Name: vascular casting of adult and early postnatal mouse lungs for micro-ct imaging
Uploaded: 2020-06-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Vascular Casting of Adult and Early Postnatal Mouse Lungs for Micro-CT Imaging at JoVE.com

Diese Forschung wurde teilweise durch das NHLBI Intramural Research Program (DIR HL-006247) unterstützt. Wir danken der NIH Mouse Imaging Facility für die Anleitung bei der Bildaufnahme und -analyse.

Alle hier beschriebenen Methoden wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee (ACUC) des National Heart Lung and Blood Institute genehmigt.
1. Vorbereitung
<ol><li>Injizieren Sie die Maus intraperitoneal mit Heparin (1 Einheit/g Maus Körpergewicht) und lassen Sie es für 2 min ambulate.</li>
	<li>Euthanisieren Sie das Tier in einerCO2-Kammer.</li>
	<li>Ordnen Sie die Maus in einer Supine-Position auf einem chirurgischen Brett an und sichern Sie alle vier Gliedmaßen mit...

Diese Methode, die richtig ausgeführt wird, liefert eindrucksvolle Bilder von pulmonalen arteriellen Netzwerken, die Vergleich und Experimente in Nagetiermodellen ermöglichen. Mehrere kritische Schritte auf dem Weg sorgen für den Erfolg. Zunächst müssen die Ermittler das Tier in der Vorbereitungsphase heparinisieren, um zu verhindern, dass sich Blutgerinnsel in der Lungenvaskulatur und den Kammern des Herzens bilden. Dies ermöglicht den vollständigen arteriellen Transit von Polymerverbindungen. Zweitens, wenn Sie ...

Der Schwerpunkt dieser Technik liegt auf der Visualisierung der pulmonalen arteriellen Architektur mit einer polymerbasierten Verbindung bei Mäusen. Während umfangreiche Arbeiten an systemischen Gefäßbetten wie Gehirn, Herz und Niere1,2,3,4,5durchgeführt wurden, stehen weniger Informationen über die Vorbereitung und Füllung des lungenarterienartigen Netzwerks zur Verfügung. Das Ziel dieser Studie ist es daher, auf frühere Arbeiten6,7,8 zu erweitern und eine detaillierte schriftliche und visuelle Referenz zu liefern, die die Forscher leicht folgen können, um hochauflösende Bilder des Lungenarterienbaums zu erzeugen.
Während es zahlreiche Methoden zur Kennzeichnung und bildgebenden Lungenvaskulatur gibt, wie Magnetresonanztomographie, Echokardiographie oder CT-Angiographie9,10, können viele dieser Modalitäten die kleinen Gefäße nicht ausreichend füllen und/oder erfassen, was den Umfang dessen, was untersucht werden kann, begrenzt. Methoden wie serielle Schnitte und Rekonstruktionen bieten eine hohe Auflösung, sind aber zeit-/arbeitsintensiv11,12,13. Die umgebende Weichteilintegrität wird in traditionellen Korrosionsguss10,13,14,15,16kompromittiert. Auch Tieralter und -größe werden zu Faktoren, wenn man versucht, einen Katheter einzuführen, oder die Auflösung fehlt. Die Polymerinjektionstechnik hingegen füllt die Arterien auf kapillarer Ebene und ermöglicht in Kombination mit dem CT eine unvergleichliche Auflösung5. Proben aus der Mauslunge, die noch jung sind, wurden bis zum 14. Tag erfolgreichgegossen und innerhalb weniger Stunden verarbeitet. Diese können auf unbestimmte Zeit erneut gescannt oder sogar zur histologischen Präparat-/Elektronenmikroskopie (EM) geschickt werden, ohne das vorhandene Weichgewebe17zu beeinträchtigen. Die Haupteinschränkungen dieser Methode sind die Vorabkosten von CT-Geräten/-software, Herausforderungen bei der genauen Überwachung des intravaskulären Drucks und die Unfähigkeit, Daten längs im selben Tier zu erfassen.
Dieses Papier baut auf bestehenden Arbeiten auf, um die Pulmonale-Arterieninjektionstechnik weiter zu optimieren und alters-/größenbezogene Grenzen auf den postnatalen Tag 1 (P1) zu verschieben, um markante Ergebnisse zu erzielen. Es ist am nützlichsten für Teams, die arterielle Gefäßnetzwerke studieren möchten. Dementsprechend bieten wir neue Anleitungen für die Katheterplatzierung/-stabilisierung, eine erhöhte Kontrolle über Füllrate/Volumen und weisen auf bemerkenswerte Fallstricke für einen erhöhten Gusserfolg hin. Die resultierenden Gussteile können dann für zukünftige Charakterisierungen und morphologische Analysen verwendet werden. Vielleicht noch wichtiger ist, dass dies die erste visuelle Demonstration ist, nach unserem Wissen, die den Benutzer durch dieses komplizierte Verfahren führt.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:829px;" width="828">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">1cc syringe</td>
			<td style="width:135px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:117px;">309659</td>
			<td style="width:346px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">20ml Glass Scintillation Vials</td>
			<td style="width:135px;">Fisher</td>
			<td>03-340-25P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">30G Needle</td>
			<td style="width:135px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:117px;">305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">50mL conical tubes</td>
			<td style="width:135px;">Cornin</td>
			<td style="width:117px;">352098</td>
			<td>For sample Storage and scanning</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">60cc syringe</td>
			<td style="width:135px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:117px;">309653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">7-0 silk suture</td>
			<td style="width:135px;">Teleflex</td>
			<td style="width:117px;">103-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Analyze 12.0 Software</td>
			<td style="width:135px;">AnalyzeDirect Inc.</td>
			<td style="width:117px;">N/A</td>
			<td>Primary Software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Amira 6.7 Software</td>
			<td style="width:135px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:117px;">N/A</td>
			<td>Alternative Sofware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">CeramaCut Scissors 9cm</td>
			<td style="width:135px;">Fine Science tools</td>
			<td style="width:117px;">14958-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Ceramic Coated Curved Forceps</td>
			<td style="width:135px;">Fine Science tools</td>
			<td style="width:117px;">11272-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">CO2 Tank</td>
			<td style="width:135px;">Robert&#39;s Oxygen Co.</td>
			<td style="width:117px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Dual syringe pump</td>
			<td style="width:135px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:117px;">EW-74900-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Dumont Mini-Forceps</td>
			<td style="width:135px;">Fine Science tools</td>
			<td style="width:117px;">11200-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Ethanol</td>
			<td style="width:135px;">Pharmco</td>
			<td style="width:117px;">111000200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Formalin</td>
			<td style="width:135px;">Sigma - Life Sciences</td>
			<td style="width:117px;">HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Gauze</td>
			<td style="width:135px;">Covidien</td>
			<td style="width:117px;">441215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;width:231px;">Hemostat</td>
			<td style="width:135px;">Fine Science tools</td>
			<td style="width:117px;">13013-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:231px;">Heparin (1000USP Units/ml)</td>
			<td style="width:135px;">Hospira</td>
			<td style="width:117px;">NDC 0409-2720-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:231px;">Horos Software</td>
			<td style="width:135px;">Horos Project</td>
			<td style="width:117px;">N/A</td>
			<td>Alternative Sofware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">induction chamber</td>
			<td style="width:135px;">n/a</td>
			<td style="width:117px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Kimwipe</td>
			<td style="width:135px;">Fisher</td>
			<td style="width:117px;">06-666</td>
			<td>fiber optic cleaning wipe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Labelling Tape</td>
			<td style="width:135px;">Fisher</td>
			<td style="width:117px;">15966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Magnetic Base</td>
			<td style="width:135px;">Kanetec</td>
			<td style="width:117px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Micro-CT system</td>
			<td style="width:135px;">SkyScan&#160;</td>
			<td style="width:117px;">1172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Microfil (Polymer Compound)</td>
			<td style="width:135px;">Flowech Inc.</td>
			<td style="width:117px;">Kit B - MV-122</td>
			<td>8 oz. of MV compound; 8 oz. of diluent; MV-Curing Agent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Micromanipulator</td>
			<td style="width:135px;">Stoelting</td>
			<td style="width:117px;">56131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Monoject 1/2 ml Insulin Syringe</td>
			<td style="width:135px;">Covidien</td>
			<td style="width:117px;">1188528012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Octagon Forceps Straight Teeth</td>
			<td style="width:135px;">Fine Science tools</td>
			<td style="width:117px;">11042-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Parafilm</td>
			<td style="width:135px;">Bemis company, Inc.</td>
			<td style="width:117px;">#PM999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">PE-10 tubing</td>
			<td style="width:135px;">Instech</td>
			<td style="width:117px;">BTPE-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Phospahte buffered Saline</td>
			<td style="width:135px;">BioRad</td>
			<td style="width:117px;">#161-0780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Ring Stand</td>
			<td style="width:135px;">Fisher</td>
			<td style="width:117px;">S13747</td>
			<td>Height 24in.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Sodium Nitroprusside</td>
			<td style="width:135px;">sigma</td>
			<td style="width:117px;">71778-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Steel Plate</td>
			<td style="width:135px;">N/A</td>
			<td style="width:117px;">N/A</td>
			<td>16 x 16 in. area, 1/16 in thick</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:231px;">Straight Spring Scissors</td>
			<td style="width:135px;">Fine Science tools</td>
			<td style="width:117px;">15000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">SURFLO 24G Teflon I.V. Catheter</td>
			<td style="width:135px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td style="width:117px;">360103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Surgical Board</td>
			<td style="width:135px;">Fisher</td>
			<td>12-587-20</td>
			<td>This is a converted slide holder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Universal 3-prong clamp</td>
			<td style="width:135px;">Fisher</td>
			<td style="width:117px;">S24280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Winged Inf. Set 25X3/4, 12&#34; Tubing</td>
			<td style="width:135px;">Nipro</td>
			<td style="width:117px;">PR25G19</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Zeiss Stemi-508 Dissection Scope</td>
			<td style="width:135px;">Zeiss</td>
			<td style="width:117px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

vascular casting of adult and early postnatal mouse lungs for micro-ct imaging

Blutgefäße bilden komplizierte Netzwerke im dreidimensionalen Raum. Daher ist es schwierig, visuell zu schätzen, wie vaskuläre Netzwerke interagieren und sich verhalten, indem sie die Oberfläche eines Gewebes beobachten. Diese Methode bietet eine Möglichkeit, die komplexe dreidimensionale Gefäßarchitektur der Lunge zu visualisieren.
Um dies zu erreichen, wird ein Katheter in die Lungenarterie eingeführt und die Vaskulatur wird gleichzeitig von Blut gespült und chemisch erweitert, um den Widerstand zu begrenzen. Die Lunge wird dann bei einem Standarddruck durch die Luftröhre aufgeblasen und die Polymerverbindung wird bei einer Standarddurchflussrate in das Gefäßbett infundiert. Sobald das gesamte arterielle Netzwerk gefüllt ist und geheilt werden kann, kann die Lungenvaskulatur direkt visualisiert oder auf einem Mikro-CT-Scanner abgebildet werden.
Wenn erfolgreich durchgeführt, kann man das lungenarteriende Netzwerk bei Mäusen vom frühen postnatalen Alter bis zu Erwachsenen zu schätzen wissen. Darüber hinaus kann diese Methode, während sie im pulmonalen Arterienbett demonstriert wird, auf jedes Gefäßbett mit optimierter Katheterplatzierung und Endpunkten angewendet werden.

Eine erfolgreiche Besetzung wird eine gleichmäßige Befüllung des gesamten Lungenarteriennetzes aufweisen. Wir zeigen dies in C57Bl/6J-Mäusen im Alter: Postnataler Tag P90 (Abbildung 4A), P30 (Abbildung 4B), P7 (Abbildung 4C) und P1 (Abbildung 4D). Durch die Steuerung der Durchflussrate und die visuelle Überwachung der Füllung in Echtzeit wurden zuverlässige Endpun...

Watch this Scientific Journal Video about Vascular Casting of Adult and Early Postnatal Mouse Lungs for Micro-CT Imaging at JoVE.com

Vascular Casting of Adult and Early Postnatal Mouse Lungs for Micro-CT Imaging

Das Ziel dieser Technik ist die ex vivo Visualisierung von pulmonalen arteriellen Netzwerken von frühpostnatalen und erwachsenen Mäusen durch Lungeninflation und Injektion einer radio-opaque polymerbasierten Verbindung über die Lungenarterie. Mögliche Anwendungen für gegossenes Gewebe werden ebenfalls diskutiert.

Vaskuläres Gießen von Erwachsenen und frühpostnatalen Mauslungen für Micro-CT Imaging

Blood vessels form intricate networks in 3-dimensional space. Consequently, it is difficult to visually appreciate how vascular networks interact and ...

Dieses Protokoll gibt eine präzise, schrittweise Anleitung für das Gießen der pulmonalen arteriellen Vaskulatur sowohl bei erwachsenen als auch bei frühen postnatalen Mäusen. Diese Technik ermöglicht es Benutzern, das gesamte Gefäßnetzwerk vollständig für die Visualisierung durch eine Vielzahl von Methoden, einschließlich Mikro-CT, zu gießen und gleichzeitig die Integrität des Weichgewebes zu erhalten. Diese Technik ist besonders nützlich für die Betrachtung der pulmonalen vaskulären Morphologie und Architektur, kann aber leicht für das Targeting anderer Gefäßbetten angepasst werden.Wie viele Operationen und Sezierungen gibt es keinen Ersatz für die Visualisierung eines Verfahrens, und die Zuschauer können davon profitieren, einige der anspruchsvolleren Manöver durchzuführen. Sobald der xiphoide Prozess freigelegt ist, greifen sie den Rippenkäfig vorsichtig und heben. Machen Sie vorsichtig einen Schnitt in der jetzt exponierten, halbtransparenten Membran.Die Lunge bricht sichtbar zusammen und zieht sich vom Zwerchfell zurück. Nach der Exposition der Lunge und Luftröhre, Faden 15 Zentimeter PE10 Schläuche auf die Nabe einer 30-Spur-Nadel. Und befestigen Sie dieses Gerät an einer Ein-Milliliter-Spritze, die 10 an den 4 Mol Natriumnitroprussid in PBS enthält.Steigen Sie in den Kolben, um die Schläuche zu grundieren, bis die gesamte Luft gereinigt ist. Als effektive Alternative zum Text, durchdringen Sie die Spitze des Herzens auf der einen Seite, und passieren Sie die Spitzen der gekrümmten Zange durch den Muskel, und aus der anderen Seite des Gewebes. Greifen Sie ein Ende einer 10-Zentimeter-Länge von 7-0 Seide, und ziehen Sie etwa zwei Zentimeter durch das Gewebe.Nachdem Sie die Naht abbanden, verwenden Sie die restlichen acht Zentimeter Naht, um das Herz kauarisch zu ziehen. Und klebe das Ende der Naht auf das Operationsbrett. Haken Sie die Spitzen der gekrümmten Zange sowohl unter der aufsteigenden Aorta und Lungenarterie Stamm.Und ziehen Sie eine Drei-Zentimeter-Länge von 7-0 Seide zurück durch die Öffnung, um eine einzelne Wurf lose Naht zu schaffen. Verwenden Sie eine Schere, um einen Ein- bis zwei Millimeter Schnitt in Richtung der Spitze des Herzens zu machen, durchdringen sie die dünnwandige rechte Herzkammer. Und führen Sie den grundierten Schlauch in den rechten Ventrikel ein und leiten Sie den Katheter sanft in den halbtransparenten, dünnwandigen Lungenarterienstamm.Stellen Sie visuell sicher, dass der Katheter weder in den linken noch in den rechten Lungenzweig vorgerückt ist und nicht an den Zweigpunkt der Lungenarterie anschließt. Kleben Sie den distalen Teil des Schlauches an das Operationsbrett, und ziehen Sie die lose Naht um die beiden großen Gefäße sanft fest. Schneiden Sie das acht Zentimeter große Stück Naht, um das Herz in eine natürliche Ruheposition zurückzuversetzen.Und clip das linke Orakel des Herzens, damit der Perfusate die Vaskulatur verlassen kann. Verwenden Sie dann eine Spritzenpumpe, um das Natriumnitroprussid mit einer Durchflussrate von 0,5 ml/min zu gießen, um sowohl das Blut zu spülen, als auch die Vaskulatur maximal zu erweitern, bis das Perfusat klar verläuft. Um die Lungenaufblaseinheit zu konstruieren, schneiden Sie den flexiblen 24-Spur-Intravenus-Katheter aus einer Wanne und verbinden Sie sich mit der Nadel eines Schmetterlingsinfusionssets.Befestigen Sie dieses Gerät am Hahn und befestigen Sie den Hahn an einer offenen 50-Milliliter-Spritze. Nach dem Beladen der Spritze mit Formalin und Grundierung des Katheters, mit dem Stopcock geschlossen, positionieren Sie die Spritze in einem Ringständer, bis zu dem Punkt, an dem der Meniskus 20 Zentimeter über der Luftröhre ist. Legen Sie zwei lose Nähte, zwei bis vier Millimeter voneinander entfernt, schlechter als der cricoid Knorpel, und verwenden Sie eine Schere, um einen kleinen Schnitt in der Cricothyroid-Band zu machen, besser als die Nähte.Setzen Sie den Katheter in die Öffnung ein und bringen Sie die Spitze über die beiden lockeren Nähte hinaus. Ziehen Sie die Nähte um die Luftröhre, und öffnen Sie den Stopphahn, damit das Formalin durch die Schwerkraft in die Lunge gelangen kann. Warten Sie fünf Minuten, bis sich die Lunge vollständig aufbläht.Wenn die Lunge während der Inflation am Rippenkäfig haftet, verwenden Sie stumpfe Zangen, um die Außenseite des Rippenkäfigs zu erfassen, und bewegen Sie die Rippen in alle Richtungen, um bei der Befreiung der Lappen zu helfen, ohne direkten Kontakt mit der Lunge zu nehmen. Nach fünf Minuten, ziehen Sie den Katheter hinter der ersten Naht und Ligate. Dann ziehen Sie den Katheter hinter der zweiten Naht und Ligate.Die Lunge sollte nun in einem geschlossenen, unter Druck stehenden Zustand aufgeblasen werden. Um die Vaskulatur zu gießen, laden Sie einen Milliliter einer 8-1-1 Lösung des Polymerverdünnungsmittels in eine Ein-Milliliter-Spritze. Und legen Sie den Kolben vorsichtig ein.Wenn die Spritze invertiert ist, drücken Sie den Kolben, um die Luft zu entfernen, und um die Bildung eines Meniskus an der Spitze der Spritze zu ermöglichen. Entfernen Sie die Natrium-Nitroprussid-Spritze von der Nabe der Nadel und tropfen Sie die Zugabe PBS in die Nabe, um einen Meniskus zu erzeugen. Verbinden Sie die Polymer-Compound-Spritze mit der Nabe, und starten Sie die Infusion mit 0,02 Millimetern pro Minute.Überwachen Sie die Verbindung, während sie sich frei durch den Schlauch bewegt, und notieren Sie das Spritzenvolumen, während es in den Rumpf der Lungenarterie eintritt. Setzen Sie die Fülle fort, bis alle Lappen vollständig gefüllt sind, bis zum kleinsten Gefäß. Stoppen Sie die Pumpe, und notieren Sie noch einmal das Spritzenvolumen.Bedecken Sie die Lunge mit einem faseroptischen Reinigungstuch, und wenden Sie PBS freimütig an. Lassen Sie das Exemplar 30 bis 40 Minuten ungestört bei Raumtemperatur sitzen. Sobald die Polymerverbindung ausgehärtet und gehärtet ist, trennen Sie die Gliedmaßen und die untere Hälfte der Maus.Und legen Sie den Kopf und Thorax in eine 50-Milliliter konisch gefüllt 10%gepuffert Formalin, über Nacht. Greifen Sie am nächsten Morgen die Luftröhre, um Herz und Lunge sanft vom verbleibenden Rippenkäfig und Thorax zu trennen. Legen Sie den geernteten Gewebeblock in eine formal gefüllte Szintillationsdurchstechflasche.Eine erfolgreiche Besetzung führt zu einer gleichmäßigen Befüllung des gesamten Lungenarteriennetzes. Wenn die Lungen- oder Lungenwege beschädigt werden, verhindern kleine Lecks, dass die Lunge Druck hält. Eine patchy oder unvollständige Füllung kann durch eine Luftschleuse entstehen, da Luft über den Katheter in das Gefäßsystem eingebracht wird, wodurch der nachgeschaltete Fluss der Verbindung blockiert wird.Unterfüllung tritt auf, wenn zu wenig Verbindung in die Vaskulatur eingeführt wird. Alternativ kann eine Überfüllung oder zu schnelle Einführung zu viel Polymerverbindung zu arteriellen Bruch oder, häufiger, venöser Transit führen. Das Vorrücken des Katheters zu weit nach unten den Lungenstamm kann dazu führen, dass sich die Spitze in einen Lungenarterienzweig verkeilt, wodurch ein Ungleichgewicht im Durchfluss entsteht und eine Seite schneller als die andere füllt.Sorgfältige Leistung der Technik, wie gezeigt, mit der entsprechenden direkten Überwachung der distalen Vaskulatur Endpunkte, und Standard-Infusionsraten können zu einer optimalen Füllung der Lungenvaskulatur führen. Darüber hinaus kann die Anpassung dieser Technik an die systemische Vaskulatur in anderen Gefäßbetten gleichermaßen günstige Ergebnisse liefern. Nach dem Gießen können Proben für mikrocomputerische Tomographie-Scans verarbeitet werden.Für die Nachbearbeitung kann ein kommerzielles Softwarepaket verwendet werden, um eine 3D-Volumenwiedergabe des Lungen-Gefäßbaums zu erzeugen. Wenn Sie diese Technik zum ersten Mal versuchen, seien Sie besonders vorsichtig um die zerbrechliche Lunge und die Lungenarterie. Am wichtigsten ist, vermeiden Sie das Einbringen von Luft in den Gefäßkreislauf.Nach einer erfolgreichen Besetzung kann eine Probe mit micro-CT gescannt werden, und Fragen der vaskulären Morphometrie und Architektur können untersucht werden.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Organotypic Slice Cultures for Studies of Postnatal Neurogenesis

Organotypischen Kulturen für Studien der postnatale Neurogenese

Here we describe a technique for studying hippocampal postnatal neurogenesis in the rodent brain using the organotypic slice culture technique. This ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Methods for Precisely Localized Transfer of Cells or DNA into Early Postimplantation Mouse Embryos

Methoden für die genau zu lokalisieren Übertragung von Zellen oder DNA in frühen Postimplantations Maus Embryonen

Manipulation and culture of early mouse embryos is a powerful yet largely under-utilized technology enhancing the value of this model system. Conversely, ...

Assessment of Maternal Vascular Remodeling During Pregnancy in the Mouse Uterus

Beurteilung der Maternal Vascular Remodeling während der Schwangerschaft in der Gebärmutter Maus

The placenta mediates the exchange of factors such as gases and nutrients between mother and fetus and has specific demands for supply of blood from the ...

Loss- and Gain-of-function Approach to Investigate Early Cell Fate Determinants in Preimplantation Mouse Embryos

Verlust- und Gewinn-of-function-Ansatz Frühe Zellschicksal Bestimmungsfaktoren in Preimplantation Maus Embryonen zur Untersuchung

 Gene silencing and overexpression techniques are instrumental for the identification of genes involved in embryonic development. Direct target gene ...

Imaging Cleared Embryonic and Postnatal Hearts at Single-cell Resolution

Imaging Gelöscht Embryonale und postnatale Hearts bei Einzelzell-Auflösung

Single clonal tracing and analysis at the whole-heart level can determine cardiac progenitor cell behavior and differentiation during cardiac development, ...

Analysis of Retinoic Acid-induced Neural Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells in Two and Three-dimensional Embryoid Bodies

Analyse von Retinsäure-induzierte neuronale Differenzierung von embryonalen Stammzellen der Maus in zwei und drei-dimensionale Embryoidkörpern

Mouse embryonic stem cells (ESCs) isolated from the inner mass of the blastocyst (typically at day E3.5), can be used as in vitro model system for ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

Live Imaging der Maus Sekundärer Gaumen Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

A Novel Use of Three-dimensional High-frequency Ultrasonography for Early Pregnancy Characterization in the Mouse

Eine neue Verwendung des dreidimensionalen Hochfrequenz-Sonographie zur frühen Schwangerschaft Charakterisierung in der Maus

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is ...

Visualization of Cellular Electrical Activity in Zebrafish Early Embryos and Tumors

Visualisierung von zellulären elektrische Aktivität im frühen Zebrafish Embryos und Tumoren

Bioelectricity, endogenous electrical signaling mediated by ion channels and pumps located on the cell membrane, plays important roles in signaling ...

Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution

Vollständig-hängen konfokalen Mikroskopie für Erwachsene Ohr Haut: ein Modellsystem, Neuro-vaskuläre Verzweigung Morphogenese und Immunzelle Verteilung zu studieren