Name: automation of bio-atomic force microscope measurements on hundreds of c. albicans cells
Uploaded: 2021-04-02T13:00:00
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我们要感谢法国国家海洋和委员会（墨西哥）、法国外交部和巴黎大学13号的FONCYT，尽管国际合作经济合作组织-NORD项目为"纳米心绞痛诊断"，263337号（墨西哥）和MI5P02（法国）提供财政支持。AMR要感谢SIP-IPN通过第20195489号项目的财政支持。SPC 由 CONACYT（第 288029 号）和 IPN 的博士奖学金支持，通过合作协议获得双博士证书 （IPN-UPS）。ED和CFD是国家科学研究中心（CNRS）的研究人员。

1. 微生物细胞培养
<ol><li>从甘油库存中恢复细胞。 注 ：C. 白化病 储存在 -80 °C 的甘油库存中，储存在大理石上。<ol>
<li>在 -80 °C 库存中挑选大理石，然后用酵母肽脱克糖 （YPD） agar 擦一擦。在液体培养前，在30°C下将细胞生长2天。</li>
	</ol>
</li>
	<li>准备液体培养物。<ol>
<li>用5mL的无菌YPD汤填充培养管，并加入一个在YPD agar板上生长的 C.藻类 细胞群。</li>
		<li>在静态条件下在静?...

<ol>
	<li>Cross, S. E., Jin, Y. S., Rao, J., Gimzewski, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomechanical+analysis+of+cells+from+cancer+patients.">Nanomechanical analysis of cells from cancer patients.</a> Nature Nanotechnology. 2 (12), 780-783 (2007).</li><li>Dague, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+force+and+electron+microscopic-based+study+of+sarcolemmal+surface+of+living+cardiomyocytes+unveils+unexpected+mitochondrial+shift+in+heart+failure.">Atomic force and electron microscopic-based study of sarcolemmal surface of living cardiomyocytes unveils unexpected mitochondrial shift in heart failure.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 74, 162-172 (2014).</li><li>Muller, D. J., Helenius, J., Alsteens, D., Dufrene, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force+probing+surfaces+of+living+cells+to+molecular+resolution.">Force probing surfaces of living cells to molecular resolution.</a> Nature Chemical Biology. 5 (6), 383-390 (2009).</li><li>Dague, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+Force+Microscopy+to+Explore+Electroporation+Effects+on+Cells.">Atomic Force Microscopy to Explore Electroporation Effects on Cells.</a> Handbook of Electroporation. , 1-13 (2016).</li><li>Puntheeranurak, T., Neundlinger, I., Kinne, R. K. H., Hinterdorfer, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+recognition+force+spectroscopy+of+transmembrane+transporters+on+living+cells.">Single-molecule recognition force spectroscopy of transmembrane transporters on living cells.</a> Nature Protocols. 6 (9), 1443-1452 (2011).</li><li>Formosa, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoscale+analysis+of+the+effects+of+antibiotics+and+CX1+on+a+Pseudomonas+aeruginosa+multidrug-resistant+strain.">Nanoscale analysis of the effects of antibiotics and CX1 on a Pseudomonas aeruginosa multidrug-resistant strain.</a> Scientific Reports. 2, (2012).</li><li>Pillet, F., Chopinet, L., Formosa, C., Dague, &. #. 2. 0. 1. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+Force+Microscopy+and+pharmacology:+From+microbiology+to+cancerology.">Atomic Force Microscopy and pharmacology: From microbiology to cancerology.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - General Subjects. 1840 (3), 1028-1050 (2014).</li><li>Wu, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+methods+to+assess+cell+mechanical+properties.">A comparison of methods to assess cell mechanical properties.</a> Nature Methods. 15 (7), 491-498 (2018).</li><li>Rigato, A., Rico, F., Eghiaian, F., Piel, M., Scheuring, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+Force+Microscopy+Mechanical+Mapping+of+Micropatterned+Cells+Shows+Adhesion+Geometry-Dependent+Mechanical+Response+on+Local+and+Global+Scales.">Atomic Force Microscopy Mechanical Mapping of Micropatterned Cells Shows Adhesion Geometry-Dependent Mechanical Response on Local and Global Scales.</a> ACS Nano. 9 (6), 5846-5856 (2015).</li><li>Favre, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+AFM+imaging+and+force+spectroscopy+using+two-dimensional+probe+arrays+for+applications+in+cell+biology.">Parallel AFM imaging and force spectroscopy using two-dimensional probe arrays for applications in cell biology.</a> Journal of Molecular Recognition. 24 (3), 446-452 (2011).</li><li>Dujardin, A., Wolf, P. D., Lafont, F., Dupres, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+multi-sample+acquisition+and+analysis+using+atomic+force+microscopy+for+biomedical+applications.">Automated multi-sample acquisition and analysis using atomic force microscopy for biomedical applications.</a> PLOS ONE. 14 (3), 0213853 (2019).</li><li>Formosa, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+living+cell+arrays+for+atomic+force+microscopy+studies.">Generation of living cell arrays for atomic force microscopy studies.</a> Nature Protocols. 10 (1), 199-204 (2015).</li><li>Proa-Coronado, S., S&#233;verac, C., Martinez-Rivas, A., Dague, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+the+paradigm+of+nanomechanical+measurements+on+cells+using+AFM:+an+automated+methodology+to+rapidly+analyse+thousands+of+cells.">Beyond the paradigm of nanomechanical measurements on cells using AFM: an automated methodology to rapidly analyse thousands of cells.</a> Nanoscale Horizons. , (2019).</li><li>Foncy, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+polyurethane+and+epoxy+resist+master+mold+for+nanoscale+soft+lithography.">Comparison of polyurethane and epoxy resist master mold for nanoscale soft lithography.</a> Microelectronic Engineering. 110, 183-187 (2013).</li><li>Unsay, J. D., Cosentino, K., Garc&#237;a-S&#225;ez, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+Force+Microscopy+Imaging+and+Force+Spectroscopy+of+Supported+Lipid+Bilayers.">Atomic Force Microscopy Imaging and Force Spectroscopy of Supported Lipid Bilayers.</a> Journal of Visualized Experiments. (101), e52867 (2015).</li><li>Schiavone, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combined+chemical+and+enzymatic+method+to+determine+quantitatively+the+polysaccharide+components+in+the+cell+wall+of+yeasts.">A combined chemical and enzymatic method to determine quantitatively the polysaccharide components in the cell wall of yeasts.</a> FEMS Yeast Research. 14 (6), 933-947 (2014).</li><li>Formosa, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoscale+Effects+of+Caspofungin+against+Two+Yeast+Species,+Saccharomyces+cerevisiae+and+Candida+albicans.">Nanoscale Effects of Caspofungin against Two Yeast Species, Saccharomyces cerevisiae and Candida albicans.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (8), 3498-3506 (2013).</li><li>El-Kirat-Chatel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoscale+analysis+of+caspofungin-induced+cell+surface+remodelling+in+Candida+albicans.">Nanoscale analysis of caspofungin-induced cell surface remodelling in Candida albicans.</a> Nanoscale. 5 (3), 1105-1115 (2013).</li><li>Peric, O., Hannebelle, M., Adams, J. D., Fantner, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+bacterial+traps+for+simultaneous+fluorescence+and+atomic+force+microscopy.">Microfluidic bacterial traps for simultaneous fluorescence and atomic force microscopy.</a> Nano Research. 10 (11), 3896-3908 (2017).</li></ol>

这种方法提供的主要改进是在确定的时间内测量的细胞数量显著增加。对应项是减少每个单元格测量的点数。这意味着这种方法不是为提供单个细胞的详细分析而设计的。该方法仅适用于可安装在 PDMS 盖章井中的细胞。邮票是相当通用的，而它包含1.5 x 1.5 μm2 至6 x 6 μm2的井。仍然不可能固定杆菌或更大的细胞。邮票和毛细管对流沉积不能用来固定更大的哺乳动物细胞（长度约100?...

这项工作提供了一种方法，使用原子力显微镜（AFM）对数百个活细胞进行自动力测量。它还提供了一种在 PDMS 微结构盖章上固定微生物的方法，该印章与在液体环境中进行的 AFM 实验相容。
Bio-AFM 是一种高度专业化的技术，用于生物学应用，然后用于研究活细胞。它需要一个训练有素的工程师，他能够分析当时的一个单元格。在这些条件下，可以分析的不同细胞数量相当小，典型的5到10个细胞在4-5小时内。然而，记录在单个细胞上的力测量量通常非常高，并且很容易达到1000。因此，目前对活细胞进行 AFM 力测量的范式是记录数百个力曲线 （FCs），但在数量有限的细胞上。
从统计学上讲，这种方法是值得怀疑的，并提出了样本的代表性问题。事实上，即使在这几个细胞上记录了数百次测量，也很难通过测量几个细胞来评估细胞群的异质性。然而，正是根据这一范式，生物物理学、微生物学和纳米医学1、2、3取得了重大进展。事实上，单细胞规模的纳米分析提供了关于细胞纳米力学、转膜蛋白组织或抗菌或抗癌药物4、5、6、7的作用机制的新信息。然而，最近对细胞进行的几次高通量生物力学测试已经出现8项，表明科学界对改变这一模式和获取细胞群异质性感兴趣。这些测试都依赖于微流体系统来变形细胞，并在压力下光学测量其变形，以间接测量其整体表面弹性8。然而，这些方法的一个重要问题是它们是单参数的：只有细胞弹性才能被探测到。此外，它们不允许测量附着细胞的机械参数，例如，这可能限制对非循环哺乳动物细胞或生物膜的研究。
涉及AFM的方法已经由S.舍林9 和M.法夫尔10的团队开发。在纤维素模式9上固定细胞，迫使单个细胞采取模式9的形状。然后，这个团队绘制了几个单元格的机械特性来定义平均数据，代表14到18个细胞。Farve等人进行的发展旨在通过将AFM罐头10平行来使测量结果倍化。据我们所知，这种多重方向的工作并没有导致对活细胞的测量。
Dujardin 团队提出的一个有趣的方法是提供一种自动化 AFM，能够识别细胞并在定制井底成像。虽然这种方法不允许分析大量的细胞，它允许自动测试每个井11的不同条件。
我们在这项工作中的目标是更加雄心勃勃，因为我们想要测量至少1000个细胞，以获得不是一个普通的细胞，而是相反，细胞之间的异质性。我们在这里开发的使用 AFM 访问细胞群异质性的战略基于对记录有限数量的力曲线的数百个细胞的分析。与记录有限数量的细胞上大量力曲线的"经典"方法相比，这种方法应被视为补充，因为它不提供相同的信息。事实上，虽然典型的方法允许人们探索单个细胞表面的异质性，使用我们的方法，我们能够访问整个细胞群的异质性。为了实现这一目标，我们结合了一种方法，将微生物（这里为酵母菌种 念珠菌）直接固定到PDMS微结构图章12的井中，并开发了一个原始程序，自动将AFM尖端从细胞移动到细胞13， 并测量每个细胞的机械特性。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>AFM cantilever</td>
			<td>Bruker AFM probes</td>
			<td>MLCT</td>
			<td>The cantilevers used were the labeled &#8220;C&#8221; with resonant frequency of 7 to 10 kHz and k: 0.01 N/m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AFM data analysis</td>
			<td>JPK-Bruker</td>
			<td>JPK Data processing version minimum 5.1.8</td>
			<td>Can be downloaded from a JPK-Bruker user acount</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AFM Petri dishes</td>
			<td>WPI</td>
			<td>FluoroDish FD35-100</td>
			<td>The heater was used to monitor the temperature changes during the experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atomic force Microscope (AFM)</td>
			<td>JPK-Bruker</td>
			<td>Nanowizard II or III</td>
			<td>the AFM should be mounted on an inverted optical microscope with a motorized stage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caspofungin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SML0425-5MG</td>
			<td>Caspofungin was used with a concentration of 4 MIC (Minimum Inhibitor Concentration)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Code editor</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>Visual Studio Code version 1.40.1</td>
			<td>https://code.visualstudio.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryobeads</td>
			<td>IFU</td>
			<td>CB12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dessicator/Degassing chamber</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>15594635</td>
			<td>The equipment is used to degassing the PDMS stamps for about 50 minutes any dessicator coupled with a vaccum pump will do.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish heater</td>
			<td>JPK-Bruker</td>
			<td>PetriDishHeater</td>
			<td>This is an add-on to the JPK/Bruker AFM. The heater was used to monitor the temperature changes during the experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate buffer pH 5.2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7899</td>
			<td>The solution contains 18 mM sodium acetate, 1 mM CaCl2, and 1 mM MnCl2. Adjust the pH with glacial acetic acid. The solution can be stored at 4 &#176;C for 2 months</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Statistical analysis language</td>
			<td>https://www.r-project.org</td>
			<td>R version 3.6.1</td>
			<td>R is a language and environment for statistical computing and graphics. It is a GNU project which is similar to the S language and environment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Statistical analysis software</td>
			<td>https://rstudio.com</td>
			<td>R studio version 1.1.463</td>
			<td>collaboration between the R Foundation, RStudio, Microsoft, TIBCO, Google, Oracle, HP and others. RStudio and Shiny are affiliated projects of the Foundation for Open Access Statistics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>761028</td>
			<td>Polydimethylsiloxane (PDMS) and curing agent in one set</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Peptone D Broth</td>
			<td>Difco</td>
			<td>242820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>YPD Agar</td>
			<td>Difco</td>
			<td>DF0427-17-6</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

automation of bio-atomic force microscope measurements on hundreds of c. albicans cells

本文介绍的方法旨在自动化生物-AFM实验和力曲线记录。使用此方法，可以自动在 4 小时内记录 1000 个单元上的力曲线。为了保持 4 小时的分析时间，每个单元格的力曲线数减少到 9 或 16。该方法结合了基于 Jython 的程序和在定义模式上组装单元的策略。该计划在商用 Bio-AFM 上实施，可以将尖端集中在阵列的第一个单元格上，然后自动从单元格移动到单元格，同时记录每个单元格上的力曲线。使用这种方法，可以访问细胞的生物物理参数，如其刚性、粘合特性等。通过自动化和分析大量的细胞，可以访问细胞群的行为。这是生物-AFM领域的一个突破，迄今为止，数据只记录在几十个细胞上。

我们使用上述协议来分析卡波芬金对机会性人类病原体C.白化病菌在其酵母形式的生物物理特性的影响。卡斯波芬金是当其他药物因细胞向抗真真药发展而无效时使用抗真果分子的最后机会。其作用机制基于对负责 é glucan 合成的复杂 fks1/Fks2 的子单位 Fks2 的抑制。由于胶质是真菌细胞壁16、17的主要成分，我们预计细胞壁的生物物理特性会改变：?...

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Automation of Bio-Atomic Force Microscope Measurements on Hundreds of C. albicans Cells

该协议旨在自动化数百个微生物细胞上的自动对焦M测量。首先，微生物固定在PDMS标记显微结构中，然后在数百个固定细胞上自动进行力光谱测量。

数百个 C.白化病 细胞生物原子力显微镜测量自动化

The method presented in this paper aims to automate Bio-AFM experiments and the recording of force curves. Using this method, it is possible to record ...

原子力显微镜自动化是生物技术向生物医学应用发展的关键创新。它还为细胞种群的生物力学特性调查开辟了通道。我们的方法使得在四个小时内记录1000个细胞的AFM测量结果成为可能，而通常的方法需要4个小时来测量10个细胞，这确实是一个显著的时间增益。如果自动化是将这项技术引入医院实验室的先决条件，则此概念验证协议表明其在制定特定医疗诊断策略时具有潜力。此协议使用多功能 PDMS 茎，可以充满各种微生物，从而探索不同的系统。要准备 PDMS 盖章，请在 PDM、寡聚合物和固化剂中以 10 比 1 的质量比例混合 55 克 PDMS 预聚合物溶液，并在真空下将产生的溶液在真空中一次混合 10 到负 1 到 10 到负两棒 5 到 10 分钟。当所有的陷阱气泡都被移除后，将20克脱气溶液倒入硅主模具上，达到2至3毫米厚，并再次去气。当所有气泡都被移除后，在 80 摄氏度下对 PDMS 进行一小时的回缩，并使用手术刀切割与可见的微结构阵列平行的 PDMS 微结构印记。然后从硅主模具上剥下邮票，将邮票微结构位置放在玻璃滑梯上，微型结构与滑梯侧面对齐。为了为设备准备细胞，离心机600微升的细胞悬浮的兴趣，并添加200微升的超自然分子的邮票。在真空下将超自然人德加斯吸约40分钟。当所有气泡都被移除后，用200微升的再喷射细胞溶液替换PDMS表面的超细剂，在室温下孵育15分钟。要将细胞加载到邮票的微观结构中，请使用以 30 到 50 度角举行的玻璃滑梯将细胞向两个方向扩散，必要时将细胞向两个方向扩散数倍。当微结构的填充率很高时，使用移液器去除细胞悬架，每次洗涤一毫升醋酸盐缓冲器清洗三次，以去除任何未绑住的细胞。最后一次洗涤后，使用氮流干燥样品的背面，并将盖章放在培养皿中。然后在菜中加入两毫升新鲜醋酸盐缓冲器。对于细胞的原子力显微镜，将碟子放在原子力显微镜阶段，并将舞台中心放在零到零。当舞台处于中心位置时，将菜移入显微镜Petry盘架，并对齐邮票的边缘，使其垂直于培养皿架的 y 轴。然后将原子显微镜力放在舞台上，注意步进马达是否足够伸展，以避免尖端撞击到邮票上。用于成像，使用显微镜旋钮将原子力显微镜尖端集中在 4.5 乘 4.5 平方米井的左角，并在显微镜软件中选择力映射模式。设置一个64乘64力图，超过100乘100微米区域，将相对设定点设置为3至5纳米牛顿，Z长度至4微米，Z运动持续时间，延长时间至0.01秒，延期延迟至零，缩回延迟至零，延迟模式以恒定力，样本率到2048赫兹。取消选中Z闭环并检查方形图像。设置快速访问 100 微米，慢轴到 100 微米，X 偏移到零微米，Y 偏移到零微米，网格角度到零度，像素到 64 × 64，像素比为 1 比 1 。接下来打开自动化软件。在弹出窗口中，选择指向脚本文件的路径。在gyfon脚本输入框部分的P1可变行239中输入W1坐标，在P2变量行241中输入框部分输入W2坐标值。将间距值归因于脚本的间距可变行 245 并输入井维，这可以从井模式的设计确定为 W-S 可变线 248。将路径写入 251 行中的保存目录，以便在所需的位置保存数据，并将总面积可变行 254 设置为 100 微米多端的愿望。然后设置在数字扫描可变行 257 中记录的每口井的力曲线矩阵行和列，然后单击运行以启动程序。要分析数据，请使用视频工作室代码软件打开 Python 脚本并执行 Python 脚本的副本文件，将力曲线文件组织成一个文件夹。输入路径到将存储数据的普通文件夹。分析力曲线，打开原子力显微镜制造商的数据处理软件。在文件菜单中，选择一批光谱曲线。接下来选择文件和加载过程，并选择刚度过程。选择过程的最后一步，单击"保留并应用到所有"，以便所有力曲线都得到相同的处理。要打开 R 脚本，将包含数据处理软件提取信息的包含信息的 i 文件加载到 R 工作室软件中。在环境窗口中，单击"导入数据集"，从弹出窗口中的文本读取器单击浏览以定位点 TSV 文件。加载文件后，选择代码运行区域并运行所有代码以运行所有代码。在这里，显示了使用所示的协议获得的典型直方图。在这项分析中，在957个原生细胞上记录了刚度再分区，而在这项分析中，测量了574个被处理细胞的刚度。要知道，使用数百个细胞可以观察到值的双模分布。在较小的样本中，通常观察到单一分布，并可能导致对种群异质性缺乏观察。这两种情况的比较突出了卡斯波芬金对降低细胞僵硬的影响。ANOVA对原生细胞和处理细胞的比较揭示了这两种情况，其刚度差异很大。由于分析的细胞数量众多，因此达到了这个值，从而对获得的结果有了更大的信心。在反复将细胞冲入井中直到盖章满为止之前，将超自然物添加到 PDMS 邮票中，对于分析的成功至关重要。在这个概念证明中，对念珠菌细胞进行了分析，但该协议可以应用于任何一组模式细胞、分子或材料。

Research

JoVE Journal

Bioengineering

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