिए भी बढ़ाया जा सकता है।ऐस तकनीक का लाभ इस तथ्य में निहित है कि एक ही व्यक्तिगत मानव अग्नाशय के आइलेट्स को विस्तारित अवधि के लिए उप-सेलुलर संकल्प के साथ गैर-निवासात्मक रूप से पालन किया जा सकता है। बीटा सेल रिप्लेसमेंट थेरेपी की सफलता दर में सुधार जारी है। हालांकि, वीवो में आइलेट ग्राफ्टिंग और अस्तित्व की दक्षता का मूल्यांकन करना अभी भी चुनौतीपूर्ण बना हुआ है।यह विधि आइलेट प्रत्यारोपण के परिणामों का आकलन और अनुकूलन करने में मदद कर सकती है। यह दृष्टिकोण केवल अग्नाशय के आइलेट्स तक ही सीमित नहीं है। यह प्रभावित ऊतकों का अध्ययन करने के लिए भी अच्छी तरह से अनुकूल है।उदाहरण के लिए, मधुमेह की जटिलताओं में, गुर्दे की ग्लोमेरुली या जिगर के टुकड़े की तरह, बस कुछ नाम करने के लिए। माउस को गर्म हीटिंग पैड पर रखने के लिए इसे हेड होल्डर में रखें और नाक मास्क पर रखें। सिर को थोड़ा उठाने के लिए अंगूठे और इंडेक्स फिंगर का इस्तेमाल करें।इसे किनारों पर धातु के टुकड़ों के साथ जकड़ना। यह सुनिश्चित करना कि कान के टुकड़े कान के सीधे नीचे सिर को ठीक करते हैं। चमड़े के नीचे माउस के पीछे बुप्रेनोरफिन समाधान इंजेक्ट करें।मुंहफट संदंश का उपयोग करके प्रत्यारोपित की जाने वाली आंखों की पलकों को धीरे-धीरे वापस लें। आंख को बाहर पॉप करें और इसे पॉलीथिन ट्यूब से ढके चिमटी की एक जोड़ी के साथ शिथिल रूप से ठीक करें। पीबीएस के साथ एक पेट्री डिश में पलकों को स्थानांतरित करने के बाद, आंख के कैन्यूलर में लगभग 20 से 30 आइलेट्स उठाएं।ऊपर की ओर 25 गेज सुई के स्तर का उपयोग करके, सावधानी से टिप को कॉर्निया में डालें और एक पार्श्व चीरा बनाएं। सावधानी से आइलेट्स के साथ पूर्व भारित कैनुला के साथ कॉर्निया उठाएं, और धीरे-धीरे आइलेट्स को आंखों में छोड़ें। धीरे-धीरे कैनुला को वापस लें और आंखों पर आई जेल लगाएं।10 मिनट के बाद, संदंश को हटा दें, पलक को पकड़ें और आंख को वापस अपनी सामान्य स्थिति में डाल दें। दो फोटॉन माइक्रोस्कोपी के साथ प्रत्यारोपित मानव आइलेट्स की इमेजिंग के लिए, सिर धारक मंच को माइक्रोस्कोप के नीचे रखें और कॉर्निया और लेंस के बीच विसर्जन तरल के रूप में आंखों पर आंख जेल का प्रशासन करें। उद्देश्य के तहत आंख की स्थिति और छवि प्रत्यारोपित मानव आइलेट्स के रूप में पाठ पांडुलिपि में वर्णित है ।ऑटोफ्लोरेसेंस को हटाने के लिए, इमेज प्रोसेसिंग टैब पर जाएं, चैनल अंकगणित चुनें और चैनल एक माइनस चैनल दो टाइप करें। यह एक नया चैनल चार बनाता है। इसका नाम बदलें।इस प्रक्रिया को दोहराएं और एक नया चैनल पांच बनाने के लिए चैनल तीन माइनस चैनल दो टाइप करें और इसे सभी टमाटर का नाम बदलें। आइलेट को मैन्युअल रूप से एक नई सतह बनाने और जादूगर में मैन्युअल रूप से संपादित करने के लिए परिभाषित करने के लिए। पॉइंटर को चुनिंदा मोड में और 3D व्यू में रखें।और अनुभागों की कल्पना करने के लिए वॉल्यूम पर क्लिक करें। ड्राइंग टैब में कंटूर चुनें और आइलेट सीमा के चारों ओर आकृति ड्राइंग शुरू करने के लिए ड्रा पर क्लिक करें, स्लाइस स्थिति एक में शुरू। फिर एक नई स्लाइस स्थिति में जाएं और ड्राइंग आकृति दोहराएं।आइलेट के शीर्ष पर अंतिम टुकड़ा के साथ समाप्त करें और बनाएं सतह टैब पर क्लिक करके समाप्त करें। अगला खंड, आइलेट वैक्यूलेचर और आइलेट टमाटर फ्लोरेसेंस आइलेट मास्क का उपयोग करके। पहले से परिभाषित आइलेट मास्क ऑब्जेक्ट चुनें, एडिटिंग टैब पर जाएं और मास्क ऑल टैब पर क्लिक करें, जो एक नई विंडो खोलता है।चैनल सेलेक्शन ड्रॉपडाउन मेन्यू में वैक्यूलेचर चैनल चुनें और मास्क लगाने से पहले ऑप्शन डुप्लीकेट चैनल एक्टिवेट करें। लगातार अंदर, बाहर और 0.000 जो एक नया चैनल छह बनाता है करने के लिए सतह के बाहर स्वर सेट। इस चैनल आइलेट वैक्यूलेचर का नाम बदलें।पिछले चरणों को दोहराएं और नए चैनल बनाने के लिए, इसका नाम बदलें, आइलेट टमाटर, चैनल चयन ड्रॉपडाउन मेनू में टमाटर सभी चुनें। फिर दृश्य मेनू में एक नई सतह बनाएं और जादूगर में स्वचालित निर्माण चुनें। स्रोत चैनल को पहले से बनाए गए आइलेट वेक्यूलेचर में सेट करें और पृष्ठभूमि घटाव चुनें।वैकल्पिक रूप से फिल्टर का उपयोग करें। उदाहरण के लिए वॉल्यूम चुनें और फ़िल्टर को विंडो में समायोजित करें, जो चयनित सेवा वस्तुओं को हटा सकता है। जादूगर को समाप्त करें और नई सतह वस्तु, आइलेट वेक्यूलेचर का नाम दें।आइलेट वैक्यूलेचर सर्विस ऑब्जेक्ट में एडिटिंग टैब पर जाकर मास्क ऑल टैब पर क्लिक करें, जो एक नई विंडो खोलता है। चैनल चयन ड्रॉपडाउन मेनू में आइलेट टमाटर चैनल चुनें और सतह के बाहर स्वर सेट 10.000 जो एक नया चैनल बनाता है। इस चैनल का नाम बदलें आइलेट टमाटर वक्यूलेचर।टमाटर कैप्सूल फ्लोरोसेंट सिग्नल को सेगमेंट करने के लिए इमेज प्रोसेसिंग टैब में चैनल अंकगणित का चयन करें और नए चैनल का निर्माण करने वाले चैनल सात माइनस चैनल आठ टाइप करें। इसका नाम बदलकर टमाटर कैप्सूल करें। पहले वर्णित एक नई सतह बनाएं और जादूगर में स्रोत चैनल, आइलेट टमाटर वाक्यूलेचर या टमाटर कैप्सूल चुनें।फिर पृष्ठभूमि घटाव करते हैं। आइलेट बैकस्कैटर फाइल खोलें और एक नई सतह बनाएं। जादूगर में, स्वचालित निर्माण चुनें और रुचि के क्षेत्र को परिभाषित करें।यदि आवश्यक हो, तो सीमा को पूर्ण तीव्रता में समायोजित करें। सतह वस्तु पर या बंद क्लिक किया जा सकता है, इसी चैनल तीव्रता के साथ क्रॉसचेक करने के लिए । जब जादूगर बंद समाप्त हो गया।अंत में, मात्राकरण करें, दृश्य मेनू में एक निर्मित सतह वस्तु का चयन करें, और सांख्यिकी टैब पर जाएं। विस्तृत वॉल्यूम डेटा को पुनः प्राप्त करने के लिए, विस्तृत टैब चुनें और ड्रॉपडाउन मेनू से विशिष्ट मूल्यों और मात्रा का चयन करें। कुल वॉल्यूम मूल्य को पुनः प्राप्त करने के लिए विस्तृत टैब पर जाएं और औसत मूल्य चुनें।इस प्रोटोकॉल के लिए आठ सप्ताह पुरानी महिला लाल फ्लोरोसेंट प्राप्तकर्ता चूहों की आंख के आंतरिक कक्ष में गैर लेबल मानव आइलेट्स प्रत्यारोपण के लिए इस्तेमाल किया गया था । इसके बाद इंटरएक्टिव इमेजिंग सॉफ्टवेयर का इस्तेमाल छवियों से मात्रात्मक डेटा निकालने के लिए किया गया । वीवो फ्लोरोसेंस इमेजिंग में, मानव आइलेट ग्राफ्ट को ऊतक ऑटोफ्लोरेसेंस से महत्वपूर्ण हस्तक्षेप से समझौता किया गया था जिसे चूहों आइलेट ग्राफ्ट में नहीं देखा गया था।शोर अनुपात के लिए संकेत में सुधार करने के लिए, ऑटोफ्लोरेसेंस चैनल घटाया गया था । फिर आइलेट सीमा को आइलेट मास्क कहा जाता है और संबंधित चैनलों को मैन्युअल रूप से परिभाषित किया गया था। अंत में, टमाटर के संकेत को पलक वास्कुलेचर और पलक कैप्सूल और अंतिम सतह प्रतिपादन में विभाजित करने का उपयोग मात्रात्मक डेटा निकालने के लिए किया गया था।यहां दो सप्ताह, दो महीने, पांच महीने और आठ महीने के बाद प्रत्यारोपण में एक ही मानव आइलेट भ्रष्टाचार के एक प्रतिनिधि देशांतर इमेजिंग सत्र के रूप में । मूल रूप से दर्ज कच्चे डेटा की एमआईपी छवियां, आइलेट ऑटोफ्लोरेसेंस हटाने के बाद संसाधित छवियां और एक खंडित आइलेट ऑब्जेक्ट्स दिखाए जाते हैं। पलक इंजेक्शन का प्रदर्शन करते समय, आइलेट्स को थोड़ी मात्रा में प्रीलोड करना सुनिश्चित करें और अपने स्टीरियो माइक्रोस्कोप पर लचीले जुड़वां प्रकाश हथियारों का उपयोग करें, ताकि आइईटी में आइलेट्स को सफलतापूर्वक इंजेक्ट करने के लिए आंखों के चैंबर स्पेस को हाइलाइट किया जा सके।वीवो इमेजिंग में आंखों के बाद तय किया जा सकता है और आगे एंटीबॉडी धुंधला और पारंपरिक हिस्टोलॉजी के लिए जांच की । यह तकनीक वास्तविक समय में और शारीरिक परिस्थितियों में व्यक्तिगत मानव आइलेट्स के कार्यात्मक अध्ययनों के लिए बहुत उपयोगी है, विशेष रूप से संवहनी, व्यवहार्यता और मेटाबोलिक अध्ययन के संदर्भ में।

Research

JoVE Journal

Medicine

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

माउस आंख में जीन थेरेपी वैक्टर और स्टेम सेल के इंजेक्शन Subretinal

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Transplantation into the Anterior Chamber of the Eye for Longitudinal, Non-invasive In vivo Imaging with Single-cell Resolution in Real-time

Transplantation into the Anterior Chamber of the Eye for Longitudinal, Non-invasive In vivo Imaging with Single-cell Resolution in Real-time

आंख की पूर्वकाल चैम्बर में अनुदैर्ध्य, गैर इनवेसिव ट्रांसप्लांटेशन<em&gt; Vivo में</emवास्तविक समय में एकल कक्ष संकल्प के साथ इमेजिंग&gt;

Intravital imaging has emerged as an indispensable tool in biological research.  In the process, many imaging techniques have been developed to study ...

Isolation, Culture, and Imaging of Human Fetal Pancreatic Cell Clusters

मानव भ्रूण अग्नाशय सेल समूहों के अलगाव, संस्कृति, और इमेजिंग

For almost 30 years, scientists have demonstrated that human fetal ICCs transplanted under the kidney capsule of nude mice matured into functioning ...

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

फ्लोरिसेंट SapC-DOPS nanovesicles का उपयोग कर मस्तिष्क ट्यूमर और गठिया के vivo ऑप्टिकल इमेजिंग में

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent ...

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Lepr<sup&gt; DB</sup&gt; टाइप 2 मधुमेह के माउस मॉडल: बरकरार islets के अग्नाशय आइलेट अलगाव और लाइव सेल 2 फोटॉन इमेजिंग

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, ...

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

घोड़े tendinopathy में अस्थि मज्जा mesenchymal स्टेम सेल लेबल टेक्नेटियम -99 m के vivo इमेजिंग और ट्रैकिंग में

Recent advances in the application of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSC) for the treatment of tendon and ligament injuries in the horse suggest ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

अग्नाशय के कैंसर नई उपचार रणनीतियों के विकास के लिए सेल के लक्षण स्टेम का अध्ययन

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

मानव ट्यूमर Xenografts से माउस कोशिकाओं की कमी गौरतलब है कि लक्ष्य प्रकोष्ठों के डाउनस्ट्रीम विश्लेषण बढ़ाता

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

अनुदैर्ध्य<em&gt; Vivo</em&gt; Cerebrovasculature की इमेजिंग: सीएनएस रोगों के लिए प्रासंगिकता

Remodeling of the brain vasculature is a common trait of brain pathologies. In vivo imaging techniques are fundamental to detect cerebrovascular ...

Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo

Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo

लेजर डॉपलर: अग्नाशय में टाप Microvascular Vasomotion को मापने के लिए एक उपकरण Vivo में

As a functional status of microcirculation, microvascular vasomotion is important for the delivery of oxygen and nutrients and the removal of carbon ...