Name: imaging and analysis of oil red o-stained whole aorta lesions in an aneurysm hyperlipidemia mouse model
Uploaded: 2022-05-02T14:00:00
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इस काम को भाग में, एनआईएच अनुदान P30AR070253 (P.-Y.C.), और HL135582 (एमएस) के तहत प्रदान किए गए एक संयुक्त जीव विज्ञान कंसोर्टियम माइक्रोग्रांट द्वारा समर्थित किया गया था। हम इस अध्ययन में उपयोग किए जाने वाले चूहों को बनाए रखने के लिए आर वेबर और एल कून के आभारी हैं।

एमटी / एमजी (स्टॉक नंबर 007676), और एपो-/ - (स्टॉक नंबर 002052) चूहों को जैक्सन प्रयोगशाला से खरीदा गया था। Myh11-CreERT2 चूहों स्टीफन Offermanns से एक उपहार थे (स्टॉक नंबर 019079 के रूप में जैक्सन प्रयोगशाला से उपलब्ध). Tgfbr2fl ...

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	<li>Lusis, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerosis.">Atherosclerosis.</a> Nature. 407, 233-241 (2000).</li><li>Emini Veseli, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+atherosclerosis.">Animal models of atherosclerosis.</a> European Journal of Pharmacology. 816, 3-13 (2017).</li><li>Plump, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+hypercholesterolemia+and+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E-deficient+mice+created+by+homologous+recombination+in+ES+cells.">Severe hypercholesterolemia and atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice created by homologous recombination in ES cells.</a> Cell. 71, 343-353 (1992).</li><li>Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+hypercholesterolemia+and+arterial+lesions+in+mice+lacking+apolipoprotein+E.">Spontaneous hypercholesterolemia and arterial lesions in mice lacking apolipoprotein E.</a> Science. 258, 468-471 (1992).</li><li>Ishibashi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypercholesterolemia+in+low+density+lipoprotein+receptor+knockout+mice+and+its+reversal+by+adenovirus-mediated+gene+delivery.">Hypercholesterolemia in low density lipoprotein receptor knockout mice and its reversal by adenovirus-mediated gene delivery.</a> Journal of Clinical Investigation. 92, 883-893 (1993).</li><li>Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ApoE-deficient+mice+develop+lesions+of+all+phases+of+atherosclerosis+throughout+the+arterial+tree.">ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree.</a> Arteriosclerosis Thrombosis. 14, 133-140 (1994).</li><li>Chen, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+cell+reprogramming+in+aortic+aneurysms.">Smooth muscle cell reprogramming in aortic aneurysms.</a> Cell Stem Cell. 26, 542-557 (2020).</li><li>Andres-Manzano, M. J., Andres, V., Dorado, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oil+Red+O+and+Hematoxylin+and+Eosin+Staining+for+Quantification+of+Atherosclerosis+Burden+in+Mouse+Aorta+and+Aortic+Root.">Oil Red O and Hematoxylin and Eosin Staining for Quantification of Atherosclerosis Burden in Mouse Aorta and Aortic Root.</a> Methods in Molecular Biology. 1339, 85-99 (2015).</li><li>Chen, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+TGF-beta+signalling+drives+vascular+inflammation+and+atherosclerosis.">Endothelial TGF-beta signalling drives vascular inflammation and atherosclerosis.</a> Nature Metabolism. 1, 912-926 (2019).</li><li>Mehlem, A., Hagberg, C. E., Muhl, L., Eriksson, U., Falkevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+of+neutral+lipids+by+oil+red+O+for+analyzing+the+metabolic+status+in+health+and+disease.">Imaging of neutral lipids by oil red O for analyzing the metabolic status in health and disease.</a> Nature Protocols. 8, 1149-1154 (2013).</li><li>Ferruzzi, J., Madziva, D., Caulk, A. W., Tellides, G., Humphrey, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compromised+mechanical+homeostasis+in+arterial+aging+and+associated+cardiovascular+consequences.">Compromised mechanical homeostasis in arterial aging and associated cardiovascular consequences.</a> Biomechanics and Modeling Mechanobiology. 17, 1281-1295 (2018).</li></ol>

एपोलिपोप्रोटीन ई (एपोई) और कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन रिसेप्टर (एलडीएलआर) की कमी वाले चूहे एथेरोस्क्लेरोसिस के विकास और उपचार का अध्ययन करने के लिए उपयोगी हैं। जांचकर्ता एथेरोस्क्लेरोसिस से सं?...

कोरोनरी धमनी रोग, अमेरिका में मृत्यु दर का एक प्रमुख कारण, आमतौर पर एथेरोस्क्लेरोसिस के कारण होता है, एक प्रक्रिया जो धमनी दीवारों के अंदर पट्टिका के निर्माण की ओर ले जाती है1। हाइपरलिपिडिमिया-प्रवण Apoe- और Ldlr-कमी वाले चूहे एथेरोस्क्लेरोसिस की जांच और इसकी जटिलताओं और उपचारों के विकास के लिए केंद्रीय हैं2,3,4,5। एन फेस महाधमनी से एथेरोस्क्लेरोटिक घावों का परिमाणीकरण विभिन्न सेल प्रकारों में आनुवंशिक हेरफेर के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए एक महत्वपूर्ण समापन बिंदु विश्लेषण है। यह एथेरोस्क्लेरोटिक रोग दीक्षा, प्रगति और प्रतिगमन को प्रभावित करने के लिए डिज़ाइन किए गए उपन्यास उपचारों का अध्ययन करने में भी मदद करता है। एथेरोस्क्लेरोटिक घाव महाधमनी और इसकी शाखाओं में कहीं भी बन सकते हैं (यानी, छाती में ब्रैकियोसेफेलिक, कैरोटिड और सबक्लेवियन धमनियों के साथ-साथ डायाफ्राम के नीचे गुर्दे, सामान्य इलियाक और ऊरु धमनियों)6। एथेरोस्क्लेरोसिस बोझ और उचित चिकित्सा के व्यापक मूल्यांकन के लिए विभिन्न स्थानों में रोग के बोझ के मूल्यांकन की आवश्यकता होती है, एक चुनौती जिसे अक्सर अनदेखा किया जाता है।
यह प्रोटोकॉल वर्णन करता है कि एथेरोस्क्लेरोटिक घावों का एक व्यापक विश्लेषण कैसे किया जाए, जो एक खुला हुआ पूरा महाधमनी के साथ शुरू होता है और एक माउस में चेहरे की तैयारी के लिए आगे बढ़ता है। खुला हुआ पूरा महाधमनी तेल रेड ओ धुंधला पूरे महाधमनी और इसकी शाखाओं में लिपिड-लदी सजीले टुकड़े के तेजी से, गुणात्मक मूल्यांकन की अनुमति देता है, जबकि एन फेस तैयारी माउस महाधमनी में एथेरोस्क्लेरोटिक घाव वितरण का मात्रात्मक मूल्यांकन प्रदान करती है।
तकनीक एक चिकनी मांसपेशी सेल के साथ 8 सप्ताह पुराने चूहों का उपयोग करता है-विशिष्ट TGFπR2 Apoe-/- हाइपरलिपिडेमिक पृष्ठभूमि (MYH11-CreERT2) पर विलोपन; Tgfbr2f/f;mT/mGf/f; Apoe-/-; इसके बाद TGFπR2iSMC-Apoe चूहों) और littermate Apoe-/- नियंत्रण (MYH11-CreERT2; mT/mGf/f) के रूप में जाना जाता है; Apoe-/-; इसके बाद Apoe-/- चूहों के रूप में संदर्भित किया जाता है)। जानवरों को अध्ययन सामग्री के रूप में उच्च कोलेस्ट्रॉल उच्च वसा वाले आहार (HCHFD) पर 16 सप्ताह के लिए रखा जाता है। अध्ययन समाप्ति पर, अप्रकाशित पूरे महाधमनी दाग और छवि (सभी प्रमुख शाखाओं सहित) लिपिड से भरे सजीले टुकड़े के गुणात्मक मूल्यांकन के लिए तेल लाल ओ के साथ कर रहे हैं। महाधमनी को एन फेस तैयारी के माध्यम से काटा जाता है, और सभी एथेरोस्क्लेरोटिक घावों को चित्रित और परिमाणित किया जाता है। इस प्रोटोकॉल का उपयोग Apoe-/- या Ldlr-/- हाइपरलिपिडिमिया चूहों के मॉडल में एथेरोस्क्लेरोटिक घाव विकास का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है और सामान्य महाधमनी से संबंधित संवहनी जीव विज्ञान अनुप्रयोगों तक बढ़ाया जा सकता है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Eppendorf tube</td>
			<td>DENVILLE</td>
			<td>C2170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>302995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16% Formaldehyde</td>
			<td>Polysciences</td>
			<td>18814-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>RC2546.70-5</td>
			<td>To clean the dissection tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black dissection wax</td>
			<td>CR Scientific</td>
			<td>C3541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8267</td>
			<td>Solvent for Tamoxifen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNeasy Blood &#38; Tissue kit</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>69506</td>
			<td>To isolate DNA from mouse ear</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Phosphate-buffered saline (1X DPBS), pH 7.4</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14059-11</td>
			<td>To cut the mouse skin and open the ribcage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Economy Plain Glass Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-A3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High cholesterol high fat diet</td>
			<td>Research Diets</td>
			<td>D12108</td>
			<td>To induce atherosclerosis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging software</td>
			<td>National Institutes of Health</td>
			<td>Image J</td>
			<td>Aortic lesion quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>JT9079-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-666A</td>
			<td>To clean the glass microscope slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McPherson-Vannas Micro Dissecting Spring Scissors</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5602</td>
			<td>To separate the heart and the aorta and to cut open the aorta and aorta branches</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope control software</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>DP Controller</td>
			<td>For aorta imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien pins</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle-25G</td>
			<td>BD</td>
			<td>305124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NonWoven Sponge</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>94442000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil Red O</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>O-0625</td>
			<td>To stain the atherosclerosis lesions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pall Acrodisc Sterile Syringe Filters with Super Membrane</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28143-312</td>
			<td>To filter working Oil Red O solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15021-15</td>
			<td>To dissect and clean the aorta</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Statistical software</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td>Prism 8</td>
			<td>Statical analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ1000</td>
			<td>For aorta dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX16</td>
			<td>For aorta imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T5648</td>
			<td>To induce Cre-loxP recombination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T Compound, Sakura Finetek</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer Style 4</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>0302-4-PO</td>
			<td>To cut the mouse skin and open the ribcage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer Style 5</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>0302-5-PO</td>
			<td>To dissect and clean the aorta</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging and analysis of oil red o-stained whole aorta lesions in an aneurysm hyperlipidemia mouse model

एपोलिपोप्रोटीन ई (Apoe) - या कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन रिसेप्टर (Ldlr) की कमी वाले हाइपरलिपिडेमिक चूहे एथेरोस्क्लेरोसिस अनुसंधान के लिए दो सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले मॉडल हैं। उनका उपयोग एथेरोस्क्लेरोटिक घाव के गठन पर विभिन्न आनुवंशिक कारकों और विभिन्न सेल प्रकारों के प्रभाव का अध्ययन करने और साथ ही साथ नए उपचारों के विकास का परीक्षण करने के लिए किया जाता है। अलगाव, पूरे महाधमनी का उच्छेदन, और तेल लाल ओ-दाग एथेरोस्क्लेरोटिक घावों का परिमाणीकरण एथेरोस्क्लेरोटिक बोझ का मूल्यांकन करने के लिए उपयोग किए जाने वाले बुनियादी मोर्फोमेट्रिक तरीके हैं । इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य एक अनुकूलित, चरण-दर-चरण सर्जिकल विधि का वर्णन करना है, जो तेल रेड ओ के साथ माउस महाधमनी में एथेरोस्क्लेरोटिक घावों को विच्छेदित करने, परफ्यूज-फिक्स, अलग, दाग, छवि और विश्लेषण करने के लिए है। क्योंकि एथेरोस्क्लेरोटिक घाव पूरे महाधमनी के पेड़ में कहीं भी बन सकते हैं, इस पूरे महाधमनी तेल रेड ओ स्टेनिंग विधि में पूरे महाधमनी और एक ही माउस में सभी शाखाओं में लिपिड-लदी सजीले टुकड़े का मूल्यांकन करने का लाभ है। तेल रेड ओ धुंधला करने के अलावा, ताजा अलग-थलग पूरे महाधमनी का उपयोग इन विट्रो और विवो प्रयोगों और सेल अलगाव में विविधता के लिए किया जा सकता है।

इस प्रोटोकॉल में, TGFπR2iSMC-Apoe चूहों में एथेरोस्क्लेरोटिक घावों का विश्लेषण HCHF diet7 पर 4 महीने के बाद किया गया था। व्यापक एथेरोस्क्लेरोसिस के अलावा, इन चूहों ने वक्षीय और पेट महाधमनी एन्यूरिज्म दो?...

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Imaging and Analysis of Oil Red O-Stained Whole Aorta Lesions in an Aneurysm Hyperlipidemia Mouse Model

यह प्रोटोकॉल चूहों में एथेरोस्क्लेरोटिक बोझ का विश्लेषण करने के लिए एक चरण-दर-चरण प्रक्रिया प्रदान करता है। जांचकर्ता इस प्रोटोकॉल का उपयोग विभिन्न जानवरों में एथेरोस्क्लेरोटिक घावों की बहुतायत, स्थान और आकार की तुलना करने के लिए कर सकते हैं।

इमेजिंग और एक एन्यूरिज्म हाइपरलिपिडिमिया माउस मॉडल में तेल लाल ओ-सना हुआ पूरे महाधमनी घावों का विश्लेषण

Apolipoprotein E (Apoe)- or low density lipoprotein receptor (Ldlr)-deficient hyperlipidemic mice are the two most commonly used models for ...

apoE और हाइपरलिपिडेमिक चूहों के अन्य प्रकार में atherosclerotic घावों का परिमाणीकरण विभिन्न आनुवंशिक कारकों और नए उपचारों के मूल्यांकन के लिए महत्वपूर्ण है। हमारा प्रोटोकॉल एक माउस में गुणात्मक और मात्रात्मक तरीके से एथेरोस्क्लेरोटिक बोझ के विश्लेषण के लिए चरण-दर-चरण निर्देश प्रदान करता है। एथेरोस्क्लेरोसिस को प्रेरित करने के 16 सप्ताह बाद, दिल को प्रभावित करने से पहले, डीपीबीएस के 10 मिलीलीटर के साथ 10 मिलीलीटर सिरिंज लोड करें और 25 गेज सुई संलग्न करें।चिमटी के साथ प्रयोगात्मक माउस के पेट की त्वचा को उठाएं और पेट के आधार से गर्दन के शीर्ष तक त्वचा को काटने के लिए ठीक कैंची का उपयोग करें। रिबकेज के नीचे पेट की दीवार खोलें और डायाफ्राम तक पहुंचने के लिए उरोस्थि को उठाने के लिए चिमटी का उपयोग करें। डायाफ्राम को काटें और वक्ष गुहा को उजागर करने के लिए रिबकेज को काट लें।इसके बाद, दिल के दाहिने आलिंद में एक छोटा सा चीरा बनाएं और धीरे-धीरे एपिकल बाएं वेंट्रिकुलर पंचर में डीपीबीएस की पूरी मात्रा को इंजेक्ट करें। लिवर और किडनी हल्के भूरे रंग के हो जाएंगे। जब सभी खारा को परफ्यूज किया गया है, तो किसी भी बाहरी रक्त और तरल पदार्थ की छाती गुहा को साफ करने के लिए एक गैर-बुना स्पंज का उपयोग करें।छाती गुहा पोंछ दिया गया है के बाद, गैर प्रयोगात्मक अंगों को हटा दें और चिमटी और ठीक कैंची के साथ clavicle काट। एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप के तहत माउस रखें और महाधमनी को विच्छेदित करने के लिए चिमटी और वसंत कैंची का उपयोग करें। जब महाधमनी को अलग कर दिया जाता है, तो ऊतक को खारा-भिगोए हुए गैर-बुने स्पंज के साथ कवर करें और ब्राकियोसेफेलिक, कैरोटिड, सबक्लेवियन, गुर्दे, आम इलियाक और ऊरु धमनियों सहित महाधमनी शाखाओं को विच्छेदित करें।जब महाधमनी से शाखाओं वाली सभी धमनियों को अलग कर दिया गया है, तो महाधमनी और महाधमनी शाखाओं के चारों ओर एडवेंटियल वसा और संयोजी ऊतक को सावधानीपूर्वक विच्छेदित करने और हटाने के लिए चिमटी और वसंत कैंची का उपयोग करें। महाधमनी और महाधमनी शाखाओं के एक सफल अलगाव के लिए अभ्यास और धैर्य की आवश्यकता होती है। संवहनी पेड़ को ठीक करने के लिए, पहले 1X DPBS में 4% formaldehyde के साथ एक 10 मिलीलीटर सिरिंज लोड करें और 25 गेज सुई संलग्न करें।हमेशा एक धुएं हुड के अंदर 4% फॉर्मेल्डिहाइड तैयार करना याद रखें। एपिकल बाएं वेंट्रिकुलर पंचर में सुई डालें और धीरे-धीरे फिक्सेटिव की पूरी मात्रा को इंजेक्ट करें। किसी भी बाहरी तरल पदार्थ की छाती गुहा को एक गैर-बुना स्पंज के साथ साफ करें जैसा कि प्रदर्शित किया गया है और महाधमनी से दिल को अलग करने के लिए चिमटी और सूक्ष्म विच्छेदन वसंत कैंची का उपयोग करें।जब ऊतकों को अलग कर दिया जाता है, तो महाधमनी और उसके प्रमुख पोत को कैरोटिड धमनी के ऊपर एक मिलीमीटर से ऊरु धमनी के अंत तक अलग और एक्साइज करें और पोत को डीपीबीएस के कंटेनर में रखें। तेल लाल ओ के लिए खुला पूरा महाधमनी के धुंधला, एक मोम पेट्री पकवान पर पोत को सुरक्षित करने के लिए Minutien पिन का उपयोग करें और ताजा DPBS के साथ पोत कुल्ला. कमरे के तापमान पर 60 मिनट के दाग के लिए पकवान में ताजा 0.45 माइक्रोमीटर रंध्र-फ़िल्टर किए गए तेल लाल ओ समाधान के 25 मिलीलीटर डालें।कमरे के तापमान पर 20 मिनट के धोने के लिए 60% आइसोप्रोपेनॉल के साथ ऊतक को डुबोएं। इनक्यूबेशन के अंत में, प्रति धोने के लिए पांच मिनट के लिए ताजा आसुत पानी के साथ जहाज को तीन बार कुल्ला करें और डिश को विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे रखें। चिमटी और वसंत कैंची का उपयोग करें धीरे से महाधमनी के चारों ओर perivascular वसा ऊतक के सभी साफ करने के लिए किसी भी झूठी पृष्ठभूमि से बचने के लिए तेल लाल ओ धुंधला और एक साफ कांच माइक्रोस्कोप स्लाइड के लिए पोत हस्तांतरण.तेल लाल ओ लिपिड-समृद्ध पट्टिका को लाल लेबल करेगा, जिससे गैर-पट्टिका युक्त क्षेत्र रंग में पीला पड़ जाएंगे। फिर एक कैमरे से सुसज्जित एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के साथ डिजिटल उच्च-रिज़ॉल्यूशन माइक्रोग्राफ प्राप्त करें और छवियों को अधिमानतः टैग की गई छवि फ़ाइल प्रारूप में सहेजें। महाधमनी ऊतक के नमूने के एन फेस बढ़ते के लिए, पोत को मोम पेट्री डिश में स्थानांतरित करें और ताजा डीपीबीएस के साथ ऊतक को कवर करें।महाधमनी चाप की कैरोटिड और सबक्लेवियन धमनियों और पेट की महाधमनी में इलियाक धमनियों को विभाजन के बाद एक से दो मिलीमीटर तक अलग करें। वृक्क धमनियों को अलग करें। इसके बाद, आंतरिक वक्रता और इलियाक धमनियों के साथ महाधमनी तैयारी को अनुदैर्ध्य रूप से खोलने के लिए माइक्रो विच्छेदन वसंत कैंची का उपयोग करें और आंतरिक वक्रता के आधार स्तर तक अधिक वक्रता के साथ महाधमनी मेहराब की तीन शाखाओं को काट दें।फिर लुमेन पक्ष का सामना करने और ताजा DPBS के साथ ऊतक को कवर करने के बिना पकवान के खिलाफ महाधमनी फ्लैट को सुरक्षित करने के लिए Minutien पिन का उपयोग करें। एपोलिपोप्रोटीन ई नॉकआउट चूहों की तुलना में, चिकनी मांसपेशी सेल टीजीएफ-बीटा-आर 2 नॉकआउट एपोलिपोप्रोटीन ई चूहों की महाधमनी दीवारें गंभीर एथेरोस्क्लेरोसिस का प्रदर्शन करती हैं, जिससे घावों को विच्छेदन करना मुश्किल हो जाता है। इसके अलावा, एन्यूरिज्म विशेष रूप से सुपररेनल महाधमनी के नीचे व्यापक हैं, जो उन्नत मानव महाधमनी एन्यूरिज्म की अत्यधिक याद दिलाते हैं।यहां, एक उच्च-कोलेस्ट्रॉल उच्च वसा वाले आहार-खिलाए गए टीजीएफ-बीटा-आर 2 नॉकआउट एपोलिपोप्रोटीन ई माउस से एक अप्रकाशित महाधमनी की एक प्रतिनिधि छवि को तेल लाल ओ के साथ दाग दिखाया गया है। माउस ने एक आरोही और एक पेट महाधमनी एन्यूरिज्म दोनों को विकसित किया, जिसमें ब्रैकियोसेफेलिक, कैरोटिड, सबक्लेवियन, इलियाक, फेमोरल और गुर्दे की धमनियों में त्वरित एथेरोस्क्लेरोटिक घाव गठन देखा गया। टीजीएफ-बीटा-आर 2 नॉकआउट एपोलिपोप्रोटीन ई माउस ऊतक के इस एन फेस ऑयल रेड ओ स्टेनिंग से पता चलता है कि एपोलिपोप्रोटीन ई नॉकआउट माउस समूह की तुलना में पूरे महाधमनी के गंभीर एन्यूरिज्मल इज़ाफ़ा और चिह्नित बढ़ाव का पता चलता है।यह गलत पृष्ठभूमि तेल लाल ओ दाग पेरिवैस्कुलर वसा ऊतकों से तेल लाल ओ दाग सजीले टुकड़े को अलग करने में सक्षम होने के लिए महत्वपूर्ण है। एथेरोस्क्लेरोसिस सजीले टुकड़े तीन आयामी घटनाएं हैं। एन फेस महाधमनी 2 डी घाव परिमाणीकरण के बाद, हम पट्टिका सेट विश्लेषण जैसे महाधमनी जड़ों और ब्रैकियोसेफेलिक धमनी की सिफारिश करते हैं।इस प्रोटोकॉल का उपयोग यह तय करने के लिए भी किया जा सकता है कि क्या कोई विशेष आनुवंशिक कारक, हस्तक्षेप, या उपचार इन मॉडलों में एथेरोस्क्लेरोसिस प्रगति या प्रतिगमन को प्रभावित करता है।

Research

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Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRI&#8212;Application in Premanifest Huntington's Disease

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRIÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚ÂApplication in Premanifest Huntington's Disease

पूरे मस्तिष्क विभाजन और संरचनात्मक मस्तिष्क एमआरआई के परिवर्तन बिंदु विश्लेषण-प्रकट Huntington की बीमारी में आवेदन

Recent advances in MRI offer a variety of useful markers to identify neurodegenerative diseases. In Huntington&#39;s disease (HD), regional brain atrophy ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

मात्रात्मक माइक्रो-सीटी विश्लेषण के एक माउस मॉडल में Aortopathy β-aminopropionitrile-प्रेरित महाधमनी धमनीविस्फार और विच्छेदन

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

माउस के Isometric सिकुड़ना माप Mesenteric धमनी का उपयोग तार Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Ultrasound Imaging of the Thoracic and Abdominal Aorta in Mice to Determine Aneurysm Dimensions

चूहों में वक्ष और उदर aorta के अल्ट्रासाउंड इमेजिंग aneurysm आयाम निर्धारित करने के लिए

Contemporary high-resolution ultrasound instruments have sufficient resolution to facilitate the measurement of mouse aortas. These instruments have been ...