Name: culturing rat sympathetic neurons from embryonic superior cervical ganglia for morphological and proteomic analysis
Uploaded: 2020-09-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Culturing Rat Sympathetic Neurons from Embryonic Superior Cervical Ganglia for Morphological and Proteomic Analysis at JoVE.com

Bu çalışma, Saint Mary's College of California'daki Fakülte Geliştirme Fonu ve Yaz Araştırma Programı hibesi tarafından desteklenmiştir. Yazarlar ayrıca Davis California Üniversitesi'nden Dr. Pamela Lein'e ve UC Berkeley Kütle spektrometresi tesisinden Dr. Anthony Iavarone'ye bu protokollerin geliştirilmesi sırasında ki tavsiyeleri için teşekkür etmek isterler. Yazarlar ayrıca Video prodüksiyonu ve kurgusu ndaki yardımları için Saint Mary's College of California'daki College Communications OfisindeHaley Nelson'a teşekkür etmek istiyor.

Hayvanlarla ilgili çalışmalarda yapılan tüm prosedürler, Saint Mary's College of California'daki Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. Saint Mary's College'daki hayvan bakımı ve kullanım kılavuzları, Ulusal Sağlık Enstitüsü'ndeki (https://olaw.nih.gov/sites/default/files/PHSPolicyLabAnimals.pdf ve https://olaw.nih.gov/sites/default/files/Guide-for-the-Care-and-Use-of-Laboratory-Animals.pdf) Laboratuvar Hayvan Refahı Ofisi tarafından sağlanan yönergelere gör...

<ol>
	<li>Rees, R. P., Bunge, M. B., Bunge, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+Changes+in+the+neuritic+growth+cone+and+target+neuron+during+synaptic+junction+development+in+culture.">Morphological Changes in the neuritic growth cone and target neuron during synaptic junction development in culture.</a> Journal of Cell Biology. 9, (1976).</li><li>Chandrasekaran, V., Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Dendritogenesis+in+Sympathetic+Neurons.">Regulation of Dendritogenesis in Sympathetic Neurons.</a> Autonomic Nervous System. , (2018).</li><li>Higgins, D., Burack, M., Lein, P., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+neuronal+polarity.">Mechanisms of neuronal polarity.</a> Current Opinion in Neurobiology. 7 (5), 599-604 (1997).</li><li>Lein, P., Guo, X., Hedges, A. M., Rueger, D., Johnson, M., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+Extracellular+Matrix+And+Osteogenic+Protein-1+on+the+morphological+differentiation+of+rat+sympathetic+neurons.">The effects of Extracellular Matrix And Osteogenic Protein-1 on the morphological differentiation of rat sympathetic neurons.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 14 (3), 203-215 (1996).</li><li>Kobayashi, M., Fujii, M., Kurihara, K., Matsuoka, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+morphogenetic+protein-2+and+retinoic+acid+induce+neurotrophin-3+responsiveness+in+developing+rat+sympathetic+neurons.">Bone morphogenetic protein-2 and retinoic acid induce neurotrophin-3 responsiveness in developing rat sympathetic neurons.</a> Molecular Brain Research. 53 (1-2), 206-217 (1998).</li><li>Burnham, P., Louis, J. C., Magal, E., Varon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+ciliary+neurotrophic+factor+on+the+survival+and+response+to+nerve+growth+factor+of+cultured+rat+sympathetic+neurons.">Effects of ciliary neurotrophic factor on the survival and response to nerve growth factor of cultured rat sympathetic neurons.</a> Developmental Biology. 161 (1), 96-106 (1994).</li><li>Hou, X. E., Li, J. Y., Dahlstr&#246;m, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clathrin+light+chain+and+synaptotagmin+I+in+rat+sympathetic+neurons.">Clathrin light chain and synaptotagmin I in rat sympathetic neurons.</a> Journal of the Autonomic Nervous System. 62 (1-2), 13-26 (1997).</li><li>Harris, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+Guidance+by+a+Decellularized+Fibroblast+Extracellular+Matrix.">Nerve Guidance by a Decellularized Fibroblast Extracellular Matrix.</a> Matrix Biology. , 176-189 (2017).</li><li>Wingerd, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;4+integrins+and+vascular+cell+adhesion+molecule-1+play+a+role+in+sympathetic+innervation+of+the+heart.">&#945;4 integrins and vascular cell adhesion molecule-1 play a role in sympathetic innervation of the heart.</a> Journal of Neuroscience. 22 (24), 10772-10780 (2002).</li><li>Higgins, D., Lein, P., Osterhout, D. J., Johnson, M., Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+culture+of+autonomic+neurons.">Tissue culture of autonomic neurons.</a> Culturing Nerve Cells. , 177-205 (1991).</li><li>Lein, P., Johnson, M., Guo, X., Rueger, D., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+protein-1+induces+dendritic+growth+in+rat+sympathetic+neurons.">Osteogenic protein-1 induces dendritic growth in rat sympathetic neurons.</a> Neuron. 15 (3), 597-605 (1995).</li><li>Bruckenstein, D. A., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+differentiation+of+embryonic+rat+sympathetic+neurons+in+tissue+culture.">Morphological differentiation of embryonic rat sympathetic neurons in tissue culture.</a> Developmental Biology. 128 (2), 337-348 (1988).</li><li>Voyvodic, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+regulation+of+dendrites+in+the+rat+superior+cervical+ganglion.">Development and regulation of dendrites in the rat superior cervical ganglion.</a> The Journal of Neuroscience. 7 (3), 904-912 (1987).</li><li>Garred, M. M., Wang, M. M., Guo, X., Harrington, C. A., Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+Responses+of+Cultured+Rat+Sympathetic+Neurons+during+BMP-7-Induced+Dendritic+Growth.">Transcriptional Responses of Cultured Rat Sympathetic Neurons during BMP-7-Induced Dendritic Growth.</a> PLoS ONE. 6 (7), 21754 (2011).</li><li>Pravoverov, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+are+Necessary+for+BMP-7-induced+Dendritic+Growth+in+Cultured+Rat+Sympathetic+Neurons.">MicroRNAs are Necessary for BMP-7-induced Dendritic Growth in Cultured Rat Sympathetic Neurons.</a> Cellular and Molecular Neurobiology. 39 (7), 917-934 (2019).</li><li>Natera-Naranjo, O., Aschrafi, A., Gioio, A. E., Kaplan, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+quantitative+analyses+of+microRNAs+located+in+the+distal+axons+of+sympathetic+neurons.">Identification and quantitative analyses of microRNAs located in the distal axons of sympathetic neurons.</a> RNA (New York, N.Y.). 16 (8), 1516-1529 (2010).</li><li>Aschrafi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+mediates+the+axonal+trafficking+of+tyrosine+hydroxylase+and+dopamine+&#946;-hydroxylase+mRNAs+and+enhances+norepinephrine+synthesis+in+primary+sympathetic+neurons.">Angiotensin II mediates the axonal trafficking of tyrosine hydroxylase and dopamine &#946;-hydroxylase mRNAs and enhances norepinephrine synthesis in primary sympathetic neurons.</a> Journal of Neurochemistry. 150 (6), 666-677 (2019).</li><li>Ghogha, A., Bruun, D. a., Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducing+dendritic+growth+in+cultured+sympathetic+neurons.">Inducing dendritic growth in cultured sympathetic neurons.</a> Journal of Visualized Experiments. (61), 4-8 (2012).</li><li>Caceres, A., Banker, G., Steward, O., Binder, L., Payne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAP2+is+localized+to+the+dendrites+of+hippocampal+neurons+which+develop+in+culture.">MAP2 is localized to the dendrites of hippocampal neurons which develop in culture.</a> Brain Research. 315 (2), 314-318 (1984).</li><li>Guo, X., Rueger, D., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+protein-1+and+related+bone+morphogenetic+proteins+regulate+dendritic+growth+and+the+expression+of+microtubule-associated+protein-2+in+rat+sympathetic+neurons.">Osteogenic protein-1 and related bone morphogenetic proteins regulate dendritic growth and the expression of microtubule-associated protein-2 in rat sympathetic neurons.</a> Neuroscience Letters. 245 (3), 131-134 (1998).</li><li>Mi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PANTHER+version+11:+Expanded+annotation+data+from+Gene+Ontology+and+Reactome+pathways,+and+data+analysis+tool+enhancements.">PANTHER version 11: Expanded annotation data from Gene Ontology and Reactome pathways, and data analysis tool enhancements.</a> Nucleic Acids Research. 45, 183-189 (2017).</li><li>Chandrasekaran, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoic+acid+regulates+the+morphological+development+of+sympathetic+neurons.">Retinoic acid regulates the morphological development of sympathetic neurons.</a> Journal of Neurobiology. 42 (4), (2000).</li><li>Courter, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BMP7-induced+dendritic+growth+in+sympathetic+neurons+requires+p75+NTR+signaling.">BMP7-induced dendritic growth in sympathetic neurons requires p75 NTR signaling.</a> Developmental Neurobiology. 76 (9), 1003-1013 (2016).</li><li>Lein, P. J., Fryer, A. D., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Culture:+Autonomic+and+Enteric+Neurons.">Cell Culture: Autonomic and Enteric Neurons.</a> Encyclopedia of Neuroscience. , 625-632 (2009).</li><li>Neto, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmentalized+Microfluidic+Platforms:+The+Unrivaled+Breakthrough+of+In+vitro+Tools+for+Neurobiological+Research.">Compartmentalized Microfluidic Platforms: The Unrivaled Breakthrough of In vitro Tools for Neurobiological Research.</a> Journal of Neuroscience. 36 (46), 11573-11584 (2016).</li><li>Sleigh, J. N., Weir, G. A., Schiavo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple,+step-by-step+dissection+protocol+for+the+rapid+isolation+of+mouse+dorsal+root+ganglia.">A simple, step-by-step dissection protocol for the rapid isolation of mouse dorsal root ganglia.</a> BMC Research Notes. 9 (1), 82 (2016).</li><li>Conrad, R., Jablonka, S., Sczepan, T., Sendtner, M., Wiese, S., Klausmeyer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lectin-based+isolation+and+culture+of+mouse+embryonic+motoneurons.">Lectin-based isolation and culture of mouse embryonic motoneurons.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), e3200 (2011).</li><li>Takeuchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfabricated+device+for+co-culture+of+sympathetic+neuron+and+iPS-derived+cardiomyocytes.">Microfabricated device for co-culture of sympathetic neuron and iPS-derived cardiomyocytes.</a> Proceedings of the Annual International Conference of the IEEE Engineering in Medicine and Biology Society, EMBS. 2013, 3817-3820 (2013).</li><li>Takeuchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+semi-separated+co-culture+system+of+sympathetic+neuron+and+cardiomyocyte.">Development of semi-separated co-culture system of sympathetic neuron and cardiomyocyte.</a> Proceedings of the 31st Annual International Conference of the IEEE Engineering in Medicine and Biology Society: Engineering the Future of Biomedicine, EMBC 2009. , 1832-1835 (2009).</li><li>Chandrasekaran, V., Lea, C., Sosa, J. C., Higgins, D., Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+are+involved+in+BMP-induced+dendritic+growth+in+cultured+rat+sympathetic+neurons.">Reactive oxygen species are involved in BMP-induced dendritic growth in cultured rat sympathetic neurons.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 67, (2015).</li><li>Kim, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statins+decrease+dendritic+arborization+in+rat+sympathetic+neurons+by+blocking+RhoA+activation.">Statins decrease dendritic arborization in rat sympathetic neurons by blocking RhoA activation.</a> Journal of Neurochemistry. 108 (4), 1057-1071 (2009).</li><li>Dalby, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+transfection+with+Lipofectamine+2000+reagent:+Primary+neurons,+siRNA,+and+high-throughput+applications.">Advanced transfection with Lipofectamine 2000 reagent: Primary neurons, siRNA, and high-throughput applications.</a> Methods. 33 (2), 95-103 (2004).</li><li>Szpara, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+gene+expression+during+neurite+outgrowth+and+regeneration.">Analysis of gene expression during neurite outgrowth and regeneration.</a> BMC Neuroscience. 8 (1), 100 (2007).</li><li>Pop, C., Mogosan, C., Loghin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+rapigest+efficacy+for+the+digestion+of+proteins+from+cell+cultures+and+heart+tissue.">Evaluation of rapigest efficacy for the digestion of proteins from cell cultures and heart tissue.</a> Clujul Medical. 87 (4), 5 (2014).</li><li>Vit, O., Petrak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integral+membrane+proteins+in+proteomics.+How+to+break+open+the+black+box.">Integral membrane proteins in proteomics. How to break open the black box.</a> Journal of Proteomics. 153, 8-20 (2017).</li></ol>

Bu yazı, embriyonik sıçan yavrularının üstün servikal gangliyonundan sempatik nöronların kültürlendirilmesi için protokolleri açıklamaktadır. Bu model sistemi kullanmanın avantajları, büyüme faktörlerine benzer bir yanıt veren nöronların homojen bir popülasyon elde etmek mümkün olmasıdır, ve bu nöronlar için büyüme faktörü gereksinimleri iyi karakterize olduğundan, serumsuz koşullar altında, tanımlanmış ortamda vitro bu nöronlar büyümek mümkündür10. Pr...

Embriyonik superior servikal gangliyondan (SCG) elde edilen sempatik nöronlar, büyüme faktörü bağımlılığı da dahil olmak üzere nöronal gelişimin birçok yönünü incelemek için yaygın olarak birincil nöronal kültür sistemi olarak kullanılmaktadır. nöron hedef etkileşimleri, nörotransmitter sinyalizasyon, aksonal büyüme, dendrite gelişimi ve plastisite, sinaptogenez ve sinir-hedef /nöron-glia etkileşimleri altında yatan sinyal mekanizmaları1,2,3,4,5,6,7,8,9. Onların küçük boyutuna rağmen (yaklaşık 10000 nöronlar / ganglia), gelişimi ve bu kültür sisteminin yaygın kullanımı için üç ana nedeni vardır i) sempatik zincirinde ilk ganglia olmak, onlar daha büyük, ve bu nedenle izole etmek daha kolay, sempatik ganglia geri kalanından daha10; ii) merkezi nöronlar aksine, SCG nöronlar oldukça nöral ibik türetilen tüm nöronlar ile homojen, benzer bir boyuta sahip, sinir büyüme faktörü bağımlılığı ve ne adrenerjik olmak. Bu onları morfolojik ve genomik çalışmalar için değerli bir model yapar10,11 ve iii) Bu nöronlar bir ay boyunca sinir büyüme faktörü içeren tanımlanmış bir serum içermeyen ortamda muhafaza edilebilir10,12. Perinatal SCG nöronlar yoğun olarak dendritlerin başlatılması ve bakımı altında yatan mekanizmaları incelemek için kullanılmıştır2. Bunun başlıca nedeni, SCG nöronlar in vivo geniş bir dendritik arbor olmasına rağmen, onlar serum yokluğunda in vitro dendritler uzatmak yok ama kemik morfogenetik proteinler 2 gibi bazı büyüme faktörlerinin varlığında dendritler büyümeye indüklenebilir2,12,13.
Bu yazıda embriyonik sıçan SCG nöronların izole ve culturing için protokol açıklanmaktadır. Son 50 yıl içinde, SCG birincil nöronal kültürler ağırlıklı olarak büyük ölçekli genomik veya proteomik değişiklikleri inceleyen çalışmalar sınırlı sayıda morfolojik çalışmalar için kullanılmıştır. Bunun başlıca nedeni düşük miktarda DNA veya proteinin izole edilmesiyle sonuçlanan küçük doku boyutudur, bu da bu nöronlar üzerinde genomik ve proteomik analizlerin gerçekleştirilmesini zorlaştırır. Ancak, son yıllarda, artan algılama duyarlılığı dendritik büyüme gelişimi sırasında SCG nöronlarda genom, miRNom ve proteom incelemek için yöntemlerin geliştirilmesini sağlamıştır14,15,16,17. Bu yazı da immünositokimya ve kütle spektrometrik analizi için nöronal protein özleri elde etmek için bir protokol kullanarak bu nöronların morfolojik analizi için yöntem açıklayacağız.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2D nanoACQUITY</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BMP-7</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>354-BP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Alumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>5470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell scraper</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS-3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase</td>
			<td>Worthington Biochemical</td>
			<td>4176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Costar or Nunc Flat bottomed Cell culture plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-200, 140675, 142475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytosine- &#946;- D-arabinofuranoside</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1768</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-phosphate buffered saline (Calcium and magnesium free)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4942078001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled Water</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM - Low glucose + Glutamine, + sodium pyruvate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fatty Acid Free BSA</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>126609</td>
			<td>20 mg/mL stock in low glucose DMEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps Dumont no.4 and no.5</td>
			<td>Ted Pella Inc</td>
			<td>5621, 5622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps and Scissors for Dissection</td>
			<td>Ted Pella Inc</td>
			<td>1328, 1329, 5002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverlips - 12mm</td>
			<td>Neuvitro Corporation</td>
			<td>GG-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat-Anti Mouse IgG Alexa 488 conjugated</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A32723</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#39;s F-12 Nutrient Mix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11765</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s balanced salt soltion (Calcium and Magnesium free)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin-Selenium-Transferrin (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>41400-045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodoacetamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A3221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz L-15 medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11415064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting media for glass coverslips</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P36931, P36934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse-anti- MAP2 antibody (SMI-52)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>SMI 52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nerve growth factor</td>
			<td>Envigo Bioproducts (formerly Harlan Bioproducts)</td>
			<td>BT5017</td>
			<td>Stock 125 &#956;g/mL in 0.2% Prionex in DMEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehye</td>
			<td>Spectrum Chemicals</td>
			<td>P1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-D-Lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0899</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prionex</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>529600</td>
			<td>10% solution, 100 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RapiGest SF</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186001861</td>
			<td>5 X 1 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synapt G2 High Definition Mass Spectrometry</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trifluoro acetic acid - Sequencing grade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>28904</td>
			<td>10 X 1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Promega or NEB</td>
			<td>V511A, P8101S</td>
			<td>100 &#956;g or 5 X 20 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waters Total recovery vials</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186000385c</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

culturing rat sympathetic neurons from embryonic superior cervical ganglia for morphological and proteomic analysis

Embriyonik sıçan üstün servikal gangliyonunsempatik nöronlar (SCG) aksonal büyüme, aksonal kaçakçılık, sinaptogenez, dendritik büyüme, dendritik plastitik plastisite ve eş-kültür sistemlerinde sinir hedef etkileşimleri incelemek için periferik nöronlar için bir in vitro model sistemi olarak kullanılmıştır. Bu protokol, E21 sıçan embriyolarının üstün servikal ganglinden nöronların izolasyonunu ve ayrıştırMalarını, ardından serumsuz ortamda saf nöronal kültürlerin hazırlanması nı ve bakımını açıklar. Nöronlar kaplamasız plastik yapışmaz olduğundan, nöronlar ya 12 mm cam kapakları veya poli-D-lizin ile kaplı 6-iyi plakalar kültürlü olacaktır. Bir antimitotik ajan (Ara-C, sitozin β-D-arabinofuranoside) ile yapılan tedavinin ardından, bu protokol% 5'ten az nöronal olmayan hücrelerile sağlıklı nöronal kültürler oluşturur, hangi in vitro bir ay boyunca muhafaza edilebilir. Embriyonik sıçan SCG nöronlar in vivo 5-8 dendritler ile multipolar olmasına rağmen; serumsuz koşullar altında, bu nöronlar kültürde sadece tek bir akson genişletmek ve kültür süresince tek kutuplu olmaya devam. Ancak, bu nöronlar bazal membran ekstresi varlığında dendritler uzatmak için indüklenebilir, kemik morfogenetik proteinler (BP), veya 10% fetal buzağı serum. Bu homojen nöronal kültürler immünositokimyasal boyama ve biyokimyasal çalışmalar için kullanılabilir. Bu yazıda ayrıca bu nöronlarda mikrotübül ilişkili protein-2 (MAP-2) için immünositokimyasal boyama ve kütle spektrometresi için nöronal ekstrelerin hazırlanması için optimize edilmiş protokol açıklanmaktadır.

Embriyonik SCG nöronların nöronal kültürleri izole etmek ve sürdürmek Sıçan embriyonik SCG'sinden ayrıştırılan hücreler poli-D-lizin kaplı plaka veya coverslip ile kaplandı ve b-sinir büyüme faktörü içeren serumsuz kültür ortamlarında muhafaza edildi. Nöronlar ve glial hücrelerin karışımını içeren ayrışmış hücreler kaplama üzerine dairesel görünürler (Şekil 1A). Kaplamadan sonraki 24 saat içinde nöronlar glial hücrelerin düze?...

Watch this Scientific Journal Video about Culturing Rat Sympathetic Neurons from Embryonic Superior Cervical Ganglia for Morphological and Proteomic Analysis at JoVE.com

Culturing Rat Sympathetic Neurons from Embryonic Superior Cervical Ganglia for Morphological and Proteomic Analysis

Bu yazı, embriyonik sıçan sempatik nöronların superior servikal gangliyondan izole ve kültürlenmesini açıklamaktadır. Ayrıca immünositokimyasal boyama ve kütle spektrometrik analizi için nöronal özler hazırlamak için ayrıntılı protokoller sağlar.

Morfolojik ve Proteomik Analiz için Embriyonik Superior Servikal Ganglia'dan Sıçan Sempatik Nöronlarının Culturing

Sympathetic neurons from the embryonic rat superior cervical ganglia (SCG) have been used as an in vitro model system for peripheral neurons to study ...

Bu videoda, morfolojik ve proteomik analiz için embriyonik sıçanların superior servikal gangliyonunun culturing'ini göstereceğiz. Diseksiyona başlamadan önce kontrol ve diseksiyon ortamı nı hazırlayın. Kontrol ortamı F-12 ve düşük glukoz Lum içeren bir insülin-selenyum-transferrin karışımı ile takviye, glutamin, sinir büyüme faktörü, ve BSA.Diseksiyon ortamı, kalem-strep ve BSA ile birlikte L-15 içerir. Medya hazırlığı için ayrıntılı protokoller için el yazmasına bakın. Nöronların kültüre için plakahazırlanması.Steril distile su ile mililitre başına 100 mikrogram poli-D-lizin stoğu başına bir miligram seyreltin. Proteomik veya genomik analiz için, diseksiyondan bir ila iki gün önce, altı kuyulu plakaları yaklaşık iki mililitre steril 100 gram lık poli-D-lizin mililitresine katedin. Bu kuyuya hücre yapışmasını sağlamak için gereklidir.Plakaları yapışkan filmle sarın ve tabakları bir gecede dört derece saklayın. Diseksiyon günü, diseksiyon başlamadan önce, kuyulardan poli-D-lizin çözeltisini çıkarın ve kuyuları steril distile suyla beş kez durulayın, ardından düşük glikozlu DMEM ile bir kez durulayın. Gangliyonun enzimatik sindirimi sırasında, hücreleri kaplamadan yaklaşık bir saat önce, DMEM'i plakalardan aspire edin ve 0.3 mililitre kontrol ortamı ile değiştirin.Plakaları 35 derecede nemlendirilmiş bir odada %5 CO2 altında saklayın. Başlık, diseksiyon için aşağıdaki öğeleri ayarlayın. Her tüpte yaklaşık 20 mililitre diseksiyon media ile dört 50 mililitre steril konik tüpler.Dört steril 35 milimetrelik tabak ve 1.5 mililitre diseksiyon ortamı. Santrifüj için 20 mililitre diseksiyon media ile bir steril 50 mililitre konik tüp. Bir 15 mililitre steril konik tüp gangliyonu santrifüj için, bir steril 10 mililitre tüp ayrıştırılmış hücreleri toplamak için.En az bir dakika boyunca ince forseps bir çift sterilize etmek için kuru boncuk sterilizatör kullanın. Hayvanlarla ilgili çalışmalarda yapılan tüm prosedürler, Saint Mary's College of California'daki Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır. Saint Mary's College of California'daki hayvan bakımı ve kullanım kılavuzları, Ulusal Sağlık Enstitüleri'ndeki Laboratuvar Hayvan Refahı Ofisi tarafından sağlanan yönergelere göre geliştirilmiştir.Hamile sıçandan E21 embriyolarının alınması. Çevredeki alan iyice sterilize edilirse rahim boynuzunun çıkarılmasının kaputun dışında yapIlebilmektedir. Co2 soluma ile hamile bir sıçan ötenazi.Karın bölgesinden kürk yamak ve sterilize etmek için% 70 alkol ile bölgede cilt silin. Steril makas ve forceps taze bir set kullanarak, deri ve daha sonra embriyolar içeren rahim boynuzları ortaya çıkarmak için kas ile kesti. Bu süreçte bağırsaklara zarar vermemeye özen görerek yeni bir makas ve çalgılar seti kullanarak, embriyolarla rahim boynuzunu çıkarın.150 milimetre steril Petri çanak içine embriyolar ile rahim boynuzu transfer ve kaputiçine aktarın. Forceps ve makas yeni bir dizi kullanarak, rahim boynuzu gelen embriyolar kaldırmak ve amniyotik membranlar ve plasenta embriyoları ayırın. Embriyoları ötenazi yapmak için, sağ kol altında orta çizgi boyunca embriyoların omurilik kesti.Bu SCG çıkarılması sırasında karotis arter kanaması azaltacaktır. Bu embriyoları diseksiyon ortamı içeren hazırlanmış 50 mililitrelik konik tüplere aktarın. Embriyoların medyaya gömüldüğünü emin ol.Her tüp üç embriyo tutabilir. Embriyodan superior servikal ganglion izolasyonu. Diseksiyon medyasından bir yavruyu, substrat üzerindeki dorsal yüzeyi ile yarı katı substratla dolu steril 150 milimetrelik Petri kabına aktarın.Üç steril 23 gauge iğnekullanarak, dikkatle boyun hiperextend ağız yoluyla her kol altında bir iğne ve ağız yoluyla üçüncü bir iğne ile çanak pub pin. Altında tükürük bezleri ortaya çıkarmak için steril ince çalgılar kullanarak boyun bölgesinde deri ile kesin. İnce forceps kullanarak bu bezleri çıkarın.Sırasıyla köprücük kemiği ve trakea yakın sternokleidomastoid ve omohyoid kasları bulun. İlk olarak, enine sternokleidomastoid kasları kesin. Ve sonra dikkatle ince forceps kullanarak ince omohyoid kas kesti.Bu kaslar çıkarıldıktan sonra, ön uçta karotis arter bifurkasyon, karotis arter bu çatal altında bulunan SCG ile trakea nın her iki tarafında görünür olacaktır. Kapalı forseps kullanarak, scg görselleştirmek için yavaşça karotis arter kaldırın. SCG'nin her iki tarafında bir tane forceps kullanarak karotisi çıkarın ve hazırlanan steril 35 milimetrelik yemeklere aktarın.Bu doku büyük olasılıkla karotis arter ile SCG içerecektir, nodose gangliyonu ile vagus sinir, yanı sıra bölgede kas veya yağ diğer segmentleri. Diğer taraftaki diseksiyon işlemini tekrarlayın. Özetlenen kalan diseksiyon adımlarına devam etmeden önce tüm embriyolardan SG'leri çıkarın.Doku örneklerinin işlenmesini kolaylaştırmak için izole edilmiş dokuları 35 milimetrelik tabakların ikisi arasında dağıtın. SCG'nin işlenmesinden sonra. SCG'yi parçalanmış dokudan ayırmak için, önce karotis bifurkasyona yakın bölgeden uzak durmaya özen görerek kas veya yağ gibi yabancı olmayan dokuları çıkarmak için ince kesetler kullanın.Bu dokular çıkarıldıktan sonra, iki gangliyon görünür. SCG badem şeklinde iken nodose ganglion küçük ve dairesel. Vagus sinirini ve nodose ganglionu karotisten ayırmak için vagus sinirini yavaşça çekin ve scg'yi karotis arterden ayırın.SCG çevreleyen kapsül kaldırmak için ince forceps kullanın. SCG'yi 35 milimetrelik yeni bir kültür yemeğine aktarın. Bu işlemi tüm diseksiyonlu doku örnekleri ile tekrarlayın.Dokunun pipet duvarlarına yapışmasını önlemek için sterilize edilmiş, pamukla tıkanmış cam pipeti diseksiyonu ile kaplayın. Dokuların parçalanmasına yardımcı olmak için diseksiyon ortamını steril iki mililitre kollajenaz tip II, kalsiyum ve magnezyumiçermeyen HBSS'de dispase tip II ve 37 santigrat derecede 50 dakika kuluçkaya yatırmak için pipetkullanın. Kuluçka sürelerinin farklı kollajenaz/dispase gruplarla optimize edilmesi gerekebileceğini ve genellikle 40 dakika ile bir saat arasında değişeceğini unutmayın.Kuluçkadan sonra, SG'leri ve kollajenaz/dispase'yi steril 15 mililitrelik konik tüpe aktarın. Plakaları durulamak ve çözeltiyi tüpe aktarmak için diseksiyon ortamını kullanın. Yaklaşık 10 mililitre ses getirmek için yeterli diseksiyon ortamı ekleyin.200 x g, 1, 000-1, 200 rpm oda sıcaklığında beş dakika boyunca santrifüj numune pelet. Supernatant aspire, pelet yerinden değil dikkat. 10 mililitre diseksiyon media ile peleti yeniden askıya alın, santrifüjü tekrarlayın ve süpernatantı atın.Kültür ortamının bir ila iki mililitre ile değiştirin. Dar delikli, bükülmüş uçlu steril Pasteur pipetini kullanarak, kültür ortamıyla ön katlayın, beş ila altı kez hafifçe triturating ederek kümeleri mekanik olarak ayrıştırın. Büyük kümeler yaklaşık bir dakika razı olsun ve yeni bir 10 mililitrelik tüp için supernatant hücre süspansiyon aktarın.SG'lerin neredeyse tamamen ayrışmasını sağlamak için her seferinde artan üç triturasyon kuvveti ile bu işlemi üç kez daha tekrarlayın. Hacmi sekiz ila 10 mililitreye çıkaracak kadar kültür ortamı ekleyin.Bir hücre süspansiyonuna yavaşça karıştırın ve hücre yoğunluğunu hemositometre ile ölçün. Deneyler için uygun hücre yoğunluğunda hücre süspansiyonu kuyulara dağıtın. Hücrelerin kuyulara eşit şekilde dağıtılmasını sağlamak için kaplama işlemi sırasında hücre süspansiyonuna sürekli olarak karıştırın.Morfolojik analiz için, 24 kuyulu bir plaka da kuyu başına 8.000 hücre etrafında hücreleri plaka. Ve genomik ve proteomik protokoller için, hücreleri kuyu başına 30.000 hücreye kadar çık. Bir nemli oda oluşturmak için alt steril su ile bir cam kurutucu plakaları aktarın.Sızdırmazlıktan önce kurutucuda %5 CO2 ortamı elde etmek için yeterli CO2 enjekte edin, yaklaşık 120 mililitre. Plakaları 35.5 santigrat derecede koruyun. Bu, protokolde sıfır günü olarak adlandırılır.Bu plakalar aynı zamanda düzenli olarak %5 CO2 inkübatörde muhafaza edilebilir. Yukarıda açıklanan yöntem sıcaklık ve pH değişikliklerini en aza indirir ve çapraz kontaminasyonu önlemeye yardımcı olur. Kültürdeki SCG nöronların ve tedavilerin bakımı.Bu resimler, birinci gün, birinci gün ve beşinci gün, parçalanmış superior servikal gangliyon hücrelerini gösteriyor. Gün sıfır görüntü kaplama üzerine hücreleri gösterir. Sıfır.İlk gün, kaplamadan 24 saat sonra, kültür medyasının yarısını dikkatlice çıkarın ve iki mikromolar Ara-C, sitozin D-arabinofuranoside, bir anti-mitotik ajan ile değiştirin. Tedaviyi 48 saat boyunca hücrelerde bırakın. Genellikle tedavi nin bu uzunluğu kültürde olmayan nöronal hücreleri ortadan kaldırmak için yeterlidir.Üçüncü gün, yavaşça yarım orta aspire ve kontrol ortamı ile değiştirin. Dördüncü günde, hücreler deneysel tedaviler için hazır. Kültürleri her gün uygun ortamla besleyin.Kuyudaki ortamın yarısını taze orta ile hafifçe değiştirin. Beşinci gündeki resimde dendritik büyüme gözlenmeden geniş aksonal büyüme görülmektedir. Dendritik büyümeyi sağlamak için, nöronlar Matrigel'de yetiştirilebilir veya kemik morfogenetik protein-7 mililitrebaşına %10 serum veya 50 nanogram ile tedavi edilebilir.Şekil 2, BMP-7 ile tedavi den sonra E21 sıçan SCG nöronlarının nöronal morfolojisinde değişiklikler göstermektedir. 10 X büyütmede temsili faz kontrast mikrografları, a panelindeki kontrol nöronlarında aksonlu dairesel nöronal hücre gövdesini ve uygun tedavileri takiben B.Kültür dönemli SCG nöronlarında oklarla gösterilen BMP-7 ile tedavi edildiğinde birden fazla kısa dendrite benzeri prosese sahip nöronların genomik analiz ve biyokimyasal çalışmalar için immünositokimyasal boyama kullanılarak morfolojik analiz için kullanılabileceğini göstermektedir. proteomik analizler gibi. İmmünboyama ve proteomik analiz için numune hazırlama için ayrıntılı protokoller için el yazmasına bakın.Şekil 3 kültürlü embriyonik sıçanlarda MAP-2 proteininden immünboylama gösterir sempatik nöronlar. Paneller A d göstermek kültürlü SCG nöronlar kontrol ortamı ve paneller E H ile tedavi göstermek nöronlar BMP-7 ile tedavi 50 mililitre başına nanogram beş gün boyunca. C ve G'de mikrotübül ilişkili protein-2 ile nöronların immünositokimyasal boyanmasını gösteren temsili mikrograflar, B ve F faz kontrast mikrograflar ile D ve H bir nükleer leke, ve Mikrotübile ilişkili protein-2 gelen A ve D.Immunocytochemical boyama üç kanal ortaya hücre vücudunda ve panel C kontrol nöronların proksimal aksonları mevcut.Ve hücre vücudunda MAP-2 protein boyama , ve BMP-7 tedavi nöronlarda dendritler panel G.Here kontrol ortamı ile tedavi üstün servikal ganglia bir örnek çalışma, tespit 1, 100 protein.Panther veritabanını kullanan gen ontolojisi proteinlerin çoğunun sitoplazmik olduğunu buldu. Ancak, örnekte hücresel kavşaklarda membrana bağlı proteinler ve proteinler vardı. Bu analiz ayrıca, örneklemde çok çeşitli nöronal sinyal yollarında yer alan proteinlerin tespit edildiğini ortaya koymuştur.Sonuç olarak, bu videoyu izledikten sonra, morfolojik ve proteomik analiz için sıçan embriyonik üstün servikal ganglion nöronlar izole etmek ve kültür gerekir. Bu çalışma, Saint Mary's College of California'daki fakülte geliştirme fonu ve yaz araştırma programı tarafından finanse edilmiştir.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Neuroscience

Unit 1

The Autonomic Nervous System

SCIENTISTS IN ACTION

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Embriyonik Omurilik Commissural Nöronlar Diseksiyon ve Kültür

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Physiological, Morphological and Neurochemical Characterization of Neurons Modulated by Movement

Hareketi tarafından Modülasyonlu Nöronlar Fizyolojik, Morfolojik ve nörokimyasal Karakterizasyonu

The role of individual neurons and their function in neuronal circuits is fundamental to understanding the neuronal mechanisms of sensory and motor ...

Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury

Kromatin Aksonal Yaralanma Dorsal Kök Ganglia Doku Immunoprecipitation

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after ...

Cerebrovascular Casting of the Adult Mouse for 3D Imaging and Morphological Analysis

3D Görüntüleme ve Morfolojik Analizi Yetişkin Mouse Serebrovasküler Döküm

Vascular imaging is crucial in the clinical diagnosis and management of cerebrovascular diseases, such as brain arteriovenous malformations (BAVMs). ...

Inducing Dendritic Growth in Cultured Sympathetic Neurons

Kültür sempatik nöronlar bulunan dendritik Büyüme indükleyen

The shape of the dendritic arbor determines the total synaptic input a neuron can receive 1-3, and influences the types and distribution of these inputs ...

Production and Isolation of Axons from Sensory Neurons for Biochemical Analysis Using Porous Filters

Biyokimyasal Analiz için Duyu Nöronlar gelen üretim ve Aksonlar izolasyonu gözenekli Filtre Kullanma

Neuronal axons use specific mechanisms to mediate extension, maintain integrity, and induce degeneration. An appropriate balance of these events is ...

A Method of Nodose Ganglia Injection in Sprague-Dawley Rat

Sprague-Dawley Sıçan nodoz Ganglionlar Enjeksiyon Bir Yöntem

Afferent signaling via the vagus nerve transmits important general visceral information to the central nervous system from many diverse receptors located ...

Diffusion Imaging in the Rat Cervical Spinal Cord

Sıçan Servikal Spinal Kord difüzyon Görüntüleme

Magnetic resonance imaging (MRI) is the state of the art approach for assessing the status of the spinal cord noninvasively, and can be used as a ...

Functional and Morphological Assessment of Diaphragm Innervation by Phrenic Motor Neurons

Frenik Motor Nöronlar tarafından Diyafram İNNERVASYONU Fonksiyonel ve Morfolojik Değerlendirmesi

This protocol specifically focuses on tools for assessing phrenic motor neuron (PhMN) innervation of the diaphragm at both the electrophysiological and ...

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Subselüler Ca Floresans ve Biyoparlaklık Görüntüleme<sup&gt; 2+</sup&gt; Yaşlı Hipokampal Nöronlar

Susceptibility to neuron cell death associated to neurodegeneration and ischemia are exceedingly increased in the aged brain but mechanisms responsible ...