Name: preparation of mesh-shaped engineered cardiac tissues derived from human ips cells for in vivo myocardial repair
Uploaded: 2020-06-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Mesh-Shaped Engineered Cardiac Tissues Derived from Human iPS Cells for In Vivo Myocardial Repair at JoVE.com

Bu çalışma, Louisville Üniversitesi'ndeki Kosair Charities Pediatrik Kalp Araştırma Programı ve RIKEN Biyosistem Dinamiği Araştırma Merkezi'ndeki Organoid Projesi tarafından finansal olarak desteklenmiştir. Yayınlanan protokollerimizde kullanılan HiPSC'ler Kyoto Üniversitesi, Kyoto, Japonya iPS Hücre Araştırma ve Uygulama Merkezi tarafından sağlanmıştır.

1. HiPSC'lerin bakımı ve kardiyovasküler farklılaşma
<ol><li>Genişletmek ve ince kat bodrum membran matris hiPSCs korumak (büyüme faktörü azaltılmış, 1:60 seyreltme) insan temel fibroblast büyüme faktörü ile fare embriyonik fibroblastlar (MEF-CM) çıkarılan koşullu ortamda 4. NOT: HiPSCs (4 faktörlü (Oct3/4, Sox2, Klf4 ve c-Myc) hattı: 201B6) kullandık. Her hücre hattı için uygun konsantrasyonda hbFGF ekleyin. Laminin-511 parçası da bodrum membran matris yerine k?...

<ol>
	<li>Sanganalmath, S. K., Bolli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+therapy+for+heart+failure:+A+comprehensive+overview+of+experimental+and+clinical+studies,+current+challenges,+and+future+directions.">Cell therapy for heart failure: A comprehensive overview of experimental and clinical studies, current challenges, and future directions.</a> Circulation Research. 113, 810-834 (2013).</li><li>Fisher, S. A., Doree, C., Mathur, A., Martin-Rendon, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meta-Analysis+of+Cell+Therapy+Trials+for+Patients+With+Heart+Failure.">Meta-Analysis of Cell Therapy Trials for Patients With Heart Failure.</a> Circulation Research. 116, 1361-1377 (2015).</li><li>Menasch&#233;, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+embryonic+stem+cell-derived+cardiac+progenitors+for+severe+heart+failure+treatment:+first+clinical+case+report:+Figure+1.">Human embryonic stem cell-derived cardiac progenitors for severe heart failure treatment: first clinical case report: Figure 1.</a> European Heart Journal. 36, 2011-2017 (2015).</li><li>Masumoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-engineered+cardiac+tissue+sheets+with+cardiomyocytes+and+vascular+cells+for+cardiac+regeneration.">Human iPS cell-engineered cardiac tissue sheets with cardiomyocytes and vascular cells for cardiac regeneration.</a> Scientific Reports. 4, 6716 (2014).</li><li>Masumoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myocardial+regenerative+potential+of+three-dimensional+engineered+cardiac+tissues+composed+of+multiple+human+iPS+cell-derived+cardiovascular+cell+lineages.">The myocardial regenerative potential of three-dimensional engineered cardiac tissues composed of multiple human iPS cell-derived cardiovascular cell lineages.</a> Scientific Reports. 6, 29933 (2016).</li><li>Zimmermann, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+heart+tissue+grafts+improve+systolic+and+diastolic+function+in+infarcted+rat+hearts.">Engineered heart tissue grafts improve systolic and diastolic function in infarcted rat hearts.</a> Nature Medicine. 12, 452-458 (2006).</li><li>Fujimoto, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+fetal+cardiac+graft+preserves+its+cardiomyocyte+proliferation+within+postinfarcted+myocardium+and+sustains+cardiac+function.">Engineered fetal cardiac graft preserves its cardiomyocyte proliferation within postinfarcted myocardium and sustains cardiac function.</a> Tissue engineering. Part A. 17, 585-596 (2011).</li><li>Lancaster, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+treatment+for+heart+failure:+cell-based+therapy+with+engineered+tissue.">Surgical treatment for heart failure: cell-based therapy with engineered tissue.</a> Vessel Plus. 2019, (2019).</li><li>Bian, W., Liau, B., Badie, N., Bursac, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesoscopic+hydrogel+molding+to+control+the+3D+geometry+of+bioartificial+muscle+tissues.">Mesoscopic hydrogel molding to control the 3D geometry of bioartificial muscle tissues.</a> Nature protocols. 4, 1522-1534 (2009).</li><li>Zhang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+cardiac+patch+for+advanced+functional+maturation+of+human+ESC-derived+cardiomyocytes.">Tissue-engineered cardiac patch for advanced functional maturation of human ESC-derived cardiomyocytes.</a> Biomaterials. 34, 5813-5820 (2013).</li><li>Christoforou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiac+progenitors+differentiate+to+cardiomyocytes+and+form+biosynthetic+tissues.">Induced pluripotent stem cell-derived cardiac progenitors differentiate to cardiomyocytes and form biosynthetic tissues.</a> PloS one. 8, 65963 (2013).</li><li>Nakane, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Cell+Composition+and+Geometry+on+Human+Induced+Pluripotent+Stem+Cells-Derived+Engineered+Cardiac+Tissue.">Impact of Cell Composition and Geometry on Human Induced Pluripotent Stem Cells-Derived Engineered Cardiac Tissue.</a> Scientific Reports. 7, 45641 (2017).</li><li>Kowalski, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Cardiomyocyte+Alignment+from+Three-Dimensional+(3D)+Confocal+Microscopy+of+Engineered+Tissue.">Quantification of Cardiomyocyte Alignment from Three-Dimensional (3D) Confocal Microscopy of Engineered Tissue.</a> Microscopy and Microanalysis. 1, (2017).</li></ol>

Doğrusal bir format, hiPSC türetilmiş EKT5araştırmamızın tamamlanmasından sonra, eBT'ler içinde vasküler hücrelerin in vitro genişlemesini kolaylaştırmak ve ait etkenler ile alıcı miyokardyum arasında in vivo vasküler kaplini kolaylaştırmak için hiPSC kaynaklı CM'ler, EK'lar ve MC'leri karıştırmak için protokolü uyarladık.
Daha büyük, implante edilebilir örgü ECT geometrilerinin oluşumunu kolaylaştırmak için, 3B kalıpları şaşırt?...

Çok sayıda preklinik çalışmalar ve klinik çalışmalar başarısız kalpler için hücre tabanlı kardiyak rejeneratif tedavilerin etkinliğini doğruladı1,2,3. Çeşitli hücre tipleri arasında, insan kaynaklı pluripotent kök hücreler (hiPSCs) onların proliferatif yeteneği sayesinde hücre kaynakları umut verici, çeşitli kardiyovasküler soy oluşturmak için potansiyel4,5, ve allojenite. Buna ek olarak, doku mühendisliği teknolojileri mümkün hasarlı bir kalp üzerine milyonlarca hücre aktarmak için yaptık5,6,7,8.
Daha önce, hiPSC kaynaklı kardiyovasküler soylardan 3Boyutlu biyoyapay dokular için ticari olarak mevcut kültür sistemi kullanarak üç boyutlu (3D) lineer mühendislik kardiyak dokuların (ECTs) üretimi rapor5,7. EKT içinde kardiyomiyositler ile vasküler endotel hücreleri ve duvar hücrelerinin birlikte bulunmasının yapısal ve elektrofizyolojik doku olgunlaşmasını kolaylaştırdığını bulduk. Ayrıca, kardiyak fonksiyonu geliştirmek için bağışıklık toleranslı sıçan miyokard infarktüs modelinde implante hiPSC-ECTs terapötik potansiyelini doğruladı, miyokardiyum yeniden, ve anjiyogenez geliştirmek5. Ancak, bu yöntemle yapılan lineer ECT'ler 1 mm x 10 mm silindir olup, bu nedenle daha büyük hayvanlar veya klinik kullanımlı klinik öncesi çalışmalarda implantasyon için uygun değildir.
Sıçan iskelet miyoblastları ve kardiyomiyositler9, insan ESC türetilmiş kardiyomiyositler10 ve fare iPSCs11kullanarak gözenekli mühendislik doku oluşumu oluşturmak için doku kalıplarının başarılı kullanımı dayanarak, biz polidimethylsiloxane kullanarak ölçeklenebilir hiPSC kaynaklı büyük implante doku oluşturmak için bir protokol geliştirdi (PDMS) kalıpları. En etkili kalıp özelliklerini belirlemek için çeşitli kalıp geometrilerini değerlendirdik. Birden fazla demet ve kavşakiçeren kafes şeklindeki ECT'ler, gözenek veya kavşaklardan yoksun düz veya doğrusal biçimlere kıyasla hücre canlılığı, doku fonksiyonu ve ölçeklenebilirlik açısından mükemmel özellikler sergiledi. Biz bir sıçan miyokard infarktüsü modelinde örgü şeklinde EKT implante ve implante silindirik ECTs benzer terapötik etkileri doğruladı12. Burada hiPSC türetilmiş örgü şeklinde bir AKT oluşturmak için protokolü açıklıyoruz.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Dishes 100x20 mm style</td>
			<td>Falcon/ Thomas scientific</td>
			<td>9380C51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwell Plates For Cell Culture 6well 50/CS</td>
			<td>Falcon / Thomas scientific</td>
			<td>6902A01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>761036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accumax</td>
			<td>Innovative Cell Technologies</td>
			<td>AM-105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BMP4, recombinant (10&#181;g)</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>RSD-314-BP-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen, Type I solution from rat tail</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C3867</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Growth factor-reduced Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human VEGF (165) IS, premium grade</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-109-385</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pluronic F-127, 0.2 &#181;m filtered (10% Solution in Water)</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>P-6866</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human bFGF</td>
			<td>WAKO</td>
			<td>060-04543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human/Mouse/Rat ActivinA (50&#181;g)</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>338-AC-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rh Wnt-3a (10&#181;g)</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>5036-WN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Versene solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15040066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture medium and supplements</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x MEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 Mercaptro Ethanol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement minus insulin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1895601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (500ml)</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (500ml)</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (5000 U/mL)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI1640 medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21870092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;MEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11900024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flowcytometry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-TRA-1-60, FITC, Clone: TRA-1-60, BD Biosciences</td>
			<td>BD / Fisher</td>
			<td>560380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Troponin T, Cardiac Isoform Ab-1, Clone: 13-11, Thermo Scientific Lab Vision</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MS-295-P0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACS Clean Solution</td>
			<td>BD</td>
			<td>340345</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSFlow Sheath Fluid</td>
			<td>BD</td>
			<td>342003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSRinse Solution</td>
			<td>BD</td>
			<td>340346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Tube with Cell Strainer Cap (Case of 500)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (500ml)</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit, for 405 nm excitation</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>L34957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDGFRb; anti-CD140b, R-PE, Clone: 28D4, BD Biosciences</td>
			<td>BD / Fisher</td>
			<td>558821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>47306-50G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VEcad-FITC; anti-CD144, FITC, Clone: 55-7H1, BD Biosciences</td>
			<td>BD / Fisher</td>
			<td>560411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zenon Alexa Fluor 488 Mouse IgG1 Labeling Kit</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>Z25002</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of mesh-shaped engineered cardiac tissues derived from human ips cells for in vivo myocardial repair

Mevcut protokol, klinik kullanım amacına yönelik olarak geliştirilen, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden (hiPSC) elde edilen kardiyovasküler hücrelerden oluşan ölçeklenebilir, örgü şeklinde tasarlanmış kalp dokuları (ECTs) oluşturma yöntemlerini açıklamaktadır. HiPSC kaynaklı kardiyomiyositler, endotel hücreleri ve vasküler duvar hücreleri jel matrisi ile karıştırılır ve daha sonra dikdörtgen internal sendelenmiş direkler ile bir polidimetilsiloksane (PDMS) doku kalıbına dökülür. Kültür gününe göre 14 ECT, 0,5 mm çapında miyofiber demetleri ile 1,5 cm x 1,5 cm örgü yapıya dönüşür. Kardiyomiyositler her paketin uzun eksenine hizalanır ve kendiliğinden senkronize olarak yener. Bu yaklaşım, yapı olgunlaşması ve fonksiyonu korunarak daha büyük (3,0 cm x 3,0 cm) örgü EKT'ye kadar ölçeklendirilebilir. Bu nedenle, hiPSC kaynaklı kardiyak hücrelerden üretilen örgü şekilli ECT'ler kardiyak rejenerasyon paradigmaları için uygun olabilir.

Şekil 1A,B CM+EC ve MC protokolüşemalarını gösterir. CM+EC protokolünden cm ve EC'ler ve MC protokolünden MC'ler indüklendikten sonra, hücreler toplam hücrelerin %10-20'sini temsil edecek şekilde son MC konsantrasyonlarını ayarlayarak karıştırılır. 2 cm genişliğindeki doku kalıbı, 0,5 mm kalınlığındaki PDMS levhadan(Şekil 2A,B)tasarım çizimine göre imal edilmiştir. Cm + EC + MC hücrelerinin altı...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Mesh-Shaped Engineered Cardiac Tissues Derived from Human iPS Cells for In Vivo Myocardial Repair at JoVE.com

Preparation of Mesh-Shaped Engineered Cardiac Tissues Derived from Human iPS Cells for In Vivo Myocardial Repair

Bu protokol, kalp hastalıkları için hücre implantasyon tedavisinin araştırılmasına olanak sağlamak için insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden elde edilen kardiyovasküler hücreleri içeren mesh şeklinde tasarlanmış kardiyak dokular üreder.

In Vivo Miyokardiyal Onarım için İnsan iPS Hücrelerinden Elde Edilen Örgü Şekilli Mühendislik Kardiyak Dokuların Hazırlanması

The current protocol describes methods to generate scalable, mesh-shaped engineered cardiac tissues (ECTs) composed of cardiovascular cells derived from ...

Bu protokol, insan kaynaklı vücut parçaları ve STEM hücre kaynaklı kalp hücrelerinden elde edilen örgü şeklinde tasarlanmış kardiyak dokular oluşturmak için asil ve kolay bir yöntem açıklar. Doku geometrisinin esnekliği ve korunmuş doku fonksiyonunun ölçeklenebilirliği bu tekniğin başlıca avantajlarıdır. İmplante örgü şekli ECT'ler bir sıçan miyokard infarktüsü modelinde kardiyak yapı ve fonksiyon geri yükleyebilirsiniz.Kardiyak rejeneratif tedavide kullanım için fizibilitesini teyit. Bu teknikler tutarlı sonuçlar için tekrarlanabilir insan KÖK hücre işleme ve doku kültürü becerileri gerektirir. Sancaklı pozisyonlarda yedi milimetre uzunluğunda 0,5 milimetre genişliğinde ve 2,5 milimetre yüksekliğinde dikdörtgen direkler ile 21 tarafından 20,5 milimetrelik dikdörtgen tepsi imal etmek için sac silikon yapıştırıcı ile yapıştırılmış izin vermek için uygun boyutta bir kürlenmiş PDMS levha keserek başlayın.İki satır lık mesaj arasındaki yatay aralık 2,5 milimetre olmalıdır. Tepsiyi 120 santigrat derecede 20 dakika boyunca otoklavlayın ve kalıbı pbs'de bir saat boyunca %1 Poloxamer 407 ile kaplayın. Daha sonra kalıbı PBS ile iyice durulayın ve kalıbı altı kuyulu bir tabak kuyuya yerleştirin.Soy analizi için, kardiyomiyosit artı endotel ve vasküler duvar hücre protokolleri hücreleri birleştirmek. Böylece duvar hücrelerinin son konsantrasyonu, yapı başına altı hücreye altı kat 10'luk bir toplam hücre sayısının %10 ila %20'si kadardır. Mix 133 asit çözünür Sıçan Kuyruğu kollajen tip bir çözelti ve 17 mikrolitre Alkali Tampon 17 mikrolitre 10X Minimum Essential Medium buz üzerinde.Sonra kollajen çözeltisi için Bodrum Membran Matrix 67 mikrolitre ekleyin. Sonra, hücreleri santrifüj ve fetal sığır serum ve antibiyotikler ile desteklenen Yüksek Glikoz Dulbecco Minimal Essential Medium 167 mikrolitre pelet resuspend. Matris çözeltisindeki hücreleri buz üzerinde karıştırın.Daha sonra dikkatlice poloxamer 407 kaplı PDMS doku kalıbına hücre matris süspansiyon 400 mikrolitre dökün. Standart hücre kültürü kuvözdeki hücre matris karışımını 37 santigrat derecede ve %5 karbondioksitle 60 dakika kuluçkaya yatırın. Doku oluştuğunda, dikkatle EKT kültür orta dört mililitre ile kalıp ıslatın ve 14 gün boyunca hücre kültürü kuluçka için plaka dönmek.EKT implantasyonundan önce, EKT'yi yükleme direklerinden dikkatlice çıkarmak için ince prömiyerleri sterilize ettiniz. Doku kalıpları farklı son EKT geometrileri oluşturmak için çeşitli desenler, post uzunlukları ve sonrası aralıkları ile imal edilebilir. Bu analiz için, 2,5 milimetre genişliğinde aralıklarla yedi milimetre uzunluğunda direkler ile bir kalıp kullanılmıştır.Poloxamer 407, hücrelerin kalıba yapışmasını önler ve 14 gün içinde hızlı jel sıkıştırmasını takiben karakteristik bir örgü yapısının oluşmasını sağlar. EkT kalıptan çıktıktan sonra bile yapı korunur. Fabrikasyon doku yapısı yaklaşık 1,5 santimetre genişliğinde ve 0,5 milimetre kalınlığındadır.Ve kafesteki her bir demet genişliği ortalama olarak yaklaşık 0,5 milimetredir. Aynı şaşırtıcı post tasarımı ile dört kat daha büyük bir kalıptan 24 milyon hücre içeren 3 santimetrelik son genişlikte bir mesh ECT oluşturmak mümkündür. Bu büyük kafes EKT de kolayca kalıp kaldırılabilir ve küçük örgü EKT eşdeğer kuvvet yerel bir hareket oluşturur.Bu son jel duygu kusurları önlemek için kabarcıklar üretmeden doku kalıbına eşit hücre matris karışımı dökmek önemlidir. Yüklenicinin işlevsel karakterizasyonu. ve dördüncü frekans ilişkileri dahili sistemler kullanılarak gerçekleştirilebilir.Nihai hedefimiz, EKT paradigmalarının büyük hayvan klinik öncesi çalışmaları kullanan klinik tedavilere çevrilmesidir.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Construction of Defined Human Engineered Cardiac Tissues to Study Mechanisms of Cardiac Cell Therapy

Tanımlı İnsan Engineered Kalp Dokuların inşaatı Kardiyak Hücre Tedavisinin Mekanizmaları Eğitim için

Human cardiac tissue engineering can fundamentally impact therapeutic discovery through the development of new species-specific screening systems that ...

In Vivo Quantitative Assessment of Myocardial Structure, Function, Perfusion and Viability Using Cardiac Micro-computed Tomography

In Vivo Quantitative Assessment of Myocardial Structure, Function, Perfusion and Viability Using Cardiac Micro-computed Tomography

Miyokard Yapı, Fonksiyon Vivo Kantitatif Değerlendirilmesi yılında Perfüzyon ve Canlılık Kardiyak Mikro-bilgisayarlı Tomografi ile

The use of Micro-Computed Tomography (MicroCT) for in vivo studies of small animals as models of human disease has risen tremendously due to the fact that ...

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Uygulamaları<em&gt; İn Vivo</em&gt; Doku değerlendirilmesi için Rat Tibialis Anterior Fonksiyonel Test İskelet Kası Onarım Engineered

Despite the regenerative capacity of skeletal muscle, permanent functional and/or cosmetic deficits (e.g., volumetric muscle loss (VML) resulting from ...

Automated Contraction Analysis of Human Engineered Heart Tissue for Cardiac Drug Safety Screening

Kardiyak İlaç güvenlik Taraması için insan mühendisliği kalp dokusunun Otomatik Büzülme Analizi

Cardiac tissue engineering describes techniques to constitute three dimensional force-generating engineered tissues. For the implementation of these ...

Protocol for MicroRNA Transfer into Adult Bone Marrow-derived Hematopoietic Stem Cells to Enable Cell Engineering Combined with Magnetic Targeting

Yetişkin kemik iliği türevi hematopoetik kök hücre mühendislik manyetik hedefleme ile kombine etkinleştirmek için hücre içine mikroRNA Transfer için iletişim kuralı

While CD133+ hematopoietic stem cells (SCs) have been proven to provide high potential in the field of regenerative medicine, their low retention rates ...

Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells

İnsan iPSC Türevli Kardiyomiyositler, Kardiyak Fibroblastlar ve Endotel Hücreleri Kullanılarak 3D Kardiyak Mikrotissue Dizilerinin İmalatı

Generation of human cardiomyocytes (CMs), cardiac fibroblasts (CFs), and endothelial cells (ECs) from induced pluripotent stem cells (iPSCs) has provided ...

Single-Cell Optical Action Potential Measurement in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes

İnsan kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Türevli Kardiyomiyositlerde Tek Hücreli Optik Eylem Potansiyeli Ölçümü

Conventional intracellular microelectrode techniques to quantify cardiomyocyte electrophysiology are extremely complex, labor intensive, and typically ...

Cardiac Spheroids as in vitro Bioengineered Heart Tissues to Study Human Heart Pathophysiology

İn vitro Biyomühendislik Kalp Dokuları Olarak Kardiyak Sferoidler İnsan Kalp Patofizyolojisi Çalışma

Despite several advances in cardiac tissue engineering, one of the major challenges to overcome remains the generation of a fully functional vascular ...

Fibroblast Derived Human Engineered Connective Tissue for Screening Applications

Fibroblast Türetilmiş İnsan Tarafından Tasarlanmış Bağ Dokusu Tarama Uygulamaları için

Fibroblasts are phenotypically highly dynamic cells, which quickly transdifferentiate into myofibroblasts in response to biochemical and biomechanical ...

Engineered Lung Tissues Prepared from Decellularized Lung Slices

Desellülerize Akciğer Dilimlerinden Hazırlanan Mühendislik Akciğer Dokuları

There is a need for improved 3-dimensional (3D) lung models that recapitulate the architectural and cellular complexity of the native lung alveolus ex ...