Name: culturing rat sympathetic neurons from embryonic superior cervical ganglia for morphological and proteomic analysis
Uploaded: 2020-09-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Culturing Rat Sympathetic Neurons from Embryonic Superior Cervical Ganglia for Morphological and Proteomic Analysis at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل من قبل صندوق تطوير الكلية وبرنامج البحوث الصيفية منحة في كلية سانت ماري في كاليفورنيا. كما يود المؤلفان أن يشكرا الدكتورة باميلا لين في جامعة كاليفورنيا في ديفيس والدكتور أنتوني ايافارون في مرفق قياس الطيف الشامل في جامعة كاليفورنيا بيركلي على نصائحهم أثناء تطوير هذه البروتوكولات. كما يود المؤلفان أن يشكرا هالي نيلسون في مكتب الاتصالات الجامعية في كلية سانت ماري في كاليفورنيا على مساعدتها في إنتاج الفيديو وتحريره.

وقد وافقت اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها في كلية سانت ماري في كاليفورنيا على جميع الإجراءات التي أجريت في الدراسات التي تشمل الحيوانات. وقد وضعت المبادئ التوجيهية لرعاية الحيوانات واستخدامها في كلية سانت ماري استنادا إلى المبادئ التوجيهية التي قدمها مكتب رعاية الحيوان الم...

<ol>
	<li>Rees, R. P., Bunge, M. B., Bunge, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+Changes+in+the+neuritic+growth+cone+and+target+neuron+during+synaptic+junction+development+in+culture.">Morphological Changes in the neuritic growth cone and target neuron during synaptic junction development in culture.</a> Journal of Cell Biology. 9, (1976).</li><li>Chandrasekaran, V., Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Dendritogenesis+in+Sympathetic+Neurons.">Regulation of Dendritogenesis in Sympathetic Neurons.</a> Autonomic Nervous System. , (2018).</li><li>Higgins, D., Burack, M., Lein, P., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+neuronal+polarity.">Mechanisms of neuronal polarity.</a> Current Opinion in Neurobiology. 7 (5), 599-604 (1997).</li><li>Lein, P., Guo, X., Hedges, A. M., Rueger, D., Johnson, M., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+Extracellular+Matrix+And+Osteogenic+Protein-1+on+the+morphological+differentiation+of+rat+sympathetic+neurons.">The effects of Extracellular Matrix And Osteogenic Protein-1 on the morphological differentiation of rat sympathetic neurons.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 14 (3), 203-215 (1996).</li><li>Kobayashi, M., Fujii, M., Kurihara, K., Matsuoka, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+morphogenetic+protein-2+and+retinoic+acid+induce+neurotrophin-3+responsiveness+in+developing+rat+sympathetic+neurons.">Bone morphogenetic protein-2 and retinoic acid induce neurotrophin-3 responsiveness in developing rat sympathetic neurons.</a> Molecular Brain Research. 53 (1-2), 206-217 (1998).</li><li>Burnham, P., Louis, J. C., Magal, E., Varon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+ciliary+neurotrophic+factor+on+the+survival+and+response+to+nerve+growth+factor+of+cultured+rat+sympathetic+neurons.">Effects of ciliary neurotrophic factor on the survival and response to nerve growth factor of cultured rat sympathetic neurons.</a> Developmental Biology. 161 (1), 96-106 (1994).</li><li>Hou, X. E., Li, J. Y., Dahlstr&#246;m, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clathrin+light+chain+and+synaptotagmin+I+in+rat+sympathetic+neurons.">Clathrin light chain and synaptotagmin I in rat sympathetic neurons.</a> Journal of the Autonomic Nervous System. 62 (1-2), 13-26 (1997).</li><li>Harris, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+Guidance+by+a+Decellularized+Fibroblast+Extracellular+Matrix.">Nerve Guidance by a Decellularized Fibroblast Extracellular Matrix.</a> Matrix Biology. , 176-189 (2017).</li><li>Wingerd, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;4+integrins+and+vascular+cell+adhesion+molecule-1+play+a+role+in+sympathetic+innervation+of+the+heart.">&#945;4 integrins and vascular cell adhesion molecule-1 play a role in sympathetic innervation of the heart.</a> Journal of Neuroscience. 22 (24), 10772-10780 (2002).</li><li>Higgins, D., Lein, P., Osterhout, D. J., Johnson, M., Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+culture+of+autonomic+neurons.">Tissue culture of autonomic neurons.</a> Culturing Nerve Cells. , 177-205 (1991).</li><li>Lein, P., Johnson, M., Guo, X., Rueger, D., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+protein-1+induces+dendritic+growth+in+rat+sympathetic+neurons.">Osteogenic protein-1 induces dendritic growth in rat sympathetic neurons.</a> Neuron. 15 (3), 597-605 (1995).</li><li>Bruckenstein, D. A., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+differentiation+of+embryonic+rat+sympathetic+neurons+in+tissue+culture.">Morphological differentiation of embryonic rat sympathetic neurons in tissue culture.</a> Developmental Biology. 128 (2), 337-348 (1988).</li><li>Voyvodic, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+regulation+of+dendrites+in+the+rat+superior+cervical+ganglion.">Development and regulation of dendrites in the rat superior cervical ganglion.</a> The Journal of Neuroscience. 7 (3), 904-912 (1987).</li><li>Garred, M. M., Wang, M. M., Guo, X., Harrington, C. A., Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+Responses+of+Cultured+Rat+Sympathetic+Neurons+during+BMP-7-Induced+Dendritic+Growth.">Transcriptional Responses of Cultured Rat Sympathetic Neurons during BMP-7-Induced Dendritic Growth.</a> PLoS ONE. 6 (7), 21754 (2011).</li><li>Pravoverov, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+are+Necessary+for+BMP-7-induced+Dendritic+Growth+in+Cultured+Rat+Sympathetic+Neurons.">MicroRNAs are Necessary for BMP-7-induced Dendritic Growth in Cultured Rat Sympathetic Neurons.</a> Cellular and Molecular Neurobiology. 39 (7), 917-934 (2019).</li><li>Natera-Naranjo, O., Aschrafi, A., Gioio, A. E., Kaplan, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+quantitative+analyses+of+microRNAs+located+in+the+distal+axons+of+sympathetic+neurons.">Identification and quantitative analyses of microRNAs located in the distal axons of sympathetic neurons.</a> RNA (New York, N.Y.). 16 (8), 1516-1529 (2010).</li><li>Aschrafi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+mediates+the+axonal+trafficking+of+tyrosine+hydroxylase+and+dopamine+&#946;-hydroxylase+mRNAs+and+enhances+norepinephrine+synthesis+in+primary+sympathetic+neurons.">Angiotensin II mediates the axonal trafficking of tyrosine hydroxylase and dopamine &#946;-hydroxylase mRNAs and enhances norepinephrine synthesis in primary sympathetic neurons.</a> Journal of Neurochemistry. 150 (6), 666-677 (2019).</li><li>Ghogha, A., Bruun, D. a., Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducing+dendritic+growth+in+cultured+sympathetic+neurons.">Inducing dendritic growth in cultured sympathetic neurons.</a> Journal of Visualized Experiments. (61), 4-8 (2012).</li><li>Caceres, A., Banker, G., Steward, O., Binder, L., Payne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAP2+is+localized+to+the+dendrites+of+hippocampal+neurons+which+develop+in+culture.">MAP2 is localized to the dendrites of hippocampal neurons which develop in culture.</a> Brain Research. 315 (2), 314-318 (1984).</li><li>Guo, X., Rueger, D., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+protein-1+and+related+bone+morphogenetic+proteins+regulate+dendritic+growth+and+the+expression+of+microtubule-associated+protein-2+in+rat+sympathetic+neurons.">Osteogenic protein-1 and related bone morphogenetic proteins regulate dendritic growth and the expression of microtubule-associated protein-2 in rat sympathetic neurons.</a> Neuroscience Letters. 245 (3), 131-134 (1998).</li><li>Mi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PANTHER+version+11:+Expanded+annotation+data+from+Gene+Ontology+and+Reactome+pathways,+and+data+analysis+tool+enhancements.">PANTHER version 11: Expanded annotation data from Gene Ontology and Reactome pathways, and data analysis tool enhancements.</a> Nucleic Acids Research. 45, 183-189 (2017).</li><li>Chandrasekaran, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoic+acid+regulates+the+morphological+development+of+sympathetic+neurons.">Retinoic acid regulates the morphological development of sympathetic neurons.</a> Journal of Neurobiology. 42 (4), (2000).</li><li>Courter, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BMP7-induced+dendritic+growth+in+sympathetic+neurons+requires+p75+NTR+signaling.">BMP7-induced dendritic growth in sympathetic neurons requires p75 NTR signaling.</a> Developmental Neurobiology. 76 (9), 1003-1013 (2016).</li><li>Lein, P. J., Fryer, A. D., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Culture:+Autonomic+and+Enteric+Neurons.">Cell Culture: Autonomic and Enteric Neurons.</a> Encyclopedia of Neuroscience. , 625-632 (2009).</li><li>Neto, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmentalized+Microfluidic+Platforms:+The+Unrivaled+Breakthrough+of+In+vitro+Tools+for+Neurobiological+Research.">Compartmentalized Microfluidic Platforms: The Unrivaled Breakthrough of In vitro Tools for Neurobiological Research.</a> Journal of Neuroscience. 36 (46), 11573-11584 (2016).</li><li>Sleigh, J. N., Weir, G. A., Schiavo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple,+step-by-step+dissection+protocol+for+the+rapid+isolation+of+mouse+dorsal+root+ganglia.">A simple, step-by-step dissection protocol for the rapid isolation of mouse dorsal root ganglia.</a> BMC Research Notes. 9 (1), 82 (2016).</li><li>Conrad, R., Jablonka, S., Sczepan, T., Sendtner, M., Wiese, S., Klausmeyer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lectin-based+isolation+and+culture+of+mouse+embryonic+motoneurons.">Lectin-based isolation and culture of mouse embryonic motoneurons.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), e3200 (2011).</li><li>Takeuchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfabricated+device+for+co-culture+of+sympathetic+neuron+and+iPS-derived+cardiomyocytes.">Microfabricated device for co-culture of sympathetic neuron and iPS-derived cardiomyocytes.</a> Proceedings of the Annual International Conference of the IEEE Engineering in Medicine and Biology Society, EMBS. 2013, 3817-3820 (2013).</li><li>Takeuchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+semi-separated+co-culture+system+of+sympathetic+neuron+and+cardiomyocyte.">Development of semi-separated co-culture system of sympathetic neuron and cardiomyocyte.</a> Proceedings of the 31st Annual International Conference of the IEEE Engineering in Medicine and Biology Society: Engineering the Future of Biomedicine, EMBC 2009. , 1832-1835 (2009).</li><li>Chandrasekaran, V., Lea, C., Sosa, J. C., Higgins, D., Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+are+involved+in+BMP-induced+dendritic+growth+in+cultured+rat+sympathetic+neurons.">Reactive oxygen species are involved in BMP-induced dendritic growth in cultured rat sympathetic neurons.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 67, (2015).</li><li>Kim, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statins+decrease+dendritic+arborization+in+rat+sympathetic+neurons+by+blocking+RhoA+activation.">Statins decrease dendritic arborization in rat sympathetic neurons by blocking RhoA activation.</a> Journal of Neurochemistry. 108 (4), 1057-1071 (2009).</li><li>Dalby, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+transfection+with+Lipofectamine+2000+reagent:+Primary+neurons,+siRNA,+and+high-throughput+applications.">Advanced transfection with Lipofectamine 2000 reagent: Primary neurons, siRNA, and high-throughput applications.</a> Methods. 33 (2), 95-103 (2004).</li><li>Szpara, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+gene+expression+during+neurite+outgrowth+and+regeneration.">Analysis of gene expression during neurite outgrowth and regeneration.</a> BMC Neuroscience. 8 (1), 100 (2007).</li><li>Pop, C., Mogosan, C., Loghin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+rapigest+efficacy+for+the+digestion+of+proteins+from+cell+cultures+and+heart+tissue.">Evaluation of rapigest efficacy for the digestion of proteins from cell cultures and heart tissue.</a> Clujul Medical. 87 (4), 5 (2014).</li><li>Vit, O., Petrak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integral+membrane+proteins+in+proteomics.+How+to+break+open+the+black+box.">Integral membrane proteins in proteomics. How to break open the black box.</a> Journal of Proteomics. 153, 8-20 (2017).</li></ol>

هذه الورقة تصف بروتوكولات لاستزراع الخلايا العصبية المتعاطفة من ganglia عنق الرحم متفوقة من الجراء الفئران الجنينية. مزايا استخدام هذا النظام النموذجي هي أنه من الممكن الحصول على مجموعة متجانسة من الخلايا العصبية توفير استجابة مماثلة لعوامل النمو، وبما أن متطلبات عامل النمو لهذه الخلايا ا?...

الخلايا العصبية المتعاطفة المستمدة من العقدة الجنينية متفوقة عنق الرحم (SCG) وقد استخدمت على نطاق واسع كنظام ثقافة الخلايا العصبية الأولية لدراسة العديد من جوانب التنمية العصبية بما في ذلك الاعتماد على عامل النمو، العصبية الهدف التفاعلات، إشارات العصبي، نمو محور عصبي، التنمية dendrite واللدونة، synaptogenesis وآليات إشارة الكامنة العصبية الهدف / العصبية- التفاعلاتglia 1،2،3،4،5،6،7،8،9.5 على الرغم من صغر حجمها (حوالي 10000 الخلايا العصبية / ganglia), هناك ثلاثة أسباب رئيسية لتطوير واستخدام واسع النطاق من هذا النظام الثقافة هي ط) كونها العقدة الأولى في سلسلة متعاطفة, هم أكبر, وبالتالي أسهل لعزل, من بقية ganglia متعاطفة10; ii) على عكس الخلايا العصبية المركزية، والخلايا العصبية في SCG متجانسة إلى حد ما مع جميع الخلايا العصبية التي تستمد من قمة العصبية، وجود حجم مماثل، والاعتماد على عامل نمو الأعصاب ويجري ولا-adrenergic. وهذا يجعلها نموذجا قيما للدراسات المورفولوجية والمجينية10و11 و 3) يمكن الحفاظ على هذه الخلايا العصبية في وسيط محدد خال من المصل يحتوي على عامل نمو الأعصاب لأكثر من شهر10,12. وقد استخدمت الخلايا العصبية SCG ما حول الولادة على نطاق واسع لدراسة الآليات الكامنة في بدء وصيانة dendrites2. ويرجع ذلك أساسا إلى أنه على الرغم من أن الخلايا العصبية SCG لديها arbor تسخين واسعة النطاق في الجسم الحي، فإنها لا تمتد التشعبات في المختبر في غياب المصل ولكن يمكن أن يكون السبب في نمو dendrites في وجود عوامل نمو معينة مثل بروتينات العظام موروجينيك2،12،13.
هذه الورقة يصف بروتوكول لعزل واستزراع الخلايا العصبية SCG الفئران الجنينية. على مدى السنوات ال 50 الماضية، استخدمت الثقافات العصبية الأولية من SCG أساسا للدراسات المورفولوجية مع عدد محدود من الدراسات التي تدرس التغيرات الجينومية أو البروتيومية واسعة النطاق. ويرجع ذلك أساسا إلى صغر حجم الأنسجة مما أدى إلى عزل كميات منخفضة من الحمض النووي أو البروتين، مما يجعل من الصعب إجراء التحليلات الجينومية والبروتيومية على هذه الخلايا العصبية. ومع ذلك، في السنوات الأخيرة، زادت حساسية الكشف قد مكنت من تطوير أساليب لدراسة الجينوم، miRNome والبروتيوم في الخلايا العصبية SCG خلال التنمية النمو التشعب14،15،16،17. هذه الورقة سوف تصف أيضا طريقة للتحليل المورفولوجي لهذه الخلايا العصبية باستخدام الكيمياء المناعية وبروتوكول للحصول على مستخلصات البروتين العصبي لتحليل الطيف الشامل.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2D nanoACQUITY</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BMP-7</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>354-BP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Alumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>5470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell scraper</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS-3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase</td>
			<td>Worthington Biochemical</td>
			<td>4176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Costar or Nunc Flat bottomed Cell culture plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-200, 140675, 142475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytosine- &#946;- D-arabinofuranoside</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1768</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-phosphate buffered saline (Calcium and magnesium free)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4942078001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled Water</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM - Low glucose + Glutamine, + sodium pyruvate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fatty Acid Free BSA</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>126609</td>
			<td>20 mg/mL stock in low glucose DMEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps Dumont no.4 and no.5</td>
			<td>Ted Pella Inc</td>
			<td>5621, 5622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps and Scissors for Dissection</td>
			<td>Ted Pella Inc</td>
			<td>1328, 1329, 5002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverlips - 12mm</td>
			<td>Neuvitro Corporation</td>
			<td>GG-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat-Anti Mouse IgG Alexa 488 conjugated</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A32723</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#39;s F-12 Nutrient Mix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11765</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s balanced salt soltion (Calcium and Magnesium free)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin-Selenium-Transferrin (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>41400-045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodoacetamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A3221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz L-15 medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11415064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting media for glass coverslips</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P36931, P36934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse-anti- MAP2 antibody (SMI-52)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>SMI 52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nerve growth factor</td>
			<td>Envigo Bioproducts (formerly Harlan Bioproducts)</td>
			<td>BT5017</td>
			<td>Stock 125 &#956;g/mL in 0.2% Prionex in DMEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehye</td>
			<td>Spectrum Chemicals</td>
			<td>P1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-D-Lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0899</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prionex</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>529600</td>
			<td>10% solution, 100 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RapiGest SF</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186001861</td>
			<td>5 X 1 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synapt G2 High Definition Mass Spectrometry</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trifluoro acetic acid - Sequencing grade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>28904</td>
			<td>10 X 1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Promega or NEB</td>
			<td>V511A, P8101S</td>
			<td>100 &#956;g or 5 X 20 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waters Total recovery vials</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186000385c</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

culturing rat sympathetic neurons from embryonic superior cervical ganglia for morphological and proteomic analysis

وقد استخدمت الخلايا العصبية المتعاطفة من ganglia عنق الرحم الجرذان الجنينية متفوقة (SCG) كنظام نموذج في المختبر للخلايا العصبية الطرفية لدراسة نمو محور عصبي، والاتجار المحوري، synaptogenesis، والنمو التشعب، واللدونة التشعب والتفاعلات العصبية الهدف في أنظمة الثقافة المشتركة. يصف هذا البروتوكول عزل الخلايا العصبية وتفككها عن العقدة العنقية المتفوقة من أجنة الفئران E21 ، يليها إعداد وصيانة الثقافات العصبية النقية في وسط خال من المصل. منذ الخلايا العصبية لا تلتزم البلاستيك غير المصقول, وسوف تكون الخلايا العصبية المستزرعة على إما 12 مم الزجاج يغطي أو 6-لوحات جيدا المغلفة بولي-د-ليسين. بعد العلاج مع عامل مضاد للتشنج (Ara-C, cytosine β-D-arabinofuranoside), هذا البروتوكول يولد الثقافات العصبية صحية مع أقل من 5% غير الخلايا العصبية, والتي يمكن الحفاظ عليها لأكثر من شهر في المختبر. على الرغم من أن الخلايا العصبية SCG الفئران الجنينية هي متعددة الأقطاب مع 5-8 dendrites في الجسم الحي; تحت شروط المصل خالية، هذه الخلايا العصبية تمتد فقط محور عصبي واحد في الثقافة وتستمر لتكون أحادية القطب لمدة الثقافة. ومع ذلك، يمكن أن تكون هذه الخلايا العصبية التي تسببها لتمديد dendrites في وجود استخراج غشاء الطابق السفلي، البروتينات مورفوجينيك العظام (BMPs)، أو 10٪ مصل عجل الجنين. ويمكن استخدام هذه الثقافات العصبية المتجانسة لتلطيخ المناعة الكيميائية والدراسات الكيميائية الحيوية. تصف هذه الورقة أيضا بروتوكول الأمثل للتلوين المناعية الكيميائية للmicrotubule البروتين المرتبطة-2 (MAP-2) في هذه الخلايا العصبية وإعداد مستخلصات الخلايا العصبية لقياس الطيف الشامل.

عزل والحفاظ على الثقافات العصبية من الخلايا العصبية SCG الجنينية تم طلاء الخلايا المنفصلة من SCG الجنينية الفئران في لوحة مغلفة بـ Poly-D-lysine أو coverlip ومصانة في وسائل الإعلام للثقافة الحرة في المصل التي تحتوي على عامل نمو الأعصاب ب. الخلايا المنفصلة التي تحتوي على خليط من الخلايا العص...

Watch this Scientific Journal Video about Culturing Rat Sympathetic Neurons from Embryonic Superior Cervical Ganglia for Morphological and Proteomic Analysis at JoVE.com

Culturing Rat Sympathetic Neurons from Embryonic Superior Cervical Ganglia for Morphological and Proteomic Analysis

تصف هذه الورقة عزلة واستزراع الخلايا العصبية المتعاطفة مع الفئران الجنينية من العقدة العنقية المتفوقة. كما يوفر بروتوكولات مفصلة للتلوين المناعي الكيميائي وإعداد مقتطفات الخلايا العصبية لتحليل الطيف الشامل.

زراعة الجرذ المتعاطفة العصبية من الجنينية الجنينية الجنينية عنق الرحم العصبية لتحليل مورفولوجية وبروتيومية

Sympathetic neurons from the embryonic rat superior cervical ganglia (SCG) have been used as an in vitro model system for peripheral neurons to study ...

في هذا الفيديو، سوف نبرهن على زراعة العقدة العنقية المتفوقة للفئران الجنينية للتحليل المورفولوجي والبروتيومي. قبل البدء في تشريح، وإعداد وسائل الإعلام السيطرة وتشريح. يحتوي وسيط التحكم F-12 وانخفاض الجلوكوز DMEM مكملة بخليط الأنسولين-السيلينيوم-نقل الرين, الجلوتامين, عامل نمو الأعصاب, وBSA.تشريح المتوسطة يحتوي على L-15 تكملها مع بكتيريا القلم وBSA. راجع المخطوطة للحصول على بروتوكولات مفصلة لإعداد وسائل الإعلام. إعداد لوحات لعبادة الخلايا العصبية.تخفيف ملليغرام واحد لكل ملليلتر من مخزون بولي-د-ليسين إلى 100 ميكروغرام لكل ملليلتر مع الماء المقطر العقيم. لتحليل البروتيوم أو الجينوم ، قبل يوم إلى يومين من تشريح ، معطف ستة لوحات بئر مع ما يقرب من مليلتر من 100 غرام معقمة لكل ملليلتر من بولي - د - ليسين. وهذا ضروري لضمان التصاق الخلية إلى البئر.التفاف لوحات مع فيلم التشبث وتخزين لوحات بين عشية وضحاها في أربع درجات مئوية. في يوم التشريح ، قبل بدء التشريح ، قم بإزالة محلول بولي دي ليسين من الآبار وشطف الآبار خمس مرات بالماء المقطر العقيم ، يليه مرة واحدة مع DMEM منخفض الجلوكوز. أثناء الهضم الأنزيمي للعصابة، ما يقرب من ساعة قبل طلاء الخلايا، وpirem DMEM من لوحات واستبداله مع 0.3 ملليلتر من متوسطة التحكم.تخزين لوحات في 35 درجة مئوية تحت 5٪ CO2 في غرفة مرطبة. في غطاء محرك السيارة، قم بإعداد العناصر التالية للتشريح. أربعة 50 ملليلتر أنابيب مخروطية مع حوالي 20 ملليلتر من وسائل الإعلام تشريح في كل أنبوب.أربعة أطباق معقمة 35 ملليمتر مع 1.5 ملليلتر من وسائل الإعلام تشريح. واحد معقم 50 ملليلتر أنبوب مخروطي مع 20 ملليلتر من وسائل الإعلام تشريح للطرد المركزي. واحد 15 ملليلتر أنبوب مخروطي معقم للrifuging ganglia، واحد أنبوب 10 ملليلتر العقيمة لجمع الخلايا المتفككة.استخدام معقمة الخرز الجاف لتعقيم زوج من ملقط غرامة لمدة دقيقة واحدة على الأقل. وقد وافقت اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها في كلية سانت ماري في كاليفورنيا على جميع الإجراءات التي أجريت في الدراسات التي تشمل الحيوانات. وقد وضعت المبادئ التوجيهية لرعاية الحيوانات واستخدامها في كلية سانت ماري في كاليفورنيا استنادا إلى المبادئ التوجيهية التي قدمها مكتب رعاية الحيوان المختبري في المعاهد الوطنية للصحة.إزالة الأجنة E21 من الفئران الحامل. لاحظ أن إزالة قرن الرحم يمكن أن تتم خارج غطاء محرك السيارة إذا تم تعقيم المنطقة المحيطة بها بشكل دقيق. القتل الرحيم فأر حامل مع استنشاق CO2.القص الفراء من منطقة البطن ومسح الجلد في المنطقة مع 70٪ الكحول لتعقيمه. باستخدام مجموعة جديدة من مقص معقمة ملقط، وقطع من خلال الجلد ومن ثم العضلات لفضح قرون الرحم التي تحتوي على الأجنة. إزالة قرن الرحم مع الأجنة، وذلك باستخدام مجموعة جديدة من مقص ملقط، مع الحرص على عدم تلف الأمعاء في هذه العملية.نقل قرن الرحم مع الأجنة في 150 ملليمتر طبق بيتري عقيمة ونقلها إلى غطاء محرك السيارة. باستخدام مجموعة جديدة من ملقط ومقص، إزالة الأجنة من قرن الرحم وفصل الأجنة من الأغشية السلوية والمشيمة. القتل الرحيم الأجنة، وقطع الحبل الشوكي من الأجنة على طول خط الوسط تحت الذراع اليمنى.وهذا سوف يقلل من النزيف من الشريان السباتي أثناء إزالة SCG. نقل هذه الأجنة إلى أنابيب مخروطية 50 ملليلتر المعدة التي تحتوي على وسائل الإعلام التشريح. تأكد من أن الأجنة مغمورة في وسائل الإعلام.يمكن لكل أنبوب أن يحمل ما يصل إلى ثلاثة أجنة. عزل العقدة العنقية متفوقة من الجنين. نقل جرو واحد من وسائل الإعلام تشريح على طبق بيتري 150 ملليمتر عقيمة نصف مليئة الركيزة الصلبة مع سطحها الظهرية على الركيزة.باستخدام ثلاث إبر قياس 23 معقمة ، قم بصب الحانة على الطبق بإبرة واحدة تحت كل ذراع وإبرة ثالثة عبر الفم لفرط الرقبة بعناية. قطع من خلال الجلد في منطقة الرقبة باستخدام ملقط غرامة معقمة لفضح الغدد اللعابية تحت. إزالة هذه الغدد باستخدام ملقط غرامة.حدد مكان عضلات الروثوما وomohyoid بالقرب من الترقوة والقصبة الهوائية على التوالي. أولاً، قطع عضلات القصر العرضية. ثم قطع بعناية العضلات omohyoid رقيقة باستخدام ملقط غرامة.وبمجرد إزالة هذه العضلات، فإن التشعب في الشريان السباتي على الطرف الأمامي، تكون مرئية على جانبي القصبة الهوائية مع SCG تقع تحت هذه الشوكة في الشريان السباتي. باستخدام ملقط مغلقة، رفع بلطف الشريان السباتي لتصور SCG. باستخدام ملقط واحد على جانبي SCG، اسحب السباتي ونقله إلى أطباق 35 ملليمتر المعقمة المعدة.هذا النسيج سوف تحتوي على الأرجح SCG مع الشريان السباتي, العصب المبهم مع ganglia الإيماءة, فضلا عن أجزاء أخرى من العضلات أو الدهون في المنطقة. كرر عملية التشريح على الجانب الآخر. إزالة SCGs من جميع الأجنة قبل الاستمرار في خطوات التشريح المتبقية المبينة.توزيع الأنسجة المعزولة بين اثنين من الأطباق 35 ملليمتر لتسهيل معالجة عينات الأنسجة. مرحلة ما بعد تجهيز SCG. لفصل SCG من الأنسجة تشريح، أولا استخدام ملقط غرامة لإزالة أي الأنسجة الدخيلة، مثل العضلات أو الدهون، مع الحرص على تجنب المنطقة بالقرب من التشعب السباتي.بمجرد إزالة هذه الأنسجة ، اثنين من ganglia مرئية. العقدة الإيماءة أصغر حجماً ودائرية في حين أن SCG هو اللوز على شكل. سحب بلطف على العصب المبهم لفصل العصب المبهم والعصابة الإيماءة من السباتي ومن ثم فصل SCG من الشريان السباتي.استخدم ملقط ناعم لإزالة الكبسولة التي تحيط بـ SCG. نقل SCG إلى طبق جديد ثقافة 35 ملليمتر. كرر هذه العملية مع جميع عينات الأنسجة تشريح.معطف ماصات زجاجية معقمة، مُسدّس بالقطن مع وسائلُ تشريح لمنع الأنسجة من التمسك بجدران الماصات. استخدام ماصة لاستبدال وسائل الإعلام تشريح مع مللتين معقمة من نوع الكولاجين الثاني، dispase نوع الثاني في HBSS الكالسيوم والمغنيسيوم خالية من واحتضان لمدة 50 دقيقة في 37 درجة مئوية للمساعدة في كسر الأنسجة. لاحظ أن أوقات الحضانة قد تحتاج إلى تحسين مع دفعات مختلفة من الكولاجين / dispase وعادة ما تتراوح بين 40 دقيقة إلى ساعة.بعد الحضانة، ونقل SCGs والكولاجيناز / dispase إلى أنبوب مخروطي 15 ملليلتر معقمة. استخدام وسائل الإعلام تشريح لشطف لوحات ونقل الحل إلى أنبوب. إضافة ما يكفي من وسائل الإعلام تشريح لجعل وحدة التخزين إلى ما يقرب من 10 ملليلتر.أجهزة الطرد المركزي في 200 × ز، 1، 000 إلى 1، 200 دورة في الدقيقة لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة ل بيليه العينة. الطامح المابير، مع الحرص على عدم طرد بيليه. Resuspend بيليه مع 10 ملليلتر من وسائل الإعلام تشريح، وتكرار الطرد المركزي والتخلص من عظمى.استبدال ب 1-2 ملليلتر من الثقافة المتوسطة. باستخدام ماصة باستور الضيقة، عازمة تلميح معقمة، قبل معطفه مع المتوسطة الثقافة، تفكيك ميكانيكيا الكتل عن طريق triturating بلطف خمس إلى ست مرات. السماح لأكبر كتل تسوية لمدة دقيقة واحدة تقريبا ونقل تعليق الخلية الفائقة إلى أنبوب جديد 10 ملليلتر.كرر هذه العملية ثلاث مرات أخرى مع زيادة قوة التثاقل في كل مرة لضمان تفكك كامل تقريبا من SCGs. نقل افرط بعد كل جولة من التثاقل إلى أنبوب 10 ملليلتر مع عظمى من التثاقل الأول. إضافة ما يكفي من وسائل الإعلام الثقافة لجعل وحدة التخزين إلى ثمانية إلى 10 ملليلتر.خلط بلطف تعليق الخلية وتحديد كثافة الخلية مع قياس الهيموسيت. توزيع تعليق الخلية في الآبار في كثافة الخلايا المناسبة للتجارب. اخلطي تعليق الخلية باستمرار أثناء عملية الطلاء لضمان التوزيع حتى للخلايا في الآبار.للتحليل المورفولوجي، صفي الخلايا حول 8000 خلية في بئر في طبق 24-جيدا. وبالنسبة للبروتوكولات الجينومية والبروتيومية، قم بطبقة الخلايا التي يصل ارتفاعها إلى 30,000 خلية في البئر. نقل لوحات إلى مجفف الزجاج مع الماء المعقم في الجزء السفلي لإنشاء غرفة مرطبة.حقن ما يكفي من ثاني أكسيد الكربون، حوالي 120 ملليلتر، للحصول على 5٪ من ثاني أكسيد الكربون في بيئة في desiccator، قبل الختم. الحفاظ على لوحات في 35.5 درجة مئوية. ويشار إلى هذا اليوم صفر في البروتوكول.ويمكن أيضا الحفاظ على هذه اللوحات في حاضنة CO2 5٪ العادية. الطريقة المذكورة أعلاه يقلل من درجة الحرارة ودرجة الحرارة التغيرات ويساعد أيضا على منع التلوث المتبادل. صيانة الخلايا العصبية SCG مثقف والعلاجات.تُظهر هذه الصور خلايا العقدة العنقية المُفصلة في اليوم صفر، واليوم الأول، واليوم الخامس. تظهر صورة اليوم الصفر الخلايا عند الطلاء. الخلايا مطلية في اليوم صفر تحتوي على خليط من الخلايا العصبية وغير العصبية على حد سواء.في اليوم الأول، بعد 24 ساعة من الطلاء، قم بإزالة نصف وسائل الإعلام الثقافية بعناية واستبدلها باثنين من الميكروفولار آرا-سي، سيتوسين د-أربينوفورانويدي، وهو عامل مضاد للميتوتيك. ترك العلاج على الخلايا لمدة 48 ساعة. عادة هذا طول العلاج يكفي للقضاء على الخلايا غير العصبية في الثقافة.في اليوم الثالث، يُشعّر برفق نصف الوسط ويُستعاض عنه بوسيلة التحكم. في اليوم الرابع، تكون الخلايا جاهزة للعلاج التجريبي. تغذية الثقافات كل يومين مع وسيلة مناسبة.استبدال بلطف نصف المتوسط في البئر مع المتوسطة الطازجة. الصورة في اليوم الخامس يظهر نمو محور عصبي واسعة النطاق مع عدم وجود نمو تشعب لوحظ. للحث على النمو التشعبي, يمكن أن تزرع الخلايا العصبية على Matrigel أو تعامل مع المصل 10٪ أو 50 نانوغرام لكل ملليلتر من البروتين مورفوجينيك العظام-7.يظهر الشكل الثاني التغيرات في مورفولوجيا الخلايا العصبية من الخلايا العصبية SCG الفئران E21 بعد العلاج مع BMP-7. تظهر ميكروجرافات التخومات على النقيض من المرحلة التمثيلية في 10 X تكبير جسم الخلايا العصبية الدائري مع محاور عصبية في الخلايا العصبية التحكم في اللوحة A، والخلايا العصبية مع عمليات متعددة تشبه التشعب القصير عند التعامل مع BMP-7 التي تظهرها الأسهم في الخلايا العصبية B.Cultured SCG بعد العلاجات المناسبة يمكن استخدامها للتحليل المورفولوجي باستخدام التلطخ الكيميائي المناعي للتحليل الجينومي والدراسات الكيميائية الحيوية ، مثل لتحليلات البروتيوم. راجع المخطوطة للحصول على بروتوكولات مفصلة للمناعة وإعداد العينات لتحليل البروتيوم.يظهر الشكل الثالث مناعة من بروتين MAP-2 في الخلايا العصبية المتعاطفة للفئران الجنينية المستزرعة. لوحات من خلال D تظهر الخلايا العصبية SCG مثقف تعامل مع وسائل الإعلام التحكم والألواح E من خلال H تظهر الخلايا العصبية تعامل مع BMP-7 في 50 نانوغرام لكل ملليلتر لمدة خمسة أيام. ميكروجراف تمثيلية تظهر تلطيخ مناعة الخلايا العصبية مع microtubule المرتبطة البروتين-2 في C و G، وصمة عار نووية في D و H مع مرحلة التباين المجهري في B و F، والخروج من القنوات الثلاث في A و D.Immunocytochemical تلطيخ من البروتينات المرتبطة microtubule-2 موجود في جسم الخلية ومحورات العجلة القريبة من الخلايا العصبية التحكم في لوحة C.و ، وdendrites في BMP-7 الخلايا العصبية المعالجة في لوحة G.Here هي عينة من العقدة عنق الرحم متفوقة تعامل مع وسائل الإعلام التحكم، والتي اكتشفت 1، 100 البروتينات.وجد علم الأجناس الجينية باستخدام قاعدة بيانات الفهود أن معظم البروتينات كانت سيتوبلازميك. ومع ذلك، كانت هناك بروتينات ومقيدة بالغشاء في الوصلات الخلوية في العينة. وكشف هذا التحليل أيضا أن البروتينات التي تشارك في مجموعة واسعة من مسارات إشارات الخلايا العصبية تم الكشف عنها في العينة.في الختام، بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تكون قادرة على عزل وثقافة الجرذ الجنينية الجنينية العصبية العقدية العنقية للتحليل المورفولوجي والبروتيومية. تم تمويل هذا العمل من قبل صندوق تطوير الكلية وبرنامج البحوث الصيفية في كلية سانت ماري في كاليفورنيا.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Neuroscience

Unit 1

The Autonomic Nervous System

SCIENTISTS IN ACTION

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

تشريح والثقافة من الخلايا العصبية من النخاع الشوكي صواري الجنينية

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Physiological, Morphological and Neurochemical Characterization of Neurons Modulated by Movement

الفسيولوجية والمورفولوجية وتوصيف الكيميائية العصبية من الخلايا العصبية عن طريق التضمين الحركة

The role of individual neurons and their function in neuronal circuits is fundamental to understanding the neuronal mechanisms of sensory and motor ...

Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury

مناعي لونين من الظهرية جذر الأنسجة العقد التالي من الإصابات محواري

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after ...

Cerebrovascular Casting of the Adult Mouse for 3D Imaging and Morphological Analysis

صب الدماغية للماوس الكبار عن التصوير والتحليل الصرفي 3D

Vascular imaging is crucial in the clinical diagnosis and management of cerebrovascular diseases, such as brain arteriovenous malformations (BAVMs). ...

Inducing Dendritic Growth in Cultured Sympathetic Neurons

حفز النمو في الخلايا العصبية شجيري متعاطف مثقف

The shape of the dendritic arbor determines the total synaptic input a neuron can receive 1-3, and influences the types and distribution of these inputs ...

Production and Isolation of Axons from Sensory Neurons for Biochemical Analysis Using Porous Filters

إنتاج وعزل محاور عصبية من الخلايا العصبية الحسية لتحليل الكيمياء الحيوية باستخدام مرشحات المسامية

Neuronal axons use specific mechanisms to mediate extension, maintain integrity, and induce degeneration. An appropriate balance of these events is ...

A Method of Nodose Ganglia Injection in Sprague-Dawley Rat

وهناك طريقة العقداء العقد حقن في سبراغ داولي الفئران

Afferent signaling via the vagus nerve transmits important general visceral information to the central nervous system from many diverse receptors located ...

Diffusion Imaging in the Rat Cervical Spinal Cord

التصوير نشر في الحبل الشوكي الجرذ عنق الرحم

Magnetic resonance imaging (MRI) is the state of the art approach for assessing the status of the spinal cord noninvasively, and can be used as a ...

Functional and Morphological Assessment of Diaphragm Innervation by Phrenic Motor Neurons

التقييم الوظيفي والمورفولوجية من الحجاب الحاجز تعصيب من قبل الحجابي موتور الخلايا العصبية

This protocol specifically focuses on tools for assessing phrenic motor neuron (PhMN) innervation of the diaphragm at both the electrophysiological and ...

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

مضان وتلألؤ بيولوجي التصوير من التحت خلوية كا<sup&gt; 2+</sup&gt; في المسنين الحصين الخلايا العصبية

Susceptibility to neuron cell death associated to neurodegeneration and ischemia are exceedingly increased in the aged brain but mechanisms responsible ...