Name: applying a three-dimensional uniaxial mechanical stimulation bioreactor system to induce tenogenic differentiation of tendon-derived stem cells
Uploaded: 2020-08-01T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Applying a Three-dimensional Uniaxial Mechanical Stimulation Bioreactor System to Induce Tenogenic Differentiation of Tendon-Derived Stem Cells at JoVE.com

وقد أجري البحث بينما كان صاحب البلاغ يحصل على "منحة دراسية من جامعة غرب أستراليا للحصول على رسوم دولية وجائزة للدراسات العليا الجامعية في جامعة غرب أستراليا". وقد دعم هذا العمل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية الصينية (81802214).

وقد تمت الموافقة على الأساليب الموصوفة وتنفيذها وفقاً للمبادئ التوجيهية واللوائح الصادرة عن لجنة أخلاقيات الحيوان بجامعة غرب أستراليا.
1- عزل الفئران TDSCs
<ol><li>القتل الرحيم 6-8 أسابيع من العمر C57BL/6 الفئران عن طريق خلع عنق الرحم.</li>
	<li>حصاد الأوتار الرضفة24 وأوتار ?...

وتر هو نسيج الضام الليفي الليفي النياني. وفقا للبحوث السابقة، التحميل الميكانيكية الزائدة يمكن أن تؤدي إلى تمايز العظم من الخلايا الجذعية وتر، في حين أن التحميل غير كافية من شأنه أن يؤدي إلى اضطراب هيكل الألياف الكولاجين خلال التمايز وتر21.
وهناك رأي شائع هو أن ...

اعتلال التتناد هو واحد من الإصابات الرياضية الشائعة. ويتجلى ذلك أساسا من الألم, تورم المحلية, انخفاض التوتر العضلي في المنطقة المصابة, والخلل الوظيفي. الإصابة باعتلال الوتار عالية. وجود اعتلال الأوتار أخيل هو الأكثر شيوعا للعدائين المسافات المتوسطة والطويلة (تصل إلى 29٪)، في حين أن وجود اعتلال الأوتار الرضفة أيضا عالية في الرياضيين من الكرة الطائرة (45٪)، وكرة السلة (32٪)، والمضمار والميدان (23٪)، وكرة اليد (15٪)، وكرة القدم (13٪)1،,2،,3،,4،,5. ومع ذلك ، بسبب قدرة محدودة على الشفاء الذاتي من وتر ، وعدم وجود علاجات فعالة ، والاعتلال لا يزال يؤثر على حياة المرضى سلبا6،7. وعلاوة على ذلك، لا يزال من غير الواضح التسبب في اعتلال التناد. كانت هناك العديد من التحقيقات حول مسببات المرض ، بما في ذلك أساسا "نظرية الالتهاب" ، "نظرية الانحطاط" ، "نظرية الإفراط في الاستخدام" ، وهكذا4. في الوقت الحاضر، يعتقد العديد من الباحثين أن اعتلال الأوتار كان بسبب فشل الإصلاح الذاتي للإصابات الدقيقة الناجمة عن التحميل الميكانيكي المفرط لتجارب وتر9،10.
الخلايا الجذعية المشتقة من الأوتار (TDSCs) ، كخلايا أولية لخلايا الأوتار ، تلعب دورًا أساسيًا في تطوير اعتلال الأوتار والاستعادة الوظيفية والهيكلية بعد اعتلال الأوتار11،12،13. وأفيد أن التحفيز العصبي الميكانيكي يمكن أن يسبب انتشار وتمايز osteocytes، والعظام، والخلايا العضلية الملساء، الخلايا الليفية، والخلايا الجذعية mesenchymal وغيرها من الخلايا الحساسة للقوة14،15،16،17،18. ولذلك، TDSCs، باعتبارها واحدة من الخلايا الحساسية ومتعددة القدرات، ويمكن أيضا أن يكون حافزا للتمييز عن طريق تحميل الميكانيكية19،20.
ومع ذلك، يمكن أن المعلمات تحميل الميكانيكية المختلفة (قوة التحميل، تردد التحميل، نوع التحميل وفترة التحميل) يمكن أن تحفز TDSCs للتمييز في خلايا مختلفة21. وبالتالي ، فإن نظام التحميل الميكانيكية الفعالة والصالحة مهم جدًا بالنسبة لـ tenogenesis. وعلاوة على ذلك، هناك أنواع مختلفة من المفاعلات الحيوية كأنظمة تحفيز تستخدم حالياً لتوفير التحميل الميكانيكي للبلدان النامية. مبادئ كل نوع من مفاعلات الحيوية مختلفة ، وبالتالي فإن المعلمات التحميل الميكانيكية المقابلة لمختلف المفاعلات الحيوية هي أيضا مختلفة. ولذلك، فإن بروتوكول التحفيز البسيط والاقتصادي والقابل للاستنساخ مطلوب، بما في ذلك نوع مفاعل حيوي، ووسيلة التحفيز المقابلة، ونظام التحميل الميكانيكي.
وتصف هذه المقالة طريقة تستند إلى نظام تمدد أحادي الأبعاد ثلاثي الأبعاد (3D) لتحفيز TDSCs على التفريق في أنسجة تشبه الأوتار. هناك سبع مراحل من البروتوكول: عزل TDSCs الفئران، والثقافة والتوسع في الفئران TDSCs، وإعداد ثقافة التحفيز المتوسطة لتشكيل ورقة الخلية، وتشكيل ورقة الخلية عن طريق زراعة في التحفيز المتوسط، وإعداد 3D وتر الخلايا الجذعية بناء، وتجميع مجمع التحفيز الميكانيكية أحادية التمدد، وتقييم الميكانيكية حفز في الأنسجة مثل وتر فيترو. الإجراء كله يستغرق أقل من 3 أسابيع للحصول على بناء الخلية 3D، وهو أقل بكثير من بعض الأساليب القائمة22،23. وقد ثبت أن البروتوكول الحالي قادر على حث TDSCs على التفريق في أنسجة الأوتار ، وهو أكثر موثوقية من نظام التمدد ثنائي الأبعاد (2D) الحالي الشائع الاستخدام (2D). وقد أثبتت الأنسجة فعالية. وباختصار، فإن هذا البروتوكول بسيط واقتصادي ويمكن استنساخه وصحته.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:860px;" width="860">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="156">
			<td height="156" style="height:156px;width:240px;">Ascorbic acid</td>
			<td style="width:213px;">Sigma-aldrich</td>
			<td style="width:119px;">PHR1008-2G</td>
			<td style="width:288px;"></td>
		</tr>
		<tr height="130">
			<td height="130" style="height:130px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco&#228; by Life Technologies</td>
			<td align="right">1908361</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Histology processor</td>
			<td style="width:213px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">TP 1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Minimal Essential Medium (Alpha-MEM)</td>
			<td>Gibco&#228; by Life Technologies</td>
			<td align="right" style="width:119px;">2003802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:240px;">Mouse Tendon Derived Stem Cell</td>
			<td style="width:213px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:288px;">Isolated from Achilles tendons of 6- to 8-wk-old C57BL/6 mice. Then digested with type I collagenase (3 mg/ml; MilliporeSigma, Burlington, MA, USA) for 3 h and passed through a 70 mmcell strainer to yield single-cell suspensions.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:213px;">Sigma-aldrich</td>
			<td style="width:119px;">441244</td>
			<td style="width:288px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Streptomycin and penicillin mixture</td>
			<td>Gibco&#228; by Life Technologies</td>
			<td align="right">15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="168">
			<td height="168" style="height:168px;width:240px;">Three-dimensional Uniaxial Mechanical Stimulation Bioreactor System</td>
			<td style="width:213px;">Centre of Orthopaedic Translational Research, Medical School, University of Western Australia</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:288px;">Available from the corresponding author upon request. Or make it according to our design* *Wang T, Lin Z, Day RE, et al. Programmable mechanical stimulation influences tendon homeostasis in a bioreactor system. Biotechnol Bioeng. 2013;110(5):1495&#8211;1507. doi:10.1002/bit.24809</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Trypsin</td>
			<td>Gibco&#228; by Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">1858331</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

applying a three-dimensional uniaxial mechanical stimulation bioreactor system to induce tenogenic differentiation of tendon-derived stem cells

اعتلال التناد هو مرض شائع من أمراض الوتر المزمن المتعلقة بالالتهاب والانحطاط في منطقة تقويم العظام. مع ارتفاع معدلات المراضة، والقدرة على إصلاح الذات محدودة، والأهم من ذلك، لا علاجات نهائية، اعتلال الأوتار لا يزال يؤثر على نوعية حياة المرضى سلبا. الخلايا الجذعية المشتقة من الأوتار (TDSCs) ، كخلايا أولية أولية من خلايا الأوتار ، تلعب دورًا أساسيًا في تطور اعتلال الأوتار ، والاستعادة الوظيفية والهيكلية بعد اعتلال الأوتار. وهكذا، فإن الطريقة التي يمكن في المختبر تقليد التمايز في الجسم الحي من TDSCs في خلايا الأوتار سيكون من المفيد. هنا، يصف هذا البروتوكول طريقة تستند إلى نظام تمدد أحادي الأبعاد ثلاثي الأبعاد (3D) لتحفيز TDSCs على التفريق في أنسجة تشبه الأوتار. هناك سبع مراحل من البروتوكول الحالي: عزل ماوس TDSCs, ثقافة وتوسع فئران TDSCs, إعداد الحفز ثقافة المتوسطة لتشكيل ورقة الخلية, تشكيل ورقة الخلية عن طريق زراعة في التحفيز المتوسطة, إعداد 3D وتر الخلايا الجذعية بناء, تجميع مجمع التحفيز الميكانيكية أحادية التمدد, وتقييم الميكانيكية حفز في النسيج مثل وتر فيترو. وقد أثبتت الأنسجة فعالية. تستغرق العملية بأكملها أقل من 3 أسابيع. لتعزيز ترسب المصفوفة خارج الخلية، تم استخدام 4.4 ملغ/مل حمض الاسكوربيك في المحفزات المتوسطة الثقافة. غرفة منفصلة مع محرك خطي يوفر دقة التحميل الميكانيكية وقابل للنقل وتعديلها بسهولة، والتي يتم تطبيقها على مفاعل حيوي. وكان نظام التحميل في هذا البروتوكول 6٪ سلالة، 0.25 هرتز، 8 ساعة، تليها 16 ساعة من الراحة لمدة 6 أيام. يمكن أن يحاكي هذا البروتوكول تمايز الخلايا في الوتر ، وهو مفيد للتحقيق في العملية المرضية لاعتلال الوتر. وعلاوة على ذلك، يمكن أن تستخدم الأنسجة الشبيهة بالوتر لتعزيز شفاء الأوتار في إصابة الأوتار ككسب غير مشروع ذاتي هندسي. وخلاصة القول إن هذا البروتوكول بسيط واقتصادي ويمكن استنساخه وصحته.

قبل التحفيز الميكانيكي، نمت TDSCs إلى التقاء 100٪ في المتوسط الكامل وعرض مورفولوجيا فائقة التنظيم غير منظم(الشكل 2A). بعد 6 أيام من التحميل الميكانيكية تمتد uniaxial، مصفوفة خارج الخلية (ECM) ومحاذاة الخلية كانت موجهة بشكل جيد (الشكل 2B). كانت الخلايا مأهولة بشكل جيد ومغلفة بشكل جيد ف...

Watch this Scientific Journal Video about Applying a Three-dimensional Uniaxial Mechanical Stimulation Bioreactor System to Induce Tenogenic Differentiation of Tendon-Derived Stem Cells at JoVE.com

Applying a Three-dimensional Uniaxial Mechanical Stimulation Bioreactor System to Induce Tenogenic Differentiation of Tendon-Derived Stem Cells

نظام ثلاثي الأبعاد للتحفيز الميكانيكي أحادي الأبعاد هو مفاعل حيوي مثالي للتمايز التنغيم الخاص بالخلايا الجذعية المشتقة من الأوتار وتكوين الأوتار الجديد.

تطبيق نظام حفّال ميكانيكي أحادي الأبعاد أحادي الأبعاد للتحفيز الحيوي للحث على التمايز التنوجيني للخلايا الجذعية المشتقة من الأوتار

Tendinopathy is a common chronic tendon disease relating to inflammation and degeneration in an orthopaedic area. With high morbidity, limited ...

يمكن أن تحفز معلمات التحميل الميكانيكية المختلفة خلايا STEM المشتقة من الأوتار التي تم تمييزها في خلايا مختلفة. نحن نقدم عملية مفصلة لتطبيق هذا ثلاثي الأبعاد التحفيز الميكانيكية ثلاثية الأبعاد نظام مفاعلات الحيوية للحث على التمايز tenogenic من الخلايا الجذعية المشتقة من الأوتار. اعتلال التدين هو واحد من الإصابات الرياضية الشائعة في قسم العظام.وجود اعتلال وتر أخيل هو الأكثر شيوعا مع ما يصل إلى 29٪ للعدائين المسافات المتوسطة والطويلة، في حين أن وجود tendinopathy الرضفة أيضا عالية في الرياضيين من الكرة الطائرة وكرة السلة والمضمار والميدان وكرة اليد وكرة القدم. ومع ذلك، نظرا لقدرة الشفاء الذاتي محدودة من وتر وعدم وجود علاج فعال، اعتلال الأوتار لا يزال له تأثير سلبي كبير على نوعية حياة المرضى. الخلايا الجذعية المشتقة من الأوتار، والمعروفة باسم TDSCs كالخلايا السليفة الهامة لخلايا الأوتار، تلعب دورًا مهمًا في تطوير اعتلال الأوتار، وكذلك استعادةها الوظيفية والهيكلية بعد اعتلال الأوتار.ولكن تختلف عن معلمات التحميل الميكانيكية، مثل تحميل الإجهاد، وتواتر التحميل، ونوع التحميل، وفترة التحميل يمكن أن تحفز TDSCs التفريق في خلايا مختلفة. وهكذا، نظام تحميل ميكانيكي فعال وصالح مهم جدا لنشأة وتر. هناك سبع مراحل من البروتوكول الحالي، بما في ذلك عزل TDSCs الفئران، والثقافة والتوسع في TDSCs الفئران، وإعداد ثقافة التحفيز المتوسطة لتشكيل ورقة الخلية، وتشكيل ورقة الخلية عن طريق زراعة في التحفيز المتوسط، وإعداد 3D وتر الخلايا الجذعية بناء، وتجميع الخلايا أحادية الإرax التي تمتد مجمع التحفيز الميكانيكية، وتقييم الميكانيكية حفز في الأنسجة مثل وتر في المختبر.عزل الفئران TDSCs. المستخدمة في الفئران التي هي الفئران التي عمرها ستة إلى ثمانية أسابيع من قبل خلع عنق الرحم. حصاد وتر الرضفة وأوتار أخيل.هضم وتر مع ستة ملليلتر نوع 1 collagenase لمدة ثلاث ساعات. جمع الخلايا والثقافة في كامل ألفا MEM تحتوي على 10٪ من FBS و 1٪ من المزيج الستريبتوميسين والنسلين لمدة سبعة أيام. تحديد TDSCs باستخدام فرز الخلايا المُنشّط بالفلور بواسطة عملية استئصال الخلايا المتدفقة، والتعبير عن علامات سطح الخلية، بما في ذلك CD4 و CD90 و Sca-1.عدم التعبير عن CD34 و CD45. مرور وتجميد الخلايا. سيتم استخدام الخلايا الممرّة لخطوات أخرى.الثقافة والتوسع في TDSCs الفئران. تأخذ الاحماء الفئران وتر الخلايا الجذعية. إضافة ببطء إضافية أربعة إلى خمسة ملليلتر من كامل ألفا MEM.نقل الخليط إلى أنبوب جهاز طرد مركزي 15 ملليلتر بواسطة ماصة. أعلى مع متوسطة إلى ما مجموعه ثمانية ملليلتر من قبل ماصة. ضع الأنبوب في جهاز طرد مركزي توازن جيد.خلايا الطرد المركزي في 347 ز لمدة خمس دقائق. أخرج أنبوب من جهاز الطرد المركزي. تحقق من بيليه في الجزء السفلي.Decant المتوسطة الحرة. إعادة تعليق الخلايا بلطف في 1-2 ملليلتر متوسطة كاملة. تجنب صنع فقاعات كثيرة جدا.نقل الخلايا التي أعيد تعليقها إلى قارورة T75 بواسطة ماصة. استخدم ماصة لإضافة واسطة ألفا ميم كاملة إلى القارورة لتصل إلى حجم إجمالي قدره 10 ملليلتر مع التركيز النهائي البالغ 13000 خلية لكل سنتيمتر مربع. ضع القارورة في الحاضنة و ثقتها عند 37 درجة مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون.تغيير الوسط كل ثلاثة أيام. مراقبة ومراقبة الخلايا تحت المجهر عند تغيير المتوسطة حتى يتم استزراع الخلايا إلى التقاء 100٪. إعداد ثقافة التحفيز المتوسطة لتشكيل ورقة الخلية.صب 15 ملليلتر إكمال ألفا MEM المتوسطة في أنبوب معقم 15 ملليلتر. إضافة ستة ميكرولتر حمض الاسكوربيك في 15 ملليلتر المتوسطة إلى التركيز النهائي من 4.4 ميكروغرام لكل ملليلتر. مزيج بلطف عن طريق عكس صعودا وهبوطا.تشكيل ورقة الخلية عن طريق زراعة في التحفيز المتوسطة. تجاهل غير عادي كامل ألفا MEM المتوسطة بعناية. تجنب لمس الخلايا التي تعلق على الجزء السفلي من القارورة.إضافة 10 ملليلتر التحفيز المتوسطة ببطء. تجنب التسبب في أي اضطراب في الخلايا المُلَكّمَة تمامًا. زراعة الخلايا في التحفيز المتوسط لمدة تسعة أيام وتغيير المتوسطة كل ثلاثة أيام لتوليد ما يكفي ورقة الخلية في 37 درجة مع 5٪ من ثاني أكسيد الكربون.إعداد 3D وتر STEM خلية بناء. أخرج القارورة من الحاضنة تجاهل وسيط التحفيز تماما.غسل ورقة الخلية monolayer مع برنامج تلفزيوني عن طريق دوامة القارورة. تجاهل برنامج تلفزيوني تماما. استخدام ماصة لإضافة ملليلتر واحد، 0.25٪ التربسين إلى زاوية القارورة.انقر فوق زاوية القارورة لفصل ورقة الخلية أحادية الطبقات حتى تغسل زاوية ورقة الخلية من أسفل القارورة. على الفور إضافة تسعة ملليلتر كاملة ألفا MEM المتوسطة لوقف رد فعل التربسينية. مواصلة دوامة قارورة لتقشر تماما قبالة ورقة الخلية monolayer.صب المجموع لإرفاق ورقة الخلية في طبق بيتري مع المتوسطة. استخدم ملاقطة معقمة لالتقاط زاوية واحدة من ورقة الخلية وتدويرها في اتجاه عقارب الساعة لمدة 15 مرة. التقاط آخر نهاية ورقة الخلية وتدوير في اتجاه عكس عقارب الساعة لمدة 10 مرات لصياغة وتر مثل في المختبر بناء.تجميع مجمع التحفيز الميكانيكي أحادي التمدد في مفاعل حيوي فريد التصميم. قم بتوصيل الخطافات بواسطة الموصل، ثم اضبط إلى سنتيمترين بين خطافين. الرياح بلطف TDSCs 3D بناء على الخطاف التجريبي لثلاث مرات على كل هوك.تأمين السنانير مع بناء الخلية على غرفة مفاعل حيوي عن طريق تشديد مسامير على طرفي. ملء الغرفة مع كامل ألفا MEM المتوسطة. قم بتوصيل المسرع بغرفة الثقافة بواسطة الكابل.قطع hooks'connector بواسطة ملاقط عقيمة. قم بتشغيل وحدة التحكم في الطاقة والقناة لبدء التحفيز الميكانيكي. وضع غطاء على الغرفة، وتتبع أضواء المؤشر، وضمان أن يمكن أن تعمل بشكل صحيح.وضع مفاعل حيوي في الحاضنة واخضاع بناء الخلية 3D لتمتد الميكانيكية. نظام التحميل هو 6٪ سلالة، 0.25 تردد هيرتز، ثماني ساعات تليها 16 ساعة راحة لمدة ستة أيام. تقييم الميكانيكية حفز في نسيج يشبه وتر في المختبر.تخفيف مسامير من قبل مفك واتخاذ الجمعية قبالة بعناية. وضع الأنسجة الشبيهة بأوتار في 4٪ PFA لتثبيت لمدة 15 دقيقة، ضع الأنسجة الثابتة الشبيهة بأوتار في كاسيت خزعة مع خزعة من الحيوانات الأليفة. معالجة لتجفيف عينة.وأخيرا، تقييم من قبل HD مكانة النسيجية. كرر البروتوكول بأكمله واستخراج RNA من الأنسجة الشبيهة بأوتار لتقييم التعبير عن علامات التنغيم بواسطة qPCR. قبل التحفيز الميكانيكي، سوف تنمو TDSCs إلى 100٪ التقاء في المتوسط الكامل وعرض مورفولوجيا هيكلية خارجية غير منظمة.بعد ستة أيام رأيت المقبل تمتد، والتحميل الميكانيكية، مصفوفة الخلوية اضافية، وكانت موجهة بشكل جيد الانحيازات الخلية. كانت الخلايا مأهولة بشكل جيد ومغلفة بشكل جيد في ECM بعد التحميل الميكانيكي. وقدم مورفولوجيا الخلية ليكون موجودا وكان أكثر شبها لخلايا الأوتار العادية مقارنة مع واحد مع دون تمتد.كثافة الخلية في بناء الخلية مع تحميل كانت أعلى من واحد دون تحميل. وأظهرت نتائج qPCR أن الأمور الحالية زادت من التعبير عن علامات تينوجيني، بما في ذلك scleraxis، موهوك، تينومودولين، والكولاجين من النوع 1 مقارنة بتلك التي تعامل بها الثقافة المعلنة. من حيث التحفيز الميكانيكية نظام مفاعل حيوي، تم استخدام غرفة منفصلة مع المحرك الخطي في البروتوكول الحالي لدينا.لأنه يمكن أن توفر دقة التحميل الميكانيكية وأنه محمول وسهلة ليتم تعديلها بالمقارنة مع الطرق التقليدية ورقة الخلايا 2D وتمتد biaxial، 3D بناء الخلية هو أكثر مماثلة لشكل حقيقي من وتر. وتمتد uniaxial هو أكثر مماثلة لخصائص قوة خلايا الأوتار. وهذا يوفر أساسا نظريا لاستخدام نظام 3D تمدد uniaxial لتحفيز التفريق بين TDSCs.وهكذا، تم توجيه ورقة الخلية 2D أخيرا إلى بناء خلية 3D وخضع uniaxial في هذا البروتوكول. وفقا لنظامنا مفاعلات حيوية، لدينا نظام التحميل هو 6٪ سلالة، 0.25 تردد هيرتز، ثماني ساعات تليها 16 ساعة راحة لمدة ستة أيام. وأخيراً، تجلت فعالية البروتوكول من خلال مورفولوجيا ومستوى التعبير عن العلامات التي تُنوِّه.عملية التشغيل برمتها بسيطة، ولكن المشغل بحاجة إلى أن تولي اهتماما للحفاظ على بيئة TDSC تعقيم في جميع الأوقات. هناك العديد من التطبيقات لبروتوكولنا. عملية تحفيز TDSCs لتقليد التمايز في الجسم الحي مفيد للتحقيق في العملية المرضية لاعتلال الأوتار.وعلاوة على ذلك، يوفر هذا البروتوكول طريقة قابلة للتكرار للتمايز الموجه من TDSCs في الأنسجة الشبيهة بالأوتار. لذلك يمكن استخدامه ببساطة وفعالية لثقافة الأوتار المهندسة المحتملة. وباختصار، فإن تطبيق نظام 3D أحادي الأبعاد للتحفيز الميكانيكي أحادي الأبعاد للتحفيز الحيوي هو بسيط واقتصادي ويمكن استنساخه وطريقة صالحة للحث على التمايز التفاضلي للـ TDSCs.بروتوكولنا يوفر العملية برمتها في التفاصيل.

Research

JoVE Journal

Medicine

Utilizing Transcranial Magnetic Stimulation to Study the Human Neuromuscular System

استخدام التنشيط المغناطيسي عبر الجمجمة لدراسة النظام العصبي العضلي الإنسان

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been in use for more than 20 years 1, and has grown exponentially in popularity over the past decade.  While ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

العزلة، وتوصيف المقارن التمييز بين الخلايا الجذعية البشرية الأسنان اللب المستمدة من الأسنان الدائمة باستخدام طريقتين مختلفتين

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Utilizing Repetitive Transcranial Magnetic Stimulation to Improve Language Function in Stroke Patients with Chronic Non-fluent Aphasia

استخدام المتكرر تحفيز المغناطيسي عبر الجمجمة لتحسين وظيفة اللغة في مرضى السكتة الدماغية المزمنة مع فقدان القدرة على الكلام غير بطلاقة

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been shown to significantly improve language function in patients with non-fluent aphasia1. In this ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

ثقافة الأنسجة نموذج ثلاثي الأبعاد لدراسة الابتدائية نخاع العظم الإنسان والأورام الخبيثة في

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Three Dimensional Cultures: A Tool To Study Normal Acinar Architecture vs. Malignant Transformation Of Breast Cells

ثلاثة الثقافات الأبعاد: أداة لدراسة الهندسة المعمارية عادي عنيبية مقابل التحول السرطاني للخلايا الثدي

Invasive breast carcinomas are a group of malignant epithelial tumors characterized by the invasion of adjacent tissues and propensity to metastasize. The ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

الكمي لسرطان الثدي الغزو خلية باستخدام ثلاثي الأبعاد (3D) نموذج

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

ثلاثي الأبعاد (3D) ورم الجسم الشبه الكروي الغزو الفحص

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

دراسة سرطان البنكرياس الجذعية خصائص الخلايا لتطوير استراتيجيات علاجية جديدة

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

ثلاثي الأبعاد الثقافة الجيني حبة من خلايا الإنسان ورم الغدة النخامية

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...

A Simple Mechanical Procedure to Create Limbal Stem Cell Deficiency in Mouse

إجراء ميكانيكي بسيط لإنشاء الحوفي نقص الخلايا الجذعية في الفأر

Limbal stem cell deficiency (LSCD) is a state of malfunction or loss of limbal epithelial stem cells, after which the corneal epithelium is replaced with ...