Name: x-ray crystallography to study the oligomeric state transition of the thermotoga maritima m42 aminopeptidase tmpep1050
Uploaded: 2020-05-13T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about X-Ray Crystallography to Study the Oligomeric State Transition of the Thermotoga maritima M42 Aminopeptidase TmPep1050 at JoVE.com

Мы благодарим Мартину Руверс за то, что она корректировал этот документ и давал конструктивные комментарии. Доступ к лучей Proxima 2 (SYNChrotron SOLEIL) был в пределах групп распределения блоков 20151139.

1. Производство и очистка рекомбинантных TmPep1050
ПРИМЕЧАНИЕ: В дальнейшем описаны процедуры клонирования и очистки дикого типа TmPep1050 адаптированы из предыдущего исследования11. Кроме того, клонирование может быть сделано с помощью синтетического гена. Для генер...

Описанный в настоящем настоящем протоколе позволяет понять переход TmPep1050 на структурном уровне. Методология была испытана ранее для определения структуры обоих TmPep1050 олигомеров11. Наиболее сложным шагом было найти условия, способствующие разобщению додекамеров в стабиль?...

Олигомеризация является преобладающим процессом, который диктует биологические функции многих белков. В Escherichia coli, подсчитано, что только 35% белков мономерных1. Некоторые белки, называемые морфиинами, могут даже принять несколько олигомерных состояний с субъединицами, имеющих различную структуру в каждом олигомеромсостоянии 2. Переход между их олигомерными состояниями часто является способом регулирования белковой активности, поскольку каждое олигомерное состояние может иметь различную специфическую активность или функцию. Несколько примеров морфиены были хорошо документированы в литературе, в частности, porphobilinogenсинтазы 3, HPr киназы /фосфатазы 4, Лон протеазы5, лактатдегидрогеназы 6, глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназы7, пируваткиназы 8, цитратсинтазы 9, и рибонуклеаза10. Недавно мы описали M42 aminopeptidase TmPep1050, еще один пример фермента с морфеином, как поведение, чья активность зависит от его олигомерныхсостояний 11. Переход между олигомерными состояниями опосредован его металлическими кофакторами, которые вызывают несколько структурных модификаций подразделений.
Семейство аминопептидазы M42 принадлежит к клану MH12,13, и широко распространено среди бактерий и Archaea14. M42 aminopeptidases являются подлинными динуклеарными ферментами, унижающими пептиды до 35 аминокислотных остатков в длину15. Они принимают своеобразную тетраэдрообразную структуру из 12 подразделений с их активными участками, ориентированными на внутреннюю полость. Такое расположение часто описывается как нано-разобщение деятельности, чтобы избежать неконтролируемого протеолиза. Физиологическая функция M42 aminopeptidases может быть связана с протеасомой, гидролизующих пептидов в результатедеградации белка 16,17. Pyrococcus horikoshii обладает четырьмя аминоптидами M42, каждая из которых представляет различные, новзаимодополняющие особенности 18,19,20,21. Сингулярно, гетерокомплексы из двух различных типов подразделений были описаны в P. horikoshii, предполагая существование пептидасомныхкомплексов 22,23.
Несколько структур M42 aminopeptidases были описаны влитературе 11,16,18,19,20,24,25,26. Подразделение состоит из двух различных областей, каталитический домен и домен димеризации. Каталитический домен принимает общий α/β, сохраненный во всем клане MH, архетипический каталитический домен является аминокислотой Ap1 из Vibrio proteolyticus27. Домен димеризации принимает PD-как раз16 и может иметь, в дополнение к своей роли в олигомеризации, роль в управлении доступом к субстрату и связывания во внутренней полости11. Поскольку основной строительный блок является более тусклым, dodecamer часто описывается как объединение шести димеров, каждый димер, расположенный на каждом краю тетраэдр16. Олигомеризация аминопептидас M42 зависит от наличия его металлических кофакторов. Ионы металла Divalent, часто«n 2» и Co2, каталитически участвуют в пептидной привязке и гидролизе. Они находятся в двух различных связывающих участках, а именно на участках М1 и М2. Два металлических ионов также диск и тонко настроить олигомеризации, как попродемонстрировано для PhTET2, PhTET3, PfTET3, и TmPep105011,24,28,29. Когда металлические кофакторы истощаются, dodecamer разбирает на димеры, как в PhTET2, PhTET3, и TmPep105011,16,28, или даже мономеры, как в PhTET2 и PfTET324,29.
Здесь представлен протокол, используемый для изучения структур олигомеров TmPep1050. Этот протокол представляет собой набор распространенных методов, включая очищение белка, скрининг протеолитической активности, кристаллизацию, рентгеновскую дифракцию и молекулярную замену. Подчеркиваются тонкости, присущие работе с металлоконструкцимами, олигомеризацией белка, кристаллизацией белка и молекулярной заменой. Пример исследования также представлен, чтобы показать, может ли tPep1050 dodecamers еще больше разобщиться на мономеры или нет. Для решения этого вопроса, вариант TmPep1050, TmPep1050H60A H307A, был изучен, чьи металлические связывающие сайты нарушаются путем мутации Его-60 (M2 сайт) и его-307 (M1 сайт) в Ала остатков. Этот протокол может быть размещен для изучения других M42 aminopeptidases или любые metalloenzymes с морфеином, как поведение.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,10-phenanthroline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>13, 137-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra 0.5 ml Centrifugal Filters Ultracel 30K</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>UFC503096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra 15 Centrifugal Filters Ultracel 30K</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>UFC903024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzonase Nuclease</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>70664-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CCP4</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>visit http://www.ccp4.ac.uk/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cOmplete EDTA-free</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5056489001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coot</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>visit https://www2.mrc-lmb.cam.ac.uk/personal/pemsley/coot/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal Screen I</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal Screen II</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DreamTaq Green PCR Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>K1082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasyXtal 15-well tool</td>
			<td>NeXtal</td>
			<td>132007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli PPY strain</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>see reference 31</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli XL1 blue strain</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>200249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Filtration Calibration Kit HMW</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>28-4038-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Filtration Calibration Kit LMW</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>28-4038-41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Filtration Standard</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>1511901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GeneJET Plasmid Miniprep Kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>K0503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Index</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Litholoops</td>
			<td>Molecular Dimensions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-leucine-p-nitroanilide</td>
			<td>Bachem AG</td>
			<td>40010720025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Natrix 1</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Natrix 2</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neggia plugin</td>
			<td>Dectris</td>
			<td>N/A</td>
			<td>visit https://www.dectris.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NeXtal Tubes JCSG Core Suite I</td>
			<td>NeXtal</td>
			<td>130724</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NeXtal Tubes JCSG Core Suite II</td>
			<td>NeXtal</td>
			<td>130725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NeXtal Tubes JCSG Core Suite III</td>
			<td>NeXtal</td>
			<td>130726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NeXtal Tubes JCSG Core Suite IV</td>
			<td>NeXtal</td>
			<td>130727</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBAD-TOPO</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>K430001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenix</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>visit https://www.phenix-online.org/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion High-Fidelity DNA polymerase</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>F-530L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salt RX 1</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salt RX 2</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SnakeSkin Dialysis Tubing, 3.5K MWCO</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>88242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Source 15Phe</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>17014702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Source 15Q</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>17094705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superdex 200 prep grade</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>17104301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermotoga maritima MSB8 strain</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>ATCC 43589</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TmCD00089984</td>
			<td>DNASU Plasmid Repository</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XDS</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>visit http://xds.mpimf-heidelberg.mpg.de/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xdsme</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>visit https://github.com/legrandp/xdsme</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

x-ray crystallography to study the oligomeric state transition of the thermotoga maritima m42 aminopeptidase tmpep1050

Аминопептиды M42 образуют функционально активные комплексы из 12 подразделений. Их процесс сборки, как представляется, регулируется их металлических ионных кофакторов запуска димер-додекамер перехода. При связывании металлических ионов в активном месте и интерфейсе взаимодействия происходит несколько структурных модификаций, формирующих димеры для содействия самосожасыву. Для наблюдения за такими изменениями, стабильные олигомеры должны быть изолированы до структурного исследования. Сообщается, что здесь метод, который позволяет очистки стабильных додекамеров и димеров TmPep1050, M42 aminopeptidase T. maritima, и их структура определения рентгеновской кристаллографии. Димеры были подготовлены из додекамеров путем удаления металлических ионов с хелатирующим агентом. Без кофактора додекамеры стали менее стабильными и были полностью разобщены при нагревании. Олигомерные структуры были решены с помощью простого молекулярного подхода к замене. Чтобы проиллюстрировать методологию, представлена структура варианта TmPep1050, полностью нарушенного в металлической ионой привязке, не показывающей дальнейшего разбивки димеров на мономеры.

Для изучения возможной диссоциации додекамера в мономеры в TmPep1050, его-60 и его-307 кодоны были заменены аланином кодоном с использованием синтетического гена. Затем этот ген был клонирован в векторе PBAD для выражения и очистки соответствующего варианта TmPep1050, впоследствии названного TmPep1050<...

Watch this Scientific Journal Video about X-Ray Crystallography to Study the Oligomeric State Transition of the Thermotoga maritima M42 Aminopeptidase TmPep1050 at JoVE.com

X-Ray Crystallography to Study the Oligomeric State Transition of the Thermotoga maritima M42 Aminopeptidase TmPep1050

Этот протокол был разработан для изучения димер-додекамер переход TmPep1050, M42 аминоптидазы, на структурном уровне. Это простой трубопровод, начиная от очистки белка и обработки рентгеновских данных. Кристалллогенез, индексация набора данных и молекулярная замена были подчеркнуты в ходе исследования, tmPep1050H60A H307A вариант.

Рентгеновская кристаллография для изучения олигомерского государства Переход Thermotoga maritima M42 Aminopeptidase TmPep1050

The M42 aminopeptidases form functionally active complexes made of 12 subunits. Their assembly process appears to be regulated by their metal ion ...

Этот протокол облегчает изучение аминопептидасов с различными олигомерными состояниями и олигомеризации зависимых мероприятий, которые сбалансированы между неактивными димерами и активными додекамерами. Этот обычный метод может быть легко выполнен в любой лаборатории. И кроме того, что требуется доступ к лучевой или рентгеновской кристаллографии, не требует специальных приборов.С некоторой адаптацией, этот метод может быть применен к любому другому белку с активностью или функцией, которая зависит от степени олигомеризации. Для обработки рентгеновских данных пользователи должны иметь минимальное понимание кристаллографии. Мы приглашаем пользователей следить за тренингами, посещать XDS Wiki и смотреть учебники Phenix.Для проведения анализа деятельности, добавить 25 микролитров 100 мМ L-Лейцин р-нитроанилид до 965 микролитров 50 миллимолярной MOPS, 250 микромолярный кобальт два хлорида и 10% метанола Pre инкубировать смесь реакции в 75 градусов по Цельсию сухой ванне, прежде чем разбавить фермент до одной микромолярной конечной концентрации с дополнительными 50 миллимолярной MOPS. Далее добавьте 10 микролитров одного микромолярского фермента в смесь реакции и вихрем полученного раствора, прежде чем вернуть реакцию на сухую ванну 75 градусов по Цельсию в течение не более одного часа. Когда раствор пожелтеет, остановить реакцию с одним миллилитром 20%кислой кислоты и вихрь смеси, прежде чем позволить ему остыть до комнатной температуры.Затем перенесите алицит реакционной смеси в клетку спектрофотометра и прочитайте абсорбенты на 410 нанометров против инкубационной смеси реакции без фермента, как отрицательный контроль. Для приготовления апоэнзима добавьте 10 микролитров 1, 10-фенантролового раствора бульона в 890 микролитров 50 миллимолярной MOPS, 0,5 сульфата аммония молара и 100 микролитров очищенного TmPep1050. Проверьте потерю активности с помощью анализа активности, как это было продемонстрировано без добавления кобальта два хлорида.После анализа перенесите образец в диализную трубку и облизбейте образец против 200 миллилитров 50 миллимолярной MOPS и 0,5 мларного сульфата аммония при четырех градусах Цельсия. Обмен диализа со свежим буфером три раза в течение 48-часового диализа и собирать образец из трубки диализа. Используя ультрафильтрационные установки с 30 килодальтонным вырезом, концентрируйте образец обратно до 100 микролитров и проверяйте концентрацию на нанообумном спектрофотометре на 280 нанометров.Для приготовления димеры разбавляют апоэнзим до одной микромолянной концентрации в 50 миллимолярных MOPS и 0,5 моларного сульфата аммония, и инкубируют реакцию в течение двух часов в сухой ванне 75 градусов по Цельсию. Затем сконцентрировать образец фермента, когда по крайней мере 50 микролитера концентрации и проверить молекулярный вес по размеру исключение хроматографии. Чтобы улучшить форму, размер и кристалличность кристаллов белка, добавьте соответствующий объем оптимизированного раствора кристаллизации в каплю кристаллов, чтобы довести объем кристаллической капли до 10 микролитров.Перенесите капельку в микротрубку 1,5 миллилитров и добавьте еще 90 микролитров раствора кристаллизации в семенной колодец. Для каждого разбавления семян добавьте 500 микролитров кристаллизации реагента на скважину к соответствующему количеству скважин в кристаллизации пластины и смешайте два микролитров образца белка с двумя микролитров кристаллизации реагента и 0,2 микролитров семян в одну поддержку кристаллизации на скважину. Затем зафиксните опоры на каждом колодец кристаллизации реагента.Для сбора кристаллов, заполнить ванну с жидким азотом и окунуть любые флаконы или корзину, используемую для обработки образца в азот. Обработка жидкого азота является опасным это может вызвать сильные обморожения. Обязательно носите надлежащие индивидуальные защиты, такие как криогенные перчатки и защитные очки для глаз.Наберите петли выбора образцов различных размеров в зависимости от размера кристалла и используйте бинокль, чтобы выбрать каплю, содержащую кристаллы. Затем используйте петлю, чтобы аккуратно выбрать изолированный кристалл из одного хорошо и сразу же окунуть петлю в жидкий азот, прежде чем поместить петлю в подходящий флакон. Для измерения интенсивности дифракции, создайте папку, из которой будет запущен XDS, и найдите путь к изображениям.Для запуска xdsme введите команду в окне терминала. После завершения XDS задания проверьте правильный файл lp и обратите внимание на вероятность определения космической группы, полноту данных, наивысшее разрешение, кристаллическую мозаику и качество данных. После проверки бессмысленного журнала XDS для получения вероятности космических групп используйте команды для повторного запуска xdsme с помощью различных решений космической группы, предложенных XDS, в отдельной папке, чтобы избежать переопределения предыдущего процесса.После выбора наилучшего решения, основанного на статистике данных, введите команды для запуска XSCALE и XDSCONV. Чтобы определить фазу без аномального рассеяния, используйте координаты 4P X, Y, чтобы подготовить стартовую модель для молекулярной замены. Из файла PDB используйте редактор файлов Phenix PDB для извлечения мономера и усечения аминокислот в аланине.Вы запустите X, оформив XDSCONV и последовательность в качестве входных данных. Проверьте файл журнала из Xtriage. Обратите внимание на полноту, количество подразделений в асимметричном блоке, анисотропию, наличие ледяных колец и побратимство.Для запуска Phaser-MR в Phenix для молекулярной замены выберите файл отражения, последовательность и стартовую модель 4P six Y, усеченную в полиаланине, и нажмите Run. По завершении, проверьте, если модель была найдена и проверить счет молекулярной замены. Коэффициент перевода, по крайней мере восемь баллов, указывает на то, что решение является окончательно правильным.После определения фазы молекулярной заменой выберите Run Auto Build и нажмите Run. Все необходимые файлы будут добавлены автоматически. По завершении проверки модели в COOT и сборки и уточнения модели вручную, в соответствии с картой плотности электронов в COOT.Используя эту модель, последовательность и данные дифракции в качестве входных данных, уточните вручную кураторую модель в Phenix, ссылаясь на Phenix, чтобы помочь выбрать правильную стратегию. После уточнения проверить результаты, уточнение бесплатно и уточнения работы должны уменьшиться. Показатели MolProbity должны соблюдаться, а выбросы с низкой реальной корреляцией пространства должны быть ограничены.Когда будет создана лучшая усовершенствованная модель, запустите MolProbity на сервере и проверьте любые выбросы, идентифицированные программой. Хроматография исключения размера может быть использована для определения очевидного молекулярного веса очищенного белка. Состояние кристаллизации пептида, может быть оптимизирован путем изменения рН по сравнению с концентрацией ПЭГ вокруг состояния димера.Например, лучшие кристаллы TmPep1050 H60A H307A были получены в 0,1 молярного цитрата натрия с рН 5,2 и 20%PEG 3350 концентрации, после одного цикла микро посева для улучшения микрокристаллизации. В этом анализе индексация данных показала, что космическая группа Кристалла TmPep1050 H60A H307A была C2221, но XDS предложила другое решение, космическую группу MP. Структура TmPep1050 H60A H307A, может быть завершена после нескольких циклов автоматизированного и ручного уточнения.Подтверждение олигомерного состояния с поверхностью интерфейса 1 710 квадратных ангстремов между мономерами и свободной энергией формирования интерфейса минус 16,2 килокалорий на родинку. Здесь можно наблюдать крупным планом активного сайта TmPep1050 H60A H307A по сравнению с активным сайтом димера TmPep1050 и додекамера. При построении модели позаботьтесь о том, чтобы построить только то, что вы видите в плотности электронов, чтобы избежать чрезмерной интерпретации, данных и не времени отполировать модель.Молекулярный вес димера и додекамера также может определяться родной масс-спектрометрией. А методы могут быть полезны для обнаружения переходных олигомеров.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

X-Ray Crystallography to Study the Oligomeric State Transition of the Thermotoga maritima M42 Aminopeptidase TmPep1050

Preparation and Delivery of Protein Microcrystals in Lipidic Cubic Phase for Serial Femtosecond Crystallography

Подготовка и поставка белка микрокристаллов в липидной кубической фазе для последовательного фемтосекундного кристаллографии

Membrane proteins (MPs) are essential components of cellular membranes and primary drug targets. Rational drug design relies on precise structural ...

Combining X-Ray Crystallography with Small Angle X-Ray Scattering to Model Unstructured Regions of Nsa1 from S. Cerevisiae

Combining X-Ray Crystallography with Small Angle X-Ray Scattering to Model Unstructured Regions of Nsa1 from S. Cerevisiae

Сочетая рентгеноструктурного анализа с малоуглового рентгеновского рассеяния для моделирования неструктурированных регионов Nsa1 от S. Cerevisiae

Determination of the full-length structure of ribosome assembly factor Nsa1 from Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) is challenging because of the ...

Characterization of Glycoproteins with the Immunoglobulin Fold by X-Ray Crystallography and Biophysical Techniques

Характеристика гликопротеины с складке иммуноглобулина рентгеноструктурного анализа и биофизических методов

Glycoproteins on the surface of cells play critical roles in cellular function, including signalling, adhesion and transport. On leukocytes, several of ...

Structural Studies of Macromolecules in Solution using Small Angle X-Ray Scattering

Структурные исследования макромолекул в решения с помощью небольшой угол рентгеновского рассеяния

Protein-protein interactions involving proteins with multiple globular domains present technical challenges for determining how such complexes form and ...

An All-in-one Sample Holder for Macromolecular X-ray Crystallography with Minimal Background Scattering

Универсальный выборочный держатель для макромолекулярной рентгеновской кристаллографии с минимальным рассеянием фона

Macromolecular X-ray crystallography (MX) is the most prominent method to obtain high-resolution three-dimensional knowledge of biological macromolecules. ...

Cell Culture on Silicon Nitride Membranes and Cryopreparation for Synchrotron X-ray Fluorescence Nano-analysis

Клеточная культура на силиконовых нитридных мембранах и криопрепарат для синхротронного рентгеновского флуоресценции Нано-анализа

Very little is known about the distribution of metal ions at the subcellular level. However, those chemical elements have essential regulatory functions ...

Screening for Thermotoga maritima Membrane-Bound Pyrophosphatase Inhibitors

Screening for Thermotoga maritima Membrane-Bound Pyrophosphatase Inhibitors

Скрининг для Термотога маритима Мембрана-Связанные пирофосфаза ингибиторы

Membrane-bound pyrophosphatases (mPPases) are dimeric enzymes that occur in bacteria, archaea, plants, and protist parasites. These proteins cleave ...

Optimizing the Growth of Endothiapepsin Crystals for Serial Crystallography Experiments

Оптимизация роста кристаллов эндотиапепсина для серийных кристаллографических экспериментов

Here, a protocol is presented to facilitate the creation of large volumes (&#62; 100 &#181;L) of micro-crystalline slurries suitable for serial ...

The Automated Crystallography Pipelines at the EMBL HTX Facility in Grenoble

Автоматизированные кристаллографические трубопроводы на заводе EMBL HTX в Гренобле

EMBL Grenoble operates the High Throughput Crystallization Laboratory (HTX Lab), a large-scale user facility offering high throughput crystallography ...

High-Throughput Screening for Protein Crystallization

High-Throughput Screening to Obtain Crystal Hits for Protein Crystallography

High-Throughput Screening to Obtain Crystal Hits for Protein Crystallography (Video) | JoVE 

Высокопроизводительный скрининг для получения кристаллических попаданий для кристаллографии белка

X-ray crystallography is the most commonly employed technique to discern macromolecular structures, but the crucial step of crystallizing a protein into ...