Name: culturing rat sympathetic neurons from embryonic superior cervical ganglia for morphological and proteomic analysis
Uploaded: 2020-09-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Culturing Rat Sympathetic Neurons from Embryonic Superior Cervical Ganglia for Morphological and Proteomic Analysis at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן לפיתוח הפקולטה ומענק תוכנית מחקר קיץ במכללת סנט מרי של קליפורניה. המחברים גם רוצים להודות ד"ר פמלה לין באוניברסיטת קליפורניה דייוויס וד"ר אנתוני Iavarone באוניברסיטת ברקלי Mass ספקטרומטריה מתקן על עצתם במהלך הפיתוח של פרוטוקולים אלה. המחברים גם רוצים להודות להיילי נלסון במשרד לתקשורת במכללה סנט מרי של קליפורניה על עזרתה בהפקת וידאו ועריכה.

כל ההליכים שבוצעו במחקרים הקשורים לבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים ושימוש (IACUC) במכללת סנט מרי בקליפורניה. ההנחיות לטיפול בבעלי חיים ולשימוש במכללת סנט מרי פותחו בהתאם להנחיות שסיפק המשרד לרווחת בעלי חיים במעבדה במכון הלאומי לבריאות (https://olaw.nih.gov/sites/default/files/PHSPolicyLabAni...

<ol>
	<li>Rees, R. P., Bunge, M. B., Bunge, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+Changes+in+the+neuritic+growth+cone+and+target+neuron+during+synaptic+junction+development+in+culture.">Morphological Changes in the neuritic growth cone and target neuron during synaptic junction development in culture.</a> Journal of Cell Biology. 9, (1976).</li><li>Chandrasekaran, V., Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Dendritogenesis+in+Sympathetic+Neurons.">Regulation of Dendritogenesis in Sympathetic Neurons.</a> Autonomic Nervous System. , (2018).</li><li>Higgins, D., Burack, M., Lein, P., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+neuronal+polarity.">Mechanisms of neuronal polarity.</a> Current Opinion in Neurobiology. 7 (5), 599-604 (1997).</li><li>Lein, P., Guo, X., Hedges, A. M., Rueger, D., Johnson, M., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+Extracellular+Matrix+And+Osteogenic+Protein-1+on+the+morphological+differentiation+of+rat+sympathetic+neurons.">The effects of Extracellular Matrix And Osteogenic Protein-1 on the morphological differentiation of rat sympathetic neurons.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 14 (3), 203-215 (1996).</li><li>Kobayashi, M., Fujii, M., Kurihara, K., Matsuoka, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+morphogenetic+protein-2+and+retinoic+acid+induce+neurotrophin-3+responsiveness+in+developing+rat+sympathetic+neurons.">Bone morphogenetic protein-2 and retinoic acid induce neurotrophin-3 responsiveness in developing rat sympathetic neurons.</a> Molecular Brain Research. 53 (1-2), 206-217 (1998).</li><li>Burnham, P., Louis, J. C., Magal, E., Varon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+ciliary+neurotrophic+factor+on+the+survival+and+response+to+nerve+growth+factor+of+cultured+rat+sympathetic+neurons.">Effects of ciliary neurotrophic factor on the survival and response to nerve growth factor of cultured rat sympathetic neurons.</a> Developmental Biology. 161 (1), 96-106 (1994).</li><li>Hou, X. E., Li, J. Y., Dahlstr&#246;m, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clathrin+light+chain+and+synaptotagmin+I+in+rat+sympathetic+neurons.">Clathrin light chain and synaptotagmin I in rat sympathetic neurons.</a> Journal of the Autonomic Nervous System. 62 (1-2), 13-26 (1997).</li><li>Harris, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+Guidance+by+a+Decellularized+Fibroblast+Extracellular+Matrix.">Nerve Guidance by a Decellularized Fibroblast Extracellular Matrix.</a> Matrix Biology. , 176-189 (2017).</li><li>Wingerd, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;4+integrins+and+vascular+cell+adhesion+molecule-1+play+a+role+in+sympathetic+innervation+of+the+heart.">&#945;4 integrins and vascular cell adhesion molecule-1 play a role in sympathetic innervation of the heart.</a> Journal of Neuroscience. 22 (24), 10772-10780 (2002).</li><li>Higgins, D., Lein, P., Osterhout, D. J., Johnson, M., Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+culture+of+autonomic+neurons.">Tissue culture of autonomic neurons.</a> Culturing Nerve Cells. , 177-205 (1991).</li><li>Lein, P., Johnson, M., Guo, X., Rueger, D., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+protein-1+induces+dendritic+growth+in+rat+sympathetic+neurons.">Osteogenic protein-1 induces dendritic growth in rat sympathetic neurons.</a> Neuron. 15 (3), 597-605 (1995).</li><li>Bruckenstein, D. A., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+differentiation+of+embryonic+rat+sympathetic+neurons+in+tissue+culture.">Morphological differentiation of embryonic rat sympathetic neurons in tissue culture.</a> Developmental Biology. 128 (2), 337-348 (1988).</li><li>Voyvodic, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+regulation+of+dendrites+in+the+rat+superior+cervical+ganglion.">Development and regulation of dendrites in the rat superior cervical ganglion.</a> The Journal of Neuroscience. 7 (3), 904-912 (1987).</li><li>Garred, M. M., Wang, M. M., Guo, X., Harrington, C. A., Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+Responses+of+Cultured+Rat+Sympathetic+Neurons+during+BMP-7-Induced+Dendritic+Growth.">Transcriptional Responses of Cultured Rat Sympathetic Neurons during BMP-7-Induced Dendritic Growth.</a> PLoS ONE. 6 (7), 21754 (2011).</li><li>Pravoverov, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+are+Necessary+for+BMP-7-induced+Dendritic+Growth+in+Cultured+Rat+Sympathetic+Neurons.">MicroRNAs are Necessary for BMP-7-induced Dendritic Growth in Cultured Rat Sympathetic Neurons.</a> Cellular and Molecular Neurobiology. 39 (7), 917-934 (2019).</li><li>Natera-Naranjo, O., Aschrafi, A., Gioio, A. E., Kaplan, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+quantitative+analyses+of+microRNAs+located+in+the+distal+axons+of+sympathetic+neurons.">Identification and quantitative analyses of microRNAs located in the distal axons of sympathetic neurons.</a> RNA (New York, N.Y.). 16 (8), 1516-1529 (2010).</li><li>Aschrafi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+mediates+the+axonal+trafficking+of+tyrosine+hydroxylase+and+dopamine+&#946;-hydroxylase+mRNAs+and+enhances+norepinephrine+synthesis+in+primary+sympathetic+neurons.">Angiotensin II mediates the axonal trafficking of tyrosine hydroxylase and dopamine &#946;-hydroxylase mRNAs and enhances norepinephrine synthesis in primary sympathetic neurons.</a> Journal of Neurochemistry. 150 (6), 666-677 (2019).</li><li>Ghogha, A., Bruun, D. a., Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducing+dendritic+growth+in+cultured+sympathetic+neurons.">Inducing dendritic growth in cultured sympathetic neurons.</a> Journal of Visualized Experiments. (61), 4-8 (2012).</li><li>Caceres, A., Banker, G., Steward, O., Binder, L., Payne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAP2+is+localized+to+the+dendrites+of+hippocampal+neurons+which+develop+in+culture.">MAP2 is localized to the dendrites of hippocampal neurons which develop in culture.</a> Brain Research. 315 (2), 314-318 (1984).</li><li>Guo, X., Rueger, D., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+protein-1+and+related+bone+morphogenetic+proteins+regulate+dendritic+growth+and+the+expression+of+microtubule-associated+protein-2+in+rat+sympathetic+neurons.">Osteogenic protein-1 and related bone morphogenetic proteins regulate dendritic growth and the expression of microtubule-associated protein-2 in rat sympathetic neurons.</a> Neuroscience Letters. 245 (3), 131-134 (1998).</li><li>Mi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PANTHER+version+11:+Expanded+annotation+data+from+Gene+Ontology+and+Reactome+pathways,+and+data+analysis+tool+enhancements.">PANTHER version 11: Expanded annotation data from Gene Ontology and Reactome pathways, and data analysis tool enhancements.</a> Nucleic Acids Research. 45, 183-189 (2017).</li><li>Chandrasekaran, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoic+acid+regulates+the+morphological+development+of+sympathetic+neurons.">Retinoic acid regulates the morphological development of sympathetic neurons.</a> Journal of Neurobiology. 42 (4), (2000).</li><li>Courter, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BMP7-induced+dendritic+growth+in+sympathetic+neurons+requires+p75+NTR+signaling.">BMP7-induced dendritic growth in sympathetic neurons requires p75 NTR signaling.</a> Developmental Neurobiology. 76 (9), 1003-1013 (2016).</li><li>Lein, P. J., Fryer, A. D., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Culture:+Autonomic+and+Enteric+Neurons.">Cell Culture: Autonomic and Enteric Neurons.</a> Encyclopedia of Neuroscience. , 625-632 (2009).</li><li>Neto, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmentalized+Microfluidic+Platforms:+The+Unrivaled+Breakthrough+of+In+vitro+Tools+for+Neurobiological+Research.">Compartmentalized Microfluidic Platforms: The Unrivaled Breakthrough of In vitro Tools for Neurobiological Research.</a> Journal of Neuroscience. 36 (46), 11573-11584 (2016).</li><li>Sleigh, J. N., Weir, G. A., Schiavo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple,+step-by-step+dissection+protocol+for+the+rapid+isolation+of+mouse+dorsal+root+ganglia.">A simple, step-by-step dissection protocol for the rapid isolation of mouse dorsal root ganglia.</a> BMC Research Notes. 9 (1), 82 (2016).</li><li>Conrad, R., Jablonka, S., Sczepan, T., Sendtner, M., Wiese, S., Klausmeyer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lectin-based+isolation+and+culture+of+mouse+embryonic+motoneurons.">Lectin-based isolation and culture of mouse embryonic motoneurons.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), e3200 (2011).</li><li>Takeuchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfabricated+device+for+co-culture+of+sympathetic+neuron+and+iPS-derived+cardiomyocytes.">Microfabricated device for co-culture of sympathetic neuron and iPS-derived cardiomyocytes.</a> Proceedings of the Annual International Conference of the IEEE Engineering in Medicine and Biology Society, EMBS. 2013, 3817-3820 (2013).</li><li>Takeuchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+semi-separated+co-culture+system+of+sympathetic+neuron+and+cardiomyocyte.">Development of semi-separated co-culture system of sympathetic neuron and cardiomyocyte.</a> Proceedings of the 31st Annual International Conference of the IEEE Engineering in Medicine and Biology Society: Engineering the Future of Biomedicine, EMBC 2009. , 1832-1835 (2009).</li><li>Chandrasekaran, V., Lea, C., Sosa, J. C., Higgins, D., Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+are+involved+in+BMP-induced+dendritic+growth+in+cultured+rat+sympathetic+neurons.">Reactive oxygen species are involved in BMP-induced dendritic growth in cultured rat sympathetic neurons.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 67, (2015).</li><li>Kim, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statins+decrease+dendritic+arborization+in+rat+sympathetic+neurons+by+blocking+RhoA+activation.">Statins decrease dendritic arborization in rat sympathetic neurons by blocking RhoA activation.</a> Journal of Neurochemistry. 108 (4), 1057-1071 (2009).</li><li>Dalby, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+transfection+with+Lipofectamine+2000+reagent:+Primary+neurons,+siRNA,+and+high-throughput+applications.">Advanced transfection with Lipofectamine 2000 reagent: Primary neurons, siRNA, and high-throughput applications.</a> Methods. 33 (2), 95-103 (2004).</li><li>Szpara, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+gene+expression+during+neurite+outgrowth+and+regeneration.">Analysis of gene expression during neurite outgrowth and regeneration.</a> BMC Neuroscience. 8 (1), 100 (2007).</li><li>Pop, C., Mogosan, C., Loghin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+rapigest+efficacy+for+the+digestion+of+proteins+from+cell+cultures+and+heart+tissue.">Evaluation of rapigest efficacy for the digestion of proteins from cell cultures and heart tissue.</a> Clujul Medical. 87 (4), 5 (2014).</li><li>Vit, O., Petrak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integral+membrane+proteins+in+proteomics.+How+to+break+open+the+black+box.">Integral membrane proteins in proteomics. How to break open the black box.</a> Journal of Proteomics. 153, 8-20 (2017).</li></ol>

מאמר זה מתאר את הפרוטוקולים לתפירת נוירונים סימפטיים מגנגליה צוואר הרחם מעולה של גורי חולדות עובריות. היתרונות של שימוש במערכת מודל זה הם כי ניתן להשיג אוכלוסייה הומוגנית של נוירונים מתן תגובה דומה גורמי גדילה, ומאז דרישות גורם גדילה עבור נוירונים אלה כבר מאופיין היטב, ניתן לגדל נוירונים...

נוירונים סימפטיים נגזר גנגליה צוואר הרחם מעולה עוברי (SCG) שימשו באופן נרחב כמערכת תרבות עצבית ראשית לחקר היבטים רבים של התפתחות עצבית כולל תלות גורם גדילה, אינטראקציות נוירון-יעד, נוירוטרנסמיטר איתות, צמיחה סקסוני, פיתוח דנדריט ו פלסטיות, סינפטוגנזה ומנגנוני איתות הבסיסית עצב-יעד / נוירון-glia אינטראקציות1,,2,,3,,4,,5,,6,,7,,8,,9. למרות גודלם הקטן (כ-10000 נוירונים/גנגליה), ישנן שלוש סיבות עיקריות לפיתוח ולשימוש נרחב במערכת תרבות זו הם אני) להיות הגנגליה הראשונה בשרשרת הסימפטית, הם גדולים יותר, ולכן קל יותר לבודד, מאשר שאר הגנגליה הסימפטית10; ii) בניגוד לנוירונים המרכזיים, הנוירונים ב-SCG הם הומוגניים למדי עם כל הנוירונים הנגזרים מהציצה העצבית, בעל גודל דומה, תלות בגורם גדילה עצבי ולהיות נור-adrenergic. זה הופך אותם מודל יקר ערך עבור מחקרים מורפולוגיים וגנומיים10,11 ו- iii) נוירונים אלה יכולים להישמר במדיום מוגדר ללא סרום המכיל גורם גדילהעצבי במשך יותר מחודש 10,12. נוירונים SCG Perinatal שימשו בהרחבה לחקר המנגנונים הבסיסיים ייזום ותחזוקה של דנדריטים2. הסיבה לכך היא בעיקר, למרות נוירונים SCG יש arbor דנדריטי נרחב vivo, הם לא להרחיב דנדריטים במבחנה בהיעדר סרום, אבל יכול להיות מושרה לגדול דנדריטים בנוכחות גורמי גדילה מסוימים כגון חלבונים מורפוגנטעצם 2,,12,13.
מאמר זה מתאר את הפרוטוקול לבידוד ולקולות נוירונים SCG חולדה עוברית. במהלך 50 השנים האחרונות, תרבויות עצביות עיקריות של SCG שימשו בעיקר מחקרים מורפולוגיים עם מספר מוגבל של מחקרים הבוחנים את השינויים הגנומיים או פרוטאומיים בקנה מידה גדול. זה בעיקר בשל גודל רקמה קטנה וכתוצאה מכך בידוד של כמויות נמוכות של DNA או חלבון, מה שמקשה לבצע ניתוחים גנומיים ופרוטונומיים על נוירונים אלה. עם זאת, בשנים האחרונות, רגישות גילוי מוגברת אפשרה פיתוח של שיטות לבחון את הגנום, miRNome ופרוטומה בנוירונים SCG במהלך פיתוח צמיחהדנדריטית 14,15,16,17. מאמר זה יתאר גם את השיטה לניתוח מורפולוגי של נוירונים אלה באמצעות אימונוציטוכימיה ופרוטוקול כדי להשיג תמציות חלבון עצבי לניתוח ספקטרומטרי מסה.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2D nanoACQUITY</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BMP-7</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>354-BP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Alumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>5470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell scraper</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS-3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase</td>
			<td>Worthington Biochemical</td>
			<td>4176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Costar or Nunc Flat bottomed Cell culture plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-200, 140675, 142475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytosine- &#946;- D-arabinofuranoside</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1768</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-phosphate buffered saline (Calcium and magnesium free)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4942078001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled Water</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM - Low glucose + Glutamine, + sodium pyruvate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fatty Acid Free BSA</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>126609</td>
			<td>20 mg/mL stock in low glucose DMEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps Dumont no.4 and no.5</td>
			<td>Ted Pella Inc</td>
			<td>5621, 5622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps and Scissors for Dissection</td>
			<td>Ted Pella Inc</td>
			<td>1328, 1329, 5002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverlips - 12mm</td>
			<td>Neuvitro Corporation</td>
			<td>GG-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat-Anti Mouse IgG Alexa 488 conjugated</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A32723</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#39;s F-12 Nutrient Mix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11765</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s balanced salt soltion (Calcium and Magnesium free)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin-Selenium-Transferrin (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>41400-045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodoacetamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A3221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz L-15 medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11415064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting media for glass coverslips</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P36931, P36934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse-anti- MAP2 antibody (SMI-52)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>SMI 52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nerve growth factor</td>
			<td>Envigo Bioproducts (formerly Harlan Bioproducts)</td>
			<td>BT5017</td>
			<td>Stock 125 &#956;g/mL in 0.2% Prionex in DMEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehye</td>
			<td>Spectrum Chemicals</td>
			<td>P1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-D-Lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0899</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prionex</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>529600</td>
			<td>10% solution, 100 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RapiGest SF</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186001861</td>
			<td>5 X 1 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synapt G2 High Definition Mass Spectrometry</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trifluoro acetic acid - Sequencing grade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>28904</td>
			<td>10 X 1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Promega or NEB</td>
			<td>V511A, P8101S</td>
			<td>100 &#956;g or 5 X 20 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waters Total recovery vials</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186000385c</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

culturing rat sympathetic neurons from embryonic superior cervical ganglia for morphological and proteomic analysis

נוירונים סימפטיים מן החולדה העוברית מעולה ganglia צוואר הרחם (SCG) שימשו כמערכת מודל מבחנה עבור נוירונים היקפיים לחקור צמיחה סקסונית, סחר באקסונים, סינפטוגנזה, צמיחה דנדריטית, פלסטיות דנדריטית ואינטראקציות מטרה עצבית במערכות תרבות שותף. פרוטוקול זה מתאר את הבידוד והניתיקות של תאי העצב מהגרגליה צוואר הרחם מעולה של עוברי חולדה E21, ואחריו הכנה ותחזוקה של תרבויות עצביות טהורות במדיום ללא סרום. מאז נוירונים אינם לדבוק פלסטיק לא מצופה, נוירונים יהיה תרבותי על או 12 מ"מ כיסוי זכוכית או 6-well צלחות מצופה פולי-D-לינזין. לאחר טיפול עם סוכן אנטימיוטי (Ara-C, ציטוסין β-D-arabinofuranoside), פרוטוקול זה יוצר תרביות עצביות בריאות עם פחות מ 5% תאים שאינם נוירוניים, אשר ניתן לשמור במשך יותר מחודש במבחנה. למרות חולדה עוברית SCG נוירונים הם רב קוטבי עם 5-8 דנדריטים ב vivo; בתנאים ללא סרום, נוירונים אלה להרחיב רק axon אחד בתרבות ולהמשיך להיות חד קוטבי למשך כל התרבות. עם זאת, נוירונים אלה יכולים להיות מושרה להאריך דנדריטים בנוכחות תמצית קרום מרתף, חלבונים מורפוגנטיים עצם (BMPs), או 10% סרום עגל עוברי. תרבויות עצביות הומוגניות אלה יכולות לשמש להכתמה חיסונית ולחקרים ביוכימיים. מאמר זה מתאר גם פרוטוקול אופטימיזציה עבור כתמים חיסוניים עבור microtubule הקשורים חלבון-2 (MAP-2) בנוירונים אלה, להכנת תמציות עצביות לספקטרומטריה מסה.

בידוד ותחזוקה של תרביות עצביות של נוירונים עובריים SCG תאים תפורים מSCG עוברי חולדה היו מצופה בצלחת פולי-D-ליסין מצופה או כיסוי ומתוחזק בתקשורת תרבות חופשית סרום המכיל גורם גדילה B-עצב. התאים התופרקים המכילים תערובת של תאי עצב ותאי גליה נראים עגולים עלציפוי (איור 1A)....

Watch this Scientific Journal Video about Culturing Rat Sympathetic Neurons from Embryonic Superior Cervical Ganglia for Morphological and Proteomic Analysis at JoVE.com

Culturing Rat Sympathetic Neurons from Embryonic Superior Cervical Ganglia for Morphological and Proteomic Analysis

מאמר זה מתאר את הבידוד וההתלות של נוירונים אוהדים של חולדה עוברית מגנגליה צוואר הרחם מעולה. הוא גם מספק פרוטוקולים מפורטים עבור כתמים חיסוניים והכנת תמציות עצביות לניתוח ספקטרומטרי מסה.

חולדה Culturing נוירונים סימפטיים מגנגליה צוואר הרחם מעולה עוברית לניתוח מורפולוגי ופרוטונומי

Sympathetic neurons from the embryonic rat superior cervical ganglia (SCG) have been used as an in vitro model system for peripheral neurons to study ...

בסרטון זה, אנו נדגים את פולחן הגרופיות הצוואריות העליונות של חולדות עובריות לניתוח מורפולוגי ופרוטומי. לפני תחילת הניתוח, הכינו את אמצעי הבקרה והפירוק. אמצעי בקרה מכיל F-12 ו- DMEM גלוקוז נמוך בתוספת תערובת אינסולין-סלניום-transferrin, גלוטמין, גורם גדילה עצבי, ו BSA.מדיום הניתוח מכיל L-15 בתוספת סטרפטוקומטר עט ו-BSA. עיין בכתב היד לקבלת פרוטוקולים מפורטים להכנת התקשורת. הכנת צלחות לתכשירי עצב פולחן.מדללים מלאי של מיליגרם למיליליטר של פולי-די-ליזין ל-100 מיקרוגרם למיליליטר עם מים מזוקקים סטריליים. לניתוח פרוטומי או גנומי, יום עד יומיים לפני הניתוח, מצפים צלחות שש בארות עם כשני מיליליטר של סטרילי 100 גרם למיליליטר של פולי-D-לינזין. זה הכרחי כדי להבטיח הידבקות התא ל הבאר.עוטפים את הצלחות בסרט נצמד ומאחסנים את הצלחות למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס. ביום הניתוח, לפני תחילת הניתוח, להסיר את הפתרון פולי D-לינזין מן בארות ולשטוף את בארות חמש פעמים עם מים מזוקקים סטריליים, ואחריו פעם אחת עם DMEM גלוקוז נמוך. במהלך העיכול האנזימטי של הגנגרליה, כשעה לפני ציפוי התאים, שאפו את ה- DMEM מהצלחות והחלפו אותו במדיום בקרה של 0.3 מיליליטר.אחסנו את הצלחות ב-35 מעלות צלזיוס מתחת ל-5%CO2 בתא לח. במכסה המנוע, הגדר את הפריטים הבאים עבור ניתוח. ארבעה צינורות חרוט סטריליים 50 מיליליטר עם כ 20 מיליליטר של מדיה ניתוח בכל צינור.ארבע מנות סטריליות 35 מילימטר עם 1.5 מיליליטר של מדיה ניתוח. צינור חרוט סטרילי אחד של 50 מיליליטר עם 20 מיליליטר של מדיית ניתוח לצנטריפוגה. צינור חרוט סטרילי אחד של 15 מיליליטר לצנטריפוגה של הגרעינים, צינור סטרילי אחד של 10 מיליליטר לאיסוף התאים המנותקים.השתמש חיטוי חרוזים יבשים כדי לעקר זוג מדפים עדין לפחות דקה אחת. כל ההליכים שבוצעו במחקרים הקשורים לבעלי חיים אושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים מוסדיים במכללת סנט מרי בקליפורניה. הנחיות הטיפול והשימוש בבעלי חיים במכללת סנט מרי בקליפורניה פותחו על סמך הנחיות שסופקו על ידי המשרד לרווחת בעלי חיים במעבדה במכון הלאומי לבריאות.הסרת עוברי E21 מהעכבר ההרי. שים לב כי הסרת קרן הרחם יכולה להתבצע מחוץ למכסה המנוע אם האזור שמסביב מעוקר ביסודיות. המתת חום לחולדה בהריון עם שאיפת CO2.גוועים את הפרווה מאזור הבטן ומנגבים את העור באזור עם 70% אלכוהול כדי לעקר אותו. באמצעות קבוצה טרייה של מספריים סטריליים ומדפים, לחתוך דרך העור ולאחר מכן את השריר לחשוף את קרני הרחם המכיל את העוברים. הסר את קרן הרחם עם העוברים, באמצעות קבוצה חדשה של מספריים ומדפים, דואג לא לפגוע במעיים בתהליך.מעבירים את קרן הרחם עם העוברים לצלחת פטרי סטרילית 150 מ"מ ומעבירים אותם למכסה המנוע. באמצעות קבוצה חדשה של מלקחיים ומספריים, להסיר את העוברים מקרן הרחם ולהפריד את העוברים מן הממברנות מי המפירה ואת שליה. כדי להרדיף את העוברים, חותכים את חוט השדרה של העוברים לאורך קו האמצע מתחת לזרוע ימין.זה יקטין את הדימום מן העורק הראשי במהלך הסרת SCG. העבר עוברים אלה לתוך צינורות חרוט מוכנים 50 מיליליטר המכילים מדיה ניתוח. תוודא שהעוברים שקועים בתקשורת.כל צינור יכול להכיל עד שלושה עוברים. בידוד של גנגליון צוואר הרחם מעולה מהעובר. מעבירים גור אחד מאמצעי הניתוח לצלחת פטרי סטרילית של 150 מ"מ, חצי מלאה במצע מוצק עם משטח הגב שלו על המצע.באמצעות שלושה מחטים סטריליות 23 מד, להצמיד את הפאב לצלחת עם מחט אחת מתחת לכל זרוע ומחט שלישית דרך הפה כדי לזרז בזהירות את הצוואר. חותכים דרך העור באזור הצוואר באמצעות מדפים דקים סטריליים כדי לחשוף את בלוטות הרוק מתחת. הסר בלוטות אלה באמצעות מדפים עדין.אתר את השרירים סטרנוקליידום ו omohyoid ליד עצם הבריח ואת קנה הנשימה בהתאמה. ראשית, לחתוך את השרירים הסטרונוקלידוסטואידים רוחביים. ואז בזהירות לחתוך את השריר omohyoid דק באמצעות מדפים עדין.לאחר הסרת השרירים הללו, bifurcation בעורק הראשי בקצה הראשון, יהיה גלוי משני צדי קנה הנשימה עם SCG ממוקם מתחת לתספורת זו בעורק הראשי. באמצעות מדפים סגורים, בעדינות להרים את העורק הראשי כדי לדמיין את SCG. באמצעות מטח אחד משני צדי SCG, לשלוף את התרפיד ולהעביר אותו מנות סטריליות מוכן 35 מילימטר.רקמה זו ככל הנראה תכיל את SCG עם העורק הראשי, עצב הוואגוס עם גרני הנוודוז, כמו גם קטעים אחרים של שריר או שומן באזור. חזור על תהליך הניתוח בצד השני. הסר SCGs מכל העוברים לפני שתמשיך בשלבי הניתוח הנותרים המתוארים.הפץ את הרקמות המבודדות בין שתיים מהמנות של 35 מילימטרים כדי להקל על עיבוד דגימות הרקמה. לאחר העיבוד של SCG. כדי להפריד את SCG מן הרקמה נותח, תחילה להשתמש מטלטולים עדין כדי להסיר כל רקמה מיותרת, כגון שריר או שומן, דואג כדי למנוע את האזור ליד bifurcation הת הראשי.ברגע שהרקמות האלה הוסרו, שני גנגלים נראים לעין. גנגליון הנודוז קטן ועגול בעוד SCG הוא בצורת שקדים. משוך בעדינות את עצב הוואגוס כדי להפריד את עצב הוואגוס ואת גרגליית הנוודז מהתרדמה ולאחר מכן להפריד את SCG מהערק הראשי.השתמש מדפים עדין כדי להסיר את הקפסולה המקיפה SCG. העבר את SCG למנה חדשה של 35 מילימטר תרבות. חזור על תהליך זה עם כל דגימות הרקמה נותק.מצפים פיפטה זכוכית מעורקת עם תקע כותנה עם מדיית ניתוח כדי למנוע מהרקמות לבקוע לקירות הפיפיט. השתמש פיפטה להחליף את המדיה dissection עם סטרילי שני מיליליטר של קולגן מסוג II, להפיג סוג II בסידן ומגנזיום ללא HBSS ודגירה במשך 50 דקות ב 37 מעלות צלזיוס כדי לעזור לשבור את הרקמות. שימו לב כי ייתכן שיהיה צורך לייעל את זמני הדגירה עם אצוות שונות של קולגן/דיספס ובדרך כלל נע בין 40 דקות לשעה.לאחר הדגירה, מעבירים את ה- SCGs והקולגנס / דיספס לצינור חרוט סטרילי של 15 מיליליטר. השתמש במדיה ניתוח לשטוף את הצלחות ולהעביר את הפתרון לצינור. הוסף די מדיה של ניתוח כדי להביא את עוצמת הקול לכ- 10 מיליליטר.צנטריפוגה ב 200 x גרם, 1, 000 כדי 1, 200 סל"ד במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר כדי גלולה את המדגם. שאפו את העל-טבעי, דאגו לא לסלק את גלולת הכדור. תן שוב את גלולה עם 10 מיליליטר של מדיה ניתוח, לחזור על הצנטריפוגה ולהשליך את supernatant.החלף עם אחד עד שני מיליליטר של תרבות בינונית. באמצעות פיפטה פסטר סטרילית צרה, כפופה קצה, מראש מצופה אותו עם תרבות בינונית, מכנית לנתק את הגושים על ידי triturating בעדינות חמש עד שש פעמים. תן לגושים הגדולים להסתפק בדקה אחת ולהעביר את ההשעיה של התא העל-טבעי לצינור חדש של 10 מיליליטר.חזור על תהליך זה שלוש פעמים נוספות עם כוח הולך וגדל של טריטורציה בכל פעם כדי להבטיח דיסוציאציה כמעט מוחלטת של SCGs. להעביר את supernatant לאחר כל סיבוב של טריטורציה לצינור 10 מיליליטר עם supernatant מן הטריוטורציה הראשונה. הוסף מספיק מדיה תרבותית כדי להביא את עוצמת הקול לשמונה עד עשרה מיליליטר.מערבבים בעדינות מתלי תאים וכמתו את צפיפות התאים באמצעות מד חמוציטים. הפץ את ההשעיה התא לתוך הבאר בצפיפות התא המתאימה לניסויים. מערבבים את ההשעיה התא ללא הרף במהלך תהליך הציפוי כדי להבטיח חלוקה שווה של תאים לתוך הבארות.לניתוח מורפולוגי, לוח התאים סביב 8, 000 תאים לגם בצלחת 24 באר. ולפרוטוקולים גנומיים ופרוטומיים, לוח התאים גבוה ככל 30, 000 תאים ל הבאר. מעבירים את הצלחות לתיעוב זכוכית עם מים סטריליים בתחתית כדי ליצור תא לח.להזריק מספיק CO2, סביב 120 מיליליטר, כדי לקבל סביבה 5%CO2 ב desiccator, לפני האיטום. לשמור על הצלחות ב 35.5 מעלות צלזיוס. פעולה זו נקראת יום אפס בפרוטוקול.צלחות אלה יכולות להישמר גם באינקובטור רגיל של 5%CO2. השיטה המתוארת לעיל ממזערת את שינויי הטמפרטורה וה- pH וגם מסייעת במניעת זיהום צולב. תחזוקה של נוירונים SCG מתורבתים וטיפולים.תמונות אלה מראות את תאי הגנגליה הצוואריים המעולה המנותקים ביום אפס, ביום הראשון וביום החמישי. תמונת היום אפס מציגה את התאים בעת הציפוי. התאים המ מצופים ביום אפס מכילים תערובת של תאים עצביים ולא עצביים.ביום הראשון, 24 שעות לאחר הציפוי, להסיר בזהירות מחצית התקשורת התרבותית ולהחליף עם שני micromolar ארה-C, ציטוסין D-arabinofuranoside, סוכן אנטי מיתוטי. השאירו את הטיפול בתאים למשך 48 שעות. בדרך כלל אורך זה של טיפול מספיק כדי לחסל תאים שאינם עצביים בתרבות.ביום השלישי, שאף בעדינות חצי מהמדיום והחלף באמצעי בקרה. ביום הרביעי, התאים מוכנים לטיפולים ניסיוניים. להאכיל תרבויות כל יומיים עם המדיום המתאים.מחליפים בעדינות חצי מהמדיום היטב במדיום טרי. התמונה ביום החמישי מראה צמיחה אקסונאלית נרחבת ללא צמיחה דנדריטית שנצפתה. כדי לגרום לצמיחה דנדריטית, נוירונים ניתן לגדל על Matrigel או מטופלים עם 10% סרום או 50 ננוגרם למיליליטר של חלבון מורפגנטי עצם-7.איור 2 מראה שינויים במורפולוגיה העצבית של נוירונים SCG עכברוש E21 בעקבות טיפול עם BMP-7. מיקרוגרפים ניגודיות פאזה ייצוגית בהגדלה של 10 X מראים את גוף התא העצבי המעגלי עם אקסונים בנוירונים בקרה בפאנל A, ותאי עצב עם תהליכים קצרים דמויי דנדריט מרובים כאשר מטופלים עם BMP-7 המוצגים על ידי החצים בפאנל B.Cultured SCG נוירונים בעקבות טיפולים מתאימים ניתן להשתמש בניתוח מורפולוגי באמצעות כתמים אימונוציטוכימיים לניתוח גנומי כגון ניתוחים פרוטומיים. עיין בכתב היד לקבלת פרוטוקולים מפורטים לכשל חיסוני והכנה לדוגמה לניתוח פרוטומי.איור 3 מראה כשל חיסוני מחלבון MAP-2 בחולדות עובריות מתורבתות נוירונים סימפטיים. לוחות A עד D להראות נוירונים SCG מתורבתים שטופלו עם מדיה שליטה לוחות E דרך H להראות נוירונים שטופלו BMP-7 ב 50 ננוגרם למיליליטר במשך חמישה ימים. מיקרוגרפים מייצגים המראים כתמים אימונוציטוכימיים של הנוירונים עם מיקרוטובול הקשורים לחלבון-2 ב- C ו- G, כתם גרעיני ב- D ו- H עם מיקרוגרפים ניגודיות פאזה ב- B ו- F, ולצאת משלושת הערוצים בכתמים A ו- D.Immunocytochemical ממיקרוטובול הקשורים לחלבון-2 קיים בגוף התא ואקסונים פרוקסימליים של נוירוני בקרה בפאנל C. וכתמים מחלבון MAP-2 בגוף התא ודנדריטים בנוירונים שטופלו ב-BMP-7 נמצאים בפאנל G.Here' הוא מדגם של גרפליה צוואר הרחם מעולה שטופלה במדיה שולטת, שזיהתה 1,100 חלבונים.ג'ין אונטולוגיה באמצעות מסד הנתונים של הפנתר מצאה שרוב החלבונים היו ציטופלסמיים. עם זאת, היו חלבונים וחלבונים הקשורים קרום בצמתים הסלולר המדגם. ניתוח זה גילה גם כי חלבונים המעורבים במגוון רחב של מסלולי איתות עצביים זוהו המדגם.לסיכום, לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להיות מסוגל לבודד ולתרבת נוירונים גנגליון צוואר הרחם עוברי מעולה עבור ניתוח מורפולוגי ופרוטומי. עבודה זו מומנה על ידי קרן פיתוח הפקולטה ותוכנית מחקר הקיץ במכללת סנט מרי בקליפורניה.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Neuroscience

Unit 1

The Autonomic Nervous System

SCIENTISTS IN ACTION

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissection והתרבות של נוירונים Commissural מחוט השדרה עובריים

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Physiological, Morphological and Neurochemical Characterization of Neurons Modulated by Movement

אפיון פיזיולוגיים, מורפולוגי והעצבית של נוירונים מווסתת על ידי תנועת

The role of individual neurons and their function in neuronal circuits is fundamental to understanding the neuronal mechanisms of sensory and motor ...

Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury

הכרומטין immunoprecipitation מרקמות השורש הגבי הגרעינים בעקבות פציעה axonal

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after ...

Cerebrovascular Casting of the Adult Mouse for 3D Imaging and Morphological Analysis

יציקה של כלי דם במוח העכבר למבוגרים הדמיה 3D ו ניתוח מורפולוגי

Vascular imaging is crucial in the clinical diagnosis and management of cerebrovascular diseases, such as brain arteriovenous malformations (BAVMs). ...

Inducing Dendritic Growth in Cultured Sympathetic Neurons

גרימת צמיחה הדנדריטים בנוירונים אוהדים מתורבתים

The shape of the dendritic arbor determines the total synaptic input a neuron can receive 1-3, and influences the types and distribution of these inputs ...

Production and Isolation of Axons from Sensory Neurons for Biochemical Analysis Using Porous Filters

הפקה ובידוד של אקסונים מסנסורי ביוכימית ניתוח באמצעות מסננים נקבוביים

Neuronal axons use specific mechanisms to mediate extension, maintain integrity, and induce degeneration. An appropriate balance of these events is ...

A Method of Nodose Ganglia Injection in Sprague-Dawley Rat

שיטה של ​​הזרקת Nodose הגרעינים בSprague-Dawley עכברוש

Afferent signaling via the vagus nerve transmits important general visceral information to the central nervous system from many diverse receptors located ...

Diffusion Imaging in the Rat Cervical Spinal Cord

ההדמיה דיפוזיה בחוט השדרה עכברוש צוואר הרחם

Magnetic resonance imaging (MRI) is the state of the art approach for assessing the status of the spinal cord noninvasively, and can be used as a ...

Functional and Morphological Assessment of Diaphragm Innervation by Phrenic Motor Neurons

הערכה תפקודית ומורפולוגי של סרעפת עצבוב על ידי סרעפת מנוע נוירונים

This protocol specifically focuses on tools for assessing phrenic motor neuron (PhMN) innervation of the diaphragm at both the electrophysiological and ...

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

הקרינה ופליטת אור הדמיה של Ca subcellular<sup&gt; 2 +</sup&gt; בבני נוירונים בהיפוקמפוס

Susceptibility to neuron cell death associated to neurodegeneration and ischemia are exceedingly increased in the aged brain but mechanisms responsible ...