Name: streamlined sampling and cultivation of the pelagic cosmopolitan larvacean, oikopleura dioica
Uploaded: 2020-06-16T15:00:00
Duration: 11 min 55 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Streamlined Sampling and Cultivation of the Pelagic Cosmopolitan Larvacean, Oikopleura dioica at JoVE.com

Мы благодарны Гарту Ильсли за его поддержку в создании системы культуры. Мы признаем вклад Рицуко Суямы и Сильвена Гийо в усилия по раннему отбору проб и идентификации видов. Особая благодарность благодаря Хироки Нисида, Такеши Онума и Тацуя Омотезако за их щедрую поддержку и руководство во всем, в том числе первоначальное создание местной системы культивирования и обмена животными и микроалгалной культурой. Мы также благодарим Даниэля Чоррута, Юан-Мари Буке, Анну Аасорд, Кристиана Каньестро и Альфонсо Феррендес-Ролдана за то, что они поделились своим опытом в области отбора проб и культивирования. Джай Дентон, Чарльз Плесси и Джеффри Джолли предоставили бесценную обратную связь по рукописи. Шарлотта Уэст сформулировала обобщенное уравнение для расчета водорослей. Наконец, мы благодарим OIST за финансирование, Мэри Коллинз и OIST Fieldwork Комитет по безопасности за консультации по безопасным процедурам отбора проб, сотрудники OIST машинного цеха для строительства культивирования и отбора проб оборудования, и Koichi Тода для доставки морской воды.

Автору нечего декларировать.

Для облегчения гибкости в создании культуры O. dioica важно понимать естественную среду обитания животных. Сезонные данные предоставляют информацию о диапазонах физических параметров, которые могут быть использованы для руководства лабораторных условий культивирования. Это также помогает в понимании сезонных колебаний в изобилии животных. На Окинаве, O. dioica наиболее надежно найти с июня по октябрь. Тем не менее, в Токийском заливе, население пик в феврале и октябре41. Хотя культивирование O. dioica часто сообщается при температуре 20 градусов по Цельсию или ниже27,28,29, Okinawan O. dioica показывает лучшую выживаемость при температурах выше 20 градусов по Цельсию; это может быть объяснено тем фактом, что минимальная температура поверхностной морской воды на Окинаве составляет 20 градусов по Цельсию(рисунок 6). Обилие O. dioica также может быть под влиянием фитопланктона цветет42 и хищник изобилия43,44. Независимо от того, где O. dioica собраны, понимание сезонности местного населения максимизирует шансы выборки и культивирования успеха.
Учитывая соответствующий сезон и место, чистая выборка является эффективным способом сбора большого количества Oikopleura с минимальными усилиями. Для сбора всех этапов животного могут быть использованы планктонные сети с меньшим размером сетки (60-70 мкм). Полностью зрелые животные редко встречаются в сети, возможно, из-за их хрупкости в конце жизненного цикла. Таким образом, идентификация видов с последующей выборкой достигается путем микроскопического наблюдения подборальных клеток. Зрелые люди обычно появляются один или два дня после отбора проб, как животные продолжают расти в лаборатории. Хотя чистая выборка эффективна, альтернативные методы отбора проб могут быть необходимы в различных обстоятельствах. Например, чистая выборка вблизи городских районов может собрать большое количество фитопланктона, что затрудняет изоляцию Ойкоплеуры. В таких случаях рекомендуется простой отбор проб ведер для сбора поверхностного морского воды или пробы лодки из районов за пределами гавани. Результаты показали, что постепенное изменение солености из-за последовательных дней дождя не повлияло на обилие O. dioica; однако следует избегать отбора проб на берегах сразу же после экстремальных погодных явлений, таких, как тропические циклоны. Эти события вызывают внезапные и радикальные биогеохимические изменения в защищенном водоеме45,,46. Сток ливневых вод может нести загрязняющие вещества, отложения и избыток питательных веществ, которые повышают мутность и более низкое качествоводы 47. Планктон, питающийся фильтром, такой как Oikopleura,может быть особенно восприимчив к этим изменениям из-за их способа кормления и ограниченной подвижности. В таких обстоятельствах мы рекомендуем отложить отбор проб на несколько дней, пока местные условия не нормализутся.
Внедрение многоступенчатой системы фильтров имеет важное значение для поддержания малых, фильтр-кормления организмов, таких как O. dioica. Используя плохо отфильтрованную морскую воду (например, сетку размером 25 мкм в прежней системе культуры) культура часто была нестабильной, особенно в летнее время, что потенциально объясняется более высоким изобилием фитопланктона. Хотя некоторые фитопланктона полезны для роста O. dioica, другие производят биотоксины, которые могут вызвать аномальное развитие эмбрионов O. dioica 48. Кроме того, высокая концентрация диатомовых, таких как Chaetoceros spp. потенциально вредны для роста O. dioica, поскольку они могут обладать длинными сетами, которые могут засорить дом и предотвратить эффективное кормление49. Мы часто наблюдали, как дома мелких животных забиты C. calcitrans setae; Поэтому мы теперь кормим C. calcitrans только животным в День 2 и старше(Таблица 3).
Хотя это не было проблемой здесь, небольшие долгосрочные культивирования O. dioica может испытывать внезапное падение численности населения из-за генетического узкого места; в таких случаях, Марти-Соланс и др.29 рекомендуют добавлять новых диких людей в культуру каждые 20 поколений.
Система культуры Ойкоплеура является гибкой. Стабильная культура может быть установлена в течение недели. Долгосрочное культивирование O. dioica возможно на скромный бюджет с неспециалистным оборудованием. Ежедневные усилия, необходимые для обслуживания 5-10 стаканов Oikopleura, как правило, менее 2 часов с 2 человек. O. dioica также может поддерживаться в искусственной морской воде, что полезно для тех, кто не имеет доступа к естественной морскойводе 28. Долгосрочное хранение водорослей можно использовать с помощью твердой культуры и криоконсервации29. Кроме того, O. dioica спермы может быть криоконсерваны, и остаются жизнеспособными в течение более года50. Все эти факторы означают, что культуры могут быть легко восстановлены. Наконец, прошлый опыт с случайной культивирования Pleurobrachia SP. может предположить, что система культивирования, разработанная для Ойкоплеуры, потенциально может быть распространена на более широкое сообщество хрупких пелагических организмов.
O. dioica продолжает давать мощные знания о различных биологических областях. Понимание местной сезонности, тщательной системы культуры, и несколько преданных своему делу людей позволяют эффективной культуры, которые будут созданы с небольшим усилием. Система культуры Ойкоплеура предоставляет базовые ресурсы для изучения широкого спектра биологических областей, связанных с экологией, развитием, геномикой и эволюцией этого уникального морского хордата.

Модельные организмы сыграли важную роль в решении многих биологических вопросов, включая вопросы, связанные с развитием, генетикой и физиологией. Кроме того, дополнительные модельные организмы способствуют новым открытиям и, следовательно, имеют решающее значение для достижения более глубокого понимания природы1,2. Морской зоопланктон представляют собой различные группы организмов, которые играют важную роль в океанических экосистемах3,,4,,5,,6. Несмотря на их изобилие и экологическое значение, желатиновые организмы, такие как планктонные туникаты, часто недопредставлены в исследованиях биоразнообразия планктона, потому что их прозрачность и хрупкость делают сбор поля и идентификациюсложными 7,8. Адаптированные методы отбора проб и лабораторное культивирование позволяют более внимательно наблюдать за животными in vitro, что способствовало знанию в биологии планктонных туникат9,,10,,11,,12.
Larvaceans (Аппендикулярные) являются класс свободного плавания морских туникат, состоящий из около 70 описанных видов во всем мире8,13. Поскольку они являются одной из наиболее распространенных групп в зоопланктонных сообществ14,15,16,17, larvaceans представляют собой основной источник пищи для крупных планктонных организмов, таких как личинки рыб18,19. В отличие от асцидий-sessile tunicates-larvaceans сохранить головастик, как морфология и остаются планктонные на протяжении всей своей жизни20. Каждое животное живет внутри самостроя, замысловатого фильтра кормления структуры, известной как дом. Они накапливают частицы в своих домах, создавая водные потоки через волнообразное движение их хвостов21. Забитые дома отбрасываются в течение дня, некоторые из которых образуют углеродные агрегаты и в конечном итоге опускаются на морское дно22; таким образом, larvaceans играют важную роль в глобальном потоке углерода23. Большинство видов, как сообщается, живут в пелагической зоне в верхней 100 м от водной колонки13; однако, гигантский ларвакейский Bathochordaeus, как известно, населяют глубины 300 м24. Исследование на Bathochordaeus в Монтерей-Бей, Калифорния показало, что животные также служат в качестве биологического вектора микропластика, предлагая потенциальную важность в понимании роли апендикулярных в вертикальном транспорте и распределении микропластика в океанах25.
Oikopleura dioica, вид larvacean, привлекает внимание в последние годы в качестве модели организма из-за нескольких замечательных характеристик. Об этом обычно сообщается во всех океанах мира. Особенно обильный в прибрежных водах26,что позволяет легко отбирать пробы с берега. Долгосрочное, стабильное культивирование возможно как с естественной, так и с искусственной морскойводой 27,,28,,29. Температурное время генерации в лабораторных условиях превышает 4-9 дней. Он имеет высокую плодовитость с каждой женщиной, способной производить 300 яиц в течение года. Как туникат, он занимает важное филогенетическое положение для понимания хорда эволюции30,31. На 70 Мб, O. dioica имеет самый маленький идентифицированный геном среди всех хордат32. Среди larvaceans, O. dioica является единственным описанным не-гермафродитических видов до сих пор33.
Первый успешный O. dioica культуры с лабораторно выращенных микроводорослей было сообщено Paffenh'fer34. Оригинальный протокол культуры с использованием синхронных двигателей и весла был разработан Fenaux и Gorsky35, а затем принят несколькими лабораториями. Совсем недавно Fujii et al.36 сообщили о том, что компания O. dioica культивирует искусственную морскую воду, надежную систему культуры и полевую коллекцию были описаны Bouquet et al.27, а оптимизированный протокол для упрощенной доступной системы был зарегистрирован Марти-Соланс и др.29. Помимо традиционной системы культуры Oikopleura, недавно сообщили дизайн с двойной трубки воспитания танк также имеет потенциал для культуры Oikopleura sp. 37.
Мы представляем подробный протокол для инициирования монокультуры O. dioica на основе сочетания протоколов, разработанных крупными исследовательскими группами Oikopleura в Международном центре морской молекулярной биологииСарса 27, Университет Барселоны29, Университет Осаки28, и наши собственные наблюдения. В ранее опубликованных протоколах культуры, подробная информация о составе водорослей средств массовой информации, методы отбора проб на берегу, и Oikopleura идентификации были лишь грубо описаны, оставляя много двусмысленности. Здесь, с помощью визуальной информации в видео-протоколе, мы собрали всю важную информацию, необходимую для создания культуры O. dioica с нуля в простой, шаг за шагом образом. Мы описываем, как отличить O. dioica от другого обычно сообщаемого вида, O. longicauda, который является одним из самых сложных шагов. Хотя существующие системы культуры применимы для выращивания O. dioica во всем мире, мы подчеркиваем важность корректировки протокола, основанной на местных экологических условиях. Представленная информация сочетает в себе широко опубликованные данные, а также знания, полученные на основе опыта. Текущий протокол идеально подходит для исследователей, заинтересованных в создании культуры с нуля.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Activated charcoal</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C2764-2.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alluminum pulley</td>
			<td>Rainbow Products</td>
			<td>10604-10607</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B4501-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boric acid</td>
			<td>Wako</td>
			<td>021-02195</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalamin (B12)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>V2876-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalt(II) chloride hexahydrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>036-03682</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper(II) sulfate pentahydrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>039-04412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium edetate hydrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>044-29525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexaammonium heptamolybdate tetrahydrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>019-03212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexagon wrench</td>
			<td>Anex</td>
			<td>No.6600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Wako</td>
			<td>080-01066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron(III) chloride hexahydrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>091-00872</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jebao programmable auto dosing pump</td>
			<td>Jebao</td>
			<td>DP-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnet pump</td>
			<td>REI-SEA</td>
			<td>RMD-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese(II) chloride tetrahydrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>134-15302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene wound cartridge filter</td>
			<td>Advantec</td>
			<td>TCW-10N-PPS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>TCW-5N-PPS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>TCW-1N-PPS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screwless terminal block</td>
			<td>SATO PARTS</td>
			<td>SL4500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Simple plankton net</td>
			<td>RIGO, Japan</td>
			<td>5512-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium metasilicate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>307815-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium nitrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>195-02545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic anhydrous</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>194740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin sulfate salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6501-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synchronous electric motor</td>
			<td>Servo</td>
			<td>D5N6Z15M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiamin hydrochloride</td>
			<td>Wako</td>
			<td>201-00852</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV sterilizer</td>
			<td>Iwaki</td>
			<td>UVF-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinc chloride</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>194858</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

streamlined sampling and cultivation of the pelagic cosmopolitan larvacean, oikopleura dioica

Oikopleura dioica - это планктонный хордат с исключительной способностью к подаче фильтров, быстрым временем генерации, сохранением раннего развития и компактным геномом. По этим причинам он считается полезным модельным организмом для морских экологических исследований, эволюционной биологии развития и геномики. Поскольку исследования часто требуют постоянного снабжения животными ресурсами, полезно создать надежную систему культуры с низким уровнем обслуживания. Здесь мы описываем пошаговый метод создания культуры O. dioica. Мы описываем, как выбрать потенциальные места отбора проб, методы сбора, целевую идентификацию животных и настройку системы культивирования. Мы предоставляем советы по устранению неполадок, основываясь на собственном опыте. Мы также выделяем критические факторы, которые помогают поддерживать надежную систему культуры. Хотя культурный протокол, представленный здесь, оптимизирован для O. dioica,мы надеемся, что наша техника отбора проб и культура установки будет вдохновлять новые идеи для поддержания других хрупких пелагических беспозвоночных.

Watch this Scientific Journal Video about Streamlined Sampling and Cultivation of the Pelagic Cosmopolitan Larvacean, Oikopleura dioica at JoVE.com

Streamlined Sampling and Cultivation of the Pelagic Cosmopolitan Larvacean, Oikopleura dioica

Oikopleura dioica является туникат модель организма в различных областях биологии. Мы описываем методы отбора проб, идентификацию видов, культивирование установки и культивирование протоколов для животных и водорослей корма. Мы выделяем ключевые факторы, которые помогли укрепить систему культуры и обсудить возможные проблемы и резолюции.

Оптимизированная выборка и культивирование пелагической космополитической Ларвасеан, Ойкоплеура диойка

Oikopleura dioica is a planktonic chordate with exceptional filter-feeding ability, rapid generation time, conserved early development, and a compact ...

Этот протокол наглядно демонстрирует, как создать долгосрочную, надежную культурную систему для морской пелагической туники Oikopleura dioica. Система культуры Oikopleura предоставляет базовые ресурсы для изучения широкого спектра биологических областей, связанных с экологией, развитием, геномикой и эволюцией. Этот вид имеет короткий жизненный цикл, высокую плодовитость, и его можно легко собрать с берега, что делает его отличным моделью организма.Хотя этот протокол оптимизирован для O.dioica, мы надеемся, что он может быть применен к другим планктонным организмам. Для начала, инициировать водорослей пищи для поддержания культуры Oikopleura, начиная с автоклавирования фильтрованной морской воды. Для инициирования биржевой культуры Chaetoceros calcitrans, 60 миль автоклавной морской воды было дополнено следующими:30 микролитров витаминов, 30 микролитров раствора А, 15 микролитров силиката натрия и 60 микролитров стрептомицина.Наконец, 30 микролитров C.calcitrans из предыдущей фондовой культуры был добавлен в качестве инокуланта. Обратитесь к таблице 2 в рукописи относительно объемов дополнения и прививки для других видов водорослей и видов культуры. После прививки запасы и субкультуры поддерживаются в инкубаторе при 17 градусах Цельсия с непрерывным освещением.Примерно через 10 дней рост водорослей подтверждается тем, что колбы становятся цветными. Когда это произойдет, переместить фондовых культур в долгосрочное хранение на четыре градуса по Цельсию на срок до одного месяца при сохранении субкультуры в том же инкубаторе. Чтобы создать рабочую культуру, добавьте необходимые добавки к 400 милам автоматической морской воды и прививки с 100 милами предыдущей субкультуры.Запечатайте колбу резиновой крышкой, вставьте одноразовый пипетку на один мил и переместите их на станцию водорослей и поддерживайте их при комнатной температуре с помощью восьмичасового фотопериода и постоянной аэрации. Вручную вихревой водорослей культур два раза в день, чтобы предотвратить агрегацию в нижней части колбы. После того, как водоросли культуры были созданы, собирать образцы поля на местном сайте.Бросьте планктонную сетку и позвольте концу трески опуститься на один-два метра ниже поверхности. Буксировать сеть со скоростью от 5 до 1 метра в секунду. Продолжайте буксировку туда и обратно в течение двух-пяти минут.Время буксировки должно быть скорректировано в соответствии с изобилием планктона на месте. После буксировки осторожно вынравлите сетку и медленно перенесите содержимое трески в 500-мильную стеклянную бутылку. Заполните бутылку на ободе, чтобы избежать пузырьков воздуха, которые могут вызвать стресс для животных во время транспортировки.На этом этапе наличие Oikopleura может быть подтверждено просмотром образцов бутылок на темном фоне. Однако для идентификации видов требуется микроскопическое наблюдение. Повторите этот процесс до тех пор, пока не будут собраны три бутылки на 500 миль.Соберите поверхностную морскую воду для записи солености, температуры и концентрации хлорофилла с помощью профилера CTD. Кроме того, соберите от 10 до 15 литров морской воды на месте, чтобы помочь акклиматизировать животных к лабораторным условиям. Чтобы акклиматизировать животных, подготовьтесь к соотношению поверхностной морской воды с места образца и фильтрованной морской воды, которая поддерживается в лаборатории.Окончательный объем должен быть скорректирован до 5-10 литров, в зависимости от концентрации образца планктона. Аккуратно добавьте 500-мильный образец в подготовленный стакан. Используя весло, прикрепленное к синхронному двигательу, вращающееся при 15 об/мин, держите планктон в подвеске на ночь.На следующее утро проверьте наличие Oikopleura на глаз. Перенесите животных в чашку Петри и наблюдайте под темным полем микроскопа, установленного между увеличением от 20 до 40 раз для положительной идентификации. Oikopleura характеризуются как головастик формы животных волнистые хвосты внутри полупрозрачного дома.Чтобы подтвердить O.dioica, ищите полностью зрелых самцов с желтыми гонадами или самок с яйцами. Если животные незрелые, ищите наличие двух субхордальных клеток в дистальной половине хвоста. Они присутствуют как у зрелых, так и у незрелых животных.Как только вид подтвердится, перенесите их в новое блюдо Петри. Повторите этот процесс до тех пор, пока от 10 до 20 особей не будут подтверждены на уровне видов. Если O.dioica не найдены, держите стакан перемешивания в течение дополнительного дня или двух.Малый O.dioica, которые изначально не наблюдались будет продолжать расти и становится легче увидеть. Если ни один не появится через неделю, отбросьте образец и повторите попытку отбора проб. Для создания монокультуры изолируйте 120 O.dioica из полевого образца в пяти литрах фильтрованной морской воды.На следующее утро ищите полностью зрелых самцов, идентифицированных желтыми гонадами, и самок с яйцами, которые выглядят как мерцающие, золотые сферы. Подготовь нерестовую стакан, аккуратно переведя 15 самцов и 30 самок с пятимильную тупую пипетку в стакан, содержащий 2,5 литра фильтрованной морской воды. Чтобы свести к минимуму физическую нагрузку во время ручной передачи, медленно отпустите животных под поверхность новой морской воды.Разрешить изолированных взрослых нереста естественно. После нереста, успешное оплодотворение может быть подтверждено путем извлечения от пяти до 10 миль морской воды со дна нереста стакана и выявления яиц с расщеплениями под микроскопом. В первое утро после нереста, в первый день, в стакане должно появиться новое поколение молодых животных с надутыми домами.Используйте 500-мильный портативный стакан, чтобы аккуратно перенести животных в новый стакан, содержащий 7,5 литров свежей, фильтрованной морской воды. Медленно вылейте содержимое на поверхность, чтобы свести к минимуму турбулентность и силы стрижки. На второе утро после нереста, второй день, вручную перенесите 150 животных в новый стакан, содержащий пять литров свежей, фильтрованной морской воды.На третье утро после нереста, третий день, вручную перенесите 120 животных в новый стакан с пятью литрами свежей, фильтрованной морской воды. К четвертому дню, сексуально зрелые, взрослые животные должны присутствовать. Соберите 15 самцов и 30 самок для нового нерестового стакана с 2,5 литрами фильтрованной морской воды, чтобы инициировать следующее поколение.Этот процесс повторяется и поддерживается для жизни культуры. Для поддержания монокультуры O.dioica, водоросли пища готовится ежедневно из рабочих культур. На животных кормят три раза в день.Подготовка ежедневной пищи путем измерения абсорбтности рабочей культуры с помощью спектрофотометра, установленная на уровне 660 нанометров. Значения абсорбанса, целевые объемы культуры O.dioica и зрелость животных помещаются в подготовленную таблицу на основе ранее определяемой кривой роста водорослей для расчета точного объема водорослей, необходимых для кормления в течение дня. Pipette рассчитывается объемов в 50-мильных труб, и центрифуга на 5000г в течение пяти минут при комнатной температуре.Медленно слить супернатант, и тщательно пипетки вверх и вниз, чтобы повторно гранулы водорослей. Пополнить трубки до их первоначального объема со свежей, фильтрованной морской водой. Основываясь на ежедневной диаграмме кормления водорослей из электронной таблицы, кормите указанное количество каждому стакану в 9 .m.12 .m и 17.m. Автоматизированный досинг насос может быть установлен, чтобы кормить животных в 5 .m.по выходным без присутствия культового персонала. После каждого кормления, поддерживать подготовленную пищу водорослей на четыре градуса по Цельсию до готовности к использованию для следующего корма. O.dioica может быть собрана из гавани нежным буксировкой модифицированной планктонной сетки, оснащенной 100-микрон-сеткой и нефильтровавным концом трески.Выборка в период с 2015 по 19 год показала сезонные колебания в присутствии O.dioica в гаванях Окинавы. Температура поверхностных морских вод, казалось, влияет на присутствие животных. O.dioica доминировала, когда температура поверхностной морской воды была 28 градусов или выше.O.dioica сосуществовала с Oikopleura longicauda при температуре от 24 до 27 градусов. Тем не менее, O.longicauda доминировали при температурах ниже 23 градусов. Изменения солености не коррелировали с обилием O.dioica.Тремя наиболее важными факторами для создания стабильных систем культуры O.dioica являются поддержание высокого качества воды с помощью многоступенчатой системы фильтрации, определение оптимального режима кормления, предпочтительно путем создания водорослей стандартных кривых, и подготовка нереста стаканов с достаточным количеством мужчин и женщин. В соответствии с предоставленным протоколом жизненный цикл O.dioica составляет четыре дня при 23 градусах. Мы надежно создали шесть независимых популяций O.dioica, все из которых длились более 20 поколений.В заключение, создание стабильной культуры O.dioica может быть сделано быстро и экономически эффективно. При надлежащей настройке, стабильная культура может быть достигнута в течение одной недели. В сочетании с небольшим геномом и быстрым жизненным циклом, это делает O.dioica мощным chordate моделью видов.O.dioica может поддерживаться как в искусственной, так и в естественной морской воде. Долгосрочное хранение водорослей возможно с использованием твердой культуры и криоконсервации. Кроме того, сперма O.dioica также может быть криоконсервирована и оставаться жизнеспособной в течение более года.O.dioica продолжает предоставлять мощные идеи в различных биологических областях. Понимание местной сезонности, тщательная система культуры и несколько преданных своему делу людей позволяют установить эффективную культуру без особых усилий.

Research

JoVE Journal

Environment

Streamlined Sampling and Cultivation of the Pelagic Cosmopolitan Larvacean, Oikopleura dioica

Integrated Field Lysimetry and Porewater Sampling for Evaluation of Chemical Mobility in Soils and Established Vegetation

Интегрированный полевой Lysimetry и поровой воде Отбор проб для оценки химической мобильности в почвах и создания растительности

Potentially toxic chemicals are routinely applied to land to meet growing demands on waste management and food production, but the fate of these chemicals ...

Soil Sampling and Isolation of Entomopathogenic Nematodes (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Soil Sampling and Isolation of Entomopathogenic Nematodes Steinernematidae, Heterorhabditidae

Отбор проб почвы и изоляция энтомопатогенных нематод (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Entomopathogenic nematodes (a.k.a. EPN) represent a group of soil-inhabiting nematodes that parasitize a wide range of insects. These nematodes belong to ...

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

Чистый отбор проб и анализ реки и эстуарии для изучения следов металлов

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

Modification and Application of a Leaf Blower-vac for Field Sampling of Arthropods

Модификация и применение листа Blower-Vac для отбора проб на местах членистоногих

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the ...

Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

Протокол Microplastics Отбор проб на поверхности моря и анализа проб

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of ...

Sampling Soils in a Heterogeneous Research Plot

Отбор проб почвы в гетерогенных исследований участок

Soils are highly heterogeneous. In general, the number of soil samples required for soil research has always been determined arbitrarily and the ...

A New Portable In Vitro Exposure Cassette for Aerosol Sampling

A New Portable In Vitro Exposure Cassette for Aerosol Sampling

Новый портативный в Vitro экспозиции кассета для аэрозольных проб

This protocol introduces a new in vitro exposure system, capable of being worn, including its characterization and performance. Air-liquid interface (ALI) ...

Cultivation of Green Microalgae in Bubble Column Photobioreactors and an Assay for Neutral Lipids

Выращивание зеленых микроводорослей в фотобиореакторах колонки пузыря и Assay для нейтральные липиды

There is significant interest in the study of microalgae for engineering applications such as the production of biofuels, high value products, and for the ...

Cultivation of the Marine Pelagic Tunicate Dolioletta gegenbauri (Uljanin 1884) for Experimental Studies

Cultivation of the Marine Pelagic Tunicate Dolioletta gegenbauri Uljanin 1884 for Experimental Studies

Культивирование морской пелагической туникате Dolioletta gegenbauri (Uljanin 1884) для экспериментальных исследований

Gelatinous zooplanktons play a crucial role in ocean ecosystems. However, it is generally difficult to investigate their physiology, growth, fecundity, ...

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

Выборка для оценки Франклиниелла видов цветок трипсы и Ориус видов хищников в полевых экспериментах

The western flower thrips, Frankliniella occidentalis (Pergande), is a polyphagous pest that has been spread worldwide. The extensive use of insecticides ...