Name: preparation of mesh-shaped engineered cardiac tissues derived from human ips cells for in vivo myocardial repair
Uploaded: 2020-06-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Mesh-Shaped Engineered Cardiac Tissues Derived from Human iPS Cells for In Vivo Myocardial Repair at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل ماليا من قبل Kosair الجمعيات الخيرية برنامج أبحاث القلب للأطفال في جامعة لويزفل ومشروع Organoid في مركز ريكين لبحوث ديناميات النظم الحيوية. تم توفير مراكز البحث الهيدروفلورية المستخدمة في بروتوكولاتنا المنشورة من قبل المركز لأبحاث وتطبيق خلايا iPS ، جامعة كيوتو ، كيوتو ، اليابان.

1. الحفاظ على الهيبات والتمايز القلب والأوعية الدموية
<ol><li>توسيع والحفاظ على hiPSCs على طبقة رقيقة مصفوفة غشاء الطابق السفلي (عامل النمو خفضت، 1:60 تخفيف) في المتوسطة مكيفة المستخرجة من الليفية الجنينية الماوس (MEF-CM) مع عامل نمو الخلايا الليفية الأساسية البشرية (hbFGF)4. ملاحظة: استخ?...

<ol>
	<li>Sanganalmath, S. K., Bolli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+therapy+for+heart+failure:+A+comprehensive+overview+of+experimental+and+clinical+studies,+current+challenges,+and+future+directions.">Cell therapy for heart failure: A comprehensive overview of experimental and clinical studies, current challenges, and future directions.</a> Circulation Research. 113, 810-834 (2013).</li><li>Fisher, S. A., Doree, C., Mathur, A., Martin-Rendon, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meta-Analysis+of+Cell+Therapy+Trials+for+Patients+With+Heart+Failure.">Meta-Analysis of Cell Therapy Trials for Patients With Heart Failure.</a> Circulation Research. 116, 1361-1377 (2015).</li><li>Menasch&#233;, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+embryonic+stem+cell-derived+cardiac+progenitors+for+severe+heart+failure+treatment:+first+clinical+case+report:+Figure+1.">Human embryonic stem cell-derived cardiac progenitors for severe heart failure treatment: first clinical case report: Figure 1.</a> European Heart Journal. 36, 2011-2017 (2015).</li><li>Masumoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-engineered+cardiac+tissue+sheets+with+cardiomyocytes+and+vascular+cells+for+cardiac+regeneration.">Human iPS cell-engineered cardiac tissue sheets with cardiomyocytes and vascular cells for cardiac regeneration.</a> Scientific Reports. 4, 6716 (2014).</li><li>Masumoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myocardial+regenerative+potential+of+three-dimensional+engineered+cardiac+tissues+composed+of+multiple+human+iPS+cell-derived+cardiovascular+cell+lineages.">The myocardial regenerative potential of three-dimensional engineered cardiac tissues composed of multiple human iPS cell-derived cardiovascular cell lineages.</a> Scientific Reports. 6, 29933 (2016).</li><li>Zimmermann, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+heart+tissue+grafts+improve+systolic+and+diastolic+function+in+infarcted+rat+hearts.">Engineered heart tissue grafts improve systolic and diastolic function in infarcted rat hearts.</a> Nature Medicine. 12, 452-458 (2006).</li><li>Fujimoto, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+fetal+cardiac+graft+preserves+its+cardiomyocyte+proliferation+within+postinfarcted+myocardium+and+sustains+cardiac+function.">Engineered fetal cardiac graft preserves its cardiomyocyte proliferation within postinfarcted myocardium and sustains cardiac function.</a> Tissue engineering. Part A. 17, 585-596 (2011).</li><li>Lancaster, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+treatment+for+heart+failure:+cell-based+therapy+with+engineered+tissue.">Surgical treatment for heart failure: cell-based therapy with engineered tissue.</a> Vessel Plus. 2019, (2019).</li><li>Bian, W., Liau, B., Badie, N., Bursac, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesoscopic+hydrogel+molding+to+control+the+3D+geometry+of+bioartificial+muscle+tissues.">Mesoscopic hydrogel molding to control the 3D geometry of bioartificial muscle tissues.</a> Nature protocols. 4, 1522-1534 (2009).</li><li>Zhang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+cardiac+patch+for+advanced+functional+maturation+of+human+ESC-derived+cardiomyocytes.">Tissue-engineered cardiac patch for advanced functional maturation of human ESC-derived cardiomyocytes.</a> Biomaterials. 34, 5813-5820 (2013).</li><li>Christoforou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiac+progenitors+differentiate+to+cardiomyocytes+and+form+biosynthetic+tissues.">Induced pluripotent stem cell-derived cardiac progenitors differentiate to cardiomyocytes and form biosynthetic tissues.</a> PloS one. 8, 65963 (2013).</li><li>Nakane, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Cell+Composition+and+Geometry+on+Human+Induced+Pluripotent+Stem+Cells-Derived+Engineered+Cardiac+Tissue.">Impact of Cell Composition and Geometry on Human Induced Pluripotent Stem Cells-Derived Engineered Cardiac Tissue.</a> Scientific Reports. 7, 45641 (2017).</li><li>Kowalski, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Cardiomyocyte+Alignment+from+Three-Dimensional+(3D)+Confocal+Microscopy+of+Engineered+Tissue.">Quantification of Cardiomyocyte Alignment from Three-Dimensional (3D) Confocal Microscopy of Engineered Tissue.</a> Microscopy and Microanalysis. 1, (2017).</li></ol>

بعد الانتهاء من التحقيق لدينا من شكل خطي، hiPSC اشتق ECT5، نحن تكييف بروتوكول لخلط هيبسك المستمدة من CMs، ECs، وMCs لتسهيل التوسع في المختبر من الخلايا الوعائية داخل ECTs ولاحقا في اقتران الأوعية الدموية الحية بين ECTs وميريكارديوم المتلقي.
لتسهيل توليد أكبر، هندسة ECT شبكة ...

وقد أكدت العديد من الدراسات قبل السريرية والتجارب السريرية كفاءة العلاجات تجديد القلب القائم على الخلايا لفشل قلوب1,2,3. من بين أنواع الخلايا المختلفة ، والخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان (hiPSCs) هي مصادر الخلايا الواعدة بحكم قدرتها على التكاثر ، وإمكانية توليد مختلف الأنساب القلبية الوعائية4،5،و التلوي. وبالإضافة إلى ذلك، جعلت تكنولوجيات هندسة الأنسجة من الممكن نقل الملايين من الخلايا إلى قلبالتالفة 5،6،7،8.
سابقا، أبلغنا عن توليد ثلاثي الأبعاد (3D) أنسجة القلب هندسة خطية (ECTs) من أنساب القلب والأوعية الدموية المستمدة من هيبسك باستخدام نظام الثقافة المتاحة تجاريا للأنسجة 3D الارتفتيفial5،7. وجدنا أن التعايش بين الخلايا البطانية الوعائية والخلايا الجدارية مع خلايا القلب داخل العلاج بالصدمات الكهربائية سهل نضج الأنسجة الهيكلية والكهروائية. وعلاوة على ذلك، قمنا بالتحقق من صحة الإمكانات العلاجية للهبسة-ECTs مزروعة في نموذج احتشاء فئران عضلة القلب المتسامحة من أجل تحسين وظيفة القلب، وتجديد عضلة القلب، وتعزيز تولد الأوعية5. ومع ذلك، كانت ECTs الخطية التي شيدت من خلال هذه الطريقة 1 مم من 10 ملم اسطوانات وبالتالي ليست مناسبة لزرع في الدراسات قبل السريرية مع الحيوانات الكبيرة أو الاستخدام السريري.
استنادا إلى الاستخدام الناجح لقوالب الأنسجة لتوليد تشكيل الأنسجة هندسية المسامية باستخدام الفئران الهيكل العظمي myoblasts وdyoblasttes cardiomyocytes9, الإنسان ESC المشتقة cardiomyocytes10 والفأر iPSCs11, وضعنا بروتوكول لتوليد القابلات التوسعية hiPSC المشتقة من الأنسجة الكبيرة المزروعة باستخدام قوالب polydimethylsiloxane (PDMS). قمنا بتقييم مجموعة من هندسات العفن لتحديد خصائص العفن الأكثر فعالية. أظهرت ECTs على شكل شبكة مع حزم وتقاطعات متعددة خصائص ممتازة في جدوى الخلية ، وظيفة الأنسجة وقابلية التوسع مقارنة مع الورق العادي أو الأشكال الخطية التي تفتقر إلى المسام أو الوصلات. قمنا بزرع العلاج بالصدمات الكهربائية على شكل شبكة في نموذج احتشاء عضلة القلب الفئران وأكد آثاره العلاجية مماثلة لECTs أسطواني مزروع12. هنا نحن وصف البروتوكول لتوليد ECT على شكل شبكة hiPSC المستمدة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Dishes 100x20 mm style</td>
			<td>Falcon/ Thomas scientific</td>
			<td>9380C51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwell Plates For Cell Culture 6well 50/CS</td>
			<td>Falcon / Thomas scientific</td>
			<td>6902A01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>761036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accumax</td>
			<td>Innovative Cell Technologies</td>
			<td>AM-105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BMP4, recombinant (10&#181;g)</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>RSD-314-BP-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen, Type I solution from rat tail</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C3867</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Growth factor-reduced Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human VEGF (165) IS, premium grade</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-109-385</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pluronic F-127, 0.2 &#181;m filtered (10% Solution in Water)</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>P-6866</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human bFGF</td>
			<td>WAKO</td>
			<td>060-04543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human/Mouse/Rat ActivinA (50&#181;g)</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>338-AC-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rh Wnt-3a (10&#181;g)</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>5036-WN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Versene solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15040066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture medium and supplements</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x MEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 Mercaptro Ethanol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement minus insulin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1895601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (500ml)</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (500ml)</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (5000 U/mL)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI1640 medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21870092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;MEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11900024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flowcytometry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-TRA-1-60, FITC, Clone: TRA-1-60, BD Biosciences</td>
			<td>BD / Fisher</td>
			<td>560380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Troponin T, Cardiac Isoform Ab-1, Clone: 13-11, Thermo Scientific Lab Vision</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MS-295-P0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACS Clean Solution</td>
			<td>BD</td>
			<td>340345</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSFlow Sheath Fluid</td>
			<td>BD</td>
			<td>342003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSRinse Solution</td>
			<td>BD</td>
			<td>340346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Tube with Cell Strainer Cap (Case of 500)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (500ml)</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit, for 405 nm excitation</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>L34957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDGFRb; anti-CD140b, R-PE, Clone: 28D4, BD Biosciences</td>
			<td>BD / Fisher</td>
			<td>558821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>47306-50G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VEcad-FITC; anti-CD144, FITC, Clone: 55-7H1, BD Biosciences</td>
			<td>BD / Fisher</td>
			<td>560411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zenon Alexa Fluor 488 Mouse IgG1 Labeling Kit</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>Z25002</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of mesh-shaped engineered cardiac tissues derived from human ips cells for in vivo myocardial repair

يصف البروتوكول الحالي طرقًا لتوليد أنسجة قلبية هندسية قابلة للتطوير على شكل شبكة (ECTs) تتكون من خلايا القلب والأوعية الدموية المستمدة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة بشريًا (hiPSCs) ، والتي يتم تطويرها لتحقيق هدف الاستخدام السريري. يتم خلط خلايا القلب ذات المشتقات القلبية المستمدة من HiPSC وخلايا البطانية وخلايا جدارية الأوعية الدموية مع مصفوفة هلام ثم تصب في قالب أنسجة متعدد الإثيل (PDMS) مع وظائف داخلية مستطيلة متداخلة. حسب الثقافة اليوم 14 ECTs تنضج في 1.5 سم × 1.5 سم هيكل شبكة مع 0.5 ملم قطر حزم myofiber. تتوافق الخلايا القلبية القلبية مع المحور الطويل لكل حزمة وتضرب بشكل متزامن. ويمكن توسيع نطاق هذا النهج إلى أكبر (3.0 سم × 3.0 سم) شبكة ECT مع الحفاظ على بناء النضج وظيفة. وهكذا، قد تكون ECTs على شكل شبكة ولدت من خلايا القلب المشتقة من hiPSC قابلة للتطبيق لنماذج تجديد القلب.

ويبين الشكل 1ألف وباء مخططات بروتوكول CM +EC وMC. بعد تحريض CMs وECs من بروتوكول CM + EC و MCs من بروتوكول MC ، يتم خلط الخلايا تعديل تركيزات MC النهائية لتمثل 10 إلى 20٪ من إجمالي الخلايا. يتم تصنيعها 2 قالب نسيج واسعة سم وفقا لرسم تصميم من 0.5 مم ورقة PDMS سميكة (الشكل 2...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Mesh-Shaped Engineered Cardiac Tissues Derived from Human iPS Cells for In Vivo Myocardial Repair at JoVE.com

Preparation of Mesh-Shaped Engineered Cardiac Tissues Derived from Human iPS Cells for In Vivo Myocardial Repair

يولد هذا البروتوكول أنسجة قلبية هندسية على شكل شبكة تحتوي على خلايا القلب والأوعية الدموية المستمدة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان للسماح بالتحري عن علاج زرع الخلايا لأمراض القلب.

إعداد الأنسجة القلبية المهندسة على شكل شبكة مشتقة من خلايا iPS البشرية لإصلاح عضلة القلب في فيفو

The current protocol describes methods to generate scalable, mesh-shaped engineered cardiac tissues (ECTs) composed of cardiovascular cells derived from ...

يصف هذا البروتوكول طريقة نبيلة وسهلة لإنشاء أنسجة قلبية هندسية على شكل شبكة مشتقة من أجزاء الجسم المستحثة البشرية وخلايا القلب المشتقة من الخلايا الجذعية. المرونة في هندسة الأنسجة وقابلية توسعية وظيفة الأنسجة المحفوظة هي المزايا الرئيسية لهذه التقنية. يمكن لـ ECTs شكل الشبكة المزروع استعادة بنية القلب ووظيفته في نموذج احتشاء عضلة القلب الفئران.التأكد من جدواها للاستخدام في العلاج التجديدي القلبي. تتطلب هذه التقنيات معالجة خلايا STEM البشرية القابلة للتكرار ومهارات زراعة الأنسجة لتحقيق نتائج متسقة. تبدأ بقطع ورقة PDMS الشفاء إلى الحجم المناسب للسماح ورقة لتكون مستعبدة مع لاصق سيليكون لتصنيع 21 في 20.5 ملليمتر علبة مستطيلة مع سبعة ملليمتر طويلة 0.5 ملليمتر واسعة و 2.5 ملليمتر وظائف مستطيلة عالية في وضعية متداخلة.يجب أن يكون التباعد الأفقي بين خطين من الوظائف 2.5 ملليمتر. اُمَكف الصلبة بـ 120 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة قبل طلاء القالب بـ 1٪ Poloxamer 407 في PBS لمدة ساعة واحدة. ثم شطف جيدا القالب مع برنامج تلفزيوني ووضع القالب في بئر واحد من لوحة ستة جيدا.لتحليل النسب، والجمع بين الخلايا من القلب بالإضافة إلى البروتوكولات الخلايا جدارية البطانية والأوعية الدموية. بحيث يكون التركيز النهائي للخلايا الجدارية 10 إلى 20٪ في عدد الخلايا الإجمالية من ست مرات 10 إلى الخلايا الست لكل بناء. مزيج 133 ميكرولترات من حمض قابل للذوبان الجرذان الكولاجين نوع واحد حل و 17 ميكرولترات من العازلة القلوية إلى 17 ميكرولترات من 10X الحد الأدنى المتوسطة الأساسية على الجليد.ثم إضافة 67 ميكرولترات من مصفوفة غشاء الطابق السفلي إلى حل الكولاجين. المقبل، الطرد المركزي الخلايا وإعادة تعليق بيليه في 167 ميكرولترات من ارتفاع الجلوكوز دوليبيككو الحد الأدنى الأساسية المتوسطة تكملها مصل البقر الجنين والمضادات الحيوية. خلط الخلايا على حل المصفوفة على الجليد.ثم صب بعناية 400 ميكرولترات من تعليق مصفوفة الخلية على بولوإكسامر 407 المغلفة PDMS العفن الأنسجة. احتضان خليط مصفوفة الخلية في حاضنة ثقافة الخلايا القياسية عند درجة حرارة 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 60 دقيقة. عندما تكون الأنسجة قد تشكلت، نقع بعناية العفن مع أربعة ملليلتر من ECT ثقافة المتوسطة والعودة لوحة إلى حاضنة ثقافة الخلية لمدة 14 يوما.قبل زرع العلاج بالصدمات الكهربائية، قمت بتعقيم ملقط غرامة لإزالة بعناية العلاج بالصدمات الكهربائية من وظائف التحميل. يمكن أن تكون ملفقة قوالب الأنسجة مع أنماط مختلفة، وأطوال آخر والتباعد ما بعد لتوليد هندسة العلاج بالصدمات الكهربائية النهائي مختلفة. لهذا التحليل، تم استخدام قالب مع سبعة وظائف ملليمتر طويلة مع 2.5 ملليمتر فواصل واسعة.Poloxamer 407 يمنع التصاق الخلايا بالعفن وتمكن من تشكيل بنية شبكة مميزة ، بعد ضغط هلام سريع في 14 يومًا. يتم الحفاظ على هيكل حتى بعد تحرير العلاج بالصدمات الكهربائية من القالب. بناء الأنسجة المفبركة هو ما يقرب من 1.5 سم واسعة و 0.5 ملليمتر سميكة.وعرض كل حزمة في شبكة هو ما يقرب من 0.5 ملليمتر في المتوسط. فمن الممكن لتوليد 3 سم النهائي عرض شبكة ECT التي تحتوي على 24 مليون خلية من العفن أربع مرات أكبر مع نفس متداخلة آخر التصميم. ويمكن أيضا أن هذا أكبر شبكة العلاج بالصدمات الكهربائية يمكن إزالتها بسهولة من القالب ويولد فعل المحلية للقوة ما يعادل أصغر ECT شبكة.من المهم صب خليط مصفوفة الخلية بالتساوي في قالب الأنسجة دون توليد فقاعات لمنع عيوب الشعور في الجل النهائي. توصيف وظيفي للمتعاقد. ويمكن تنفيذ علاقات التردد الرابعة باستخدام أنظمة مدمجة.هدفنا النهائي هو ترجمة نماذج العلاج بالصدمات الكهربائية إلى علاجات سريرية تستخدم دراسات حيوانية كبيرة قبل السريرية.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Construction of Defined Human Engineered Cardiac Tissues to Study Mechanisms of Cardiac Cell Therapy

بناء المهندسة القلب الأنسجة تعريف الإنسان لدراسة آليات العلاج الخلوي القلب

Human cardiac tissue engineering can fundamentally impact therapeutic discovery through the development of new species-specific screening systems that ...

In Vivo Quantitative Assessment of Myocardial Structure, Function, Perfusion and Viability Using Cardiac Micro-computed Tomography

In Vivo Quantitative Assessment of Myocardial Structure, Function, Perfusion and Viability Using Cardiac Micro-computed Tomography

في فيفو التقييم الكمي للبنية عضلة القلب، وظيفة، الإرواء والجدوى عن طريق احتساب الصغرى القلب المقطعي

The use of Micro-Computed Tomography (MicroCT) for in vivo studies of small animals as models of human disease has risen tremendously due to the fact that ...

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

تطبيقات<em&gt; في فيفو</em&gt; التجارب الفنية من الفئران قصبة الساق الأمامية لتقييم الأنسجة المهندسة وإصلاح العضلات والهيكل العظمي

Despite the regenerative capacity of skeletal muscle, permanent functional and/or cosmetic deficits (e.g., volumetric muscle loss (VML) resulting from ...

Automated Contraction Analysis of Human Engineered Heart Tissue for Cardiac Drug Safety Screening

تحليل الآلي تقلص الإنسان المهندسة القلب الأنسجة للفحص القلب سلامة الأدوية

Cardiac tissue engineering describes techniques to constitute three dimensional force-generating engineered tissues. For the implementation of these ...

Protocol for MicroRNA Transfer into Adult Bone Marrow-derived Hematopoietic Stem Cells to Enable Cell Engineering Combined with Magnetic Targeting

بروتوكول لنقل ميكرورنا إلى المشتقة من نخاع العظام المكونة للدم الخلايا الجذعية البالغة لتمكينها هندسة الخلايا جنبا إلى جنب مع استهداف المغناطيسي

While CD133+ hematopoietic stem cells (SCs) have been proven to provide high potential in the field of regenerative medicine, their low retention rates ...

Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells

تصنيع صفائف الأنسجة الدقيقة القلبية 3D باستخدام الخلايا العضلية القلبية المشتقة من iPSC البشرية ، والخلايا الليفية القلبية ، والخلايا البطانية

Generation of human cardiomyocytes (CMs), cardiac fibroblasts (CFs), and endothelial cells (ECs) from induced pluripotent stem cells (iPSCs) has provided ...

Single-Cell Optical Action Potential Measurement in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes

قياس إمكانات العمل البصري أحادي الخلية في خلايا القلب المشتقة من الخلايا الجذعية المتعددة القدرات

Conventional intracellular microelectrode techniques to quantify cardiomyocyte electrophysiology are extremely complex, labor intensive, and typically ...

Cardiac Spheroids as in vitro Bioengineered Heart Tissues to Study Human Heart Pathophysiology

الـ 25: الفيزياء القلبية كما في الأنسجة الحيوية للقلب لدراسة أمراض القلب البشري

Despite several advances in cardiac tissue engineering, one of the major challenges to overcome remains the generation of a fully functional vascular ...

Fibroblast Derived Human Engineered Connective Tissue for Screening Applications

الخلايا الليفية المشتقة من النسيج الضام البشري المهندسة لتطبيقات الفحص

Fibroblasts are phenotypically highly dynamic cells, which quickly transdifferentiate into myofibroblasts in response to biochemical and biomechanical ...

Engineered Lung Tissues Prepared from Decellularized Lung Slices

أنسجة رئوية هندسية محضرة من شرائح رئوية منزوعة الخلايا

There is a need for improved 3-dimensional (3D) lung models that recapitulate the architectural and cellular complexity of the native lung alveolus ex ...