Name: longitudinal in vivo imaging and quantification of human pancreatic islet grafting and contributing host cells in the anterior eye chamber
Uploaded: 2020-06-11T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Longitudinal In Vivo Imaging and Quantification of Human Pancreatic Islet Grafting and Contributing Host Cells in the Anterior Eye Chamber at JoVE.com

이 연구는 스웨덴 연구 위원회, 전략적 연구 지역 외디아브, Dnr 2009-1039, 전략 연구 Dnr IRC15-0067, 룬드의 왕립 물리 학회, 당뇨병퓌르분데트 및 바르니프뢰르분데트에 의해 지원되었다.

스웨덴 룬드의 지역 윤리위원회는 인간과 관련된 연구의 윤리적 검토에 관한 법에 따라 연구를 승인했습니다. 동물 실험은 스웨덴동물 실험윤리에 따라 엄격하게 수행되었으며 말뫼와 룬드의 윤리위원회의 승인을 받았습니다. 6~8주된 면역결핍 NOD. (Cg)-Gt (ROSA)26Sortm4-Rag2-/ - (NOD. 로사 토마토. Rag2Rag2-/-받는 마우스는 인간섬(10)?...

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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PET/MRI+enables+simultaneous+in+vivo+quantification+of+beta-cell+mass+and+function.">PET/MRI enables simultaneous in vivo quantification of beta-cell mass and function.</a> Theranostics. 10 (1), 398-410 (2020).</li><li>Wang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+of+Allogeneic+Islet+Grafts+in+Nonhuman+Primates+Using+MRI.">Monitoring of Allogeneic Islet Grafts in Nonhuman Primates Using MRI.</a> Transplantation. 99 (8), 1574-1581 (2015).</li><li>Gotthardt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+quantification+of+beta+cells+by+PET+imaging:+why+clinical+implementation+has+never+been+closer.">Detection and quantification of beta cells by PET imaging: why clinical implementation has never been closer.</a> Diabetologia. 61 (12), 2516-2519 (2018).</li><li>Joosten, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+the+Pancreatic+beta+Cell+Mass+in+Vivo+with+Exendin+SPECT+during+Hyperglycemia+and+Severe+Insulitis.">Measuring the Pancreatic beta Cell Mass in Vivo with Exendin SPECT during Hyperglycemia and Severe Insulitis.</a> Molecular Pharmaceutics. 16 (9), 4024-4030 (2019).</li><li>Virostko, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+imaging+in+mouse+models+quantifies+beta+cell+mass+in+the+pancreas+and+after+islet+transplantation.">Bioluminescence imaging in mouse models quantifies beta cell mass in the pancreas and after islet transplantation.</a> Molecular Imaging and Biology. 12 (1), 42-53 (2010).</li></ol>

수급자와 기증자 조직의 개입을 관찰하여 인간 췌장 세포 이식 과정을 연구하는 방법이 제시된다. 면역 결핍 마우스 눈의 전방 챔버에 인간 섬을 이식 하는 최소한의 침습 수술 후, 마우스 는 수술 후 분 이내에 신속 하 게 복구. 절차는 한쪽 눈에 수행됩니다. 일반적으로, 5-7 일 이후 이식 후 각막은 충분히 인트인트 이미징을 수행 하기 위해 치유.
이 프로토콜에서는 인간 적?...

당뇨병 mellitus는 종종 인슐린 저항을 동반췌형 연하 베타 세포의 손실 또는 기능 장애에서 불충분 한 인슐린 생산의 결과로 혈당의 높은 수준을 특징으로 하는 대사 질환의 그룹을 설명합니다. 타입-1 (T1D) 및 타입-2 당뇨병 (T2D)는 베타 세포의 진보적인 기능 장애가 질병 발달을 일으키는 원인이 되는 복잡한 질병입니다. T1D는 베타 세포에 대한 자가 면역 공격에 의해 침전되고, T2D는 신진 대사 요인에 의해 구동되는 것으로 간주되는 반면, 저급 전신 염증1의증가 증거이기는하지만. 기증자 인간 섬, 특히 T1D 환자에게 이식은 생리적 혈당 조절을 제공할 수 있는 잠재력을 제공합니다. 그러나, 조직 기증자와 가난한 축 소 이식의 부족은 주류 치료 옵션이 될 수있는 islet 이식을 방지하고있다. 저산소, 염증성, 면역원성 숙주 환경2,,3으로인해 즉각적인 이식 후 기간(24-48h)에서 기능성 축약 이식의 상당 부분이 손실된다. 섬 생존의 개선을 위한 개입 방법의 효율성을 평가하기 위해, 이러한 이식의 지속적인 모니터링이 필요하다.
이식 후 이식된 인간 췌장암의 운명을 이미지화하고 추적하는 생체기술에서 여전히 당뇨병 연구에 대한 도전으로 남아있다 4,,5. 현재까지, 양성선 방출 단층 촬영(PET), 자기 공명 영상(MRI), 또는 초음파(미국)를 포함한 비침습적 이미징 기술은 실험 조건에서 이식된 섬의 정량화 및 기능적 평가가능성을보여준다 5. However, given the small islet sizes, quantitative measurements by those modalities suffer from insufficient resolution. 관찰을 위한 이식 부위로서 눈의 전방 챔버(ACE)는 장기간에 걸쳐 효과적으로 더 높은 공간 해상도와 빈번한 모니터링을 제공하는 유망한 비침습적 이미징 솔루션이다6. 이 방법은 마우스 개강 생물학(양외7에서검토), 자가면역 반응8,인간 유일 접목9,,10을연구하기 위해 성공적으로 악용되었다.
여기서 ACE 이식 방법은 이식 후 최대 10개월 동안 개별 축약 이식에 대한 연속적이고 반복된 기록에 의한 인간 췌장 이식 과정의 역학을 조사하기 위한 2-광자 이미징 접근법과 결합된다. 더 큰 이미징 깊이의 다광 화상 진찰 특성및 감소된 전반적인 광표백 및 사진 손상은 공초점 현미경검사법 11의화상 진찰 한계를 극복합니다. 형광 화상 진찰의 정량화는 islet 견본 준비, islet 이식, 화상 취득, 심상 여과를 포함하여 몇몇 단계를 관련시킵니다, 탈모 소음 또는 배경, 분할, 정량화 및 데이터 분석. 가장 어려운 단계는 일반적으로 이미지를 여러 부품 또는 영역으로 분할하거나 분할하는 것입니다. 예를 들어, 신호와 배경 잡음 또는 색상 또는 모양의 유사성에 따라 복셀의 클러스터링 영역을 분리하여 축화 를 나타내는 3D 볼륨의 복셀을 감지하고 레이블을 지정하는 것이 포함될 수 있습니다. 분할되면 개체 볼륨 크기와 같은 통계는 일반적으로 추출하기 간단합니다. 분할 및 데이터 시각화와 같은 이미징 데이터의 정량화 및 추출을 위한 방법이 제공된다. 특히 인간 섬에서 자가형광을 제거하고 아슬렛 혈관과 섬 캡슐 형성 수용자 세포를 구별하는 데 특별한 주의를 기울입니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anasthesia machine, e.g. Anaesthesia Unit U-400</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>8323001</td>
			<td>used for isofluran anasthesia during surgery and imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-induction chamber 1.4 L</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>8329002</td>
			<td>connect via tubing to U-400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-gas routing switch</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>8433005</td>
			<td>connect via tubing to U-400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AngioSense 680 EX</td>
			<td>Percin Elmer</td>
			<td>NEV10054EX</td>
			<td>imaging agent for injection, used to image blood vessels in human islet grafts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator tubes assemblies</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5177-5EA</td>
			<td>connect with pulled capillary pipettes for manual islet picking</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (Temgesic) 0.3mg/ml</td>
			<td>Schering-Plough Europ&#233;</td>
			<td>64022</td>
			<td>fluid, for pain relief</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capillary pipettes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>321242C</td>
			<td>used together with Aspirator tubes assemblies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran-Texas Red (TR), 70kDa</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D1830</td>
			<td>imaging agent for injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye cannula, blunt end , 25 G</td>
			<td>BVI Visitec/BD</td>
			<td>BD585107</td>
			<td>custom made from Tapered Hydrode lineator [Blumenthal], dimensions: 0.5 x 22mm (25G x 7/8in) (45&#8304;), tip tapered to 30 G (0.3mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye gel</td>
			<td>Novartis</td>
			<td></td>
			<td>Viscotears, contains Carbomer 2 mg/g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe 0.5 ml, Model 1750 TPLT</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>81242</td>
			<td>Plunger type gas-tight syringe for islet injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Head holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Head holding adapter</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>SG-4N-S</td>
			<td>assemled onto metal plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-gas mask</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>GM-4-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-UST-2 Solid Universal Joint</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>UST-2</td>
			<td>assemled onto metal plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-custom made metal plate for head-holder assembly</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Dumont #5, straight</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>0207-5TI-PS or 0208-5-PS</td>
			<td>attached to UST-2 (custom made)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad, custom made</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>taped to the stereotaxic platform</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human islet culture media</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-CMRL 1066</td>
			<td>ICN Biomedicals</td>
			<td></td>
			<td>cell culture media for human islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-HEPES</td>
			<td>GIBCO BRL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-L-glutamin</td>
			<td>GIBCO BRL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Gentamycin</td>
			<td>GIBCO BRL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Fungizone</td>
			<td>GIBCO BRL</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Ciproxfloxacin</td>
			<td>Bayer healthcare AG</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Nicotinamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image analysis software</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td>Imaris 9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Aquisition software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>ZEN 2010</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infrared lamp</td>
			<td>VWR</td>
			<td>1010364937</td>
			<td>used to keep animals warm in the wake-up cage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane Isoflo</td>
			<td>Abott Scandinavia/Apotek</td>
			<td></td>
			<td>fluid, for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 25 G (0.5 x 16mm), orange</td>
			<td>BD</td>
			<td>10442204</td>
			<td>used as scalpel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, 90mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>391-0440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Photon/confocal microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-LSM7 MP upright microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Ti:Sapphire laser Tsunami</td>
			<td>Spectra-Physics, Mai Tai</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-long distance water-dipping lens 20x/NA1.0</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-ET710/40m (Angiosense 680)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>288003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-ET645/65m-2p (TR)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>NC528423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-ET525/50 (GFP)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-ET610/75 (tomato)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-main beam splitter T680lpxxr</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>T680lpxxr</td>
			<td>Dichroic mirror to transmit 690 nm and above and reflect 440 to 650 nm size 25.5 x 36 x 1 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polythene tubing (0.38mm ID, 1.09 mm OD)</td>
			<td>Smiths Medical Danmark</td>
			<td>800/100/120</td>
			<td>to connect with Hamilton syringe and eye canula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Model SMZ645, for islet picking</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope (Flourescence)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for islet graft imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-AZ100 Multizoom</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>wide field and long distance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-AZ Plan Apo 1x</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-AZ Plan Apo 4x</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-AZ-FL Epiflourescence with C-LHGFI HG lamp</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-HG Manual New Intensilight</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Epi-FL Filter Block TEXAS RED</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>contains EX540-580, DM595 and BA600-660</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Epi-FL Filter Block G-2A</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>(EX510-560, DM575 and BA590)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-Epi-FL Filter Block B-2A</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>(EX450-490, DM505 and BA520)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-DS-Fi1 Colour Digital Camera (5MP)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1-ml, Omnitix</td>
			<td>Braun</td>
			<td>9161406V</td>
			<td>for Buprenorphine injection, used with 27 G needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tape</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

longitudinal in vivo imaging and quantification of human pancreatic islet grafting and contributing host cells in the anterior eye chamber

화상 진찰 베타 세포는 아일렛 이식을 이해하는 쪽으로 중요한 단계입니다. 베타 세포 생물학의 기록을 위한 다른 화상 진찰 플랫폼이 개발되고 생체 내에서이용되고 있더라도, 단하나 세포 분해능 및 연속적인 세로 기록을 허용하는 측면에서 제한됩니다. 각막의 투명성 때문에 마우스내 눈의 전방 챔버(ACE)는 인간 및 마우스 췌장 세포 생물학을 연구하기에 적합합니다. 다음은 이 접근법이 개별 인간 적인 아슬렛 이식의 접목 및 개조의 연속적인 세로 기록을 수행하는 데 어떻게 사용될 수 있는지에 대한 설명입니다. 인간 적인 아슬렛 이식편은 NOD를 사용하여 ACE에 삽입됩니다. (Cg)-Gt (ROSA)26Sortm4-Rag2-/-마우스를 받는 사람으로. 이것은 기증자 세포 대 수령인의 확장및 접목의 캡슐화 및 혈관화를 승진시키는 수신자 세포의 기여의 조사를 허용합니다. 또한, 배분부 또는 분할된 혈관분기 및 아슬레 캡슐 형성 수용자 세포의 이미지 분석 및 정량화를 위한 단계별 접근법이 설명된다.

표지되지 않은 인간 섬은 8주된 여성 NOD의 ACE로 이식되었다. (Cg)-Gt (ROSA)26Sortm4-Rag2-/ -(NOD. 로사토마토. Rag2-/−)받는 쥐. 인간 조직 거부를 방지하기 위해 면역형 Rag2 녹아웃 마우스를 수령인으로 선택하였다. 이러한 형질전환 마우스에서, 모든 세포와 조직은 수령인과 기증자 조직의 명확한 식별을 허용하는 막 표적 토마토 형광 단백질 (mT)?...

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Longitudinal In Vivo Imaging and Quantification of Human Pancreatic Islet Grafting and Contributing Host Cells in the Anterior Eye Chamber

이 프로토콜의 목표는 인간 췌장 이식 과정과 기여 숙주 대 기증자 세포의 역학을 지속적으로 모니터링하는 것입니다. 이것은 NOD의 눈의 전방 챔버 (ACE)에 인간 섬을 이식하여 달성된다. (Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4-Rag2-/-마우스 수신자가 반복된 2광자 이미징을 수행합니다.

생체 내 눈 챔버에서 인간 췌장 이식 및 기여 호스트 세포의 생체 내 이미징 및 정량화

Imaging beta cells is a key step towards understanding islet transplantation. Although different imaging platforms for the recording of beta cell biology ...

ACE는 최적의 이미징 광경입니다. 그것은 접목 상황에서 그들의 기능 및 생존가능성을 공부하기 위하여 islet 세포의 생체 내 화상 진찰에서 장기적으로 그것을 반복하는 것을 지원합니다. 그것은 또한 실시간으로 생리및 병리학 조건 하에서 그밖 양상을 공부하기 위하여 확장될 수 있습니다.ACE 기술의 장점은 동일한 개별 인간 췌장 섬이 장기간 세포 분해능으로 비침습적으로 따를 수 있다는 사실에 있습니다. 베타 세포 대체 요법의 성공률은 계속 개선됩니다. 그러나, 생체 내에서 섬 접목및 생존의 효율성을 평가하는 것은 여전히 도전남아있다.이 방법은 islet 이식의 결과를 평가하고 최적화하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법은 췌장 섬만으로만 제한되지 않습니다. 그것은 또한 영향을 받는 조직을 공부 에 적합.예를 들어, 당뇨병 합병증에서, 신장 구체 또는 간 조각 처럼, 그냥 몇 가지 이름을. 따뜻한 가열 패드에 마우스를 배치하기 시작하려면 머리 홀더에 배치하고 코 마스크를 착용합니다. 엄지와 검지 손가락을 사용하여 머리를 약간 들어 올립니다.측면에 금속 조각으로 고정. 귀 조각이 귀 바로 아래 머리를 고정하는지 확인합니다. 피하 시 마우스 뒷면에 buprenorphine 용액을 주입합니다.눈꺼풀을 부드럽게 후퇴하여 무딘 집게를 사용하여 이식합니다. 눈을 밖으로 팝업 느슨하게 폴리 에틸렌 튜브로 덮여 핀셋의 쌍으로 고정. 안구건조증을 PBS가 있는 페트리 접시로 옮은 후, 눈칸에 약 20~30개의 섬을 집어들수 있습니다.25 게이지 바늘 레벨을 위쪽으로 사용하여 각막에 팁을 조심스럽게 삽입하고 단일 측면 절개를 합니다. 섬으로 미리 로드된 캐뉼라로 각막을 조심스럽게 들어 올리고 섬이 천천히 눈에 들어올립니다. 천천히 캐뉼라를 철회하고 눈젤을 눈에 바르게 발라주세요.10분 후, 집게를 제거하고 눈꺼풀을 잡고 눈을 정상 위치로 다시 놓습니다. 두 개의 광자 현미경으로 이식된 인간 섬의 이미징을 위해, 현미경 의 밑에 헤드 홀더 플랫폼을 놓고 각막과 렌즈 사이 침수 액체로 눈에 눈 젤을 관리하십시오. 텍스트 원고에 설명된 바와 같이 눈의 위치를 객관적으로 배치하고 이식된 인간 섬을 이미지화합니다.자동 불발성을 제거하려면 이미지 처리 탭으로 이동하여 채널 산술을 선택하고 채널 1을 뺀 채널 2를 입력합니다. 이렇게 하면 새 채널 4가 만들어집니다. 혈관의 이름을 바꿉니다.이 프로세스를 반복하고 채널 3 마이너스 채널 2를 입력하여 새 채널 5를 만들고 토마토의 이름을 모두 바꿉니다. islet을 정의하려면 수동으로 새 표면을 만들고 마법사에서 수동으로 편집하도록 선택합니다. 포인터를 선택 모드와 3D 뷰로 유지합니다.볼륨을 클릭하여 섹션을 시각화합니다. 드로잉 탭에서 윤곽을 선택하고 그림을 클릭하여 슬라이스 위치 1에서 시작하여 개실 테두리 주위에 윤곽그리기를 시작합니다. 그런 다음 새 슬라이스 위치로 이동하고 드로잉 윤곽을 반복합니다.주막 상단의 마지막 슬라이스로 마무리하고 표면 탭 만들기를 클릭하여 끝납니다. 다음 세그먼트, 아슬렛 혈관 및 아슬렛 토마토 형광은 아슬렛 마스크를 사용하여. 이전에 정의된 islet 마스크 개체를 선택하고 편집 탭으로 이동하여 새 창을 여는 모든 탭의 마스크를 클릭합니다.채널 선택 드롭다운 메뉴에서 혈관 채널을 선택하고 마스크를 적용하기 전에 중복 채널을 활성화합니다. 내부, 외부 및 0.000으로 바셀을 설정하여 새로운 채널 6을 만듭니다. 이 채널의 이름을 바꿉니다.이전 단계를 반복하고 채널 선택 드롭다운 메뉴에서 토마토를 모두 선택하고 새 채널을 만들고 이름을 바꾸려면 아틀릿 토마토를 선택합니다. 그런 다음 장면 메뉴에서 새 표면을 만들고 마법사에서 자동 생성을 선택합니다. 원본 채널을 이전에 만든 이슬 vasculature로 설정하고 배경 빼기를 선택합니다.선택적으로 필터를 사용합니다. 예를 들어 볼륨을 선택하고 선택한 서비스 개체를 제거할 수 있는 창에서 필터를 조정합니다. 마법사를 완료하고 새 표면 오브젝트인 islet vasculature의 이름을 지정합니다.islet vasculature 서비스 개체에서 편집 탭으로 이동 하 고 마스크 모든 탭을 클릭, 새 창을 엽니 다. 채널 선택 드롭다운 메뉴에서 아일렛 토마토 채널을 선택하고 새로운 채널을 만드는 10.000으로 바셀을 외부 표면으로 설정합니다. 이 채널의 이름을 바꿀 토마토 혈관.토마토 캡슐 형광 신호를 분할하려면 이미지 처리 탭에서 채널 산술을 선택하고 채널 7 마이너스 채널 8을 선택하여 새로운 채널을 생성합니다. 토마토 캡슐의 이름을 바꿉니다. 이전에 설명한 대로 새 표면을 만들고 마법사에서 소스 채널, 토마토 혈관 또는 토마토 캡슐을 선택합니다.그런 다음 배경 빼기 작업을 수행합니다. 이스렛 백스캐터 파일을 열고 새 표면을 만듭니다. 마법사에서 자동 생성을 선택하고 관심 영역을 정의합니다.필요한 경우 임계값을 절대 강도로 조정합니다. 표면 오브젝트를 클릭하거나 끌 수 있으며 해당 채널 강도를 교차 검사할 수 있습니다. 완료되면 마법사를 닫습니다.마지막으로 정량화를 수행하고 장면 메뉴에서 생성된 표면 오브젝트를 선택하고 통계 탭으로 이동합니다. 자세한 볼륨 데이터를 검색하려면 자세한 탭을 선택하고 드롭다운 메뉴에서 특정 값과 볼륨을 선택합니다. 총 볼륨 값을 검색하려면 자세한 탭으로 이동하여 평균 값을 선택합니다.이 프로토콜은 8주 된 여성 적색 형광 수령마우스의 눈의 내부 챔버로 비 표지된 인간 섬을 이식하는 데 사용되었다. 대화형 이미징 소프트웨어는 이미지에서 정량적 데이터를 추출하는 데 사용되었습니다. 생체 내 형광화상에서, 인간 적인 이슬균 이식편은 마우스 이슬이식에서 관찰되지 않은 조직 자동 형광으로부터의 상당한 간섭에 의해 손상되었다.신호 대 노이즈 비율을 개선하기 위해 자동 형광 채널이 빼졌습니다. 그런 다음 islet 마스크라고 하는 islet 경계와 해당 채널이 수동으로 정의되었습니다. 마지막으로, 토마토 신호의 분할은 눈꺼풀 혈관및 눈꺼풀 캡슐 및 최종 표면 렌더링으로 정량적 데이터를 추출하는 데 사용되었습니다.여기에서 이식 후 2주, 2개월, 5개월 및 8개월에 동일한 인간 적국 이식의 대표적인 세로 화상 진찰 세션으로. 원래 기록된 원시 데이터의 MIP 이미지, islet 자동 형광 제거 후 처리된 이미지 및 분할된 이스탈 개체가 표시됩니다. 눈꺼풀 주입을 수행할 때, 작은 볼륨으로 섬을 미리 로드하고 스테레오 현미경에 유연한 트윈 라이트 암을 사용하여 아실 공간을 강조하여 성공적으로 ACE에 섬을 주입하십시오.생체 내 이미징에 이어 눈을 고정하고 항체 염색 및 종래의 공론학에 대해 더 자세히 조사할 수 있다. 이 기술은 특히 혈관화, 생존 력 및 대사 연구의 맥락에서, 생리적 조건하에서 개별 인간 섬의 기능적 연구에 매우 유용합니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

마우스 눈에 유전자 치료 벡터와 줄기 세포의 Subretinal 주입

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

연구

의학

Transplantation into the Anterior Chamber of the Eye for Longitudinal, Non-invasive In vivo Imaging with Single-cell Resolution in Real-time

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길이, 비 침습적을위한 안구의 앞쪽 상공 회의소에 이식<em&gt; 생체에</em실시간으로 단일 셀 해상도&gt; 영상

Intravital imaging has emerged as an indispensable tool in biological research.  In the process, many imaging techniques have been developed to study ...

Isolation, Culture, and Imaging of Human Fetal Pancreatic Cell Clusters

인간의 태아 췌장 세포 클러스터의 분리, 문화, 및 이미징

For almost 30 years, scientists have demonstrated that human fetal ICCs transplanted under the kidney capsule of nude mice matured into functioning ...

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

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형광 SAPC-DOPS Nanovesicles을 사용하여 뇌 종양 및 관절염의 생체 광학 이미징

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent ...

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

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Lepr<sup&gt; DB</sup&gt; 2 형 당뇨병의 마우스 모델 : 본래 독도 췌장 섬 세포의 분리 및 라이브 셀 2 광자 이미징

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, ...

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

말 건 병증에 골수 중간 엽 줄기 세포를 레이블 테크네튬 99m의 생체 ​​이미징 및 추적에서

Recent advances in the application of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSC) for the treatment of tendon and ligament injuries in the horse suggest ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

췌장암 새로운 치료 전략을 개발하기위한 전지 특성 줄기 공부

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

인간 종양 이종 이식에서 마우스 세포의 고갈은 크게 대상 세포의 다운 스트림 분석을 향상

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

종<em&gt; 생체</em&gt;은 Cerebrovasculature의 이미징 : CNS 질환에 관련성

Remodeling of the brain vasculature is a common trait of brain pathologies. In vivo imaging techniques are fundamental to detect cerebrovascular ...

Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo

Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo

레이저 도플러: 췌 장 섬 Microvascular Vasomotion에 Vivo에서 측정 하기 위한 도구

As a functional status of microcirculation, microvascular vasomotion is important for the delivery of oxygen and nutrients and the removal of carbon ...