Name: preparation of mesh-shaped engineered cardiac tissues derived from human ips cells for in vivo myocardial repair
Uploaded: 2020-06-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Mesh-Shaped Engineered Cardiac Tissues Derived from Human iPS Cells for In Vivo Myocardial Repair at JoVE.com

עבודה זו נתמכה כספית על ידי תוכנית מחקר הלב לילדים של Kosair Charities באוניברסיטת לואיוויל ופרויקט אורגנואיד במרכז RIKEN לחקר דינמיקת מערכות ביולוגיות. HiPSCs בשימוש בפרוטוקולים שפורסמו שלנו סופקו על ידי המרכז למחקר ויישום תא iPS, אוניברסיטת קיוטו, קיוטו, יפן.

1. תחזוקה של hiPSCs ובידול לב וכלי דם
<ol><li>להרחיב ולתחזק hiPSCs על מטריצת קרום מרתף מעיל דק (גורם גדילה מופחת, 1:60 דילול) בינוני מותנה מופק פיברובלסטים עוברי העכבר (MEF-CM) עם גורם גדילה פיברובלסט בסיסי אנושי (hbFGF)4. הערה: השתמשנו בקו hiPSCs (4 גורם (אוק3/4, Sox2, Klf4 ו- c-Myc) שורה: 201B6). הוסף hbFGF בריכוז ה...

<ol>
	<li>Sanganalmath, S. K., Bolli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+therapy+for+heart+failure:+A+comprehensive+overview+of+experimental+and+clinical+studies,+current+challenges,+and+future+directions.">Cell therapy for heart failure: A comprehensive overview of experimental and clinical studies, current challenges, and future directions.</a> Circulation Research. 113, 810-834 (2013).</li><li>Fisher, S. A., Doree, C., Mathur, A., Martin-Rendon, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meta-Analysis+of+Cell+Therapy+Trials+for+Patients+With+Heart+Failure.">Meta-Analysis of Cell Therapy Trials for Patients With Heart Failure.</a> Circulation Research. 116, 1361-1377 (2015).</li><li>Menasch&#233;, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+embryonic+stem+cell-derived+cardiac+progenitors+for+severe+heart+failure+treatment:+first+clinical+case+report:+Figure+1.">Human embryonic stem cell-derived cardiac progenitors for severe heart failure treatment: first clinical case report: Figure 1.</a> European Heart Journal. 36, 2011-2017 (2015).</li><li>Masumoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-engineered+cardiac+tissue+sheets+with+cardiomyocytes+and+vascular+cells+for+cardiac+regeneration.">Human iPS cell-engineered cardiac tissue sheets with cardiomyocytes and vascular cells for cardiac regeneration.</a> Scientific Reports. 4, 6716 (2014).</li><li>Masumoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myocardial+regenerative+potential+of+three-dimensional+engineered+cardiac+tissues+composed+of+multiple+human+iPS+cell-derived+cardiovascular+cell+lineages.">The myocardial regenerative potential of three-dimensional engineered cardiac tissues composed of multiple human iPS cell-derived cardiovascular cell lineages.</a> Scientific Reports. 6, 29933 (2016).</li><li>Zimmermann, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+heart+tissue+grafts+improve+systolic+and+diastolic+function+in+infarcted+rat+hearts.">Engineered heart tissue grafts improve systolic and diastolic function in infarcted rat hearts.</a> Nature Medicine. 12, 452-458 (2006).</li><li>Fujimoto, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+fetal+cardiac+graft+preserves+its+cardiomyocyte+proliferation+within+postinfarcted+myocardium+and+sustains+cardiac+function.">Engineered fetal cardiac graft preserves its cardiomyocyte proliferation within postinfarcted myocardium and sustains cardiac function.</a> Tissue engineering. Part A. 17, 585-596 (2011).</li><li>Lancaster, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+treatment+for+heart+failure:+cell-based+therapy+with+engineered+tissue.">Surgical treatment for heart failure: cell-based therapy with engineered tissue.</a> Vessel Plus. 2019, (2019).</li><li>Bian, W., Liau, B., Badie, N., Bursac, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesoscopic+hydrogel+molding+to+control+the+3D+geometry+of+bioartificial+muscle+tissues.">Mesoscopic hydrogel molding to control the 3D geometry of bioartificial muscle tissues.</a> Nature protocols. 4, 1522-1534 (2009).</li><li>Zhang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+cardiac+patch+for+advanced+functional+maturation+of+human+ESC-derived+cardiomyocytes.">Tissue-engineered cardiac patch for advanced functional maturation of human ESC-derived cardiomyocytes.</a> Biomaterials. 34, 5813-5820 (2013).</li><li>Christoforou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiac+progenitors+differentiate+to+cardiomyocytes+and+form+biosynthetic+tissues.">Induced pluripotent stem cell-derived cardiac progenitors differentiate to cardiomyocytes and form biosynthetic tissues.</a> PloS one. 8, 65963 (2013).</li><li>Nakane, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Cell+Composition+and+Geometry+on+Human+Induced+Pluripotent+Stem+Cells-Derived+Engineered+Cardiac+Tissue.">Impact of Cell Composition and Geometry on Human Induced Pluripotent Stem Cells-Derived Engineered Cardiac Tissue.</a> Scientific Reports. 7, 45641 (2017).</li><li>Kowalski, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Cardiomyocyte+Alignment+from+Three-Dimensional+(3D)+Confocal+Microscopy+of+Engineered+Tissue.">Quantification of Cardiomyocyte Alignment from Three-Dimensional (3D) Confocal Microscopy of Engineered Tissue.</a> Microscopy and Microanalysis. 1, (2017).</li></ol>

לאחר השלמת החקירה שלנו של פורמט ליניארי, hiPSC נגזר ECT5, התאמנו את הפרוטוקול כדי לערבב cMs נגזר hiPSC, ECs, ו- MCs כדי להקל על הרחבת מבחנה של תאי כלי דם בתוך ECTs ולאחר מכן צימוד כלי דם vivo בין ECTs ו שריר הלב הנמען.
כדי להקל על יצירת גיאומטריות ECT גדולות יותר, הניתנות להשתלה, השתמשנ...

מחקרים פרה-קליניים רבים וניסויים קליניים אישרו את היעילות של טיפולים התחדשות לב מבוססי תאים עבורלבבות כושלים 1,,2,,3. בין סוגי תאים שונים, תאי גזע פלורופוטנטיים המושרה על ידי בני אדם (hiPSCs) מבטיחים מקורות תאים מכוח יכולת ההתפשטות שלהם, פוטנציאל לייצר תוחינות לב וכלידם שונים 4,,5, ו allogenicity. בנוסף, טכנולוגיות הנדסת רקמות אפשרו להעביר מיליוני תאים ללבפגום 5,6,,,7,,8.
בעבר, דיווחנו על הדור של רקמות לב ליניאריות (3D) ליניאריים מהונדסים (ECTs) מ-hiPSC נגזר תחבולות לב וכלי דם באמצעות מערכת תרבות מסחרית זמינה עבור רקמות ביו-ארטיפיאליות 3D5,7. מצאנו כי הדו-קיום של תאי אנדותל כלי דם ותאי ציור קיר עם קרדיומיוציטים בתוך ECT הקלה על התבגרות רקמות מבניות ואלקטרופיזיולוגיות. יתר על כן, אימתנו את הפוטנציאל הטיפולי של hiPSC-ECTs מושתל במודל אוטם שריר הלב חולדה סובלני חיסונית כדי לשפר את תפקוד הלב, לחדש את שריר הלב, ולשפר אנגיוגנזה5. עם זאת, ECTs ליניארי שנבנה על ידי שיטה זו היו 1 מ"מ על 10 מ"מ צילינדרים ולכן לא מתאים להשתלה במחקרים פרה-קליניים עם בעלי חיים גדולים יותר או שימוש קליני.
בהתבסס על השימוש המוצלח של תבניות רקמות כדי ליצור היווצרות רקמות מהונדסות נקבוביות באמצעות myoblasts שלד חולדה ו cardiomyocytes9, אדם ESC נגזר cardiomyocytes10 ועכבר iPSCs11,פיתחנו פרוטוקול כדי ליצור מדרגי hiPSC נגזר רקמות מושתלות גדולות יותר באמצעות תבניות polydimethylsiloxane (PDMS). הערכנו מגוון של גיאומטריות עובש כדי לקבוע את מאפייני עובש היעילים ביותר. ECTs בצורת רשת עם חבילות וצמתים מרובים הציגו מאפיינים מצוינים בכדאיות התא, פונקציית רקמות ומדרגיות בהשוואה לפורמטים פשוטים או ליניאריים שחסרים נקבוביות או צמתים. השתלנו את ECT בצורת רשת במודל אוטם שריר הלב חולדה ואימת את השפעותיו הטיפוליות דומה ECTs גלילימושתל 12. כאן אנו מתארים את הפרוטוקול כדי ליצור ECT בצורת רשת שינוי נגזר hiPSC.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Dishes 100x20 mm style</td>
			<td>Falcon/ Thomas scientific</td>
			<td>9380C51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwell Plates For Cell Culture 6well 50/CS</td>
			<td>Falcon / Thomas scientific</td>
			<td>6902A01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>761036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accumax</td>
			<td>Innovative Cell Technologies</td>
			<td>AM-105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BMP4, recombinant (10&#181;g)</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>RSD-314-BP-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen, Type I solution from rat tail</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C3867</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Growth factor-reduced Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human VEGF (165) IS, premium grade</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-109-385</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pluronic F-127, 0.2 &#181;m filtered (10% Solution in Water)</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>P-6866</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human bFGF</td>
			<td>WAKO</td>
			<td>060-04543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human/Mouse/Rat ActivinA (50&#181;g)</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>338-AC-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rh Wnt-3a (10&#181;g)</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>5036-WN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Versene solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15040066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture medium and supplements</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x MEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 Mercaptro Ethanol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement minus insulin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1895601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (500ml)</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (500ml)</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (5000 U/mL)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI1640 medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21870092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;MEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11900024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flowcytometry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-TRA-1-60, FITC, Clone: TRA-1-60, BD Biosciences</td>
			<td>BD / Fisher</td>
			<td>560380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Troponin T, Cardiac Isoform Ab-1, Clone: 13-11, Thermo Scientific Lab Vision</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MS-295-P0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACS Clean Solution</td>
			<td>BD</td>
			<td>340345</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSFlow Sheath Fluid</td>
			<td>BD</td>
			<td>342003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSRinse Solution</td>
			<td>BD</td>
			<td>340346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Tube with Cell Strainer Cap (Case of 500)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (500ml)</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit, for 405 nm excitation</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>L34957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDGFRb; anti-CD140b, R-PE, Clone: 28D4, BD Biosciences</td>
			<td>BD / Fisher</td>
			<td>558821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>47306-50G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VEcad-FITC; anti-CD144, FITC, Clone: 55-7H1, BD Biosciences</td>
			<td>BD / Fisher</td>
			<td>560411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zenon Alexa Fluor 488 Mouse IgG1 Labeling Kit</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>Z25002</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of mesh-shaped engineered cardiac tissues derived from human ips cells for in vivo myocardial repair

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטות ליצירת רקמות לב מהונדסות (ECTs) מדרגיות בצורת רשת המורכבות מתאי לב וכלי דם המופקים מתאי גזע פלורופוטנטיים (hiPSCs) הנגרמים על ידי בני אדם, אשר מפותחים לקראת המטרה של שימוש קליני. קרדיומיוקיטים נגזר HiPSC, תאים אנדותל, ותאי ציור קיר כלי דם מעורבבים עם מטריצת ג'ל ולאחר מכן נשפכים לתוך עובש רקמה polydimethylsiloxane (PDMS) עם הודעות מלבניות פנימיות מטלטלות. ביום תרבות 14 ECTs להבשיל לתוך 1.5 ס"מ x 1.5 ס"מ רשת מבנה עם חבילות myofiber קוטר 0.5 מ"מ. קרדיומיוציטים ליישר את הציר הארוך של כל צרור ולנצח באופן ספונטני באופן סינכרוני. ניתן לשנות את קנה המידה של גישה זו עד ECT רשת גדולה יותר (3.0 ס"מ x 3.0 ס"מ) תוך שמירה על התבגרות ופונקציה של מבנה. לכן, ECTs בצורת רשת המופקת מתאי לב הנגזרים על-ידי hiPSC עשויים להיות אפשריים עבור פרדיגמות התחדשות הלב.

איור 1A,B מציג את השרטוטים של פרוטוקול CM+EC ו- MC. לאחר גורם CMs ו- ECs מפרוטוקול CM + EC ו- MCs פרוטוקול MC, התאים מעורבים התאמת ריכוזי MC הסופי לייצג 10 עד 20% של תאים הכולל. תבנית רקמה ברוחב 2 ס"מ מפוברקת על פי ציור העיצוב מגליון PDMS בעובי 0.5 מ"מ(איור 2א', ב). שיש?...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Mesh-Shaped Engineered Cardiac Tissues Derived from Human iPS Cells for In Vivo Myocardial Repair at JoVE.com

Preparation of Mesh-Shaped Engineered Cardiac Tissues Derived from Human iPS Cells for In Vivo Myocardial Repair

הפרוטוקול הנוכחי מייצר רקמות לב מהונדסות בצורת רשת המכילות תאי לב וכלי דם המופקים מתאי גזע פלורופוטנטיים אנושיים כדי לאפשר חקירה של טיפול השתלת תאים למחלות לב.

הכנת רקמות לב מהונדסות בצורת רשת נגזר תאי iPS אנושיים לתיקון שריר הלב Vivo

The current protocol describes methods to generate scalable, mesh-shaped engineered cardiac tissues (ECTs) composed of cardiovascular cells derived from ...

פרוטוקול זה מתאר שיטה אצילית וקלה ליצירת רקמות לב מהונדסות בצורת רשת המופקות מחלקי גוף הנגרמים על ידי בני אדם ותאי לב שמקורם בתאי STEM. הגמישות של הגיאומטריה של הרקמה ואת המדרגיות של תפקוד הרקמה השתמר הם היתרונות העיקריים של טכניקה זו. ה- ECTs של צורת רשת מושתלת יכול לשחזר מבנה לב ולתפקד במודל אוטם שריר הלב של חולדה.אישור היתכנותו לשימוש בטיפול רגנרטיבי לב. טכניקות אלה דורשות עיבוד תאי STEM אנושיים לשחזור ואת כישורי תרבות הרקמה לקבלת תוצאות עקביות. התחל על ידי חיתוך גיליון PDMS נרפא לגודל המתאים כדי לאפשר את הגיליון להיות מלוכדות עם דבק סיליקון כדי לפברק מגש מלבני 21 על ידי 20.5 מילימטר עם שבעה מילימטר ארוך 0.5 מילימטר רוחב ו 2.5 מילימטר גבוה עמדות מלבניות בתנופים מתנדנדים.המרווח האופקי בין שתי שורות עמודים צריך להיות 2.5 מילימטרים. סעו אוטומטית במגש ב-120 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות לפני ציפוי התבנית ב-1%Poloxamer 407 ב-PBS למשך שעה. לאחר מכן שוטפים ביסודיות את התבנית עם PBS ומ מניחים את התבנית לתוך באר אחת של צלחת שש בארות.לניתוח שושלת היוחסין, שלבו את התאים מהקרדיומיוציט בתוספת פרוטוקולי תאי קיר אנדותל וסקולריים. כך שהריכוז הסופי של תאי קיר הוא 10 עד 20% במספר תאים כולל של שש פעמים 10 לש ששת התאים לכל מבנה. מערבבים 133 מיקרוליטרים של קולגן זנב עכברוש מסיס חומצה סוג אחד ו 17 microliters של מאגר אלקלי ל 17 microliters של 10X מינימום חיוני בינוני על קרח.לאחר מכן הוסיפו 67 מיקרוליטרים של מטריצת קרום המרתף לפתרון הקולגן. לאחר מכן, צנטריפוגה התאים resuspend את גלולה ב 167 microliters של בינוני חיוני מינימלי של גלוקוז Dulbecco גבוה בתוספת סרום חזיר עוברי ואנטיביוטיקה. מערבבים את התאים על פתרון המטריצה על הקרח.ואז בזהירות לשפוך 400 microliters של ההשעיה מטריצת התא על פולוקסאמר 407 מצופה עובש רקמת PDMS. אין לארוב את תערובת מטריצת התאים באינקובטור סטנדרטי לתרבות התאים ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו-חמצני למשך 60 דקות. כאשר הרקמה נוצרה, בזהירות להשרות את התבנית עם ארבעה מיליליטר של מדיום תרבות ECT ולהחזיר את הצלחת אינקובטור תרבות התא במשך 14 ימים.לפני השתלת ECT, אתה מעקר מטלאים עדין כדי להסיר בזהירות את ECT מן עמדות הטעינה. תבניות רקמות ניתן להמציא עם דפוסים שונים, אורכי פוסט ומרווח פוסט כדי ליצור גיאומטריות ECT סופיות שונות. לניתוח זה נעשה שימוש בתבנית עם עמדות באורך שבעה מילימטרים עם מרווחים ברוחב 2.5 מילימטר.Poloxamer 407 מונע הידבקות של התאים לתבנית ומאפשר היווצרות של מבנה רשת אופייני, לאחר דחיסת ג'ל מהירה בתוך 14 ימים. המבנה נשמר גם לאחר ECT הוא שוחרר מן התבנית. מבנה הרקמה המפוברק הוא ברוחב של כ-1.5 ס"מ ועוביו 0.5 מילימטרים.והרוחב של כל חבילה רש הוא כ 0.5 מילימטרים בממוצע. ניתן ליצור רשת שינוי ברוחב סופי של 3 ס"מ המכילה 24 מיליון תאים מתבנית גדולה פי ארבעה עם אותו עיצוב פוסט מתנדנד. זה ECT רשת גדולה יותר ניתן גם להסיר בקלות מן התבנית ומייצר פעולה מקומית של כוח שווה ערך ECT רשת קטנה יותר.חשוב לשפוך את תערובת מטריצת התא באופן שווה לתוך תבנית הרקמה מבלי ליצור בועות כדי למנוע תחושת פגמים בג'ל הסופי. אפיון תפקודי של הקבלן. ו ניתן לבצע קשרי תדר רביעי באמצעות מערכות מובנות.המטרה הסופית שלנו היא תרגום פרדיגמות ECT לטיפולים קליניים המשתמשים במחקרים פרה-קליניים גדולים בבעלי חיים.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Construction of Defined Human Engineered Cardiac Tissues to Study Mechanisms of Cardiac Cell Therapy

בניית רקמות לב Engineered האנושית תחם לחקור מנגנונים של טיפול בתאי לב

Human cardiac tissue engineering can fundamentally impact therapeutic discovery through the development of new species-specific screening systems that ...

In Vivo Quantitative Assessment of Myocardial Structure, Function, Perfusion and Viability Using Cardiac Micro-computed Tomography

In Vivo Quantitative Assessment of Myocardial Structure, Function, Perfusion and Viability Using Cardiac Micro-computed Tomography

In vivo כמותי הערכת מבנה שריר הלב, תפקוד, זלוף ואת הכדאיות שימוש טומוגרפיה לב מיקרו שחושב

The use of Micro-Computed Tomography (MicroCT) for in vivo studies of small animals as models of human disease has risen tremendously due to the fact that ...

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

יישומים של<em&gt; In vivo</em&gt; בדיקות פונקציונליות של עכברוש השוקה הקדמי להערכת רקמות מהונדסות תיקון שרירי שלד

Despite the regenerative capacity of skeletal muscle, permanent functional and/or cosmetic deficits (e.g., volumetric muscle loss (VML) resulting from ...

Automated Contraction Analysis of Human Engineered Heart Tissue for Cardiac Drug Safety Screening

ניתוח התכווצות האוטומטי של רקמת לב Engineered האנוש להקרנת בטיחות תרופת לב

Cardiac tissue engineering describes techniques to constitute three dimensional force-generating engineered tissues. For the implementation of these ...

Protocol for MicroRNA Transfer into Adult Bone Marrow-derived Hematopoietic Stem Cells to Enable Cell Engineering Combined with Magnetic Targeting

פרוטוקול להעברת MicroRNA לתוך למבוגרים הנגזרות מח עצם Hematopoietic תאי גזע כדי לאפשר הנדסה תא בשילוב עם מיקוד מגנטי

While CD133+ hematopoietic stem cells (SCs) have been proven to provide high potential in the field of regenerative medicine, their low retention rates ...

Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells

ייצור מערכי מיקרוטיסו לב תלת-ממדיים באמצעות קרדיומיוציטים אנושיים שמקורם ב-IPSC, פיברובלסטים לבביים ותאי אנדותל

Generation of human cardiomyocytes (CMs), cardiac fibroblasts (CFs), and endothelial cells (ECs) from induced pluripotent stem cells (iPSCs) has provided ...

Single-Cell Optical Action Potential Measurement in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes

מדידה פוטנציאלית לפעולה אופטית חד-תאית בקרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע מושרים על ידי תאי גזע אנושיים

Conventional intracellular microelectrode techniques to quantify cardiomyocyte electrophysiology are extremely complex, labor intensive, and typically ...

Cardiac Spheroids as in vitro Bioengineered Heart Tissues to Study Human Heart Pathophysiology

ספרואידים לב כמו במבחנה ביו מהונדסת רקמות לב לחקור פתופיזיולוגיה לב אנושי

Despite several advances in cardiac tissue engineering, one of the major challenges to overcome remains the generation of a fully functional vascular ...

Fibroblast Derived Human Engineered Connective Tissue for Screening Applications

פיברובלסט נגזר רקמת חיבור מהונדסת אנושית עבור יישומי הקרנה

Fibroblasts are phenotypically highly dynamic cells, which quickly transdifferentiate into myofibroblasts in response to biochemical and biomechanical ...

Engineered Lung Tissues Prepared from Decellularized Lung Slices

רקמות ריאה מהונדסות שהוכנו מפרוסות ריאה נטולות תאים

There is a need for improved 3-dimensional (3D) lung models that recapitulate the architectural and cellular complexity of the native lung alveolus ex ...