Name: assays for validating histone acetyltransferase inhibitors
Uploaded: 2020-08-06T15:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assays for Validating Histone Acetyltransferase Inhibitors at JoVE.com

इस काम को जेम्स और एस्तेर किंग बायोमेडिकल रिसर्च प्रोग्राम (6JK03 और 20K07), और बैंकहेड-कोले कैंसर रिसर्च प्रोग्राम (4BF02 और 6BC03), फ्लोरिडा डिपार्टमेंट ऑफ हेल्थ, फ्लोरिडा ब्रेस्ट कैंसर फाउंडेशन और यूएफ हेल्थ कैंसर सेंटर के अनुदानों द्वारा समर्थित किया गया था। इसके अतिरिक्त, हम प्रकाशन प्रक्रिया के दौरान उनके समर्थन के लिए डॉ जचारी ओस्किंग और डॉ एंड्रिया लिन को धन्यवाद देना चाहते हैं ।

1. इन विट्रो हैट परख
<ol><li>बफर तैयारी नोट: बफर व्यंजनों के लिए तालिका 1 देखें।<ol>
<li>5x परख बफर और 6x सोडियम डॉडेक्सिल सल्फेट (एसडीएस) तैयार करें और -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। 1 एमएल एलिकोट में ?...

जीन ट्रांसक्रिप्शन2,3को विनियमित करने के लिए लिसाइन एसिटाइलट्रांसफेरेसेस (KATs) हाइस्टोन पूंछ और ट्रांसक्रिप्शन कारकों पर कई लिसाइन अवशेषों का इस्टल करें। पिछले दो दशकों में किए ग...

लिसिन एसिटाइलट्रांसफेरेस (KATs) ने हिस्टोन और गैर-हिस्टोन,प्रोटीन1,2,,3,4दोनों पर लिसाइन अवशेषों के एसीटिलेशन को उत्प्रेरित किया ।, हाल के शोध से पता चलता है कि KATs और उनके एसिटिलट्रांसफरेज कार्य ठोस ट्यूमर विकास को बढ़ावा देने के4,,5,,6,,7,8,9 कर,सकतेहैं । उदाहरण के लिए, सीआरईबी-बाइंडिंग प्रोटीन (सीबीपी) /पी300 दो पैरालॉगस केट्स हैं जो कैंसर2,,3में कई सिग्नलिंग रास्तों को विनियमित करते हैं। सीबीपी/पी 300 में एक अच्छी तरह से विशेषता हाइस्टोन एसिटाइलट्रांसफेरेज (हैट) फ़ंक्शन और उत्प्रेरक हिस्टोन 3 लिसाइन 27 एसिटिलेशन (एच 3के27एसी)2,,4,,5,10,,11,सक्रिय एन्मेंटेवर्स, प्रमोटर क्षेत्रों और सक्रिय जीन ट्रांसक्रिप्शन12,13,,14के लिए एक महत्वपूर्ण मार्कर है।,, सीबीपी/पी 300 ने हिटोन और,अन्य ट्रांसक्रिप्शन कारकों,16,4,9,15, 16, 17, 18के एसिटिलेशन के माध्यम से ऑन्कोजीन के प्रतिलेखन को सक्रिय करके ठोस ट्यूमर में प्रो-ग्रोथ सिग्नलिंग रास्तों के लिए महत्वपूर्ण सह-सक्रियकों के रूप में काम किया।,,1718 ट्यूमर की प्रगति में उनकी भूमिका के कारण, सीबीपी/पी300 और अन्य KATs उपन्यास अवरोधकों के विकास के लिए जांच की जा रही है जो उनके ऑन्कोजेनिक कार्य,4, 5,6,,6,7,,8,9, 19,,,19,,20को अवरुद्ध करते हैं ।19 ए-485 और जीएनई-049 सीबीपी/पी3004, 9,के लिए शक्तिशाली और विशिष्ट अवरोधकों को विकसित करने के दो सफल प्रयासों का प्रतिनिधित्वकरतेहैं । फिलहाल सीबीपी/पी300 और अन्य KATs के लिए अतिरिक्त अवरोधकों की जांच की जा रही है ।
पहले वर्णित कैट अवरोधकों (KATI) की गुणवत्ता को प्रश्न में बुलाया जा रहा है, जिसमें कई अवरोधकों को लक्ष्य प्रभाव और खराब लक्षण वर्णन21दिखाया गया है । इसलिए, उच्च गुणवत्ता वाले रासायनिक जांच के विकास के लिए उपन्यास दवा उम्मीदवारों का कठोर लक्षण वर्णन और सत्यापन आवश्यक है। यहां उल्लिखित तीन प्रोटोकॉल हैं जो स्क्रीनिंग के लिए एक पाइपलाइन बनाते हैं और उपन्यास KATI की शक्ति और विशिष्टता को कड़ाई से मान्य करते हैं, जिसमें KATs के हैट फ़ंक्शन (HATI) को बाधित करने पर विशेष ध्यान दिया जाता है। सीबीपी/पी 300 और उनके अवरोधकों का उपयोग उदाहरण के रूप में कियाजाताहै, लेकिन इन प्रोटोकॉलों को अन्य KATs के लिए अनुकूलित किया जा सकता है जिनमें हैट फ़ंक्शन 7 है।
पहला प्रोटोकॉल एक इन विट्रो हिस्टोन एसीटिलट्रांसफरेज (हैट) परख है जो नियंत्रित टेस्ट ट्यूब प्रतिक्रिया में शुद्ध पुनर्संयोजन p300 और हिस्टोन का उपयोग करता है। यह परख प्रदर्शन करने के लिए सरल है, लागत प्रभावी है, एक कम थ्रूपुट सेटिंग में यौगिकों को स्क्रीन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, और रेडियोधर्मी सामग्री की आवश्यकता नहीं है। इस प्रोटोकॉल में, संक्षिप्त इनक्यूबेशन अवधि के दौरान हिस्टोन पूंछ पर लिसाइन एसिटिलेशन को पुनः संयोजन पी 300 उत्प्रेरक और हिप्थर एसिटिलेशन के स्तर को मानक इम्यूनोब्लोटिंग प्रक्रियाओं का उपयोग करके मापा जाता है। हाइस्टोन एसिटिलेशन को कम करने वाले यौगिकों के लिए स्क्रीन करने के लिए सीबीपी/पी300 अवरोधकों की उपस्थिति या अनुपस्थिति में एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया का प्रदर्शन किया जा सकता है। इसके अतिरिक्त, हैट परख का उपयोग यह सत्यापित करने के लिए किया जा सकता है कि क्या पीसीएएफ जैसे अन्य शुद्ध KATs के खिलाफ उनकी गतिविधि का आकलन करके उपन्यास यौगिक सीबीपी/पी300 के लिए चयनात्मक हैं या नहीं। टोपी परख अपनी सादगी, कम लागत के कारण उपन्यास अवरोधकों की जांच के लिए एक उत्कृष्ट प्रारंभिक बिंदु है, और एक अवरोधक की शक्ति/चयनशीलता का निर्धारण करने की क्षमता है । दरअसल , इस प्रोटोकॉल का उपयोग साहित्य में अक्सर इन विट्रो स्क्रीन5,10के रूप में किया जाता है । हालांकि, टोपी परख में पहचाने गए अवरोधक सेल संस्कृति में हमेशा प्रभावी नहीं होते हैं क्योंकि एक टेस्ट ट्यूब प्रतिक्रिया एक जीवित कोशिका प्रणाली की तुलना में बहुत सरल होती है। इसलिए, सेल कल्चर प्रयोगों में अवरोधकों को आगे बढ़ाना आवश्यक है22,23.
पाइपलाइन में दूसरा प्रोटोकॉल क्रोमेटिन हाइपरसेटाइलेशन अवरोध (सीएचएई) परख है। यह कोशिका आधारित परख एचएटीआई24के साथ सह-इनक्यूबेशन से पहले क्रोमेटिन में हिस्टोन डेसेटाइलीज अवरोधकों (एचडीएसीआई) को हाइपरसेटिलेट करने के लिए एक उपकरण के रूप में उपयोग करती है। बेसल हिस्टोन एसिटिलेशन सेल कल्चर में कम हो सकता है, जिससे एसीटिलेशन बढ़ाने के लिए एचडीएसीआई के अलावा इम्यूनोब्लोटिंग के जरिए जांच करना मुश्किल हो जाता है । CHHAI परख का उद्देश्य उपन्यास HATI की पहचान करना है जो एचडीएसी अवरोध के कारण हिस्टोन एसिटिलेशन में वृद्धि को कम कर सकता है। इस परख के फायदे में इसकी कम लागत, प्रदर्शन करने में सापेक्ष आसानी और संस्कृति में कोशिकाओं का उपयोग शामिल है, जो परीक्षण ट्यूब हैट परख की तुलना में अधिक शारीरिक प्रासंगिकता प्रदान करता है। हैट परख के समान, यह प्रोटोकॉल डेटा संग्रह के लिए मानक इम्यूनोब्लोटिंग का उपयोग करता है।
हैट और सीएचई का कहना है कि वैश्विक हिस्टोन एसिटिलेशन को बाधित करने के लिए उपन्यास यौगिकों की शक्ति के बारे में डेटा प्रदान करता है, लेकिन यह अंतर्दृष्टि प्रदान नहीं करता है कि ये यौगिक विशिष्ट जीनोमिक क्षेत्रों में संशोधनों को कैसे प्रभावित करते हैं। इसलिए, अंतिम प्रोटोकॉल, क्रोमेटिन इम्यूनोप्रिपिCIPITेशन-मात्रात्मक पॉलीमेरेज चेन रिएक्शन (ChIP-qPCR) एक सेल संस्कृति प्रयोग है जो जीनोम के विशिष्ट क्षेत्रों में डीएनए-प्रोटीन इंटरैक्शन की जांच करता है। सीआईपी प्रोटोकॉल में, डीएनए-प्रोटीन इंटरैक्शन को संरक्षित करने के लिए क्रोमेटिन को क्रॉसलिंक किया जाता है। क्रोमेटिन को तब कोशिकाओं से निकाला जाता है और डीएनए-प्रोटीन परिसर ब्याज के प्रोटीन के लिए चयनात्मक इम्यूनोप्रिपिटेशन से गुजरता है (उदाहरण के लिए, H3K27ac के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग करना)। इसके बाद डीएनए को शुद्ध किया जाता है और क्यूपीसीआर का उपयोग करके विश्लेषण किया जाता है । उदाहरण के लिए, यह निर्धारित करने के लिए ChIP-qPCR का उपयोग किया जा सकता है कि क्या एक उपन्यास HATi अलग-अलग ऑन्कोजीन पर हिस्टोन एसिटिलेशन को डाउनरेगुलेट करता है, जैसे साइक्लिन डी1 25। जबकि सीआईपी-क्यूपीसीआर एक सामान्य तकनीक है जो क्षेत्र में,उपयोग की जाती है,4,10,26को अनुकूलित करना मुश्किल हो सकता है।, यह प्रोटोकॉल छग-क्यूपीसीआर प्रक्रिया का प्रदर्शन करते समय होने वाले संभावित नुकसान से बचने के लिए सुझाव प्रदान करता है और इसमें गुणवत्ता नियंत्रण जांच शामिल है जो डेटा पर की जानी चाहिए।
जब एक साथ उपयोग किया जाता है, तो ये तीन प्रोटोकॉल उपन्यास HATI के कठोर लक्षण वर्णन और सत्यापन के लिए अनुमति देते हैं। इसके अतिरिक्त, ये विधियां कई फायदे प्रदान करती हैं क्योंकि वे प्रदर्शन करने में आसान हैं, अपेक्षाकृत सस्ते हैं और वैश्विक और क्षेत्रीय हिस्टोन एसीटिलेशन पर डेटा प्रदान करते हैं।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 ml tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td>For all methods</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 cm dish</td>
			<td>Sarstedt AG &#38; Co.</td>
			<td>83.3902</td>
			<td>For cell culture of MCF-7 cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 ul tips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-707-454</td>
			<td>For all Methods</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 ul tips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4846</td>
			<td>For all Methods</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X Glycine buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Method 3. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X Running Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Methods 1 and 2. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X TBST</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Methods 1 and 2. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3513</td>
			<td>For Method 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 cm dish</td>
			<td>Sarstedt AG &#38; Co.</td>
			<td>83.3903</td>
			<td>For Method 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical tube</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-200249</td>
			<td>For Methods 2 and 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X TBST with 5% milk and 0.02% Sodium Azide</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Methods 1 and 2. Can be used to dilute primary antibodies that will be used more than once. Allows for short-term storage of primary antibody dilutions. Do not use for secondary antibody diluton. CAUTION: Sodium Azide is toxic.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X TBST with 5% milk</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Methods 1 and 2. Used to block PVDF membrane and for antibody diltions. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 ul tips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4844</td>
			<td>For all Methods</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3148</td>
			<td>for SDS sample buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-20% polyacrylamide gel</td>
			<td>Thermo Fisher: Invitrogen</td>
			<td>XP04205BOX</td>
			<td>For Methods 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5X Assay buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Method 1. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5X Passive lysis buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Method 2. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6X Sodium Dodecyl Sulfate (SDS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Methods 1 and 2. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A-485</td>
			<td>MedChemExpress</td>
			<td>HY-107455</td>
			<td>CBP/p300 Inhbitor for use in Methods 2 and 3. Dissolved in DMSO.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetyl-CBP(K1535)/p300(K1499) antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>4771</td>
			<td>For Method 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetyl-CoA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2056</td>
			<td>for use in Method 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetyl-Histone H3 (Lys 27) antibody (H3K27ac)</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>CST 8173</td>
			<td>antoibodies for H3K27ac for immunoblots and ChIP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetyl-Histone H3 (Lys18) antibody (H3K18ac)</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>CST 9675</td>
			<td>antoibodies for H3K18ac for immunoblots and ChIP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>alpha tubulin antibody</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>T5168</td>
			<td>For Method 2. Dilute 1:20,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anacardic acid</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>13144</td>
			<td>For Method 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse IgG HRP linked secondary antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>7076</td>
			<td>For Methods 1 and 2. Dilute 1:10,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-rabbit IgG secondary antibody</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>711-035-152</td>
			<td>For Methods 1 and 2. Dilute 1:10,000 to 1:20,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoradiography film</td>
			<td>MIDSCI</td>
			<td>BX810</td>
			<td>For Methods 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Belly Dancer Rotating Platform</td>
			<td>Stovall Life Science Incorporated</td>
			<td>not available</td>
			<td>For Methods 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Calf Serum (BCS)</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30072.03</td>
			<td>cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2153</td>
			<td>for buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0126</td>
			<td>for SDS sample buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CDTA</td>
			<td>Spectrum Chemical</td>
			<td>125572-95-4</td>
			<td>For buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell scraper</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>CLS3010</td>
			<td>For Method 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ChIP dilution buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Method 3. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ChIP Elution Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Method 3. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete DMEM for MCF-7 Cells</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Methods 2 and 3. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covaris 130 &#181;l microTUBE</td>
			<td>Covaris</td>
			<td>520045</td>
			<td>Sonication tube for use with Covaris S220 in Method 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covaris S220 Focused-ultrasonicator</td>
			<td>Covaris</td>
			<td>S220</td>
			<td>DNA sonicator for use in Method 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>41639</td>
			<td>for drug dilution and vehicle control treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>43815</td>
			<td>for SDS sample buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td>cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP120-1</td>
			<td>for buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Example transfer tank and transfer apparatus</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>1704070</td>
			<td>For Methods 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EZ-Magna ChIP A/G Chromatin Immunoprecipitation Kit</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>17-10086</td>
			<td>For Method 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FK228 (Romidepsin)</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>128517-07-7</td>
			<td>HDAC Inhibitor for use in Method 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8775</td>
			<td>for cell fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP229-1</td>
			<td>For buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7126</td>
			<td>for buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>54457</td>
			<td>for buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High salt wash buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Method 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IGEPAL (NP-40)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I3021</td>
			<td>for buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilon Chemiluminescent HRP Substrate</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>WBKLS0500</td>
			<td>For Methods 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP366-500</td>
			<td>for buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LiCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L9650</td>
			<td>For buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LiCl wash buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Method 3. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low salt wash buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Method 3. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Separator</td>
			<td>Promega</td>
			<td>Z5341</td>
			<td>For use in Method 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>494437</td>
			<td>For buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini gel tank</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A25977</td>
			<td>For Methods 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS-275 (Entinostat)</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>209783-80-2</td>
			<td>HDAC Inhibitor for use in Method 2. Dissolved in DMSO.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td>for buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S318-100</td>
			<td>for buffer preparation in Methods 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Rabbit IgG</td>
			<td>Bethyl Laboratories</td>
			<td>P120-101</td>
			<td>Control rabbit antibody for use in Method 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclei swelling buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Method 3. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR Cleanup Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>28104</td>
			<td>For use in Method 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin 100X</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-002-CI</td>
			<td>cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td>For Methods 2 and 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PIPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>80635</td>
			<td>for buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>powdered milk</td>
			<td>Nestle Carnation</td>
			<td></td>
			<td>For Methods 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power Pac 200 for western blot transfer</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td></td>
			<td>For Methods 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power Pac 3000 for SDS gel running</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td></td>
			<td>For Methods 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prestained Protein Ladder</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>26616</td>
			<td>For Methods 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PI8340</td>
			<td>for use in Method 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein A Magentic Beads</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>S1425S</td>
			<td>For use in Method 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>P8107S</td>
			<td>For use in Method 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTC-100 Programmable Thermal Controller</td>
			<td>MJ Research Inc.</td>
			<td>PTC-100</td>
			<td>For Method 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF Transfer Membrane</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>IEVH00005</td>
			<td>For Methods 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant H3.1</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>M2503S</td>
			<td>for use in Method 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant p300</td>
			<td>ENZO Life Sciences</td>
			<td>BML-SE451-0100</td>
			<td>for use in Method 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAHA (Vorinostat)</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>149647-78-9</td>
			<td>HDAC Inhibitor for use in Method 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS lysis buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Method 3. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>26628-22-8</td>
			<td>For Methods 1 and 2. CAUTION: Sodium Azide is toxic. See SDS for proper handling.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S233-500</td>
			<td>for buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deoxycholate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D6750</td>
			<td>for buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate (SDS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>71725</td>
			<td>for SDS sample buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Heatblock</td>
			<td>VWR Scientific Products</td>
			<td>MPN: 949030</td>
			<td>For Methods 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table top centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5417R</td>
			<td>For all methods</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TE buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Method 3. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Methods 1 and 2. See Table 1 for recipe.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichostatin A</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>58880-19-6</td>
			<td>HDAC Inhibitor for use in Method 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP152-5</td>
			<td>for buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td>for buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td>for buffer preparation in Methods 1 and 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray film processor</td>
			<td>Konica Minolta Medical &#38; Graphic, Inc.</td>
			<td>SRX-101A</td>
			<td>For Methods 1 and 2</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assays for validating histone acetyltransferase inhibitors

लिसाइन एसिटाइलट्रांसफेरेसेस (KATs) क्रोमेटिन गतिशीलता और जीन अभिव्यक्ति को विनियमित करने के लिए हिस्टन और अन्य प्रोटीन पर लिसाइन अवशेषों के एसीटिलेशन को उत्प्रेरित करता है। सीबीपी/पी300 जैसे KATs, विविध कैंसर के ट्यूमरजीनेसिस में उनकी महत्वपूर्ण भूमिका के कारण चिकित्सीय लक्ष्यों के रूप में गहन जांच के अधीन हैं । KATs के हिस्टोन एसिटाइलट्रांसफेरेज (हैट) समारोह को लक्षित करने वाले उपन्यास छोटे अणु अवरोधकों का विकास चुनौतीपूर्ण है और इसके लिए मजबूत परख की आवश्यकता है जो संभावित अवरोधकों की विशिष्टता और शक्ति को मान्य कर सकते हैं।
यह लेख तीन तरीकों की एक पाइपलाइन को रेखांकित करता है जो उपन्यास हैट अवरोधकों (HATI) के लिए कठोर इन विट्रो सत्यापन प्रदान करते हैं। इन तरीकों में एक टेस्ट ट्यूब हैट परख, क्रोमेटिन हाइपरसेटिलेशन अवरोध (सीएचएई) परख, और क्रोमेटिन इम्यूनोप्रिपेशन-मात्रात्मक पीसीआर (ChIP-qPCR) शामिल हैं। हैट परख में, एक टेस्ट ट्यूब प्रतिक्रिया में हिस्टोन के साथ फिर से संयोजन किया जाता है, जो हिस्टोन पूंछ पर विशिष्ट lysine अवशेषों के एसीटिलेशन के लिए अनुमति देता है। इस प्रतिक्रिया को एक HATI द्वारा अवरुद्ध किया जा सकता है और साइट-विशिष्ट हिस्टोन एसिटिलेशन के सापेक्ष स्तर को इम्यूनोब्लोटिंग के माध्यम से मापा जा सकता है। टोपी परख में पहचाने गए अवरोधकों को सेलुलर वातावरण में पुष्टि करने की आवश्यकता है।
ChHAI परख उपन्यास HATI के लिए स्क्रीन करने के लिए इम्यूनोब्लोटिंग का उपयोग करता है जो एक हिस्टोन डेसेटाइलेस अवरोधक (एचडीएसीआई) द्वारा प्रेरित हस्टटोन के मजबूत हाइपरसेटाइलेशन को कम करता है। एचडीएसीआई के अलावा सहायक है क्योंकि हिस्टोन एसिटिलेशन के बेसल स्तर इम्यूनोब्लोटिंग के माध्यम से पता लगाने के लिए मुश्किल हो सकता है।
हैट और सीएचई का कहना है कि हिस्टोन एसिटिलेशन में वैश्विक परिवर्तनों को मापता है, लेकिन विशिष्ट जीनोमिक क्षेत्रों में एसीटिलेशन के बारे में जानकारी प्रदान नहीं करते हैं। इसलिए, जीन नियामक तत्वों पर हिस्टोन एसिटिलेशन स्तरों पर एचएटीआई के प्रभावों की जांच करने के लिए छग-क्यूपीसीआर का उपयोग किया जाता है। यह हिस्टोन-डीएनए परिसरों के चयनात्मक इम्यूनोप्रिपिटेशन और क्यूपीसीआर के माध्यम से शुद्ध डीएनए के विश्लेषण के माध्यम से पूरा किया जाता है। साथ में, ये तीन परख उपन्यास हैटी की विशिष्टता, शक्ति और कार्रवाई के तंत्र के सावधानीपूर्वक सत्यापन की अनुमति देते हैं।

इन विट्रो हिस्टोन एसिटाइलट्रांसफरेज (हैट) परख का उपयोग उन यौगिकों के लिए जांच करने के लिए किया जा सकता है जो एक हिस्टोन सब्सट्रेट की ओर p300 टोपी गतिविधि को रोकते हैं। चित्रा 1A टोपी परख के लिए एक...

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Assays for Validating Histone Acetyltransferase Inhibitors

हिस्टोन एसिटाइलट्रांसफेरेसिस (HATs, जिसे लिसाइन एसिटाइलट्रांसफेरेसिस के रूप में भी जाना जाता है) के अवरोधक, जैसे सीबीपी/पी300, कैंसर के इलाज के लिए संभावित चिकित्सीय हैं । हालांकि, इन अवरोधकों को मान्य करने के लिए कठोर तरीकों की आवश्यकता है। सत्यापन के लिए तीन इन विट्रो विधियों में रीकॉम्बिनेंट एसिटाइलट्रांसफेरेस के साथ हैट परख, सेल संस्कृति में हिस्टोन एसिटिलेशन के लिए इम्यूनोब्लोटिंग और सीआईपी-क्यूपीसीआर शामिल हैं।

हिस्टोन एसिटिलट्रांसफेरेज अवरोधकों को मान्य करने के लिए परखें

Lysine acetyltransferases (KATs) catalyze acetylation of lysine residues on histones and other proteins to regulate chromatin dynamics and gene ...

ये प्रोटोकॉल महत्वपूर्ण हैं क्योंकि वे उपन्यास हैट अवरोधकों की शक्ति और चयनशीलता के सत्यापन के लिए विस्तृत कदम प्रदान करते हैं, जो महत्वपूर्ण अनुसंधान उपकरण और संभावित चिकित्सीय हैं। इस वीडियो में प्रदर्शित तकनीकों को प्रदर्शन करना आसान है और वैश्विक और क्षेत्रीय हिस्टोन एसीटिलेशन पर हैट अवरोधकों के प्रभावों के बारे में जानकारी प्रदान करना है। वे जीन अभिव्यक्ति के एपीजेनेटिक नियमन को समझना संभव बनाते हैं ।विवरण पर ध्यान महत्वपूर्ण है । यह कदम-दर-कदम प्रोटोकॉल का पालन करने के लिए महत्वपूर्ण है । पांडुलिपि निर्देशों के अनुसार एक 0.2 मिलीलीटर पीसीआर ट्यूब के अंदर एक 10 माइक्रोलीटर की मात्रा में एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया तैयार करके शुरू करें।फिर पीसीआर थर्मल साइकिलर में एक घंटे के लिए 30 डिग्री सेल्सियस पर पूर्ण प्रतिक्रिया मिश्रण को इनक्यूबेट करें। इस बीच, 6X एसडीएस नमूना बफर में एक से 10 अनुपात में दो मर्केप्टोथेनॉल जोड़ें। पीसीआर थर्मल साइकिलर से नमूने निकालें और प्रत्येक प्रतिक्रिया मिश्रण करने के लिए तैयार एसडीएस नमूना बफर के दो माइक्रोलीटर जोड़ें।नमूनों को हीट ब्लॉक पर पांच मिनट के लिए ९५ डिग्री सेल्सियस तक गर्म करें, फिर उन्हें बर्फ पर ठंडा करें । नमूनों को शून्य से 20 या माइनस 80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें या जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस और इम्यूनोब्लोटिंग के साथ आगे बढ़ें। बीज 100, 000 एमसीएफ-7 कोशिकाओं को सेल संस्कृति माध्यम के एक मिलीलीटर में एक 12 अच्छी तरह से प्लेट के प्रत्येक कुएं में और कोशिकाओं को 80 से 90% तक बढ़ने की अनुमति देते हैं।जब कोशिकाएं वांछित पूर्णता तक पहुंचती हैं, तो कोशिका संस्कृति माध्यम को चार, पांच और छह कुओं से प्राप्त करें, और प्रत्येक कुएं में मध्यम में तीन माइक्रोमोलर MS275 के एक मिलीलीटर को पिपेट करें। फिर कोशिका संस्कृति माध्यम को एक, दो और तीन कुओं से आकांक्षी करें, और प्रत्येक कुएं में पतला डीएमएसओ के एक मिलीलीटर को पिपेट करें। कोशिकाओं को चार घंटे के लिए इनक्यूबेटर में वापस करें ताकि MS275 के संपर्क में आने वाली कोशिकाओं में एसिटाइलेटेड हिटोन के संचय की अनुमति दी जा सके।जबकि कोशिकाएं इनक्यूबेटिंग कर रही हैं, पांडुलिपि निर्देशों के अनुसार डीएमएसओ में ए-485 के कमजोर पड़ने की तैयारी करें। जब इनक्यूबेशन समाप्त हो जाती है, तो कुएं से माध्यम को एस्पिरेट करें और कमजोर पड़ने डालें। कोशिकाओं को इनक्यूबेटर में वापस करें और उन्हें 20 घंटे तक संस्कृति दें, फिर कोशिका संस्कृति माध्यम को कुओं से हटाएं और कोशिकाओं को पीबीएस के एक मिलीलीटर से धोएं।पीबीएस को एस्पिरेट करें और निष्क्रिय लाइसिस बफर के 100 माइक्रोलीटर जोड़ें। रात भर माइनस 80 डिग्री सेल्सियस पर प्लेट स्टोर करें। डीएमएसओ के साथ इलाज की जाने वाली कोशिकाओं से सोनिकेटेड क्रोमेटिन के पिपेट 100 माइक्रोलीटर दो 1.5 मिलीलीटर ट्यूबों में, फिर प्रत्येक ट्यूब में चिप कमजोर पड़ने बफर के 400 माइक्रोलीटर पिपेट 500 माइक्रोलीटर तक कुल मात्रा लाने के लिए।एक ट्यूब से समाधान के पांच माइक्रोलीटर निकालें और इसे DMSO इनपुट के रूप में शून्य से 20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। एक ही तरह से ए-485 के साथ इलाज कोशिकाओं से सोनिकेटेड क्रोमेटिन के साथ दो ट्यूब तैयार करें। डीएमएसओ और ए-485 नमूनों में आईजीजी और एच 3के27 एसीटाइल एंटीबॉडी जोड़ने के लिए एक पिपेट का उपयोग करें।फिर प्रत्येक ट्यूब में प्रोटीन के 20 माइक्रोलीटर एक चुंबकीय मोती जोड़ें, जिससे यह सुनिश्चित हो सके कि मोतियों को अच्छी तरह से निलंबित कर दिया गया है। नमूनों को चार डिग्री सेल्सियस पर रात भर घुमाएं। गोली प्रोटीन एक चुंबकीय विभाजक का उपयोग कर एक चुंबकीय मोती और मोतियों को परेशान किए बिना supernatant हटा दें।मोतियों को 500 माइक्रोलीटर से कम नमक धोने वाले बफर के एक मिलीलीटर में धोएं और उन्हें चार डिग्री सेल्सियस पर पांच मिनट के लिए घुमाएं। एक त्वरित स्पिन नीचे प्रदर्शन करें, मोतियों को चुंबकीय विभाजक के साथ गोली दें और सुपरनैंट को हटा दें। उच्च नमक धोने बफर, लिथियम क्लोराइड वॉश बफर, और ते बफर के साथ धोने की प्रक्रिया दोहराएं।ते बफर के साथ धोने के बाद, फ्रीजर से इनपुट नमूने निकालें और उन्हें बर्फ पर डाल दें। प्रोटीन के एक एलिकोट को पिघलाएं, फिर एक चुंबकीय विभाजक का उपयोग करके मोतियों को गोली दें और मोतियों से ते बफर को हटा दें। इनपुट नमूनों सहित हर नमूने में चपी एल्यूशन बफर के 100 माइक्रोलीटर और प्रोटीनेज के एक माइक्रोलीटर जोड़ें और थर्मोसाइकिलर का उपयोग करके दो घंटे के लिए 62 डिग्री सेल्सियस पर मिलाते हुए उन्हें इनक्यूबेट करें।इनक्यूबेशन के बाद, नमूनों को 10 मिनट के लिए 95 डिग्री सेल्सियस तक गर्म करें, फिर उन्हें कमरे के तापमान में ठंडा करें। चुंबकीय मोतियों को चुंबकीय विभाजक के साथ गोली दें और डीएनए युक्त सुपरनेट को एक नई 1.5 मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें। एक मानक पीसीआर सफाई किट का उपयोग कर डीएनए शुद्ध और qPCR चलाते हैं ।इन विट्रो हिस्टोन एसिटाइलट्रांसफरेज परख का उपयोग एक हिस्टोन सब्सट्रेट की ओर पी 300 हैट गतिविधि पर एनाकार्डिक एसिड के प्रभाव की जांच करने के लिए किया गया था। एक एकाग्रता रेंज का परीक्षण किया गया था और एसिटिल-सीओए को नकारात्मक नियंत्रण प्रतिक्रिया में नहीं जोड़ा गया था। इम्यूनोब्लॉट परिणाम ImageJ के साथ मात्रा निर्धारित किए गए थे, जो डीएमएसओ नियंत्रण की तुलना में 100 माइक्रोमोलर एनाकार्डिक एसिड पर एसीटाइल एच3के18 और एसीटिल एच3के9 में स्पष्ट कमी दिखा रहे थे।क्रोमेटिन हाइपर-एसिटिलेशन अवरोध परख में, एचडीएसीआई एमएस275 के साथ एमसीएफ-7 कोशिकाओं का उपचार कई lysine अवशेषों पर हिस्टोन 3 के दृढ़ता से अप्रेय किए गए एसीटिलेशन। एसीटाइल एच3के18 और एसीटाइल एच3के27 का बेसल स्तर कम था, जिसमें CHHAI परख में एचडीएसीआई जोड़ने के लाभ दिखाई दे रहे थे । MS275 के साथ पूर्व में इलाज कोशिकाओं में ए-485 के अलावा H3K18 और H3K27 में वृद्धि हुई हिस्टोन एसीटिलेशन को कम करता है, लेकिन H3K9 नहीं।इमेजजे के साथ इम्यूनोब्लॉट के परिणामों की भी मात्रा निर्धारित की गई थी। छगन क्यूपीसीआर का उपयोग जीन नियामक तत्वों पर हैट अवरोधकों के प्रभावों की जांच करने के लिए किया गया था जो ऑन्कोजीन अभिव्यक्ति को नियंत्रित करते हैं। डीएमएसओ नमूने में, आईजीजी नियंत्रण एंटीबॉडी द्वारा उपजी डीएनए ने साइक्लिन डी 1 प्रमोटर के लिए क्यूपीसीआर प्रतिक्रिया में एसीटाइल एच 3K27 एंटीबॉडी की तुलना में अधिक सीटी मूल्य का उत्पादन किया, यह दर्शाता है कि गैर-विशिष्ट आईजीजी नियंत्रण ने प्रमोटर पर एसीटाइल एच 3के27 विशिष्ट एंटीबॉडी की तुलना में कम डीएनए हिस्टोन परिसरों को उपजी ।DMSO नियंत्रण के साथ तुलना में, ए-485 साइक्लिन D1 प्रमोटर में एसीटाइल H3K27 संवर्धन कम। महत्वपूर्ण बात, ए-485 सेल संस्कृति में एसीटाइल H3K27 को काफी कम करने के लिए जाना जाता है। इस प्रोटोकॉल का प्रयास करते समय, ध्यान रखें कि इन विट्रो हैट और सीएचईएएस के पूर्व-इनक्यूबेशन कदम आवश्यक हैं और उन्हें भुलाया नहीं जाना चाहिए।इनपुट नमूनों को बचाने और ChIP के दौरान मोतियों के नुकसान से बचने के लिए याद रखना भी महत्वपूर्ण है। इन प्रक्रियाओं को करने के बाद, ChIP-seq एक अतिरिक्त तरीका है जिसे पूरे जीनोम के लिए नियामक तत्वों पर हिस्टोन एसिटिलेशन के बारे में वैश्विक जानकारी हासिल करने के लिए निष्पादित किया जा सकता है। ये प्रोटोकॉल वैज्ञानिकों के लिए उपन्यास हैट अवरोधकों को सावधानीपूर्वक मान्य करने और साहित्य में कम गुणवत्ता वाले रासायनिक जांच प्रकाशित करने से बचने के लिए सहायक हैं।मान्य टोपी अवरोधक संभावित चिकित्सा विज्ञान के रूप में आगे के विकास से गुजर सकते हैं।

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

Coculture Assays अध्ययन करने के लिए ग्लयोब्लास्टोमा आक्रमण की बृहतभक्षककोशिका और Microglia उत्तेजना

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Spheroids, कॉलोनी के गठन की परख, और Zebrafish Xenografts द्वारा विरोधी अनंतमूलि OT48 की सी गतिविधि के नैदानिक मूल्यांकन

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Assessment of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors by an Interrogation of Signal Transduction Pathways by Antibody Arrays

एंटीबॉडी arrays द्वारा संकेत Transduction रास्ते की एक पूछताछ के द्वारा Tyrosine कळेनासे अवरोधकों के लिए प्रतिरोध का आकलन

Cancer patients with an aberrant regulation of the protein phosphorylation networks are often treated with the tyrosine kinase inhibitors. Response rates ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

लाइव सेल इमेजिंग परख ग्लियोब्लास्टोमा ब्रेन ट्यूमर स्टेम सेल प्रवासन और आक्रमण का अध्ययन करने के लिए

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Investigation of Genetic Dependencies Using CRISPR-Cas9-based Competition Assays

आनुवंशिक निर्भरता की जांच CRISPR-Cas9-आधारित प्रतियोगिता परख का उपयोग

Gene perturbation studies have been extensively used to investigate the role of individual genes in AML pathogenesis. For achieving complete gene ...

Yeast As a Chassis for Developing Functional Assays to Study Human P53

अध्ययन मानव P53 करने के लिए कार्यात्मक परख के विकास के लिए एक चेसिस के रूप में खमीर

The finding that the well-known mammalian P53 protein can act as a transcription factor (TF) in the yeast S. cerevisiae has allowed for the development of ...

Characterization of the Effects of Migrastatic Inhibitors on 3D Tumor Spheroid Invasion by High-resolution Confocal Microscopy

उच्च संकल्प Confocal माइक्रोस्कोपी द्वारा 3 डी ट्यूमर स्फीरॉइड आक्रमण पर Migrastatic inhibitors के प्रभाव का चरित्र

Drug discovery and development in cancer research is increasingly being based on drug screens in a 3D format. Novel inhibitors targeting the migratory and ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

स्तन कैंसर मेटास्टैटिक उपनिवेशीकरण और फेफड़ों में बोझ की मात्रा निर्धारित करने के लिए वीवो इमेजिंग में पूंछ नस मेटास्टेसिस Assays और वास्तविक समय का संयुक्त उपयोग

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...

Assessing Cellular Target Engagement by SHP2 (PTPN11) Phosphatase Inhibitors

Assessing Cellular Target Engagement by SHP2 PTPN11 Phosphatase Inhibitors

SHP2 (PTPN11) द्वारा सेलुलर लक्ष्य सगाई का आकलन फॉस्फेट अवरोधक

The Src-homology 2 (SH2) domain-containing phosphatase 2 (SHP2), encoded by the PTPN11 proto-oncogene, is a key mediator of receptor tyrosine kinase ...

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

कैनोरहैब्डिटिस एलिगेंस का उपयोग करके ईजीएफआर और आरएएस अवरोधकों की पहचान

The changes in the plasma membrane localization of the epidermal growth factor receptor (EGFR) and its downstream effector RAS have been implicated in ...