Name: longitudinal in vivo imaging and quantification of human pancreatic islet grafting and contributing host cells in the anterior eye chamber
Uploaded: 2020-06-11T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Longitudinal In Vivo Imaging and Quantification of Human Pancreatic Islet Grafting and Contributing Host Cells in the Anterior Eye Chamber at JoVE.com

この研究は、スウェーデン研究評議会、戦略的研究地域Exodiab、Dnr 2009-1039、LUDC-IRC、ルンド、糖尿病フェルブンデット、バーン糖尿病フェルバンデットの王立生理学会への戦略研究DNR IRC15-0067スウェーデンの財団によって支援されました。

スウェーデンのルンドにある地域倫理委員会は、人間を含む研究の倫理的見直しに関する法律に従って研究を承認した。動物実験は、スウェーデンの動物実験の倫理に厳密に従って行われ、マルメとルンドの倫理委員会によって承認されました。6〜8週齢の免疫不全NOD。(Cg)-Gt(ローザ)26Sortm4-ラグ2-/- (NOD.ローザトマト。Rag2-/-)レシピエントマ?...

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	<li>Kharroubi, A. T., Darwish, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+mellitus:+The+epidemic+of+the+century.">Diabetes mellitus: The epidemic of the century.</a> World Journal of Diabetes. 6 (6), 850-867 (2015).</li><li>Kanak, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+response+in+islet+transplantation.">Inflammatory response in islet transplantation.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 451035 (2014).</li><li>Nanji, S. A., Shapiro, A. 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Advances in Ophthalmology. 122 (3), 163-176 (2011).</li><li>Iwasaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+intolerance+during+prolonged+sevoflurane+anaesthesia.">Glucose intolerance during prolonged sevoflurane anaesthesia.</a> Canadian Journal of Anaesthesia. 43 (10), 1059-1061 (1996).</li><li>Hamilton, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+and+its+applications+in+fluorescent+microscopy+imaging.">Quantification and its applications in fluorescent microscopy imaging.</a> Traffic. 10 (8), 951-961 (2009).</li><li>Michelotti, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PET/MRI+enables+simultaneous+in+vivo+quantification+of+beta-cell+mass+and+function.">PET/MRI enables simultaneous in vivo quantification of beta-cell mass and function.</a> Theranostics. 10 (1), 398-410 (2020).</li><li>Wang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+of+Allogeneic+Islet+Grafts+in+Nonhuman+Primates+Using+MRI.">Monitoring of Allogeneic Islet Grafts in Nonhuman Primates Using MRI.</a> Transplantation. 99 (8), 1574-1581 (2015).</li><li>Gotthardt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+quantification+of+beta+cells+by+PET+imaging:+why+clinical+implementation+has+never+been+closer.">Detection and quantification of beta cells by PET imaging: why clinical implementation has never been closer.</a> Diabetologia. 61 (12), 2516-2519 (2018).</li><li>Joosten, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+the+Pancreatic+beta+Cell+Mass+in+Vivo+with+Exendin+SPECT+during+Hyperglycemia+and+Severe+Insulitis.">Measuring the Pancreatic beta Cell Mass in Vivo with Exendin SPECT during Hyperglycemia and Severe Insulitis.</a> Molecular Pharmaceutics. 16 (9), 4024-4030 (2019).</li><li>Virostko, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+imaging+in+mouse+models+quantifies+beta+cell+mass+in+the+pancreas+and+after+islet+transplantation.">Bioluminescence imaging in mouse models quantifies beta cell mass in the pancreas and after islet transplantation.</a> Molecular Imaging and Biology. 12 (1), 42-53 (2010).</li></ol>

レシピエントとドナー組織の関与を観察することによってヒト膵島細胞移植プロセスを研究する方法を提示する。免疫不全マウス眼の前房にヒトの小島を移植する最小限の侵襲手術の後、マウスは手術後数分以内に迅速に回復する。手順は片目で行われます。一般に、5~7日以降、角膜は、生体内イメージングを行うのに十分に治癒する。
このプロトコルでは、ヒトの小?...

糖尿病は、膵島ベータ細胞の喪失または機能不全からのインスリン産生不十分な結果として、血糖のレベルの上昇を特徴とする代謝疾患のグループを記述し、しばしばインスリン抵抗性を伴う。1型(T1D)および2型糖尿病(T2D)は、ベータ細胞の進行性機能障害が疾患の発症を引き起こす複雑な疾患である。T1Dはベータ細胞に対する自己免疫攻撃によって沈殿し、一方T2Dは代謝因子によって駆動されると考えられるが、低位の全身炎症の証拠は増加する1である。ドナーヒト小島の移植は、特にT1D患者に、生理的血糖コントロールを提供する可能性を提供する。しかし、組織ドナーの不足と貧しい小地の生着は、主流の治療オプションになるための小地移植を妨げている。機能的な小子移植片のかなりの割合は、低酸素、炎症性、免疫原性宿主環境22、33のために、即時の移植後期間(24〜48時間)で失われる。イレット生存率の改善のための介入方法の効率を評価するためには、このような移植の継続的なモニタリングが必要である。
移植後に移植されたヒト膵島の運命を画像化および追跡するin vivo技術は、糖尿病研究4,55に依然として4課題である。現在までに、非侵襲的イメージング技術は、陽電子放出断層撮影(PET)、磁気共鳴画像法(MRI)、または超音波(US)を含む、実験条件5における移植された小島の定量化および機能評価の可能性を示す。しかし、小さな小さな小さな小さな小さな小さい小さい小さいと、それらのモダリティによる定量的な測定は、不十分な解像度に苦しむ。眼前室(ACE)を観察用の移植部位としては、長期間にわたって効果的に高い空間分解能と頻繁なモニタリングを提供する有望な非侵襲的イメージングソリューションである。この方法は、マウスの小子生物学(ヤンら7でレビュー)、自己免疫免疫応答8、ならびにヒトの小子移植9,9、10を研究するためにうまく利用されている。
ここでACE移植法を2光子イメージング手法と組み合わせて、移植後最大10ヶ月間、個々の膵島移植片に対する連続的かつ繰り返しの記録によってヒト膵島の生着プロセスのダイナミクスを調べる。より大きな撮像深度の多光子イメージング特性と、全体的な光漂白および光損傷の減少は、共焦点顕微鏡11のイメージング限界を克服する。蛍光イメージングの定量化には、小島サンプル調製、小島移植、画像取得、島のノイズや背景を除去するための画像フィルタリング、セグメンテーション、定量、データ分析など、いくつかの段階が含まれます。最も困難な手順は、通常、イメージを複数のパーツまたはリージョンに分割または分割することです。これには、バックグラウンドノイズから信号を分離することや、色や形状の類似性に基づいてボクセルの領域をクラスタリングして、たとえば、アイレット血管系を表す3Dボリュームのボクセルを検出してラベル付けすることが含まれます。セグメント化されると、オブジェクトのボリュームサイズなどの統計は、通常、簡単に抽出できます。提供される方法は、セグメンテーションやデータ可視化などのイメージングデータの定量・抽出方法である。特に注意は、ヒト小島における自己蛍光の除去と、受け手細胞を形成する小島の血管系と小島カプセルの区別に関する。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anasthesia machine, e.g. Anaesthesia Unit U-400</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>8323001</td>
			<td>used for isofluran anasthesia during surgery and imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-induction chamber 1.4 L</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>8329002</td>
			<td>connect via tubing to U-400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-gas routing switch</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>8433005</td>
			<td>connect via tubing to U-400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AngioSense 680 EX</td>
			<td>Percin Elmer</td>
			<td>NEV10054EX</td>
			<td>imaging agent for injection, used to image blood vessels in human islet grafts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator tubes assemblies</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5177-5EA</td>
			<td>connect with pulled capillary pipettes for manual islet picking</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (Temgesic) 0.3mg/ml</td>
			<td>Schering-Plough Europ&#233;</td>
			<td>64022</td>
			<td>fluid, for pain relief</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capillary pipettes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>321242C</td>
			<td>used together with Aspirator tubes assemblies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran-Texas Red (TR), 70kDa</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D1830</td>
			<td>imaging agent for injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye cannula, blunt end , 25 G</td>
			<td>BVI Visitec/BD</td>
			<td>BD585107</td>
			<td>custom made from Tapered Hydrode lineator [Blumenthal], dimensions: 0.5 x 22mm (25G x 7/8in) (45&#8304;), tip tapered to 30 G (0.3mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye gel</td>
			<td>Novartis</td>
			<td></td>
			<td>Viscotears, contains Carbomer 2 mg/g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe 0.5 ml, Model 1750 TPLT</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>81242</td>
			<td>Plunger type gas-tight syringe for islet injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Head holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Head holding adapter</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>SG-4N-S</td>
			<td>assemled onto metal plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-gas mask</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>GM-4-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-UST-2 Solid Universal Joint</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>UST-2</td>
			<td>assemled onto metal plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-custom made metal plate for head-holder assembly</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Dumont #5, straight</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>0207-5TI-PS or 0208-5-PS</td>
			<td>attached to UST-2 (custom made)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad, custom made</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>taped to the stereotaxic platform</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human islet culture media</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-CMRL 1066</td>
			<td>ICN Biomedicals</td>
			<td></td>
			<td>cell culture media for human islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-HEPES</td>
			<td>GIBCO BRL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-L-glutamin</td>
			<td>GIBCO BRL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Gentamycin</td>
			<td>GIBCO BRL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Fungizone</td>
			<td>GIBCO BRL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Ciproxfloxacin</td>
			<td>Bayer healthcare AG</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Nicotinamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image analysis software</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td>Imaris 9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Aquisition software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>ZEN 2010</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infrared lamp</td>
			<td>VWR</td>
			<td>1010364937</td>
			<td>used to keep animals warm in the wake-up cage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane Isoflo</td>
			<td>Abott Scandinavia/Apotek</td>
			<td></td>
			<td>fluid, for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 25 G (0.5 x 16mm), orange</td>
			<td>BD</td>
			<td>10442204</td>
			<td>used as scalpel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, 90mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>391-0440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Photon/confocal microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-LSM7 MP upright microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Ti:Sapphire laser Tsunami</td>
			<td>Spectra-Physics, Mai Tai</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-long distance water-dipping lens 20x/NA1.0</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-ET710/40m (Angiosense 680)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>288003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-ET645/65m-2p (TR)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>NC528423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-ET525/50 (GFP)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-ET610/75 (tomato)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-main beam splitter T680lpxxr</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>T680lpxxr</td>
			<td>Dichroic mirror to transmit 690 nm and above and reflect 440 to 650 nm size 25.5 x 36 x 1 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polythene tubing (0.38mm ID, 1.09 mm OD)</td>
			<td>Smiths Medical Danmark</td>
			<td>800/100/120</td>
			<td>to connect with Hamilton syringe and eye canula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Model SMZ645, for islet picking</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope (Flourescence)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for islet graft imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-AZ100 Multizoom</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>wide field and long distance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-AZ Plan Apo 1x</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-AZ Plan Apo 4x</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-AZ-FL Epiflourescence with C-LHGFI HG lamp</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-HG Manual New Intensilight</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Epi-FL Filter Block TEXAS RED</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>contains EX540-580, DM595 and BA600-660</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Epi-FL Filter Block G-2A</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>(EX510-560, DM575 and BA590)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Epi-FL Filter Block B-2A</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>(EX450-490, DM505 and BA520)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-DS-Fi1 Colour Digital Camera (5MP)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1-ml, Omnitix</td>
			<td>Braun</td>
			<td>9161406V</td>
			<td>for Buprenorphine injection, used with 27 G needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tape</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

longitudinal in vivo imaging and quantification of human pancreatic islet grafting and contributing host cells in the anterior eye chamber

ベータ細胞のイメージングは、小子移植を理解するための重要なステップです。ベータ細胞生物学の記録のための異なるイメージングプラットフォームが 開発され、インビボで利用されているが、それらは単一細胞分解能および連続的な縦断記録を可能にするという点で限られている。角膜の透明性のために、マウスの眼前房(ACE)は、ヒトおよびマウス膵島細胞生物学の研究に適している。ここでは、このアプローチを使用して、個々のヒト小口移植片の移植および再血管化の連続的な縦方向の記録を行うことができる方法の説明を示す。ヒトの小子移植片は、NODを使用して、ACEに挿入される。(Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4-Rag2-/-マウスをレシピエントとして使用する。これにより、レシピエント対ドナー細胞の拡張の調査と、移植片のカプセル化および血管化を促進するレシピエント細胞の寄与を可能にする。また、レシピエント細胞を形成する島の体積またはセグメント化された血管系および小島カプセルの画像分析および定量化のためのステップバイステップのアプローチが概説されている。

非標識ヒト小島を8週齢の雌NODのACEに移植した。(Cg)-Gt(ローザ)26Sortm4-ラグ2-/-(NOD.ローザトマト。Rag2-/−)レシピエントマウス。ヒト組織拒絶反応を防ぐために、免疫不全Rag2ノックアウトマウスをレシピエントとして選んだ。これらのトランスジェニックマウスにおいて、全ての細胞および組織は、レシピエントおよびドナー組織の明確?...

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Longitudinal In Vivo Imaging and Quantification of Human Pancreatic Islet Grafting and Contributing Host Cells in the Anterior Eye Chamber

このプロトコルの目的は、ヒト膵島の生着プロセスと寄与する宿主対ドナー細胞のダイナミクスを継続的に監視することです。これは、NODの眼の前房(ACE)にヒトの小島を移植することによって達成される。(Cg)-Gt(ローザ)26Sortm4-Rag2-/-マウスの受信者に続いて2光子イメージングを繰り返す。

前眼室におけるヒト膵島移植および寄与宿主細胞のイメージングと定量

Imaging beta cells is a key step towards understanding islet transplantation. Although different imaging platforms for the recording of beta cell biology ...

ACE は最適なイメージングのサイトです。移植状況におけるそれらの機能および生存率を研究するために、長期間インビボでのイレット細胞イメージングでそれを繰り返すことを支持する。また、リアルタイムで生理学的および病理学的条件下で他の側面を研究するために拡張することができます.ACE技術の利点は、同じ個々のヒト膵島が長期間にわたって細胞下解像度で非侵襲的に追跡することができるという事実にあります。ベータ細胞補充療法の成功率は改善し続けている。しかし、インビボでのイレット移植および生存の効率を評価することは依然として困難である。この方法は、小子移植の結果を評価し、最適化するのに役立つ可能性があります。このアプローチは膵島のみに限定されません。また、影響を受ける組織を研究するのに適しています。例えば、糖尿病性合併症では、腎臓糸球体や肝臓片のような、ほんのいくつかを挙げるように。温かい加熱パッドの上にマウスを置き始めるには、ヘッドホルダーに置き、ノーズマスクに置きます。親指と人差し指を使って頭を少し持ち上げます。側面に金属片を付けて留めます。耳の部分が耳の真下に頭を固定することを確認します。マウスの背面にブプレノルフィン溶液を皮下注射する。鈍い鉗子を使用して移植される眼のまぶたを穏やかに引き込む。目を飛び出し、ポリテーンチューブで覆われたピンセットでゆるく固定します。PBSでまぶたをペトリ皿に移した後、目のカナラに約20〜30個の小島を拾います。25ゲージの針レベルを上にして、慎重に先端を角膜に挿入し、単一の横切開を行います。カニューレをプリロードした角膜を慎重に持ち上げ、ゆっくりと小島を目に放出します。カニューレをゆっくりと引っ込め、目に目ゲルを塗布します。10分後、鉗子を取り外し、まぶたを保持し、目を通常の位置に戻します。2つの光子顕微鏡で埋め込まれたヒト小島のイメージングのために、ヘッドホルダープラットフォームを顕微鏡の下に置き、角膜とレンズの間の浸漬液として眼に目ゲルを投与する。目的の下に目を配置し、テキスト原稿に記載されているように、埋め込まれたヒト小島を画像化します。自己蛍光を除去するには、画像処理タブに移動し、チャンネルの算術を選択し、チャンネル1からチャンネル2を引いたものを入力します。これにより、新しいチャネル 4 が作成されます。血管系の名前を変更します。このプロセスを繰り返し、チャネル 3 マイナス チャンネル 2 を入力して新しいチャンネル 5 を作成し、トマトの名前を全て変更します。この小水を定義するには、手動で新しいサーフェスを作成し、ウィザードで手動で編集を選択します。ポインタを選択モードと 3D ビューに保持します。そして、セクションを視覚化するボリュームをクリックします。図面タブで輪郭を選択し、[描画]をクリックして、スライス位置1から、小地の境界線の周りに輪郭を描き始めます。次に、新しいスライス位置に移動し、描画の輪郭を繰り返します。最後のスライスを小水の上部に置き、最後に [サーフェスの作成] タブをクリックします。次のセグメントは、アイレットマスクを用いたバレーバレーの脈管及びトマトの蛍光である。以前に定義したアイレットマスクオブジェクトを選択し、編集タブに移動してマスクの[すべて]タブをクリックすると、新しいウィンドウが開きます。チャンネル選択ドロップダウンメニューで血管構造チャンネルを選択し、マスクを適用する前にオプションの重複チャンネルをアクティブにします。内部、外側、および新しいチャネル 6 を作成する 0.000 に外側のボクセルを設定します。このチャンネルの小口血管構造の名前を変更します。前の手順を繰り返し、チャンネル選択ドロップダウンメニューでトマトをすべて選択し、新しいチャンネルを作成し、名前を変更し、トマトを選択します。次に、シーンメニューで新しいサーフェスを作成し、ウィザードで自動作成を選択します。ソースチャネルを以前に作成した小海峡の脈管構造に設定し、背景減算を選択します。オプションでフィルターを使用します。たとえば、ボリュームを選択し、選択したサービスオブジェクトを削除できるウィンドウでフィルターを調整します。ウィザードを終了し、新しいサーフェス オブジェクト、小地の血管構造に名前を付けます。「小州脈管構造」サービスオブジェクトで編集タブに移動し、マスクの[すべて]タブをクリックすると、新しいウィンドウが開きます。チャンネル選択ドロップダウンメニューでアイレットトマトチャンネルを選択し、新しいチャンネルを作成する10.000に表面外のボクセルを設定します。このチャンネルの小口トマト血管系の名前を変更します。トマトカプセル蛍光信号をセグメント化するには、画像処理タブでチャンネルの算術を選択し、チャネル7マイナスチャンネル8を入力して新しいチャンネルを作成します。トマトカプセルの名前を変更します。前に説明したように新しい表面を作成し、ソースチャンネル、ウィザードでトマトの血管またはトマトカプセルを選択します。次に、バックグラウンドの減算を実行します。小子の後方散乱ファイルを開き、新しいサーフェスを作成します。ウィザードで、自動作成を選択し、対象の領域を定義します。必要に応じて、しきい値を絶対強度で調整します。サーフェス オブジェクトは、クリックしてオンまたはオフにして、対応するチャネル強度とクロスチェックできます。完了したら、ウィザードを閉じます。最後に、定量を実行し、シーンメニューで作成したサーフェスオブジェクトを選択して、統計情報タブに移動します。詳細なボリュームデータを取得するには、詳細タブを選択し、ドロップダウンメニューから特定の値とボリュームを選択します。合計ボリューム値を取得するには、詳細タブに移動し、平均値を選択します。このプロトコルは、8週齢の雌の赤い蛍光レシピエントマウスの眼の内部チャンバーに非標識ヒト小島を移植するために使用された。その後、インタラクティブイメージングソフトウェアを使用して、画像から定量的なデータを抽出しました。生体内フルオレセンス画像では、マウスの小子移植片では観察されなかった組織自己蛍光からの有意な干渉によってヒト小口移植片が損なわれた。信号対雑音比を改善するために、自己蛍光チャネルを減算した。その後、アイレットマスクと呼ばれる小子の境界と対応するチャネルを手動で定義しました。最後に、トマト信号を眼瞼の血管構造および眼瞼カプセルへのセグメンテーションと最終表面レンダリングを使用して定量的データを抽出した。ここでは、移植後2週間、2ヶ月、5ヶ月および8ヶ月で同じヒト小島移植片の代表的な縦断画像セッションとして。もともと記録された生データのMIP画像、小子自家蛍光除去後の処理画像およびセグメント化された小子オブジェクトが示されている。まぶたの注入を行う場合は、小さなボリュームで小島をプリロードし、ステレオ顕微鏡に柔軟なツインライトアームを使用して、ACEに島を正常に注入するために眼室スペースを強調してください。インビボイメージングに続いて、眼を固定し、抗体染色および従来の構造学についてさらに調査することができる。この技術は、特に血管化、生存率および代謝研究の文脈において、リアルタイムおよび生理学的条件下での個々のヒト小島の機能研究に非常に有用である。

Research

JoVE Journal

Medicine

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

マウスの眼の中に遺伝子治療ベクターと幹細胞の網膜下注入

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Transplantation into the Anterior Chamber of the Eye for Longitudinal, Non-invasive In vivo Imaging with Single-cell Resolution in Real-time

Transplantation into the Anterior Chamber of the Eye for Longitudinal, Non-invasive In vivo Imaging with Single-cell Resolution in Real-time

縦用の眼の前房に移植、非侵襲<emインビボ&gt;</emリアルタイムでのシングルセル分解能&gt;イメージング

Intravital imaging has emerged as an indispensable tool in biological research.  In the process, many imaging techniques have been developed to study ...

Isolation, Culture, and Imaging of Human Fetal Pancreatic Cell Clusters

ヒト胎児膵臓細胞クラスターの単離、培養、およびイメージング

For almost 30 years, scientists have demonstrated that human fetal ICCs transplanted under the kidney capsule of nude mice matured into functioning ...

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

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蛍光SAPC-DOPSナノベシクルを用いて脳腫瘍、関節炎のin vivo光イメージング中

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent ...

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

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LEPR<sup&gt; DB</sup&gt; 2型糖尿病のマウスモデル：無傷の膵島の膵島単離およびライブセル2光子イメージング

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, ...

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

馬腱でテクネチウム-99m標識骨髄間葉系幹細胞のin vivoイメージングと追跡中

Recent advances in the application of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSC) for the treatment of tendon and ligament injuries in the horse suggest ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

新しい治療戦略を開発するための膵臓癌幹細胞特性を研究

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

ヒト腫瘍異種移植片からマウス細胞の枯渇は大幅に標的細胞の下流分析を向上させます

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

縦<em&gt;インビボ</em&gt;脳血管系のイメージング：中枢神経系疾患との関連

Remodeling of the brain vasculature is a common trait of brain pathologies. In vivo imaging techniques are fundamental to detect cerebrovascular ...

Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo

Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo

レーザーのドップラー: 膵微小血管皮膚血管運動In Vivo測定のためのツール

As a functional status of microcirculation, microvascular vasomotion is important for the delivery of oxygen and nutrients and the removal of carbon ...