Name: proteolytically degraded alginate hydrogels and hydrophobic microbioreactors for porcine oocyte encapsulation
Uploaded: 2020-07-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Proteolytically Degraded Alginate Hydrogels and Hydrophobic Microbioreactors for Porcine Oocyte Encapsulation at JoVE.com

作者非常感谢：Waclaw Twozydlo博士（贾吉洛尼亚大学动物学和生物医学研究所发育生物学和无脊椎动物形态学系）在TEM的技术设施;Beata Snakowska女士（贾吉洛尼亚大学动物学和生物医学研究所内分泌学系）提供技术援助;到日本济隆大学动物学和生物医学研究所细胞生物学和成像系，JEOL JEM 2100HT（日本东京，日本 JEOL）。波兰国家科学中心2018/29/N/NZ9/00983赠款支持这项工作。

下列程序由贾吉洛尼亚大学动物学和生物医学研究所的动物福利委员会批准。
1. 猪积细胞-卵母细胞复合物的分离
<ol><li>为了收集分离卵巢卵泡的材料，在当地屠宰场从预骨基座（约6-7个月大，体重70至80公斤）中切除猪卵巢。在每个实验中从 10 种动物中选择大约 20 个猪卵巢进行 COC 隔离。 注：假设每个卵巢产生3~5个卵泡，卵泡总数从60到100个。</li>
	<li>将卵巢放在含有1%AA...

能够保持体外生长的卵母细胞，但也在其周围的积细胞，同时支持其成熟是极其必要的成功的辅助生殖技术，并促进对体细胞/卵母细胞相互作用的理解，特别是在物种，如人类或猪。不断改进的IVM技术正在成为在多囊卵巢综合征（PCOS）、卵巢过早衰竭或最终不育（肿瘤治疗）的情况下保留生殖选择的重要工具。此外，由于某些卵巢功能障碍可能是由调节性卵泡生长不良引起的，了解控制卵母细?...

各种培养系统的发展，包括三维（3D）的培养系统，旨在为从卵泡分离的卵母细胞的生长和成熟提供最佳条件，即使在发育初期。这对辅助生殖技术（ART）非常重要，特别是鉴于癌症治疗后与不孕症作斗争的妇女越来越多。体外条件（IVM）卵母细胞的成熟已经是一种成熟的技术，主要用于体外胚胎生成，用于牲畜繁殖2。然而，在大多数哺乳动物物种中，即使能达到高成熟率的积卵-卵母细胞复合物（COCs）（范围60至90%），它们的发展能力仍然不足以满足需求。这是因为以这样的方式获得的受精卵的发展，甚至到囊肿阶段是低的，在转移到代孕动物后，其期限的生存能力降低。因此，有必要提高从接受IVM程序4的卵母细胞获得的胚胎的发育能力。因此，新的成熟介质5正在设计，并测试不同时期的体外培养6，77以及6补充各种生长因子和分子的培养媒体,8，9。
任何完整的 IVM 系统的第一步是为卵母细胞在体外培养期间的可持续生长创造最佳条件。卵母细胞生长是卵母细胞恢复卵母细胞能力的具体指标之,一。此外，适当的体外培养系统必须能够支持其核成熟和细胞质分化12。积卵-卵母细胞复合物的形态是 ART 诊所使用的另一个重要指标，用于选择最佳卵母细胞，用于人类和牲畜12、13的体外受精 （IVF） 程序的后续步骤。考虑的COC的形态特征包括：卵母细胞直径、细胞质造粒和第一极体完整性14、15。14,此外，卵母细胞的发育潜力与积细胞的外观和压实及其围绕卵母细胞的层数相关。对于适当的卵母细胞体外培养系统来说，非常重要的也是维持卵母细胞-累积细胞的适当相互作用和细胞骨架稳定性16、17、18、19。16,17,18,19到目前为止，在人体体外卵母细胞生长的人类COC中已经证明20。使用牛科动物也导致活产。这些从不成熟的卵巢卵泡分离，然后培养14天，直到卵母细胞足够大，接受IVF程序21。类似地，从大猩猩蚁卵泡中分离出的COCs，在体外培养后受IVM影响，产生能够重新形成卵母细胞的卵母细胞，以正常出现的主轴结构22。元相II阶段。然而，在这项研究中，作者并没有试图给他们施肥。然而，这些结果表明，类似的程序不仅可应用于这些特定的哺乳动物物种，而且也适用于从卵泡中获得的人类积云-卵母细胞复合物，这些复合物应能获得适合成功的IVF技术的优质卵母细胞。
上述结果通过应用传统的IVM协议获得，在二维（2D）系统中培养卵母细胞。2D培养系统中的常规程序是覆盖卵母细胞，浸入一滴适当的培养介质中，与矿物油23，24。23,24假定体外卵母细胞培养期间的油覆盖有助于防止液体蒸发，从而确保培养物中适当的pH值和渗透压力的维持。虽然这种2D培养系统允许获得，甚至高达87%的成熟猪卵母细胞25，已经证明，矿物油覆盖导致脂质可溶性材料的实质性扩散，这是适当的卵母细胞发展所必需的26。此外，由于类固醇（黄体酮和雌激素）在卵母细胞培养期间扩散到矿物油中，观察到核成熟延迟和猪卵母细胞发育能力成就下降。这可能导致获得少量的酶，此外，其特点是发育能力低到囊肿阶段，并转移到接受动物27后生存能力差。因此，正在尝试通过创造最佳条件，实现与CC一起培养的卵母细胞作为复合物，特别是使用三维（3D）系统，提高从IVM程序后接收的卵母细胞衍生的胚胎的发育能力。各种创新的3D体外培养系统已经发展，近二十年来，28，29。,29这些旨在保持细胞的自然空间组织，并避免它们在培养皿中扁平化，这是传统2D培养中无法实现的。养殖COC的结构和功能活动可以通过维护其适当的架构和不受干扰的沟通，通过各种隔间之间的间隙结30，可以确保其结构和功能活动。生物支架对于3D细胞复合物体外培养的适宜性已经使用天然生物材料进行了评估，如细胞外基质（ECM;胶原蛋白和透明质酸）的各种成分（ECM;胶原蛋白和透明质酸）31或惰性聚合物（藻酸盐）32。这些尝试在几个物种的测试带来了有希望的结果，在卵母细胞梅病恢复和实现他们的完全能力33，34，35。33,34,35然而，到目前为止，还没有开发适合从大型家畜（包括猪）分离出的COC成熟3D系统。
本文描述了可用于猪 COC 的 3D 培养的两种协议。第一个协议描述了纤维蛋白-藻酸盐珠（FAB）中的封装。FAB 可以通过同时混合藻酸盐和纤维蛋白溶液而形成，这种溶液经过同步凝胶过程。这种组合提供了一个动态的机械环境，因为两个组件都有助于矩阵刚度。类似的解决方案以前也用于小鼠卵巢卵泡培养和成熟36。在所提出的协议中，为了避免藻酸纤维蛋白网络过早降解，使用适当浓度更高的氯化钙溶液，确保快速稳定的凝胶过程。动态机械环境在 COC 驻留和尺寸增加的自然卵泡环境中创造了类似这样的条件。此外，该作品还展示了COC 3D培养系统的代表性结果，其中这些培养系统悬浮在一滴介质中，并用氟化乙烯丙烯（FEP;六氟丙烯和四氟乙烯的共聚物）粉末颗粒封装，形成微生物反应器（液体大理石、LM）。LM是一种3D生物反应器，以前已经证明支持活微生物37，肿瘤球类38和 胚胎干细胞39的生长。LMs也已成功用于羊卵母细胞培养40。在大多数使用LMs的实验中，生物反应器是使用粒径为1μm41的聚四氟乙烯（PTFE）粉床制备的。提出的协议使用FEP，其成分和性质与氟聚合物PTFE非常相似。但FEP比PTFE更容易形成和柔软，尤其重要的是，它是高度透明的。
两个 3D 系统都维护体外气态培养环境。他们还通过防止其扁平化和由此破坏间隙结，保持卵母细胞和周围卵泡细胞之间的功能关系，来维持COC 3D组织。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:761px;" width="761">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">General</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:162px;"></td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:256px;">Antibiotic Antimycotic (100x) 100ml</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Fisher</td>
			<td>15240062</td>
			<td style="width:204px;">2.5% final concentration for Handling Medium. 1% in PBS (step 1.2)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:256px;">DMEM/F12 (500ml)</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8062</td>
			<td style="width:204px;">Handling and Maturation Medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">DPBS (w/o Ca, Mg), 1x, 500ml</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Fisher</td>
			<td>14190144</td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:256px;">FCS (100 ml)</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Fisher</td>
			<td>16140063</td>
			<td style="width:204px;">10% final concentration for both Handling Medium and Maturation Medium. (steps: 1.5. 2.6.)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">PBS (1x, pH 7.4) 500ml</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Fisher</td>
			<td>10010023</td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">TBS Stock Solution (10x, pH 7.4) 500 ml</td>
			<td>Cayman Chemicals</td>
			<td>600232</td>
			<td style="width:204px;">1x final concentration. Other brand can be use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Maturation Medium</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:162px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">hCG (1 VIAL of 10 000 U)</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:162px;">CG10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">PMSG</td>
			<td style="width:139px;">BioVendor</td>
			<td>RP1782721000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Fibrin-alginate beads</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:162px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Alginate Lyase</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:162px;">A1603</td>
			<td>(Step 2.11.1)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Thrombin</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9326-150UN</td>
			<td>(Step 2.1)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Calcium Chloride</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:162px;">C5670</td>
			<td>(Step 2.1)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Fibrinogen (250mg)</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:162px;">F3879</td>
			<td>(Step 2.2)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:256px;">Sodium Alginate</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>W201502</td>
			<td style="width:204px;">(Step 2.3) use for alginate solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Liquid Marble</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:162px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:256px;">FEP</td>
			<td style="width:139px;">Dyneon GmbH 3M AdMD</td>
			<td style="width:162px;">A-66670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Morphological examination</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:162px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:104px;width:256px;">LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit, for mammalian cells</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Fisher</td>
			<td>L3224</td>
			<td style="width:204px;">(Step 4.1.) Emitted fluorescence: 494 nm for calcein, 528 nm for EthD-1; measure: 517 nm for calcein, 617 nm - EthD-1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td style="width:139px;">Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td>mounting medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Ultrastructure examination</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:162px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:256px;">Glutaraldehyde solution</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:162px;">G5882</td>
			<td style="width:204px;">2.5% final concentraion (Step 4.2.1.)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">LR White resin</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:162px;">L9774</td>
			<td>(Step 4.2.4.)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Methylene blue</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:162px;">M9140</td>
			<td>(Step 4.2.5.)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Osmium Tetroxide</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:162px;">O5500</td>
			<td>(Step 4.2.3.)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Sodium cacodylate trihydrate</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:162px;">C0250</td>
			<td style="width:204px;">Use for preparing 0.1M sodium cacodylate buffer (pH 7.2)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Uranyl Acetate</td>
			<td style="width:139px;">POCH</td>
			<td>868540111</td>
			<td>(Step 4.2.4.)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Specific instruments, tools</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:162px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">30 mm Pteri dish</td>
			<td style="width:139px;">TPP</td>
			<td>93040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">60 mm IVF Petri dish</td>
			<td style="width:139px;">Falcon</td>
			<td>353653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:256px;">Ez-Grid Premium Cell Handling Pipettor</td>
			<td style="width:139px;">RI Life Sciences</td>
			<td style="width:162px;">8-72-288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Ez-Tip</td>
			<td style="width:139px;">RI Life Sciences</td>
			<td style="width:162px;">8-72-4155/20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Heating Table</td>
			<td style="width:139px;">SEMIC</td>
			<td style="width:162px;"></td>
			<td>Other brands can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Incubator</td>
			<td style="width:139px;">Panasonic</td>
			<td style="width:162px;">MCO-170AIC-PE</td>
			<td>Other brands can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Sterile petri dish (10 cm)</td>
			<td>NEST Biotechnology</td>
			<td>704002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:256px;">Sterile syringe filters with 0.2 &#181;m</td>
			<td style="width:139px;">GOOGLAB SCIENTIFIC</td>
			<td>GB-30-022PES</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Thermos</td>
			<td style="width:139px;">Quechua</td>
			<td>5602589</td>
			<td>Other brands can be used</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

proteolytically degraded alginate hydrogels and hydrophobic microbioreactors for porcine oocyte encapsulation

在生殖生物学方面，从人工授精和胚胎移植技术开始的生物技术革命导致辅助生殖技术的发展，如卵母细胞体外成熟（IVM）、体外受精（IVF）和通过从体细胞核转移克隆家畜。IVM 是特别重要的方法。它是为商业重要或濒危物种的生成间隔缩短、体外人类生殖研究以及细胞疗法的转基因动物生产等应用提供成熟、优质卵母细胞的平台技术。卵母细胞质量一词包括其完成成熟、受精的能力，从而产生健康的后代。这意味着优质卵母细胞对于成功受精至关重要，包括试管婴儿手术。这给开发一种可靠的培养方法带来了许多困难，这种方法不仅支持人类卵母细胞的生长，而且支持其他大型哺乳动物物种的生长。IVM 的第一步是卵母细胞的体外培养。本文描述了猪卵母细胞的3D培养的两个协议。在第一个，3D模型累积-卵母细胞复合物（COCs）封装在一个纤维蛋白-藻酸盐珠渗透网络中，其中纤维蛋白和藻酸盐的混合物同时凝胶化。在第二种材料中，COC悬浮在一滴介质中，用氟化乙烯丙烯（FEP;六氟丙烯和四氟乙烯的共聚物）粉末颗粒封装，形成定义为液体大理石（LM）的微生物反应器。两个 3D 系统都维护体外气态培养环境。他们还通过防止其扁平化和由此破坏间隙结来维护 COC 3D 组织，从而保持卵母细胞与周围卵泡细胞之间的功能关系。

在使用两种IVM系统的COC中，格兰努洛萨细胞相互紧密地粘附在一起，大多数回收的COC有完整的积液层（图1A，B）。此外，还保留了相当一部分积血细胞。
从COC可行性分析中获得的结果证实，两个系统应用于在体外条件下3D中封装猪卵母细胞，确保了最佳生长条件（图2）。在这两组中，只观察到高活力卵母细胞，V1 = 13%?...

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Proteolytically Degraded Alginate Hydrogels and Hydrophobic Microbioreactors for Porcine Oocyte Encapsulation

此处介绍的两个协议用于在三生培养条件下封装猪卵母细胞。在第一种，积卵-卵母细胞复合物（COCs）封装在纤维蛋白-藻酸珠中。第二，它们被用氟化乙烯丙烯粉末颗粒（微生物反应器）封闭。两个系统都确保以最佳条件维护其 3D 组织。

蛋白酶降解藻酸盐水凝胶和疏水性微生物反应器，用于猪卵母细胞封装

In reproductive biology, the biotechnology revolution that began with artificial insemination and embryo transfer technology led to the development of ...

这种封装猪卵母细胞的协议使得维持COC的球面组织成为可能。这可以防止它们扁平化，并随后破坏卵母细胞和周围卵泡细胞之间的间隙结。描述的两种协议的主要优点是用户友好，并允许有效控制卵母细胞和化疗细胞的生存。这两种培养系统都是生殖生物学基础研究的宝贵工具，对改善不孕症治疗可能有临床意义。它们还可用于开发新的生物技术方法和改良牲畜。冲洗卵巢后，将它们转移到装满 HM 介质的烧杯中，并在随后的所有操作中将它们存放在 38 摄氏度的培养箱中。从大型猪卵泡中吸出卵泡液，在室温下以100倍G离心10分钟。然后，使用连接到0.2微米膜孔过滤器的无菌注射器过滤上清液，并在负80摄氏度时将其捕捉冻结。要将 COC 与中等大小的卵泡分离，请将两到三个卵巢转移到充满 HM 的无菌 10 厘米培养皿中。用无菌手术号15刀片轻轻切割突出的卵巢卵泡的表面，这将导致卵泡液和COCs流入培养皿。用一次性注射器上附着28针吸吸卵泡内装物，并将其转移到另一个培养皿中。要准备IVF培养皿，在中央井中加入一毫升HM，并在外圈中放置三到四滴HM。然后使用聚碳酸酯微管将未损坏的 COC 移动到外圈中的 HM 滴，并短暂冲洗三到四次。完成后，分别将它们转移到中央井中。将 IVF 板存放在培养箱中。准备血栓和纤维蛋白原解决方案，如文本手稿中所述。在手术当天，在冰上慢慢解冻纤维蛋白原溶液，并在使用前将纤维蛋白原溶液带到室温。以一比一的比例混合0.5%的藻酸溶液和纤维蛋白原溶液，最终体积为两毫升，轻轻涡旋混合物。在玻璃显微镜幻灯片上涂抹石蜡薄膜薄条，修复孵化室。将 FA 混合物的移液 7.5 微升滴到带分离隔开的石蜡薄膜涂层玻璃滑轨上，将 8 到 10 滴排列成两排。使用微管将三到五个 COC 转移到 FA 下降的中心，以及最小体积的成熟介质。在每个 FA 滴的顶部添加 7.5 微升的血栓溶液，以覆盖它。没有必要混合它们，因为凝胶几乎瞬间形成。用先前准备的玻璃滑梯盖住孵化室，然后将培养室倒置，放在一个100毫米的培养皿中，内衬湿润的滤纸。将培养皿放入 5%的二氧化碳中，在 38 摄氏度的培养箱中加热五到七分钟。孵育后，将每个FA胶囊转移到一个96井板的井中，其中含有100微升的成熟介质。每两天，用新鲜的预平衡成熟介质更换一半的介质。图像 COC 使用 10 倍放大倍率的倒置光学显微镜。在培养COC四天后，从井中去除成熟介质，并在DMEM中加入100微升，每毫升10个国际单位。将培养盘留在培养箱中 25 至 30 分钟。从溶解胶囊中取出COC。在DMEM中清洗几次，然后将它们转移到含有PBS的IVF盘内环。在 30 毫米培养皿中制作一张 5 克 FEP 粉末的床。将含有三到五个 COC 的成熟介质液滴到 FEP 粉末上。以圆周运动轻轻旋转板，确保颗粒完全覆盖液滴表面，形成液体弹珠或LMs。准备几个60毫米IVF培养皿，并在外圈中加入三到四毫升无菌水，以形成湿度室。用 1000 微升移液器拾取成形的 LM，并放入中央井中。在5%的二氧化碳培养箱中，在38摄氏度的温度下孵化大理石四天。要改变介质，将30微升的成熟介质应用于每个LM，从而导致其扩散。当大理石内容物溶解时，将从生物反应器释放的 COC 转移到培养皿中一滴新鲜成熟介质中。在成熟介质中洗涤三到四次后，将 COC 以及 30 微升新鲜介质转移到 FEP 粉床上。以圆周运动轻轻旋转板，确保粉末颗粒完全覆盖液体滴的表面，形成新的 LM. 然后，将 LM 转移到 IVF 培养皿中。两种体外成熟系统都产生具有粒状细胞的COC，这些细胞相互紧密粘附，并完整地层层累积细胞。COC 可行性分析证实，两种封装系统均实现了最佳增长条件。在这两组中，只观察到高生存能力的卵母细胞位点。卵母细胞用透射电子显微镜成像。线粒体分布均匀，形状为壳状。其中只有少数被拉长，其聚类偶尔被观察到。内质性沉默要么与线粒体相关，要么在卵细胞质中游出。液体液滴出现为小，暗，圆形结构，和高尔吉仪器出现与扩张的蓄水池。在将 FA 胶囊从孵化室转移到培养板中以及在拾取格式 LM 转移到 IVF 培养皿时，必须精确和小心。

Research

JoVE Journal

Biology

Title Cell Encapsulation by Droplets

通过飞沫标题细胞封装

科研

生物学

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引物延伸捕获：从严重退化的DNA来源有针对性的顺序检索

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Imaging of F&#246;rster resonance energy transfer (FRET)&#160;is a powerful tool for examining cell biology in real-time. Studies utilizing FRET commonly ...

Fabrication of Amyloid-&#946;-Secreting Alginate Microbeads for Use in Modelling Alzheimer's Disease

Fabrication of Amyloid-ÃƒÅ½Ã‚Â²-Secreting Alginate Microbeads for Use in Modelling Alzheimer's Disease

制造淀粉样蛋白-β-分泌阿尔金酸微珠,用于模拟阿尔茨海默氏病

According to the amyloid cascade hypothesis, the earliest trigger in the development of Alzheimer&#8217;s disease (AD) is the accumulation of toxic ...