Name: dissection and isolation of murine glia from multiple central nervous system regions
Uploaded: 2020-06-04T14:30:00
Duration: 8 min
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Isolation of Murine Glia from Multiple Central Nervous System Regions at JoVE.com

نشكر مورغان بسينيكا على تحرير المخطوطات ومناقشتها والدكتور جراهام كيد للمساعدة في تنسيق الشكل. تم دعم هذا العمل من قبل NIAID K22 AI125466 (JLW).

<ol>
	<li>Fields, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+Biology+in+Learning+and+Cognition.">Glial Biology in Learning and Cognition.</a> The Neuroscientist. 20 (5), 426-431 (2014).</li><li>Nuriya, M., Hirase, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+astrocytes+in+neurovascular+communication.">Involvement of astrocytes in neurovascular communication.</a> Progress in Brain Research. 225, 41-62 (2016).</li><li>Nave, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelination+and+support+of+axonal+integrity+by+glia.">Myelination and support of axonal integrity by glia.</a> Nature. 468 (7321), 244-252 (2010).</li><li>Wake, H., Moorhouse, A. J., Miyamoto, A., Nabekura, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia:+actively+surveying+and+shaping+neuronal+circuit+structure+and+function.">Microglia: actively surveying and shaping neuronal circuit structure and function.</a> Trends in Neurosciences. 36 (4), 209-217 (2013).</li><li>Kierdorf, K., Prinz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+in+steady+state.">Microglia in steady state.</a> The Journal of Clinical Investigation. 127 (9), 3201-3209 (2017).</li><li>Hertz, L., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+astrocytes+for+potassium+ion+(K(+))+homeostasis+in+brain+and+glial+effects+of+K(+)+and+its+transporters+on+learning.">Importance of astrocytes for potassium ion (K(+)) homeostasis in brain and glial effects of K(+) and its transporters on learning.</a> Neurosciences and Biobehavior Reviews. 71, 484-505 (2016).</li><li>Gordon, G. R., Howarth, C., MacVicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+Control+of+Blood+Flow+by+Astrocytes:+A+Role+for+Tissue+Oxygen+and+Other+Metabolic+Factors.">Bidirectional Control of Blood Flow by Astrocytes: A Role for Tissue Oxygen and Other Metabolic Factors.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 903, 209-219 (2016).</li><li>Schneider, J., Karpf, J., Beckervordersandforth, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Astrocytes+in+the+Neurogenic+Niches.">Role of Astrocytes in the Neurogenic Niches.</a> Methods Mol Biol. 1938, 19-33 (2019).</li><li>Sharif, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+brain+barrier:+A+review+of+its+anatomy+and+physiology+in+health+and+disease.">Blood brain barrier: A review of its anatomy and physiology in health and disease.</a> Clinical Anatomy. 31 (6), 812-823 (2018).</li><li>von Bernhardi, R., Eugenin-von Bernhardi, J., Flores, B., Eugenin Leon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+Cells+and+Integrity+of+the+Nervous+System.">Glial Cells and Integrity of the Nervous System.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 949, 1-24 (2016).</li><li>Gordon, J., Amini, S., White, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+overview+of+neuronal+cell+culture.">General overview of neuronal cell culture.</a> Methods in Molecular Biology. 1078, 1-8 (2013).</li><li>Spaethling, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+Cell+Culture+of+Live+Neurosurgically+Resected+Aged+Adult+Human+Brain+Cells+and+Single+Cell+Transcriptomics.">Primary Cell Culture of Live Neurosurgically Resected Aged Adult Human Brain Cells and Single Cell Transcriptomics.</a> Cell reports. 18 (3), 791-803 (2017).</li><li>Bayraktar, O. A., Fuentealba, L. C., Alvarez-Buylla, A., Rowitch, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte+development+and+heterogeneity.">Astrocyte development and heterogeneity.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7 (1), 020362 (2015).</li><li>Liu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Region-specific+and+stage-dependent+regulation+of+Olig+gene+expression+and+oligodendrogenesis+by+Nkx6.1+homeodomain+transcription+factor.">Region-specific and stage-dependent regulation of Olig gene expression and oligodendrogenesis by Nkx6.1 homeodomain transcription factor.</a> Development. 130 (25), 6221-6231 (2003).</li><li>Tan, Y. L., Yuan, Y., Tian, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+regional+heterogeneity+and+its+role+in+the+brain.">Microglial regional heterogeneity and its role in the brain.</a> Molecular Psychiatry. 25 (2), 351-367 (2020).</li><li>Witting, A., Moller, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+cell+culture:+a+primer+for+the+novice.">Microglia cell culture: a primer for the novice.</a> Methods in Molecular Biology. 758, 49-66 (2011).</li><li>Williams, J. L., Patel, J. R., Daniels, B. P., Klein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+CXCR7/ACKR3+as+a+therapeutic+strategy+to+promote+remyelination+in+the+adult+central+nervous+system.">Targeting CXCR7/ACKR3 as a therapeutic strategy to promote remyelination in the adult central nervous system.</a> Journal of Experimental Medicine. 211 (5), 791-799 (2014).</li><li>Domingues, H. S., Portugal, C. C., Socodato, R., Relvas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligodendrocyte,+Astrocyte,+and+Microglia+Crosstalk+in+Myelin+Development,+Damage,+and+Repair.">Oligodendrocyte, Astrocyte, and Microglia Crosstalk in Myelin Development, Damage, and Repair.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 4, 71 (2016).</li><li>Tanner, D. C., Cherry, J. D., Mayer-Proschel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligodendrocyte+progenitors+reversibly+exit+the+cell+cycle+and+give+rise+to+astrocytes+in+response+to+interferon-gamma.">Oligodendrocyte progenitors reversibly exit the cell cycle and give rise to astrocytes in response to interferon-gamma.</a> Journal of Neuroscience. 31 (16), 6235-6246 (2011).</li><li>Stansley, B., Post, J., Hensley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+review+of+cell+culture+systems+for+the+study+of+microglial+biology+in+Alzheimer's+disease.">A comparative review of cell culture systems for the study of microglial biology in Alzheimer's disease.</a> Journal of Neuroinflammation. 9 (1), 115 (2012).</li><li>Spaethling, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+Cell+Culture+of+Live+Neurosurgically+Resected+Aged+Adult+Human+Brain+Cells+and+Single+Cell+Transcriptomics.">Primary Cell Culture of Live Neurosurgically Resected Aged Adult Human Brain Cells and Single Cell Transcriptomics.</a> Cell Reports. 18 (3), 791-803 (2017).</li><li>Timmerman, R., Burm, S. M., Bajramovic, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Overview+of+in+vitro+Methods+to+Study+Microglia.">An Overview of in vitro Methods to Study Microglia.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 12 (242), (2018).</li><li>Stevens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glia:+much+more+than+the+neuron's+side-kick.">Glia: much more than the neuron's side-kick.</a> Current Biology. 13 (12), 469-472 (2003).</li><li>Fields, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+biology+in+learning+and+cognition.">Glial biology in learning and cognition.</a> Neuroscientist. 20 (5), 426-431 (2014).</li><li>Yamamuro, K., Kimoto, S., Rosen, K. M., Kishimoto, T., Makinodan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+primary+roles+of+glial+cells+in+the+mechanisms+of+psychiatric+disorders.">Potential primary roles of glial cells in the mechanisms of psychiatric disorders.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (154), (2015).</li><li>Hartenstein, V., Giangrande, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connecting+the+nervous+and+the+immune+systems+in+evolution.">Connecting the nervous and the immune systems in evolution.</a> Communications Biology. 1 (1), 64 (2018).</li><li>Emsley, J. G., Macklis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astroglial+heterogeneity+closely+reflects+the+neuronal-defined+anatomy+of+the+adult+murine+CNS.">Astroglial heterogeneity closely reflects the neuronal-defined anatomy of the adult murine CNS.</a> Neuron Glia Biology. 2 (3), 175-186 (2006).</li><li>Chaboub, L. S., Deneen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+Origins+of+Astrocyte+Heterogeneity:+The+Final+Frontier+of+CNS+Development.">Developmental Origins of Astrocyte Heterogeneity: The Final Frontier of CNS Development.</a> Developmental Neuroscience. 34 (5), 379-388 (2012).</li><li>Tan, Y. L., Yuan, Y., Tian, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+regional+heterogeneity+and+its+role+in+the+brain.">Microglial regional heterogeneity and its role in the brain.</a> Molecular Psychiatry. 25 (2), 351-367 (2020).</li><li>Bottcher, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+microglia+regional+heterogeneity+and+phenotypes+determined+by+multiplexed+single-cell+mass+cytometry.">Human microglia regional heterogeneity and phenotypes determined by multiplexed single-cell mass cytometry.</a> Nature Neurosciences. 22 (1), 78-90 (2019).</li><li>Marques, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligodendrocyte+heterogeneity+in+the+mouse+juvenile+and+adult+central+nervous+system.">Oligodendrocyte heterogeneity in the mouse juvenile and adult central nervous system.</a> Science. 352 (6291), 1326-1329 (2016).</li></ol>

لدى المؤلفين تضارب في المصالح يجب الكشف عنه.

في هذا البروتوكول ، نصف عزل المجموعات الفرعية الرئيسية الثلاث للخلايا الدبقية من الجهاز العصبي المركزي للفئران: الخلايا الدبقية الصغيرة ، OPCs ، والخلايا النجمية. تتمثل الانتكاسة الرئيسية للتحقيق في أمراض الجهاز العصبي المركزي التنكسية والالتهابات العصبية في نقص الخلايا والأنسجة البشرية الأولية ، خاصة تلك التي تكون إقليمية ومن نفس المريض. في معظم الحالات ، يتم اشتقاق خطوط خلايا الجهاز العصبي المركزي البشرية من خلايا سرطانية محولة وخالدة والتي قد لا تكون تمثيلات دقيقة لسلوكها الفسيولوجي الطبيعي20،21،22. وبالتالي ، فإن الطرق البديلة ضرورية لدراسة الأنماط الظاهرية لخلايا الجهاز العصبي المركزي بطريقة مضبوطة. علاوة على ذلك ، فإن تنوع مجموعات الخلايا الدبقية العصبية يجعل من الضروري التحقيق في كل نوع فرعي بشكل مستقل عن بعضها البعض ، وكذلك في ظروف الثقافة المشتركة من أجل تلخيص كل من وظائف خلاياها المستقلة وغير المستقلة. الخلايا الدبقية لديها مجموعة واسعة من الوظائف الحرجة في الجهاز العصبي المركزي تتراوح بين دعم الخلايا العصبية 23 ، والتعلم / الإدراك 24،25 ، والاستجابات المناعية للجهاز العصبي المركزي26. على هذا النحو ، من الضروري فهم الوظائف الجزيئية والخلوية لكل مجموعة فرعية دبقية في سياق فسيولوجي ومرضي. من أجل القيام بذلك ، نقدم هنا طريقة موثوقة لاستخراج وعزل الأنواع الفرعية الدبقية القابلة للحياة. نظرا للقيود العملية والأخلاقية في أبحاث الإنسان ، تعد النماذج الحيوانية حاليا أكثر البدائل صلة ببيولوجيا الخلايا الدبقية البشرية. على وجه الخصوص ، تعتبر الفئران نموذجية مثالية حيث يمكن التلاعب بالجينوم الخاص بها وتحليله لمزيد من تشريح آليات جزيئية معينة تكمن وراء الصحة والمرض. لذلك ، فإن الإزالة والفصل الناجح للخلايا الدبقية الصغيرة للفئران ، و OPCs ، والخلايا النجمية هي أداة رئيسية للتحقيق في وظائف الخلايا الدبقية أثناء الحالات الفسيولوجية أو التنكسية العصبية أو الالتهابية العصبية.
يمكن تحسين هذا البروتوكول لاستكشاف عدم التجانس الإقليمي لخلايا الجهاز العصبي المركزي. أصبح من الواضح بشكل متزايد أن الدبقية تظهر عدم تجانس إقليمي في الشكل والوظيفة. الخلايا النجمية متنوعة إقليميا وتظهر مورفولوجيا متميزة اعتمادا على موقعها داخل الجهاز العصبي المركزي27. علاوة على ذلك ، يمكن لكثافة الخلايا النجمية ومؤشرها الانقسامي تحديد المناطق التشريحية ، مما يدعم الفرضية القائلة بأن عدم تجانس الخلايا النجمية الإقليمية قد يعكس الاختلافات الجزيئية والوظيفية بناء على موقعها داخل الجهاز العصبي المركزي28. كما أن عدم التجانس الإقليمي للخلايا الدبقية الصغيرة قيد التحقيق النشط ، على الرغم من أن الآليات الأساسية والعواقب الوظيفية لتنوع الخلايا الدبقية الصغيرة في تطور الجهاز العصبي المركزي أو سلوكه غير واضحة حاليا. ومع ذلك ، فمن المعروف أن الخلايا الدبقية الصغيرة البالغة تظهر تنوعا في عدد الخلايا والهياكل الخلوية وتحت الخلوية والتوقيعات الجزيئية29. علاوة على ذلك ، فإن التطورات الحديثة في قياس الكتلة الخلوية متعددة الإرسال قد حددت بشكل أكبر عدم التجانس الإقليمي للخلايا الدبقية الصغيرة ، وتحليل النمط الظاهري الخلوي من خمس مناطق مختلفة من الجهاز العصبي المركزي لتسعة متبرعين بشريين ، مما يسمح بالتنميط المناعي على نطاق واسع للخلايا الدبقية الصغيرةالبشرية 30. حاليا ، هذه الأساليب في مراحلها الأولى ، مما يجعل الدراسات على الحيوانات حلا قابلا للتطبيق لدراسة الخلايا الدبقية الإقليمية في تطور مرض الجهاز العصبي المركزي. أخيرا ، تم وصف عدم التجانس الإقليمي مؤخرا في oligodendrocytes. حدد تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية على 5072 خلية فردية من 10 مناطق من الجهاز العصبي المركزي للأحداث والبالغين 13 مجموعة فرعية متميزة عبر مراحل مختلفة من التمايز31. الأهم من ذلك ، وجد أيضا أنه مع نضوج الخلايا قليلة التغصن من OPCs ، تباعدت ملفات تعريف النسخ الخاصة بها وتغيرت أنماطها الظاهرية الوظيفية ، مما يبرز عدم تجانس الخلايا قليلة التغصن داخل الجهاز العصبي المركزي31.
وبالتالي ، فإن فهم عدم التجانس الإقليمي لمختلف خلايا الجهاز العصبي المركزي المقيمة في سياق الخلايا العصبية المجاورة المتنوعة والدبقية الأخرى قد يوفر أساسا منطقيا مهما للتطوير المستقبلي لعلاجات جديدة لعلاج الاضطرابات الالتهابية العصبية والتنكسية العصبية. بينما يركز هذا البروتوكول على استخراج وعزل وتحديد المجموعات السكانية الفرعية الدبقية ، فإنه يوفر نقطة انطلاق ملائمة لفحص وظيفتها. علاوة على ذلك ، يمكن تكييفها ودمجها مع نماذج الفئران المعدلة وراثيا من أجل دراسة الآليات الجينية المرتبطة ببيولوجيا الخلية الدبقية. يمكن استخدامه أيضا لفحص استجابات الخلايا الدبقية لبعضها البعض في فحوصات الثقافة المشتركة. تمثل الخطوات الموضحة طريقة فعالة من حيث التكلفة وعالية الإنتاجية لاستخراج وعزل مجموعات دبقية الجهاز العصبي المركزي المختلفة والتي يمكن بعد ذلك تكييفها مع مجموعة واسعة من المعلمات التجريبية. وتجدر الإشارة إلى ؛ ومع ذلك ، فإن الطريقة الموصوفة هنا تستخدم حديثي الولادة بسبب انخفاض مستويات الميالين والكثافة العالية للخلايا الدبقية المتكاثرة. لهذه الأسباب ، من الممكن تقنيا عزل الدبقية القابلة للحياة عن حديثي الولادة مقارنة بالحيوانات البالغة. وبالتالي ينبغي النظر في الاختلافات المظهرية في الدبقية الوليدية مقارنة بالدبقية البالغة أثناء التصميم التجريبي وتفسير البيانات.

الدبقية ضرورية للوظيفة العصبية المناسبة في الجهاز العصبي المركزي. وهي تتألف من ثلاث مجموعات فرعية رئيسية ، الخلايا النجمية ، والخلايا قليلة التغصن ، والخلايا الدبقية الصغيرة ، ولكل منها دور مختلف ، ولكنه لا غنى عنه1. بدون تنوع الخلايا الدبقية المناسبة ونشاطها ، ستتأثر وظيفة الخلايا العصبية بشدة ، مما يؤدي إلى ضعف الجهاز العصبي المركزي. الدبقية قادرة على التأثير على النقل العصبي ، وكل نوع من الخلايا يفعل ذلك بطريقة فريدة. الخلايا الدبقية في الدماغ لديها القدرة على التواصل فيما بينها ، وكذلك مع الخلايا العصبية ، من أجل تسهيل وظيفة الجهاز العصبي المركزيالمناسبة 2. تزيد الخلايا قليلة التغصن من سرعة النقل الكهربائي من خلال تكوين غمد المايلين ، مما يسهل تجميع القنوات الأيونية في عقد رانفييه ، مواقع توليد إمكانات الفعل العصبي3. تعتبر الخلايا الدبقية الصغيرة ضرورية لتقليم نقاط الاشتباك العصبي من خلال مراقبة الانتقال المشبكي و "إعادة توصيل" الوصلات العصبية بعد الإصابة4. بالإضافة إلى ذلك ، تعد الخلايا الدبقية الصغيرة أكثر الخلايا المناعية المقيمة وفرة في الجهاز العصبي المركزي ، حيث تعمل كشكل أساسي للدفاع المضيف ضد مسببات الأمراض5. يمكن للخلايا النجمية تنظيم الانتقال المشبكي بين الخلايا العصبية عن طريق تعديل تركيز البوتاسيوم خارج الخلية6. لديهم أيضا أدوار في التحكم في تدفق الدم المحلي7 ، وإطلاق وتناول العناصر المعدلة للأعصاب8 ، ولها دور رئيسي في الحفاظ على حاجز الدم في الدماغ9. وبالتالي ، فإن كل نوع فرعي دبقي أمر بالغ الأهمية لوظيفة الجهاز العصبي المركزي ، حيث ترتبط العيوب في أي نوع منذ فترة طويلة بمجموعة واسعة من الحالات المرضية ، بما في ذلك الأمراض النفسية والصرع والحالات التنكسية العصبية10.
أكبر عقبة في دراسة علم الأمراض في الجهاز العصبي المركزي هي عدم القدرة على التحقيق في الخلايا البشرية في سياق مكانتها البيئية الدقيقة. يتم جمع أنسجة الخزعة البشرية بعد الوفاة ويمكن بسهولة أن تتلف الخلايا أو تضيع أثناء الاستخراج والمعالجة. علاوة على ذلك ، من الصعب الحفاظ على الخلايا البشرية حية وقابلة للحياة في المختبر لأي فترة زمنية دون اشتقاق خطوط الخلايا الخالدة من الأورام ، وعند هذه النقطة لم تعد تعكس بدقة خصائصها الفسيولوجية الطبيعية11,12. بالإضافة إلى ذلك ، هناك قدر كبير من عدم التجانس الإقليمي بين أنواع الخلايا الدبقية الفردية13،14،15 ، والحصول على عينات الجهاز العصبي المركزي الإقليمية من المرضى الفرديين يكاد يكون مستحيلا. على هذا النحو ، من الضروري تطوير نماذج بديلة لدراسة مساهمة الخلايا الدبقية الإقليمية في اضطرابات الجهاز العصبي المركزي المحددة.
هنا ، نصف نظاما في المختبر باستخدام عزل منطقة الجهاز العصبي المركزي للفأر للعديد من المجموعات الفرعية الدبقية ، مما يسمح بمعالجة وتحديد كمية الخلايا الدبقية الصغيرة ، وخلايا سلائف الخلايا قليلة التغصن (OPCs) ، والتي تؤدي إلى ظهور خلايا قليلة التغصن الناضجة ، والخلايا النجمية. يمكن عزل كل مجموعة بشكل مستقل وإخضاعها لمجموعة واسعة من التقنيات التجريبية بما في ذلك العلاج بالأدوية أو الجزيئات ، والكيمياء المناعية ، واستخراج وتحليل البروتين / الحمض النووي الريبي ، وأنظمة الاستزراع المشترك الأخرى اعتمادا على الضرورة التجريبية. بالإضافة إلى ذلك ، تنتج تقنية العزل هذه عددا كبيرا من الخلايا ، مما يسمح بتوصيف وفحص كل مجموعة دبقية بطريقة عالية الإنتاجية. كما أنه يتيح دراسة تمايز خلايا الجهاز العصبي المركزي ونموها وانتشارها استجابة لمجموعة واسعة من المحفزات البيئية الدقيقة بطريقة خاضعة للرقابة من أجل تجنب العوامل المربكة التي توجد عادة في بيئة الجسم الحي. وأخيرا، تسهل تقنية عزل الخلايا هذه التلاعب بمجموعات الخلايا الدبقية داخل مناطق الجهاز العصبي المركزي المختلفة للتحقيق في كيفية تفاعل الخلايا الدبقية الإقليمية مع بعضها البعض والاستجابة للمحفزات المختلفة، مما يسمح بالدقة والتكاثر.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.05% Trypsin and 0.53 mM EDTA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25300054</td>
			<td>Tissue dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-Well Plates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>665 180</td>
			<td>Cell culture plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X PBS pH 7.4</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010031</td>
			<td>Standard reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>32% Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15714-S</td>
			<td>Fixative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL, 25 cm2 cell culture flask</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>690 175</td>
			<td>Cell culture (T25) flask</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic 100X</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-096</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement 50X</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504-044</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9647-50G</td>
			<td>Antibody diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM 800</td>
			<td>Confocal for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>D1306</td>
			<td>Nuclear stain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (1X), high glucose with Na pyruvate</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11995040</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10104159001</td>
			<td>Tissue dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum heat inactivated</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A3840001</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin from bovine plasma</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1141-1MG</td>
			<td>Cell adherent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine stitch Scissors</td>
			<td>Sklar</td>
			<td>64-3260</td>
			<td>Dissection tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit IgG Alexa Fluor 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11008</td>
			<td>Secondary staining antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rat IgG Alexa Fluor 555</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21434</td>
			<td>Secondary staining antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution (w/o Ca or Mg)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14170120</td>
			<td>Tissue dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine, 200mM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>20530081</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine epidermal growth factor</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>PMG8044</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine IFN-&#947;</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>315-05-20UG</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine PDGF-AA</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>315-17</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103-049</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal goat serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9023</td>
			<td>Blocking solution component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors</td>
			<td>Surgi-OR</td>
			<td>95-272</td>
			<td>Dissection tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-D-Lysine 12 mm #1 German Glass Coverslip</td>
			<td>Corning Biocoatt</td>
			<td>354086</td>
			<td>Cell adherent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Gold Antifade Reagent</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>9071S</td>
			<td>Mounting Media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-Iba1</td>
			<td>Wako</td>
			<td>019-19741</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-NG2 Chondroitin Proteoglycan</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ab5320</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat anti-GFAP</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>13-0300</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat anti-myelin basic protein</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab7349</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp Tip Scissors</td>
			<td>Surgi-OR</td>
			<td>95-104</td>
			<td>Dissection tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>S4 E Stereo Zoom Microscope</td>
			<td>Microscope for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Forceps</td>
			<td>Sklar</td>
			<td>66-7644</td>
			<td>Dissection tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP151-100</td>
			<td>Cell permabilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin Inhibitor (from chicken egg white)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10109878001</td>
			<td>Tissue dissociation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection and isolation of murine glia from multiple central nervous system regions

توضح الطرق المعروضة هنا الإجراءات المختبرية لتشريح أربع مناطق مختلفة من الجهاز العصبي المركزي (CNS) من حديثي الولادة الفئران لعزل المجموعات السكانية الدبقية. الغرض من هذا الإجراء هو فصل الخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا السلفية قليلة التغصن (OPCs) والخلايا النجمية من الأنسجة القشرية والمخيخية وجذع الدماغ والحبل الشوكي لتسهيل المزيد من التحليل في المختبر. تسمح إجراءات عزل منطقة الجهاز العصبي المركزي بتحديد عدم التجانس الإقليمي بين الخلايا الدبقية في أنظمة زراعة الخلايا المتعددة. يتم إجراء عزل سريع لمنطقة الجهاز العصبي المركزي ، يليه الإزالة الميكانيكية للسحايا لمنع تلوث الخلايا السحائية من الخلايا الدبقية. يجمع هذا البروتوكول بين تفكك الأنسجة اللطيف والطلاء على مصفوفة محددة مصممة للحفاظ على سلامة الخلايا والتصاق. يوفر عزل الخلايا الدبقية المختلطة من مناطق الجهاز العصبي المركزي المتعددة تحليلا شاملا للخلايا الدبقية التي يحتمل أن تكون غير متجانسة مع تعظيم استخدام التجارب الفردية. بالإضافة إلى ذلك ، بعد تفكك الأنسجة الإقليمية ، تنقسم الخلايا الدبقية المختلطة إلى أنواع متعددة من الخلايا بما في ذلك الخلايا الدبقية الصغيرة ، و OPCs ، والخلايا النجمية لاستخدامها إما في نوع الخلية المفردة ، أو إدراج لوحة زراعة الخلايا ، أو أنظمة الاستزراع المشترك. بشكل عام ، توفر التقنيات الموضحة بروتوكولا شاملا للتطبيق الواسع للتشريح الدقيق لأربع مناطق فردية من الجهاز العصبي المركزي من حديثي الولادة الفئران وتتضمن طرقا لعزل ثلاثة أنواع فردية من الخلايا الدبقية لفحص عدم التجانس الإقليمي في أي عدد من أنظمة أو فحوصات زراعة الخلايا في المختبر.

توضح البيانات التمثيلية الموضحة أدناه أن إشارات IFNγ تؤثر على تمايز OPC ونضجه. بدون وجود مستقبلات IFNγ (IFNγR) ، لا تتمايز OPCs القشرية إلى خلايا قليلة التغصن الميالينية الناضجة بسهولة ، وهو ما يتضح من عدم وجود تلطيخ MBP (الشكل 1). نظرا لأن الخلايا قليلة التغصن والخلايا النجمية مشتقة من سلف شائع ، فقد قمنا بتحليل تعبير GFAP ، الذي يسمي الخلايا النجمية. وجدنا أن الخلايا التي تعاني من نقص IFNγR تعبر بقوة عن GFAP مما يشير إلى أنها قد تتبنى نمطا ظاهريا نجميا ، مما يؤكد التقارير السابقة19.
يتضح دليل إضافي على عدم التجانس الإقليمي في خلايا الجهاز العصبي المركزي من خلال اختلاف مورفولوجيا الخلايا النجمية كما هو موضح في الخلايا النجمية من القشرة والمخيخ وجذع الدماغ والحبل الشوكي (الشكل 2). تجدر الإشارة إلى أن الخلايا النجمية من نفس المنطقة قد تظهر أيضا عدم تجانس مورفولوجي ، مما يدعم فكرة أن هذا النوع الفرعي الدبقي ديناميكي للغاية. تشير الاختلافات في البنية الخلوية إلى التنوع الوظيفي ، وبالتالي فإن القدرة على عزل المجموعات الدبقية ضرورية لدراسة استجابات النمط الظاهري في غياب ووجود محفزات البيئة الدقيقة.
تعتبر الخلايا قليلة التغصن ضرورية لتكوين الميالين في المحاور العصبية وهي ضرورية لإصلاح الجهاز العصبي المركزي ووظيفته بشكل صحيح. تؤدي OPCs إلى ظهور نظيراتها الناضجة ، مما يجعل من الأهمية بمكان فهم البيولوجيا الكامنة وراء قدرتها على التمايز. تؤثر إشارات السيتوكين بشكل كبير على سلوك الخلايا الجذعية والمناعية. وبالتالي ، من المهم أن نفهم كيف يمكن أن تختلف الاستجابات الإقليمية ل OPCs لتحفيز السيتوكينات التفاضلي (الشكل 3) ، مما قد يؤثر على قدرتها على التمايز إلى خلايا قليلة التغصن الميالينية الناضجة.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61345/61345fig01.jpg"> الشكل 1: بيانات تمثيلية توضح تمايز OPC في الفئران WT و IFNγR-/- في وجود IFNγ خارجي. تم عزل OPCs القشرية من ( A ) WT و (B) IFNγR-/- P4 الفئران الجرو باتباع الإجراء الموضح أعلاه. عولجت الخلايا ب 1 نانوغرام / مل IFNγ لمدة 48 ساعة ، ثم تم تثبيتها وتلطيخها لتحديد تمايز الخلايا. تم تصنيف OPCs ل NG2 و GFAP لتحديد تلك التي كانت تتبنى النمط الظاهري النجمي. وبالمثل ، تم تصنيف OPCs أيضا ل NG2 و MBP لتحديد تلك التي كانت تتمايز إلى خلايا قليلة التغصن الناضجة. شريط المقياس = 20 ميكرومتر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61345/61345fig01large.jpg" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61345/61345fig02.jpg"> الشكل 2: بيانات تمثيلية توضح عدم التجانس الإقليمي في مورفولوجيا الخلايا النجمية. تم عزل الخلايا النجمية من القشرة والمخيخ وجذع الدماغ والحبل الشوكي من جراء الفئران P4 باستخدام البروتوكول الموصوف أعلاه وتم تصنيفه ل GFAP (الأخضر) بواسطة الكيمياء المناعية بعد 48 ساعة في الثقافة. شريط المقياس = 20 ميكرومتر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61345/61345fig02large.jpg" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61345/61345fig03.jpg"> الشكل 3: بيانات تمثيلية توضح الاستجابات التفاضلية ل OPCs الإقليمية للسيتوكينات. تم عزل OPCs من جذع الدماغ والحبل الشوكي لجراء الفئران P4 باستخدام البروتوكول الموضح أعلاه. تمت معالجة الخلايا بتركيزات متزايدة (1-10 نانوغرام / مل) من ( A ) IFNγ أو (B) إنترلوكين (IL) -17 من أجل التحقيق في التأثير التفاضلي للسيتوكين على قدرة OPCs الإقليمية على التمايز إلى خلايا قليلة التغصن الميالينية. بعد حضانة 48 ساعة مع السيتوكينات المحددة ، تم إصلاح OPCs ووضع علامة على NG2 (أخضر) و MBP (أحمر). شريط المقياس = 20 ميكرومتر. تمثل البيانات الوسائل ± SEM. ** ، p < 0.01 ؛ ، ص < 0.001 ؛ ، p < 0.0001 بواسطة 2-way ANOVA. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61345/61345fig03large.jpg" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td colspan="3">برنامج تلفزيوني / محلول مضاد حيوي (PAS):</td>
		</tr><tr><td>1.0 مل</td>
			<td colspan="2">100X مضاد حيوي / مضاد حيوي يحتوي على 10000 وحدة / مل بنسلين و 10000 مجم / مل ستربتومايسين</td>
		</tr><tr><td>25 ملغم / مل</td>
			<td colspan="2">أمفوتريسين ب</td>
		</tr><tr><td>99 مل</td>
			<td colspan="2">1X برنامج تلفزيوني</td>
		</tr><tr><td colspan="3"></td>
		</tr><tr><td colspan="3">وسائل الإعلام الدبقية المختلطة (MGM)</td>
		</tr><tr><td>88 مل</td>
			<td colspan="2">1X DMEM (ارتفاع الجلوكوز ، ث / L- الجلوتامين ، ث / نا بيروفات)</td>
		</tr><tr><td>10 مل</td>
			<td colspan="2">FBS المعطل بالحرارة</td>
		</tr><tr><td>1.0 مل</td>
			<td colspan="2">إل-جلوتامين (100X)</td>
		</tr><tr><td>1.0 مل</td>
			<td colspan="2">مضاد حيوي / مضاد حيوي</td>
		</tr><tr><td colspan="3"></td>
		</tr><tr><td colspan="3">OPC الوسائط (50 مل)</td>
		</tr><tr><td>49 مل</td>
			<td colspan="2">الوسائط العصبية القاعدية</td>
		</tr><tr><td>1.0 مل</td>
			<td colspan="2">ملحق B27 (50X)</td>
		</tr><tr><td>10 نانوغرام/مل</td>
			<td colspan="2">PDGF-AA</td>
		</tr><tr><td colspan="3">ملاحظة: تتم إضافة PDGF-AA طازجة قبل كل تغيير في الوسائط.</td>
		</tr><tr><td colspan="3"></td>
		</tr><tr><td colspan="3">وسائط الخلايا النجمية (1 لتر)</td>
		</tr><tr><td>764 مل</td>
			<td colspan="2">MEM مع أملاح إيرل التي تحتوي على الجلوتامين</td>
		</tr><tr><td>36 مل</td>
			<td colspan="2">الجلوكوز (استخدم مخزون 100 مجم / مل للتركيز النهائي البالغ 20 مللي مول)</td>
		</tr><tr><td>100 مل</td>
			<td colspan="2">FBS المعطل بالحرارة</td>
		</tr><tr><td>100 مل</td>
			<td colspan="2">مصل الحصان المعطل بالحرارة</td>
		</tr><tr><td>10 مل</td>
			<td colspan="2">الجلوتامين (استخدم مخزون 200 مللي مول إذا لم يتم تضمينه في وسط المخزون)</td>
		</tr><tr><td colspan="3"></td>
		</tr><tr><td colspan="3">اختياري: 10 نانوغرام / مل عامل نمو بشرة الفأر المؤتلف</td>
		</tr><tr><td colspan="3">ملاحظة: قم بتصفية جميع الوسائط وتخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية حتى يتم استخدامها.</td>
		</tr></tbody></table>الجدول 1: العازلة ووصفات الوسائط.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Isolation of Murine Glia from Multiple Central Nervous System Regions at JoVE.com

Dissection and Isolation of Murine Glia from Multiple Central Nervous System Regions

نقدم هنا بروتوكولا للعزل في المختبر لمجموعات الخلايا الدبقية المتعددة من الجهاز العصبي المركزي للفأر. تسمح هذه الطريقة بفصل الخلايا الدبقية الصغيرة الإقليمية ، وخلايا سلائف الخلايا قليلة التغصن ، والخلايا النجمية لدراسة الأنماط الظاهرية لكل منها في مجموعة متنوعة من أنظمة الثقافة.

تشريح وعزل الفئران الدبقية من مناطق الجهاز العصبي المركزي المتعددة

The methods presented here demonstrate laboratory procedures for the dissection of four different regions of the central nervous system (CNS) from murine ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Systemic and Local Drug Delivery for Treating Diseases of the Central Nervous System in Rodent Models

النظامية والمحلية تسليم المخدرات لعلاج أمراض الجهاز العصبي المركزي في المجموعات القوارض

Thorough preclinical testing of central nervous system (CNS) therapeutics includes a consideration of routes of administration and agent biodistribution ...

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

التصوير المتعدد الوسائط من زرع الخلايا الجذعية في الجهاز العصبي المركزي من الفئران

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Production of Lentiviral Vectors for Transducing Cells from the Central Nervous System

انتاج ناقلات Lentiviral للخلايا Transducing من الجهاز العصبي المركزي

Efficient gene delivery in the central nervous system (CNS) is important in studying gene functions, modeling neurological diseases and developing ...

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

وضع العلامات واحدة من الخلايا في الجهاز العصبي المركزي<em&gt; ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

والنموذج الإصابات المعنية بالتحقيق في وسط الجهاز العصبي في إصلاح<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

An experimental method has been developed to investigate the cellular responses to central nervous system (CNS) injury using the fruit-fly Drosophila. ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

مباشرة داخل البطين تسليم المخدرات الى القوارض الجهاز العصبي المركزي

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Immunohistochemical Analysis in the Rat Central Nervous System and Peripheral Lymph Node Tissue Sections

تحليل المناعى في الجهاز العصبي المركزي والمحيطي الجرذ العقدة الليمفاوية أقسام الأنسجة

Immunohistochemistry (IHC) provides highly specific, reliable and attractive protein visualization. Correct performance and interpretation of an IHC-based ...

In vivo Interrogation of Central Nervous System Translatome by Polyribosome Fractionation

In vivo Interrogation of Central Nervous System Translatome by Polyribosome Fractionation

في الجسم الحي الاستجواب من النظام العصبي المركزي Translatome بواسطة Polyribosome تجزئة

Multiple processes are involved in gene expression including transcription, translation and stability of mRNAs and proteins. Each of these steps are ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

في الجسم الحي Optogenetic تحفيز الجهاز العصبي المركزي القوارض

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...

Optical Clearing of the Mouse Central Nervous System Using Passive CLARITY

المقاصة البصري للنظام العصبي المركزي الماوس عن طريق وضوح السلبي

Traditionally, tissue visualization has required that the tissue of interest be serially sectioned and imaged, subjecting each tissue section to unique ...