Name: streamlined sampling and cultivation of the pelagic cosmopolitan larvacean, oikopleura dioica
Uploaded: 2020-06-16T15:00:00
Duration: 11 min 55 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Streamlined Sampling and Cultivation of the Pelagic Cosmopolitan Larvacean, Oikopleura dioica at JoVE.com

Garth Ilsley'e kültür sisteminin kurulmasına verdiği destek ten dolayı minnettarız. Ritsuko Suyama ve Sylvain Guillot'un erken örnekleme ve türlerin tanımlanması çabalarına katkılarını kabul ediyoruz. Özel teşekkür Hiroki Nishida, Takeshi Onuma ve Tatsuya Omotezako onların cömert destek ve rehberlik boyunca, yerel kültür sisteminin ilk kurulması ve hayvan ve mikroalgal kültürünün paylaşımı da dahil olmak üzere kaynaklanmaktadır. Ayrıca Daniel Chourrout, Jean-Marie Bouquet, Anne Aasjord, Cristian Cañestro ve Alfonso Ferrández-Roldán'a örnekleme ve kültür çıkarma konusundaki uzmanlıklarını paylaştıkları için teşekkür ederiz. Jai Denton, Charles Plessy ve Jeffrey Jolly el yazması hakkında paha biçilmez geribildirim sağladı. Charlotte West alg hesaplaması için genelleştirilmiş bir denklem formüle etti. Son olarak, finansman için OIST teşekkür, Mary Collins ve Güvenli örnekleme prosedürleri tavsiye için OIST Fieldwork Güvenlik Komitesi, kültür ve örnekleme ekipmanları inşaatı için OIST makine mağazası personeli ve deniz suyu teslim için Koichi Toda.

Yazarın beyan edecek bir şeyi yok.

O. dioica kültürünün kurulmasında esnekliği kolaylaştırmak için hayvanların doğal yaşam alanlarını anlamak önemlidir. Mevsimsel veriler, laboratuvar culturing koşullarına rehberlik etmek için kullanılabilecek fiziksel parametrelerin aralıkları hakkında bilgi sağlar. Aynı zamanda hayvan bolluğu mevsimsel dalgalanmalar anlamada yardımcı olur. Okinawa'da, O. dioica en güvenilir Haziran-Ekim arasında bulunur. Ancak, Tokyo koyunda, nüfus Şubat ve Ekim41'dezirve . O. dioica'nın kültüretür genellikle 20 °C veya daha düşük27,28,29, Okinawan O. dioica 20 °C'nin üzerindeki sıcaklıklarda daha iyi sağkalım gösterir; Bu durum Okinawa'daki minimum yüzey deniz suyu sıcaklığının ~20 °C(Şekil 6)olmasıyla açıklanabilir. O. dioica bolluğu da fitoplankton çiçek42 ve yırtıcı bolluk43,,44etkilenmiş olabilir. O. dioica'nın nerede toplandığına bakılmaksızın, yerel popülasyonların mevsimselliğini anlamak örnekleme ve başarı yıkma şansını en üst düzeye çıkarır.
Uygun sezon ve konum göz önüne alındığında, net örnekleme en az çaba ile Oikopleura çok sayıda toplama etkili bir yoludur. Hayvanların tüm aşamalarını toplamak için daha küçük ağ boyutuna (60-70 μm) sahip plankton ağları da kullanılabilir. Tamamen olgun hayvanlar nadiren net bulunur, belki de yaşam döngüsünün sonunda kırılganlık nedeniyle. Bu nedenle, örnekleme ile takip edilen türlerin tanımlanması subkord hücrelerinin mikroskobik gözlemi ile elde edilir. Hayvanlar laboratuvarda büyümeye devam ettikçe olgun bireyler genellikle örnekleme sonrası bir veya iki gün görünürler. Net örnekleme verimli olmasına rağmen, farklı durumlarda alternatif örnekleme yöntemleri gerekebilir. Örneğin, kentsel alanlarda yakın net örnekleme fitoplankton çok sayıda toplayabilir, zor Oikopleuraizole etmek için yapım . Bu gibi durumlarda, liman dışındaki alanlardan yüzey deniz suyu veya tekne örneklemetoplamak için basit kova örneklemesi önerilir. Sonuçlar, yağmur ardışık gün nedeniyle tuzluluk kademeli değişim O. dioicabolluğu etkilemediğini gösterdi ; ancak tropikal siklonlar gibi aşırı hava olaylarından hemen sonra kıyı örneklemesi önlenmelidir. Bu olaylar su korunaklı bir vücutta ani ve şiddetli biyojeokimyasal değişikliklere neden45,46. Yağmur suyu akıntısı kirleticiler, tortular ve bulanıklık ve düşük su kalitesini artırmak aşırı besin taşıyabilir47. Filtre besleme planktonları, Oikopleuragibi , özellikle beslenme ve sınırlı hareketlilik onların modu nedeniyle bu değişikliklere duyarlı olabilir. Böyle bir durumda, yerel koşullar normale dönene kadar örneklemenin birkaç gün ertelenmesini öneririz.
O. dioicagibi küçük, filtre beslemeli organizmaları korumak için çok aşamalı bir filtre sisteminin devreye girmesi esastır. Kötü filtrelenmiş deniz suyu (örneğin, önceki kültür sisteminde 25 μm örgü) kullanarak, kültür genellikle özellikle yaz aylarında kararsız, potansiyel fitoplankton yüksek bolluk nedeniyle. Bazı fitoplanktonlar O. dioica büyüme için yararlı olmasına rağmen, diğerleri O. dioica embriyoların anormal gelişimine neden olabilir biyotoksinler üretmek48. Buna ek olarak, Chaetoceros spp. gibi diatomların yüksek konsantrasyonda onlar ev tıkanmak ve verimli besleme önlemek uzun setae sahip olabilir gibi O. dioica büyüme için potansiyel olarakzararlıdır 49. C. calcitrans setae tarafından tıkanmış küçük hayvanların evlerini sık sık gözlemledik; bu nedenle, şimdi C. calcitrans sadece Gün 2 ve daha büyük hayvanlara beslemek (Tablo 3).
Burada bir sorun olmamasına rağmen, O. dioica küçük ölçekli uzun vadeli culturing genetik bir darboğaz nedeniyle nüfus boyutunda ani düşüşler yaşayabilir; bu gibi durumlarda, Martí-Solans ve ark.29 kültüre her 20 nesilde bir yeni vahşi bireyler eklemeyi önerir.
Oikopleura kültür sistemi esnektir. Bir hafta içinde istikrarlı bir kültür kurulabilir. O. dioica uzun vadeli culturing olmayan uzman ekipman ile mütevazı bir bütçe ile mümkündür. Oikopleura 5-10 beaers bakımı için gerekli günlük çaba genellikle 2 kişi ile 2 saatten azdır. O. dioica da doğal deniz suyuna erişimi olmayanlar için yararlı yapay deniz suyu,28muhafaza edilebilir. Alg gıdauzun uzun süreli depolanması katı kültür ve kriyopreservation29kullanılarak mümkündür. Ayrıca, O. dioica sperm kriyoopreserved olabilir, ve bir yıldan fazla canlı kalır50. Tüm bu faktörler kültürlerin kolayca yeniden kurulabileceği anlamına gelir. Son olarak, Pleurobrachia spkazara culturing ile geçmiş deneyim . Oikopleura için geliştirilen kültür sisteminin potansiyel olarak daha geniş bir kırılgan pelajik organizma topluluğuna genişletilebileceği düşündürebilir.
O. dioica çeşitli biyolojik alanlarda güçlü anlayışlar sağlamaya devam etmektedir. Yerel mevsimsellik anlayışı, titiz bir kültür sistemi ve birkaç adanmış bireyler, az çabayla etkili bir kültürün kurulmasına olanak sağlar. Oikopleura kültür sistemi, ekoloji, geliştirme, genomik ve bu eşsiz deniz kordatevrimi ile ilgili çok çeşitli biyolojik alanları araştırmak için temel kaynaklar sağlar.

Model organizmalar, gelişim, genetik ve fizyoloji ile ilgili olanlar da dahil olmak üzere birçok biyolojik sorunun ele alınmasında etkili olmuştur. Ayrıca, ek model organizmalar yeni keşifler kolaylaştırmak ve bu nedenle doğanın daha büyük bir anlayış elde etmek için çok önemlidir1,2. Deniz zooplankton okyanus ekosistemleriönemlibir rol oynayan organizmaların çeşitli gruplar 3,4,5,6. Onların bolluk ve ekolojik önemine rağmen, planktonik tunicates gibi jelatinimsi organizmalar genellikle altında plankton biyolojik çeşitlilik çalışmalarında temsil edilmektedir çünkü şeffaflık ve kırılganlık alan toplama ve kimlik meydan yapmak7,8. Adapte örnekleme teknikleri ve laboratuvar culturing planktonik tunicates9,10,11,12biyoloji bilgi ilerletmiştir in vitro, hayvanların daha yakından gözlem sağlar.
Larvaceans (Apendicularians) dünya çapında yaklaşık 70 tanımlanan türler 8 oluşan serbest yüzme deniz tunicates bir sınıftır8,13. Onlar zooplankton topluluklar içinde en bol gruplardan biri olduğu gibi14,15,16,17, larvaceans balık larvaları gibi büyük planktonik organizmalar için birincil besin kaynağı temsil18,19. Ascidians aksine-sessile tunicates-larvaceans bir kurbağa yavrusu gibi morfoloji korumak ve yaşamları boyunca planktonik kalır20. Her hayvan, ev olarak bilinen kendi kendini inşa edilmiş, karmaşık bir filtre besleme yapısı içinde yaşar. Kuyruklarının dalgalı hareketi ile su akıntıları oluşturarak evlerinde partiküller birikirler21. Tıkanmış evler gün boyunca atılır, bazıları karbon agregaları oluşturur ve sonunda deniz tabanına22lavabo; böylece, larvaceans küresel karbon akısı önemli bir rol oynamaktadır23. Çoğu türün13no'lsu su sütununun üst 100 m'si içinde pelajik bölgede yaşadığı bildirilir; ancak, dev larvacean Bathochordaeus 300 m24derinliklerinde yaşadığı bilinmektedir. Monterey Bay Bathochordaeus bir çalışma, Kaliforniya hayvanların da mikroplastik biyolojik bir vektör olarak hizmet ortaya, okyanuslarda mikroplastikdikey taşıma ve dağılımında apandisisitlerin rolünü anlamada potansiyel bir önem düşündüren25.
Oikopleura dioica, larvacean bir tür, birkaç dikkat çekici özellikleri nedeniyle bir model organizma olarak son yıllarda dikkat çekti. Genellikle dünya okyanuslarında rapor edilir. Özellikle kıyı sularında bol miktarda bulunur26, kıyıdan kolay örnekleme sağlar. Uzun süreli, stabil kültür hem doğal hem de yapay deniz suyu27,,28,29ile mümkündür. Sıcaklık bağımlı üretim süreleri laboratuvar koşullarında 4-9 gün kadar kısadır. Yıl boyunca >300 yumurta üretebilen her dişi ile yüksek bir fecundity vardır. Bir tunicate olarak, kordevrim30,31anlamak için önemli bir filogenetik konuma sahiptir. 70 Mb'de, O. dioica tüm kordates32arasında en küçük tanımlanmış genoma sahiptir. Larvaceans arasında, O. dioica şimdiye kadar açıklanan tek non-hermafrodit türler33.
Laboratuvar yetiştirilen mikroalg ile ilk başarılı O. dioica kültürü Paffenhöfer34tarafından bildirilmiştir . Senkron motorlar ve kürekler kullanılarak orijinal kültür protokolü Fenaux ve Gorsky35 tarafından geliştirilmiş ve daha sonra birden fazla laboratuvar tarafından kabul edilmiştir. Daha yakın zamanda, Fujii ve ark36 yapay deniz suyunda O. dioica culturing bildirdi, sağlam bir kültür sistemi ve alan koleksiyonu Buket ve ark.27 tarafından tarif edildi ve basitleştirilmiş için optimize edilmiş bir protokol, uygun fiyatlı sistem Marti-Solans ve ark.29tarafından bildirilmiştir . Kenara geleneksel Oikopleura kültür sistemi, bir çift tüp yetiştirme tankı ile yeni bildirilen tasarım da kültür Oikopleura sp potansiyeline sahiptir. 37'ye kadar.
Biz Sars Uluslararası Deniz Moleküler Biyoloji Merkezi27büyük Oikopleura araştırma grupları tarafından geliştirilen protokollerin bir arada dayalı bir O. dioica monokültür başlatmak için ayrıntılı bir protokol salıyoruz , Barselona Üniversitesi29, Osaka Üniversitesi28, ve kendi gözlemler. Daha önce yayınlanmış kültür protokollerinde, alg medyasının bileşimi, kıyı örnekleme teknikleri ve Oikopleura tanımlaması ile ilgili ayrıntılı bilgiler kabaca açıklanmış ve bu da çok fazla belirsizlik bırakarak tanımlanmıştır. Burada, video protokolündeki görsel bilgilerin yardımıyla, bir O. dioica kültürünü sıfırdan kurmak için gereken tüm kritik bilgileri adım adım basit bir şekilde bir araya getirdik. Biz nasıl başka bir yaygın olarak bildirilen türler, O. longicauda,en zorlu adımlardan biridir O. dioica ayırt etmek için açıklar. Mevcut kültür sistemleri dünya çapında O. dioica ekimi için geçerli olmasına rağmen, yerel çevre koşullarına dayalı protokol ayarlamasının önemini vurguluyoruz. Sunulan bilgiler, yaygın olarak yayınlanan verilerin yanı sıra deneyimle kazanılan bilgileri de birleştirir. Mevcut protokol, sıfırdan bir kültür oluşturmak isteyen araştırmacılar için idealdir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Activated charcoal</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C2764-2.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alluminum pulley</td>
			<td>Rainbow Products</td>
			<td>10604-10607</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B4501-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boric acid</td>
			<td>Wako</td>
			<td>021-02195</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalamin (B12)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>V2876-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalt(II) chloride hexahydrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>036-03682</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper(II) sulfate pentahydrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>039-04412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium edetate hydrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>044-29525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexaammonium heptamolybdate tetrahydrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>019-03212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexagon wrench</td>
			<td>Anex</td>
			<td>No.6600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Wako</td>
			<td>080-01066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron(III) chloride hexahydrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>091-00872</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jebao programmable auto dosing pump</td>
			<td>Jebao</td>
			<td>DP-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnet pump</td>
			<td>REI-SEA</td>
			<td>RMD-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese(II) chloride tetrahydrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>134-15302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene wound cartridge filter</td>
			<td>Advantec</td>
			<td>TCW-10N-PPS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>TCW-5N-PPS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>TCW-1N-PPS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screwless terminal block</td>
			<td>SATO PARTS</td>
			<td>SL4500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Simple plankton net</td>
			<td>RIGO, Japan</td>
			<td>5512-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium metasilicate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>307815-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium nitrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>195-02545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic anhydrous</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>194740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin sulfate salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6501-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synchronous electric motor</td>
			<td>Servo</td>
			<td>D5N6Z15M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiamin hydrochloride</td>
			<td>Wako</td>
			<td>201-00852</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV sterilizer</td>
			<td>Iwaki</td>
			<td>UVF-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinc chloride</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>194858</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

streamlined sampling and cultivation of the pelagic cosmopolitan larvacean, oikopleura dioica

Oikopleura dioica olağanüstü filtre besleme yeteneği, hızlı üretim süresi, korunmuş erken gelişim ve kompakt genom ile bir planktonik akorat olduğunu. Bu nedenlerden dolayı, deniz ekolojik çalışmaları, evrimsel gelişimbiyolojisi ve genomik için yararlı bir model organizma olarak kabul edilir. Araştırma genellikle hayvan kaynaklarının sürekli bir kaynağı gerektirir gibi, güvenilir, düşük bakım kültür sistemi kurmak için yararlıdır. Burada bir O. dioica kültürü oluşturmak için adım adım yöntemi açıklar. Potansiyel örnekleme alanlarının nasıl seçiliş yöntemini, toplama yöntemlerini, hedef hayvan tanımlamasını ve kültür sisteminin kurulumlarını açıklarız. Kendi deneyimlerimize dayalı olarak sorun giderme önerileri sayılmaktayız. Ayrıca, sağlam bir kültür sisteminin sürdürülmesine yardımcı olan kritik faktörleri de vurguluyoruz. Burada sağlanan kültür protokolü O. dioicaiçin optimize edilmiş olsa da, örnekleme tekniğimizin ve kültür kurulumuzun diğer kırılgan pelajik omurgasızları korumak için yeni fikirlere ilham vermesini umuyoruz.

Watch this Scientific Journal Video about Streamlined Sampling and Cultivation of the Pelagic Cosmopolitan Larvacean, Oikopleura dioica at JoVE.com

Streamlined Sampling and Cultivation of the Pelagic Cosmopolitan Larvacean, Oikopleura dioica

Oikopleura dioica biyolojinin çeşitli alanlarında bir tunicate model organizmadır. Biz örnekleme yöntemleri, türlerin belirlenmesi, kültür kurulum ve hayvanlar ve alg yem için culturing protokolleri açıklar. Kültür sisteminin güçlendirilmesine yardımcı olan temel faktörleri vurguluyor ve olası sorunları ve çözümleri tartışıyoruz.

Pelagic Cosmopolitan Larvacean, Oikopleura dioica'nın Kolay Örnekleme silikve ekimi

Oikopleura dioica is a planktonic chordate with exceptional filter-feeding ability, rapid generation time, conserved early development, and a compact ...

Bu protokol, deniz pelajik tunicate Oikopleura dioica için uzun vadeli, güvenilir bir kültür sisteminin nasıl kurulabildiğini görsel olarak göstermektedir. Oikopleura kültür sistemi, ekoloji, gelişim, genomik ve evrimle ilgili çok çeşitli biyolojik alanları araştırmak için temel kaynaklar sağlar. Bu türün kısa bir yaşam döngüsü, yüksek fecundity vardır, ve kolayca kıyıdan toplanabilir, mükemmel bir model organizma yapma.Bu protokol O.dioica için optimize edilmiş olsa da, diğer planktonik organizmalara uygulanabileceğini umuyoruz. Başlamak için, filtrelenmiş deniz suyu otoklavlama ile başlayan, Oikopleura kültürünü sürdürmek için alg gıda başlatmak. Chaetoceros calcitrans bir stok kültürü başlatmak için, otoklav deniz suyu 60 mils aşağıdaki ile takviye edildi:30 vitamin mikrolitre, çözelti A 30 mikrolitre, sodyum silikat 15 mikrolitre, ve streptomisin 60 mikrolitre.Son olarak, bir önceki stok kültüründen 30 mikrolitre C.calcitrans bir inoculant olarak eklenmiştir. Diğer alg türleri ve kültür türleri için ek ve aşılama hacimleri ile ilgili el yazmasında tablo ikiye bakın. Aşılamadan sonra, stok ve alt kültürler sürekli aydınlatma ile 17 santigrat derecede bir kuluçka korunur.Yaklaşık 10 gün sonra, alg büyüme şişeleri renkli olma tarafından doğrulanır. Bu durumda, aynı kuluçka makinesinde alt kültür korurken bir aya kadar dört santigrat derece stok kültürleri uzun vadeli depolama için taşıyın. Bir çalışma kültürü oluşturmak için, otoklavlı deniz suyu 400 mils gerekli takviyeleri ekleyin ve önceki alt kültür 100 mils ile aşılamak.Şişeyi kauçuk bir kapakla kapatın, bir milimetrelik tek kullanımlık pipet takın ve onları bir yosun istasyonuna taşıyın ve sekiz saatlik fotoperiod ve sabit havalandırma ile oda sıcaklığında muhafaza edin. Şişenin alt kısmında toplanmayı önlemek için günde iki kez el ile alg kültürleri girdap. Alg kültürleri kurulduktan sonra, yerel bir sitede alan örnekleri toplayın.Bir plankton ağı atın ve morina ucunun yüzeyin bir ila iki metre altına batmasını bekleyin. Ağı saniyede yaklaşık 5 ila bir metre hızla çekin. İki ila beş dakika boyunca ileri geri çekme devam edin.Çekme süresi yerinde plankton bolluğuna göre ayarlanmalıdır. Çekme sonra, dikkatle net kaldırın ve yavaş yavaş 500-mil, cam şişe morina ucu içeriğini aktarın. Taşıma sırasında hayvanlariçin strese neden olabilir hava kabarcıkları önlemek için kenarına şişe doldurun.Bu aşamada, Oikopleura varlığı karanlık bir arka plan karşı örnek şişeler görüntüleyerek teyit edilebilir. Ancak, tür düzeyinde tanımlama için mikroskobik gözlem gereklidir. Üç 500 mil lik şişe toplanana kadar bu işlemi tekrarlayın.Bir CTD profilleyicisi ile tuzluluk, sıcaklık ve klorofil konsantrasyonu kaydetmek için yüzey deniz suyu toplayın. Ayrıca, laboratuvar koşullarına hayvanların uyum yardımcı olmak için yerinde deniz suyu 10 ila 15 litre toplamak. Hayvanları uyumsağlamak için, numune alanından yüzey deniz suyunun bire bir oranını ve laboratuvarda tutulan filtrelenmiş deniz suyunu hazırlayın.Son hacim plankton numunesinin konsantrasyonuna bağlı olarak 5 ila 10 litre arasında ayarlanmalıdır. 500 millik numuneyi hazırlanan kabın üzerine dikkatlice ekleyin. 15 RPM'de dönen senkron bir motora bağlı bir kürek kullanarak planktonu bir gecede süspansiyonda tutun.Ertesi sabah, göz Oikopleura varlığını kontrol edin. Hayvanları petri kabına aktarın ve pozitif bir tanımlama için büyütme 20 ila 40 kez arasında ayarlanmış karanlık alan mikroskobu altında gözlemleyin. Oikopleura yarı saydam bir evin içinde kuyruklarını dalgalandıran kurbağa yavrusu şeklinde hayvanlar olarak karakterize edilir.O.dioica onaylamak için, sarı gonadlar veya yumurta ile kadın ile tam olgun erkek arayın. Hayvanlar olgunlaşmamışsa, kuyruğun distal yarısında iki subkorneal hücrenin varlığını arayın. Bunlar hem olgun hem de olgunlaşmamış hayvanlarda bulunur.Türler onaylandıktan sonra, onları yeni bir Petri kabına aktarın. Bu işlemi 10-20 kişi tür düzeyinde onaylanana kadar tekrarlayın. Hiçbir O.dioica bulunursa, bir ya da iki gün daha karıştırarak beher tutun.Başlangıçta gözlemlenebilen küçük O.dioica büyümeye ve daha kolay görmeye devam edecektir. Bir hafta sonra hiçbiri görünmüyorsa, örneği atın ve yeniden örneklemeyi deneyin. Bir monokültür kurmak için, filtrelenmiş deniz suyu beş litre bir alan örneğinden 120 O.dioica izole.Ertesi sabah, sarı gonadlar tarafından tanımlanan tam olgun erkekler ve parıldayan, altın küreler olarak görünen yumurta ile dişiler için arayın. 15 erkek ve 30 dişinin beş milimetrelik, künt uçlu pipetini 2,5 litre filtrelenmiş deniz suyu içeren bir kabına hafifçe aktararak bir yumurtlama kabı hazırlayın. Manuel transfer sırasında fiziksel stresi en aza indirmek için, yavaş yavaş yeni deniz suyu yüzeyinin altında hayvanları bırakın.İzole edilmiş yetişkinlerin doğal olarak yumurtlamasını bekleyin. Yumurtlamadan sonra, yumurtlama kabının altından 5 ila 10 mil deniz suyu çıkarılarak ve mikroskop altında dekolteli yumurtalar tespit edilerek başarılı bir döllenme teyit edilebilir. Yumurtlamadan sonraki ilk sabah, ilk gün, şişirilmiş evleri olan yeni nesil genç hayvanlar kabın içinde görünmelidir.Hayvanları 7,5 litre taze, filtrelenmiş deniz suyu içeren yeni bir kabına nazikçe aktarmak için 500 millik, el malı bir kabı kullanın. Türbülans ve kesme kuvvetlerini en aza indirmek için içeriği yavaşça yüzeye dökün. Yumurtlamadan sonraki ikinci sabah, ikinci gün, 150 hayvanı beş litre taze, filtrelenmiş deniz suyu içeren yeni bir kabına elle aktarın.Üçüncü sabah yumurtlama sonrası, üçüncü gün, elle taze, filtredeniz suyu beş litre ile yeni bir beher için 120 hayvan aktarın. Dördüncü gün, cinsel olgun, yetişkin hayvanlar mevcut olmalıdır. Yeni nesil başlatmak için filtre deniz suyu 2,5 litre ile yeni bir yumurtlama kabı için 15 erkek ve 30 kadın toplamak.Bu süreç kültür hayatı boyunca tekrarlanır ve sürdürülmektedir. O.dioica monokültürkorumak için, alg gıda çalışma kültürleri her gün hazırlanır. Hayvanlar günde üç kez beslenirler.660 nanometrelik bir spektrofotometre seti kullanarak çalışma kültürünün emiciliğini ölçerek günlük gıdaları hazırlayın. Emicilik değerleri, hedef O.dioica kültür hacimleri ve hayvan olgunluğu, günün beslenmesi için gerekli olan yosun hacmini hesaplamak için önceden belirlenmiş bir alg büyüme eğrisine dayalı hazırlanmış bir elektronik tabloya yerleştirilir. Pipet 50-mil tüpler halinde hesaplanan hacimleri ve oda sıcaklığında beş dakika için 5, 000g santrifüj.Yavaş yavaş supernatant dökün ve dikkatle yukarı ve aşağı peletli yosun yeniden askıya almak için pipet. Tüpleri orijinal hacimlerine taze, filtrelenmiş deniz suyuyla doldurun. Elektronik tablodaki günlük alg besleme grafiğine göre, belirtilen miktarı her bir kabı9 a.m ile besleyin.12 p.m. ve 5 .m. Otomatik bir dozaj pompası 5 p.m hayvanları beslemek için ayarlanabilir.hafta sonları culturing personel varlığı olmadan. Her beslemeden sonra, bir sonraki yem için kullanılmak üzere hazır olana kadar dört santigrat derece hazır hazırlanan alg gıda korumak. O.dioica 100 mikron örgü ve filtre olmayan morina ucu ile donatılmış değiştirilmiş bir plankton net nazik çekme tarafından bir limandan toplanabilir.2015 ve 19 yılları arasında örnekleme Okinawa limanlarında O.dioica varlığında mevsimsel varyasyon gösterdi. Yüzey deniz suyu sıcaklığı hayvanların varlığını etkilemek gibi görünüyordu. Yüzey deniz suyu sıcaklığı 28 derece veya daha yüksek olduğunda O.dioica hakimdi.O.dioica 24 ila 27 derece arasındaki sıcaklıklarda Oikopleura longicauda ile birlikte vardı. Ancak, O.longicauda 23 derecenin altındaki sıcaklıklarda hakimoldu. Tuzluluk değişiklikleri O.dioica bolluğu ile ilişkili değildi.Kararlı O.dioica kültür sistemleri kurmak için en önemli üç faktör çok adımlı filtrasyon sistemi ile yüksek su kalitesini korumak, optimum besleme rejimi belirlenmesi, tercihen alg standart eğrileri oluşturarak, ve erkek ve kadın yeterli sayıda yumurtlama bearesi hazırlanması. Sağlanan protokolütaki o.dioica'nın yaşam döngüsü 23 derecede dört gündür. O.dioica'nın altı bağımsız nüfusunu güvenilir bir şekilde oluşturduk ve bunların hepsi 20 nesilden fazla sürdü.Sonuç olarak, O.dioica istikrarlı bir kültür kurulması hızlı ve maliyet-etkin yapılabilir. Uygun bir kurulum ile, istikrarlı bir kültür bir hafta içinde elde edilebilir. Küçük genomu ve hızlı yaşam döngüsü ile birlikte, bu O.dioica güçlü bir kordat modeli tür yapar.O.dioica hem yapay hem de doğal deniz suyunda muhafaza edilebilir. Alg gıdauzun uzun süreli depolanması katı kültür ve kriyopreservation kullanılarak mümkündür. Buna ek olarak, O.dioica sperm de kriyoopreserved olabilir ve bir yıldan fazla canlı kalır.O.dioica çeşitli biyolojik alanlarda güçlü anlayışlar sağlamaya devam etmektedir. Yerel mevsimsellik anlayışı, titiz bir kültür sistemi ve birkaç adanmış bireyler, az çabayla etkili bir kültürün kurulmasına olanak sağlar.

Research

JoVE Journal

Environment

Streamlined Sampling and Cultivation of the Pelagic Cosmopolitan Larvacean, Oikopleura dioica

Integrated Field Lysimetry and Porewater Sampling for Evaluation of Chemical Mobility in Soils and Established Vegetation

Entegre Saha Lysimetry ve gözenek suyu Örnekleme Topraklarda Kimyasal Hareketlilik Değerlendirilmesi ve kurulan Bitki Örtüsü

Potentially toxic chemicals are routinely applied to land to meet growing demands on waste management and food production, but the fate of these chemicals ...

Soil Sampling and Isolation of Entomopathogenic Nematodes (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Soil Sampling and Isolation of Entomopathogenic Nematodes Steinernematidae, Heterorhabditidae

Toprak Örnekleme ve Entomopatojenik Nematodlar İzolasyonu (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Entomopathogenic nematodes (a.k.a. EPN) represent a group of soil-inhabiting nematodes that parasitize a wide range of insects. These nematodes belong to ...

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

Temiz Örnekleme ve Eser Metal Çalışmaları Nehri ve haliç Waters Analizi

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

Modification and Application of a Leaf Blower-vac for Field Sampling of Arthropods

Modifikasyon ve Arthropodların Saha Örnekleme için bir Yaprak Blower-vac Uygulama

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the ...

Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

Deniz Yüzey ve Numune Analizi Microplastics Örnekleme Protokolü

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of ...

Sampling Soils in a Heterogeneous Research Plot

Türdeş olmayan bir araştırma topraklarda örnekleme Arsa

Soils are highly heterogeneous. In general, the number of soil samples required for soil research has always been determined arbitrarily and the ...

A New Portable In Vitro Exposure Cassette for Aerosol Sampling

A New Portable In Vitro Exposure Cassette for Aerosol Sampling

Aerosol örnekleme için yeni bir taşınabilir Vitro pozlama kaset

This protocol introduces a new in vitro exposure system, capable of being worn, including its characterization and performance. Air-liquid interface (ALI) ...

Cultivation of Green Microalgae in Bubble Column Photobioreactors and an Assay for Neutral Lipids

Kabarcık sütun Photobioreactors ve bir tahlil yeşil mikroalg ekimi için nötr lipitler

There is significant interest in the study of microalgae for engineering applications such as the production of biofuels, high value products, and for the ...

Cultivation of the Marine Pelagic Tunicate Dolioletta gegenbauri (Uljanin 1884) for Experimental Studies

Cultivation of the Marine Pelagic Tunicate Dolioletta gegenbauri Uljanin 1884 for Experimental Studies

Deneysel Çalışmalar için Deniz Pelajik Tunicate Dolioletta gegenbauri (Uljanin 1884) Yetiştiriciliği

Gelatinous zooplanktons play a crucial role in ocean ecosystems. However, it is generally difficult to investigate their physiology, growth, fecundity, ...

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

Frankliniella türlerinin tahmin edilmesi Için örnekleme alan deneylerinde çiçek Thrips ve Orius türleri predatör

The western flower thrips, Frankliniella occidentalis (Pergande), is a polyphagous pest that has been spread worldwide. The extensive use of insecticides ...