Name: double direct injection of blood into the cisterna magna as a model of subarachnoid hemorrhage
Uploaded: 2020-08-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage at JoVE.com

Wir danken der PRIMACEN-Plattform (Normandie Rouen University, Frankreich) für bildgebende Geräte und Herrn Arnaud Arabo, Frau Julie Maucotel und Frau Martine Dubois für die Unterbringung und Pflege von Tieren. Wir danken Frau Celeste Nicola dafür, dass sie dem Videotaping des Protokolls ihre Stimme geliehen hat. Diese Arbeit wurde unterstützt durch seinari Normandie Reifungsprogramm, Fondation AVC unter der Schirmherrschaft der FRM, Normandie Rouen University und Inserm. Die Normandie und die Europäische Union (3R-Projekt). Europa beteiligt sich mit dem Europäischen Fonds für regionale Entwicklung (EFRE) an der Normandie.

Alle Verfahren wurden unter der Aufsicht von H. Castel in Übereinstimmung mit dem französischen Ethikausschuss und den Leitlinien der Richtlinie 2010/63/EU des Europäischen Parlaments und des Rates für den Schutz von Tieren, die für wissenschaftliche Zwecke verwendet werden, durchgeführt. Dieses Projekt wurde von der örtlichen CENOMEXA und den nationalen Ethikausschüssen für Tierforschung und -tests genehmigt. Männliche C57Bl/6J Rj-Mäuse (Janvier) im Alter von 8–12 Wochen wurden unter kontrollierten Standard...

Trotz der Intensität der Forschung auf dem Gebiet der SAH und der Entwicklung von therapeutischen Strategien wie endovaskulären und pharmakologischen Behandlungsmöglichkeiten, die in den letzten zwanzig Jahren zugenommen haben, bleibt die Sterblichkeit innerhalb der ersten Woche der Krankenhauseinweisung hoch und erreicht in den folgenden 6 Monaten etwa 50%24,25. Dieses aktuelle präklinische Modell durch tägliche Doppelinjektion von homolog...

Subarachnoide Blutungen (SAH) machen bis zu 5% aller Schlaganfallfälle aus und stellen eine relativ häufige Pathologie mit einer Inzidenz von 7,2 bis 9 Patienten pro 100.000 pro Jahr dar, mit einer Sterblichkeitsrate von 20%-60% je nach Studie1,2,3. In der akuten Phase ist die Sterblichkeit auf die Schwere von Blutungen, Blutungen, zerebralen Vasospasmus (CVS) und/oder medizinischen Komplikationen4zurückzuführen. Bei Überlebenden ist eine frühe Hirnverletzung (EBI) mit einer parenchymalen Verlängerung der Blutung und einer abrupten Erhöhung des intrakraniellen Drucks verbunden, was in etwa 10%-15% derFällezu primärer zerebraler Ischämie5 und sofortigem Tod führen kann. Nach dem ersten "akuten" Stadium der SAH hängt die Prognose vom Auftreten einer "sekundären" oder verzögerten zerebralen Ischämie (DCI) ab, die bei fast 40% der Patienten durch zerebrale Computertomographie und bei bis zu 80% der Patienten nach Magnetresonanztomographie (MRT)7,8. Zusätzlich zu den CVS, die zwischen 4 bis 21 Tage nach einem Aneurysmbruch bei einer Mehrheit der SAH-Patienten auftreten, kann DCI9 aus multifaktoriellen diffusen Hirnläsionen resultieren, die sekundär zur Mikrothrombosebildung, reduzierter zerebraler Perfusion, Neuroinflammation und kortikaler Ausbreitungsdepression (CSD)10,11,12,13. Dies betrifft 30% der SAH-Überlebenden und wirkt sich auf kognitive Funktionen wie visuelles Gedächtnis, verbales Gedächtnis, Reaktionszeit und Exekutive, visuospatial und Sprachfunktionen14 Beeinträchtigung des täglichen Lebens15. Aktuelle Standardtherapien zur Vorbeugung von CVS und/oder den schlechten kognitiven Ergebnissen bei SAH-Patienten basieren auf der Blockade der Ca2+-Signalisierung und Vasokonstriktion durch die Verwendung von Ca2+-Kanalinhibitoren als Nimodipin. Neuere klinische Studien zur Vasokonstriktion ergaben jedoch eine Dissoziation zwischen dem neurologischen Ergebnis des Patienten und der Prävention von CVS16, was auf komplexere pathophysiologische Mechanismen hindeutet, die an SAH-langfristigen Folgen beteiligt sind. Daher besteht ein medizinischer Bedarf an einem besseren Verständnis der Anzahl der pathologischen Ereignisse, die sah begleitet, und der Entwicklung gültiger und standardisierter Tiermodelle zur Erprobung ursprünglicher therapeutischer Interventionen.
Der Bruch eines intrakraniellen Aneurysmen, das hauptsächlich für sah beim Menschen verantwortlich ist, ist in präklinischen Tiermodellen wahrscheinlich schwer nachzuahmen. Derzeit kann der Aneurysmbruch und die SAH-Situation vorläufig durch die Perforation der mittleren Hirnarterie (endovaskuläres Punktionsmodell) getestet werden, die für CVS und sensitivomotorische Dysfunktion bei Mäusen17,18verantwortlich ist. Aufgrund des Fehlens einer möglichen Kontrolle über den Beginn von Blutungen und die Diffusion von Blut in diesem Modell wurden andere Methoden bei Nagetieren entwickelt, um SAH-Modelle ohne endovaskuläre Bruch zu erzeugen. Genauer gesagt bestehen sie aus der direkten Verabreichung von arteriellem Blut in den subarachnoiden Raum durch eine Einzel- oder Doppelinjektion in die Magna zisterne19 oder eine einzelinjektion in die prächiasmatische Zisterne20. Der Hauptvorteil dieser Mausmodelle ohne endovaskuläre Ruptur ist die Möglichkeit, den chirurgischen Eingriff und die Qualität und Quantität der injizierten Blutprobe reproduzierbar zu meistern. Ein weiterer Vorteil dieses Modells gegenüber dem Modell insbesondere durch endovaskuläre Perforation ist die Erhaltung des allgemeinen Wohlbefindens des Tieres. In der Tat ist diese Operation weniger invasiv und technisch weniger herausfordernd als die, die erforderlich ist, um einen Karotiswandbruch zu erzeugen. Bei diesem letzten Modell muss das Tier intubiert und mechanisch belüftet werden, während ein Monofilament in die äußere Halsschlagader eingelegt und in die innere Halsschlagader vorgedrungen ist. Dies führt wahrscheinlich zu vorübergehenden Ischämien aufgrund von Gefäßverstopfung durch den Drahtweg. Folglich ist die Komorbidität (moribunden Zustand, wichtige Schmerzen und Tod) im Zusammenhang mit der Operation weniger wichtig im Doppelinjektionsmodell im Vergleich zu endovaskulären Perforationsmodell. Die doppelte Direkteinspritzung entspricht nicht nur einer konsistenteren SAH, sondern entspricht auch dem Tierschutz in Forschung und Tests (verkürzte Zeit unter Anästhesie, Schmerzen durch Gewebestörungen in der Chirurgie und Not) und führt zu einer Mindestanzahl von Tieren, die für die Protokollstudie und Personalschulung verwendet werden.
Darüber hinaus ermöglicht dies die Umsetzung desselben Protokolls für transgene Mäuse, was zu einem optimierten pathologischen Verständnis der SAH und der Möglichkeit einer vergleichenden Prüfung potenzieller therapeutischer Verbindungen führt. Hier präsentieren wir ein standardisiertes Mausmodell der subarachnoiden Blutung (SAH) durch eine doppelte tägliche konsekutive Injektion von autologem arteriellem Blut in die Zisterne magna in 6-8 Wochen alten männlichen C57Bl/6J Mäusen. Der Hauptvorteil dieses Modells ist die Kontrolle des Blutungsvolumens im Vergleich zum endovaskulären Perforationsmodell und die Verstärkung des Blutungsereignisses ohne eine drastische Erhöhung des intrakraniellen Drucks21. Kürzlich wurde die doppelte direkte Injektion von Blut in die Zisternen magna zu den experimentellen und physiopathologischen Fragen bei Mäusen gut beschrieben. In der Tat haben wir vor kurzem CVS von großen zerebralen Arterien (Basilar (BA), mittlere (MCA) und vordere (ACA) zerebrale Arterien), zerebrovaskuläre Fibrin-Abscheidung und Zellapoptose vom Tag 3 (D3) bis 10 (D10), Kreislaufdefekte von paravaskulärer zerebrospinaler Flüssigkeit begleitet von veränderten sensitivomotorischen und kognitiven Funktionen bei Mäusen, 10 Tage nach der Zeit in diesem Modell22. So macht es dieses Modell gemeistert, validiert und für kurzfristige und langanhaltende Ereignisse nach der SAH charakterisiert. Es sollte ideal geeignet sein, um neue Ziele prospektiv zu identifizieren und für Studien zu potenten und effizienten therapeutischen Strategien gegen SAH-assoziierte Komplikationen zu entwickeln.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:776px;" width="775">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">absorbable hemostat</td>
			<td style="width:201px;">Ethicon</td>
			<td style="width:161px;">Surgicel</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">absorbable suturing thread</td>
			<td style="width:201px;">Ethicon</td>
			<td style="width:161px;">Vicryl 5.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">auto-regulated electric blanket</td>
			<td style="width:201px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:161px;">50-7087-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">bluetack for capillary fixation</td>
			<td style="width:201px;">UHU</td>
			<td style="width:161px;">Patafix</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">electronic balance</td>
			<td style="width:201px;">Denver Instrument</td>
			<td style="width:161px;">MXX-2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">glass capillaries</td>
			<td style="width:201px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:161px;">GC150F-15</td>
			<td style="width:167px;">inner diameter 0.86 mm 
			outer diameter 1.5 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">isoflurane vaporizer</td>
			<td style="width:201px;">Phymep</td>
			<td style="width:161px;">V100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">micropipette puller</td>
			<td style="width:201px;">Sutter Instrument Company</td>
			<td style="width:161px;">P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">needle 26 G</td>
			<td style="width:201px;">BD microbalance</td>
			<td style="width:161px;">300300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">non absorbable suturing thread</td>
			<td style="width:201px;">Peters surgical</td>
			<td style="width:161px;">Filapeau 4.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">stereotaxic frame</td>
			<td style="width:201px;">David Kopf instruments</td>
			<td style="width:161px;">Model 902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">surgical equipment</td>
			<td style="width:201px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:161px;">clamp, microscissors, thin scissors</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">syringe 20 mL TERUMO</td>
			<td style="width:201px;">Thermofisher</td>
			<td>11866071</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

double direct injection of blood into the cisterna magna as a model of subarachnoid hemorrhage

Unter den Schlaganfällen macht subarachnoidieide Blutung (SAH) nach dem Bruch eines zerebralen arteriellen Aneurysmens 5-9% aus, ist aber für etwa 30% der gesamten Schlaganfall-bedingten Mortalität mit einer wichtigen Morbidität in Bezug auf das neurologische Ergebnis verantwortlich. Ein verzögerter zerebraler Vasospasmus (CVS) kann am häufigsten in Verbindung mit einer verzögerten zerebralen Ischämie auftreten. Verschiedene Tiermodelle von SAH werden nun verwendet, einschließlich endovaskulärer Perforation und direkte Injektion von Blut in die Zisterne magna oder sogar die prächiasmatische Zisterne, die jeweils deutliche Vor- und Nachteile aufweisen. In diesem Artikel wird ein standardisiertes Mausmodell der SAH durch doppelte direkte Injektion von bestimmten Mengen autologen Vollbluts in die Zisterne magna vorgestellt. Kurz gesagt, Mäuse wurden gewogen und dann durch Isofluran-Inhalation besäugt. Anschließend wurde das Tier in eine Liegeposition auf einer beheizten Decke mit einer Rektaltemperatur von 37 °C gelegt und in einem stereotaktischen Rahmen mit einer Zervixbiegung von etwa 30° positioniert. Einmal an Ort und Stelle, wurde die Spitze einer länglichen Glasmikropipette, gefüllt mit dem homologen arteriellen Blut aus der Halsschlagader einer anderen Maus gleichen Alters und Geschlechts (C57Bl/6J), mittels eines Mikromanipulators im rechten Winkel in Kontakt mit der atlanto-okzipitalen Membran positioniert. Dann wurden 60 l Blut in die Zisterne-Magna injiziert, gefolgt von einer 30°-Abwärtsneigung des Tieres für 2 Minuten. Die zweite Infusion von 30 l Blut in die Zisterne magna wurde 24 h nach der ersten durchgeführt. Die individuelle Nachbeobachtung jedes Tieres erfolgt täglich (sorgfältige Bewertung von Gewicht und Wohlbefinden). Dieses Verfahren ermöglicht eine vorhersagbare und hochreproduzierbare Blutverteilung, die wahrscheinlich mit einer intrakraniellen Druckerhöhung einhergeht, die durch eine gleichwertige Injektion einer künstlichen zerebralen Rückenmarksflüssigkeit (CSF) nachgeahmt werden kann, und stellt ein akutes bis mildes Modell der SAH dar, das eine niedrige Sterblichkeit induzieren.

Experimenteller Zeitplan, Verfahren, Follow-up und Sterblichkeit Abbildung 1A und Abbildung 1B fassen das SAH-Modellprotokoll durch doppelte intrazisternale Blutinjektion zusammen. Kurz gesagt, wurden am ersten Tag der SAH-Induktion (D-1) 60 l Blut, das einer homologen Maus entnommen wurde, bzw. 60 l künstliche Zerebrospinalflüssigkeit (aCSF) in die Zisternenmagna in SAH bzw. Scheinbedingungen injiziert. Am nächsten Tag (D0) wurden 30 l Bl...

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Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Wir beschrieben in diesem Protokoll ein standardisiertes subarachnoides Blutungsmodell (SAH) durch eine doppelte Injektion von autologem Vollblut in die Zisternenmagna. Der hohe Standardisierungsgrad des Doppelinjektionsverfahrens stellt ein mittleres bis akutes Modell der SAH mit relativer Sterblichkeitssicherheit dar.

Doppelte Direkteinspritzung von Blut in die Cisterna Magna als Modell der subarachnoiden Blutung

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...

Das übergeordnete Ziel dieses Videos ist es, das Protokoll einer doppelten direkten Injektion von Blut in die Zisterne magna als Modell der subarachnoiden Blutung zu erklären. Die Physiologie der subarachnoiden Blutung ist oft auf einen Bruch eines Aneurysmen zurückzuführen. Und wir machen zuerst die Extravasation von Blut in das Kompartiment zwischen dem Gehirn und dem Gewebe, das das Gehirn bedeckt.Dieses Fach ist der Subarachnoidenraum. Subarachnoide Blutungen machen bis zu 7% aller Streikfälle aus. Die Sterblichkeit schwankt zwischen 30 und 50% in bevölkerungsbasierten Studien und subarachnoiden Blutungen Überlebende erleben häufig kognitive Fortsetzungen als Gedächtnisdefizite, Asthenie oder affektive Störungen.Die Hauptursache für die hohe Prävalenz des schlechten Ergebnisses ist die zerebrale Ischämie. Studien stellten einen Zusammenhang zwischen dem Auftreten von Ischämie in der Vasokonstriktion der großen Hirnarterien, genannt mikroskopischer Vasospasmus, der bei einer Mehrheit der Patienten zwischen dem vierten und fünfzehnten Tag nach dem ersten Blähungsereignis nachgewiesen werden kann. Aufgrund der Ineffizienz der derzeitigen therapeutischen Möglichkeiten besteht ein offensichtlicher medizinischer Bedarf an einem besseren Verständnis pathologischer Ereignisse.Begleitende subarachnoide Blutungen und neue therapeutische Ziele sollten getestet werden, aber dies erfordert vielfältige und standardisierte Tiermodelle. Der Bruch des interkraniellen Aneurysmen, das hauptsächlich für subarachnoide Blutungen beim Menschen verantwortlich ist, ist wahrscheinlich schwierig, präklinische und menschliche Modelle zu erstellen. Bei Tieren liegen die Hauptschwierigkeiten in der Kontrollinzidenz von Blutungen und Blutverteilung, aber neuere Studien konzentrieren sich auf die Entwicklung redischerer Modelle von Modellen der subarachnoiden Blutung.Hierstellen Sie ein standardisiertes Mausmodell von zwei aufeinanderfolgenden Injektionen von autologem arteriellem Blut unserer zwei Tage in die Zisterne magna. Die Hauptvorteile dieses Modells sind, einen nichtinvasiven chirurgischen Eingriff reproduzierbar zu meistern, die Qualität und Quantität des injizierten Blutes anzupassen und das Blutungsereignis zu verstärken, ohne den intrakraniellen Druck drastisch zu erhöhen. Vor Beginn der Operation müssen Sie eine weitere große Anzahl von Glaskapillaren mit einem Mikropipette-Puller setzen.Die injizierende Pipette sollte einen Innendurchmesser von 0,86 Millimetern und einen Außendurchmesser von 0,5 Millimeter aufweisen. Bereiten Sie die künstliche zerebrale Rückenmarksflüssigkeit für Scheinzustand vor, wie im schriftlichen Protokoll angegeben. Sie müssen diese sauerstoffreiche künstliche zerebrale Rückenmarksflüssigkeit mit einem 0,22 Mikron Filterapparat realisieren.Der erste Schritt unseres subarachnoiden Blutungsmodells besteht in der Isolierung der Karotisarterie entlang der Luftröhre und der Sammlung des Maximums an Blut aus der Karotisarterienpunktion. Nach der Anästhesie durch Isofluran eisern, überprüfen Sie den Mangel an Reflexen, indem Sie ein oder zwei Hinterbeine klemmen, um die Einstellung des experimentellen Verfahrens zu ermöglichen. Kodieren Sie eine ein Millimeter Spritze mit Eprin mit einer 26-Spur-Nadel.Dies wird blutgerinnungsmöglich in den nächsten Schritten. Wiegen Sie jede Maus präzise mit einer elektronischen Waage. In der aktuellen Studie hätten Mäuse kurz vor der Operation ein Körpergewicht im Bereich von 20 bis 25 Gramm.Wie bereits erläutert, induzierte Anästhesie der operierten Maus und dann rasieren den Hals und den Raum zwischen jedem Ohr mit Hilfe einer geeigneten elektrischen Knipser. Überprüfen Sie die Maus schläft und der Mauskopf ist gut blockiert. Subkutan 100 Mikroliter Buprenorphin mit 0,1 Milligramm pro Kilo mit einer 26-Meter-Nadel im unteren Rücken injizieren, um Schmerzen nach dem Erwachen zu vermeiden.Verhindern Sie trockene Augen mit einem schützenden flüssigen Gel und halten Sie die intrauktale Temperatur von 37 Grad mit einer auto regulierten elektrischen Decke aufrecht. Vor der Behandlung des rasierten Bereichs mit einer antiseptischen Lösung wurden alle Instrumente, die das Gewebe berühren, sterilisiert und aseptisch behandelt. Schneiden Sie am ersten Tag einen einen Zentimeter langen Schnitt in den hinteren Hals, gefolgt von der Trennung der Muskeln entlang der Mittellinie, um auf die Zisternen magna zuzugreifen.Schneiden Sie die Spitze der leeren Glaspipette mit einer dünnen Schere. Passen Sie sich dann an eine Spritze an, die mit einem flexiblen Siliziumstecker verbunden ist. Dann übertragen Sie 60 Mikroliter Blut oder künstliche zerebrale Rückenmarksflüssigkeit in einem 0,5 Milliliter Rohr mit einer Präzisionsmikropipette Suck in die Glaspipette, die 60 Mikroliter Blut für die subarachnoiden Blutung oder 60 Mikroliter künstlicher zerebraler Rückenflüssigkeit für den Scheinzustand.Zur Injektion die Pipette auf den stereotaktischen Rahmen einzufügen, indem Sie z.B. einen Ring oder einen verwenden und sich langsam der Pipettenspitze an der Schnittstelle mit der Cisterna magna annähern. Legen Sie die Pipettespitze langsam durch die atlanto-okzipitale Membran in die Zisterne magna mit einem Mikromanipulator des stereotaktischen Rahmens ein. Schließen Sie die Pipette an die zuvor gefüllte Spritze an, die für die Druckinduktion bereit ist.Injizieren Sie durch Druck mit einer niedrigen Rate um 10 Mikroliter pro Minute, um akute intrakranielle Hypertonie zu vermeiden. Während der Injektion, überwachen Sie die Atemfrequenz und die Rektaltemperatur genau. Am Ende der Injektion, vorsichtig nehmen Sie die Pipette mit dem Mikromanipulator und visuell kümmern darauf, dass es kein Leck während der Entnahme.Erreichen Sie Homöostase und führen Sie zwei Nähte mit geflochtenem, nicht resorbierbarem Nährgewinde durch. Unmittelbar nach der Operation, isolieren und positionieren Sie die Maus im Niedergang Dekubitus und decken Sie mit einer Überlebensdecke in einer offenen Box für die Dauer der Genesung. Nach 24 Stunden, anästhesie neuflieren Sie die Maus auf dem stereotaktischen Rahmen wie am Vortag und entfernen Sie mit Sorgfalt die Nähte mit Mikroschere.Bereiten Sie wie zuvor aseptisch der atlanto-okzipitalen Membran vor, indem Sie auf die rasierte Fläche und aseptische Lösung mit einer Baumwollstange auftragen. Injizieren, wie am Vortag, 30 Mikroliter Blut oder künstliche zerebrale Rückenmarksflüssigkeit mit einer niedrigen Rate. Wie bereits erwähnt, überwachen Sie Atemfrequenz und Rektaltemperatur.Am Ende der Injektion, vorsichtig nehmen Sie die Pipette und kontrollieren das Fehlen von Blutleck während der Entnahme. Erreichen Sie Homöostase und führen Sie zwei Nähte mit einem geflochtenen resorbierbaren Nahtgewinde durch. Vom ersten Tag der Operation bis zum Tag des Opfers sollte das Körpergewicht täglich als sensibler Indikator für das allgemeine Wohlbefinden bewertet werden.Es zeigte eine signifikante reduzierte Körpergewichtszunahme bei subarachnoiden Blutungen, im Vergleich zu Scheintieren, was auf einen lang anhaltenden Aktivitätsregenerationsprozess und verlängerte pathologische Ereignisse, postsubarachnoidale Blutungen hindeutet. Warum ist die Sterblichkeit nicht in Scheinzustand? Die Sterblichkeit liegt an Tag sieben bei subarachnoiden Blutungen, wobei die meisten Tiere am einen oder vierten Tag nach der Operation sterben.Unter humanen Endpunkten wird eine signifikante Gewichtsabnahme von 15% des Anfangsgewichts festgestellt. Eine zurückgeknickte Haltung, langsame Bewegungen, Wunden, abnorme Stimmbildungen oder signifikante Aggressionsind sind ebenfalls Anzeichen dafür, dass das Tier leidet. Wenn eines dieser Zeichen oder eine Kombination von Zeichen erscheint, wird die Verfolgung des Tieres innerhalb von Stunden verstärkt, die seinem Aussehen folgen.Wenn sich der Zustand des Tieres in der folgenden Stunde verschlechtert oder sich nicht innerhalb von 48 Stunden verbessert, wird davon ausgegangen, dass ein unerträgliches Leiden erreicht ist und die Tötung durchgeführt wird. In diesem Beispiel am ersten Tag der Operation kann es von einem Probenhirn beobachtet werden, Blutgerinnsel entlang der großen Arterien des Willis-Polygons in subarachnoiden Blutungen Subjekt. Am fünften Tag nach der Operation und vor dem Opfer ermöglicht die intervaskuläre indische Tinteninjektion den Nachweis von makroskopischem Vasospasmus, der der Vasokonstriktion großer Kleinhirnarterien entspricht, die Färbung von Hirnscheiben mit Hämatoxylin und Eosin ermöglicht die Messung des zerebralen Vasospasmus.Hier, wie auf dieser Fotomikroskopie dargestellt, können Sie als Vasospasmus der Basilararterie beobachten. In diesem Modell der Umleitung direkte Injektion von Blut in die Zisterne magna, haben wir vor kurzem gezeigt zerebralen Vasospasmus der großen zerebralen Arterien, zerebrale vaskuläre fibril Ablagerung, und Zellapoptose, begleitet von veränderten sensorischen, motorischen und kognitiven Funktionen bei Mäusen. So macht es dieses Modell validiert und gekennzeichnet für kurzfristige und lang anhaltende Ereignisse, postarachnoidale Blutungen.Es sollte ideal geeignet sein, um neue Ziele prospektiv zu identifizieren und studien über effiziente therapeutische Strategien gegen subarachnoidale Blutungen im Zusammenhang mit Komplikationen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Eigenblut Injection zu Spontane intrazerebrale Blutungen in Mäuse-Modell

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Forschung

Neurowissenschaften

Cannula Implantation into the Cisterna Magna of Rodents

Kanüle Implantation in die Cisterna Magna von Nagetieren

Cisterna magna cannulation (CMc) is a straightforward procedure that enables direct access to the cerebrospinal fluid (CSF) without operative damage to ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Eine Volumetrische Methode zur Quantifizierung der zerebralen Vasospasmus in einem Mausmodell der Subarachnoidalblutung

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

In Vivo Direct Reprogramming of Resident Glial Cells into Interneurons by Intracerebral Injection of Viral Vectors

In Vivo Direkte Reprogrammierung von Resident Glial Cells in Interneurons durch Intracerebral Injection of Viral Vectors

Converting resident glia in the brain into functional and subtype-specific neurons in vivo provides a step forward towards the development of alternative ...

Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood

Massive Pontinenblutung durch Doppelinjektion von Eigenblut

We provide a protocol to establish a massive pontine hemorrhage model in a rat. Rats weighing about 250 grams were used in this study. One hundred ...

Analysis of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage with High Frequency Transcranial Duplex Ultrasound

Analyse des zerebralen Vasospasmus in einem murinen Modell der Subarachnoidalblutung mit hochfrequenten transkraniellen Duplex-Ultraschall

Cerebral vasospasm that occurs in the weeks after subarachnoid hemorrhage, a type of hemorrhagic stroke, contributes to delayed cerebral ischemia. A ...

Pre-Chiasmatic, Single Injection of Autologous Blood to Induce Experimental Subarachnoid Hemorrhage in a Rat Model

Prächiasmatische, einmalige Injektion von Eigenblut zur Induktion einer experimentellen Subarachnoidalblutung in einem Rattenmodell

Despite advances in treatment over the last decades, subarachnoid hemorrhage (SAH) continues to carry a high burden of morbidity and mortality, largely ...

Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs

Direkte Kanülenimplantation in der Cisterna Magna der Schweine

The glymphatic system is a waste clearance system in the brain that relies on the flow of cerebrospinal fluid (CSF) in astrocyte-bound perivascular spaces ...

Endovascular Perforation Model for Subarachnoid Hemorrhage Combined with Magnetic Resonance Imaging (MRI)

Endovascular Perforation Model for Subarachnoid Hemorrhage Combined with Magnetic Resonance Imaging MRI

Endovaskuläres Perforationsmodell für Subarachnoidalblutungen in Kombination mit Magnetresonanztomographie (MRT)

The endovascular filament perforation model to mimic subarachnoid hemorrhage (SAH) is a commonly used model - however, the technique can cause a high ...

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

Stereotaktischer chirurgischer Ansatz zur Mikroinjektion des kaudalen Hirnstamms und des oberen zervikalen Rückenmarks über die Cisterna magna bei Mäusen

Stereotaxic surgery to target brain sites in mice is commonly guided by skull landmarks. Access is then obtained via burr holes drilled through the skull. ...