Name: a pipeline using bilateral in utero electroporation to interrogate genetic influences on rodent behavior
Uploaded: 2020-05-21T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Pipeline using Bilateral In Utero Electroporation to Interrogate Genetic Influences on Rodent Behavior at JoVE.com

אנו מודים לליסה קרצ'ג' על משוב ביקורתי ועריכה לכתב היד. אנו מודים לכל עוזרי המחקר במעבדת קרוז-מרטין שלא יסולא בפז בסיוע עם חליטות וספירת תאים של מוחות התנהגות. אנו מודים לאנדריי קווטש על התשומות על עיצוב האלקטרודה המשולשת, וטוד בלוטה וליבת ההדמיה הביולוגית של אוניברסיטת בוסטון על השימוש במיקרוסקופ הקונפוקלי. עבודה זו נתמכה על ידי מענק החוקר הצעיר NARSAD (AC-M, #27202), פרס ברנטון ר. לוץ (ALC), פרס I. אלדן מאצ'י (ALC), NSF NRT UtB: מלגת המחקר הלאומית לנוירופוטונים (ALC, #DGE1633516) ותוכנית הזדמנויות מחקר לתואר ראשון באוניברסיטת בוסטון (WWY). למממנים לא היה כל תפקיד בעיצוב המחקר, איסוף וניתוח הנתונים, ההחלטה לפרסם או הכנת כתב היד.

כל הפרוטוקולים הניסיוניים נערכו על פי הנחיות המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) למחקר בבעלי חיים ואושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת בוסטון (IACUC).
1. הכנת פתרון DNA
<ol><li>לרכוש פלסמיד מסחרי או subclone גן של עניין לתוך פלסמיד עם האמרגן הרצוי. כאן נעשה שימוש ?...

<ol>
	<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+association+and+meta-analysis+of+a+schizophrenia+GWAS+variant+rs10489202+in+East+Asian+populations.">Genetic association and meta-analysis of a schizophrenia GWAS variant rs10489202 in East Asian populations.</a> Translational Psychiatry. 8 (1), 144 (2018).</li><li>Schizophrenia Working Group of the Psychiatric Genomics Consortium. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+insights+from+108+schizophrenia-associated+genetic+loci.">Biological insights from 108 schizophrenia-associated genetic loci.</a> Nature. 511 (7510), 421-427 (2014).</li><li>Howard, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+meta-analysis+of+depression+identifies+102+independent+variants+and+highlights+the+importance+of+the+prefrontal+brain+regions.">Genome-wide meta-analysis of depression identifies 102 independent variants and highlights the importance of the prefrontal brain regions.</a> Nature Neuroscience. 22 (3), 343-352 (2019).</li><li>Grove, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+common+genetic+risk+variants+for+autism+spectrum+disorder.">Identification of common genetic risk variants for autism spectrum disorder.</a> Nature Genetics. 51 (3), 431-444 (2019).</li><li>Comer, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+expression+of+schizophrenia-associated+gene+C4+leads+to+hypoconnectivity+of+prefrontal+cortex+and+reduced+social+interaction.">Increased expression of schizophrenia-associated gene C4 leads to hypoconnectivity of prefrontal cortex and reduced social interaction.</a> PLoS Biology. 18 (1), 3000604 (2020).</li><li>Chini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolving+and+Rescuing+Developmental+Miswiring+in+a+Mouse+Model+of+Cognitive+Impairment.">Resolving and Rescuing Developmental Miswiring in a Mouse Model of Cognitive Impairment.</a> Neuron. 105 (1), 60-74 (2020).</li><li>Clifton, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+expression+of+genes+associated+with+schizophrenia+and+bipolar+disorder+across+development.">Dynamic expression of genes associated with schizophrenia and bipolar disorder across development.</a> Translational Psychiatry. 9 (1), 74 (2019).</li><li>Oberlander, V. C., Xu, X., Chini, M., Hanganu-Opatz, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+dysfunction+of+prefrontal-hippocampal+networks+in+mouse+models+of+mental+illness.">Developmental dysfunction of prefrontal-hippocampal networks in mouse models of mental illness.</a> European Journal of Neurosciences. 50 (6), 3072-3084 (2019).</li><li>Batista-Brito, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+Dysfunction+of+VIP+Interneurons+Impairs+Cortical+Circuits.">Developmental Dysfunction of VIP Interneurons Impairs Cortical Circuits.</a> Neuron. 95 (4), 884-895 (2017).</li><li>Luo, L., Callaway, E. M., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Dissection+of+Neural+Circuits:+A+Decade+of+Progress.">Genetic Dissection of Neural Circuits: A Decade of Progress.</a> Neuron. 98 (2), 256-281 (2018).</li><li>DeNardo, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+strategies+to+access+activated+neurons.">Genetic strategies to access activated neurons.</a> Current Opinion in Neurobiology. 45, 121-129 (2017).</li><li>Huang, Z. J., Zeng, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+approaches+to+neural+circuits+in+the+mouse.">Genetic approaches to neural circuits in the mouse.</a> Annual Reviews in Neurosciences. 36, 183-215 (2013).</li><li>Wu, Z., Yang, H., Colosi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+genome+size+on+AAV+vector+packaging.">Effect of genome size on AAV vector packaging.</a> Molecular Therapy. 18 (1), 80-86 (2010).</li><li>Callaway, E. M., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monosynaptic+Circuit+Tracing+with+Glycoprotein-Deleted+Rabies+Viruses.">Monosynaptic Circuit Tracing with Glycoprotein-Deleted Rabies Viruses.</a> Journal of Neurosciences. 35 (24), 8979-8985 (2015).</li><li>Cruz-Mart&#237;n, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dedicated+circuit+links+direction-selective+retinal+ganglion+cells+to+the+primary+visual+cortex.">A dedicated circuit links direction-selective retinal ganglion cells to the primary visual cortex.</a> Nature. 507 (7492), 358-361 (2014).</li><li>Saito, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+electroporation+in+the+embryonic+mouse+central+nervous+system.">In vivo electroporation in the embryonic mouse central nervous system.</a> Nature Protocols. 1 (3), 1552-1558 (2006).</li><li>Cruz-Mart&#237;n, A., Crespo, M., Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+stabilization+of+dendritic+spines+in+fragile+X+mice.">Delayed stabilization of dendritic spines in fragile X mice.</a> Journal of Neurosciences. 30 (23), 7793-7803 (2010).</li><li>Zhang, J. H., Adikaram, P., Pandey, M., Genis, A., Simonds, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+genome+editing+through+CRISPR-Cas9+engineering.">Optimization of genome editing through CRISPR-Cas9 engineering.</a> Bioengineered. 7 (3), 166-174 (2016).</li><li>Strecker, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-guided+DNA+insertion+with+CRISPR-associated+transposases.">RNA-guided DNA insertion with CRISPR-associated transposases.</a> Science. 365 (6448), 48-53 (2019).</li><li>Cruz-Mart&#237;n, A., Crespo, M., Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate+induces+the+elongation+of+early+dendritic+protrusions+via+mGluRs+in+wild+type+mice,+but+not+in+fragile+X+mice.">Glutamate induces the elongation of early dendritic protrusions via mGluRs in wild type mice, but not in fragile X mice.</a> PLoS One. 7 (2), 32446 (2012).</li><li>LoTurco, J., Manent, J. B., Sidiqi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+and+improved+tools+for+in+utero+electroporation+studies+of+developing+cerebral+cortex.">New and improved tools for in utero electroporation studies of developing cerebral cortex.</a> Cerebral Cortex. 19, 120-125 (2009).</li><li>Kolk, S. M., de Mooij-Malsen, A. J., Martens, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporal+Molecular+Approach+of+in+utero+Electroporation+to+Functionally+Decipher+Endophenotypes+in+Neurodevelopmental+Disorders.">Spatiotemporal Molecular Approach of in utero Electroporation to Functionally Decipher Endophenotypes in Neurodevelopmental Disorders.</a> Frontiers in Molecular Neurosciences. 4, 37 (2011).</li><li>Szczurkowska, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+in+vivo+genetic+manipulation+of+the+mouse+or+rat+brain+by+in+utero+electroporation+with+a+triple-electrode+probe.">Targeted in vivo genetic manipulation of the mouse or rat brain by in utero electroporation with a triple-electrode probe.</a> Nature Protocols. 11 (3), 399-412 (2016).</li><li>dal Maschio, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-performance+and+site-directed+in+utero+electroporation+by+a+triple-electrode+probe.">High-performance and site-directed in utero electroporation by a triple-electrode probe.</a> Nature Communications. 3, 960 (2012).</li><li>Zhan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficient+neuron-microglia+signaling+results+in+impaired+functional+brain+connectivity+and+social+behavior.">Deficient neuron-microglia signaling results in impaired functional brain connectivity and social behavior.</a> Nature Neurosciences. 17 (3), 400-406 (2014).</li><li>Mathis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DeepLabCut:+markerless+pose+estimation+of+user-defined+body+parts+with+deep+learning.">DeepLabCut: markerless pose estimation of user-defined body parts with deep learning.</a> Nature Neurosciences. 21 (9), 1281-1289 (2018).</li><li>Bullmann, T., Arendt, T., Frey, U., Hanashima, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transportable,+inexpensive+electroporator+for+in+utero+electroporation.">A transportable, inexpensive electroporator for in utero electroporation.</a> Development Growth and Differentiation. 57 (5), 369-377 (2015).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+association+analysis+identifies+30+new+susceptibility+loci+for+schizophrenia.">Genome-wide association analysis identifies 30 new susceptibility loci for schizophrenia.</a> Nature Genetics. 49 (11), 1576-1583 (2017).</li><li>Ripke, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+association+analysis+identifies+13+new+risk+loci+for+schizophrenia.">Genome-wide association analysis identifies 13 new risk loci for schizophrenia.</a> Nature Genetics. 45 (10), 1150-1159 (2013).</li><li>De Marco Garcia, N. V., Fishell, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subtype-selective+electroporation+of+cortical+interneurons.">Subtype-selective electroporation of cortical interneurons.</a> Journal of Visualized Experiment. (90), e51518 (2014).</li><li>Borrell, V., Yoshimura, Y., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+delivery+to+telencephalic+inhibitory+neurons+by+directional+in+utero+electroporation.">Targeted gene delivery to telencephalic inhibitory neurons by directional in utero electroporation.</a> Journal of Neuroscience Methods. 143 (2), 151-158 (2005).</li><li>Soma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+mouse+amygdala+as+revealed+by+enhanced+green+fluorescent+protein+gene+transfer+by+means+of+in+utero+electroporation.">Development of the mouse amygdala as revealed by enhanced green fluorescent protein gene transfer by means of in utero electroporation.</a> Journal of Comparative Neurology. 513 (1), 113-128 (2009).</li></ol>

בזאת, צינור מתואר המשלב מניפולציה של גנים חדשים של עניין באוכלוסיות גדולות של נוירונים קליפת המוח הקדמית עם מבחנים התנהגותיים בעכברים. יתר על כן, צינור זה מאפשר מחקר אורך של התנהגות באותם עכברים הן במהלך התפתחות מוקדמת לאחר הלידה והן בבגרות. טכניקה זו עוקפת את הצורך להסתמך על מודלים גנטיי?...

מחקרי עמותה גנומית (GWAS) הובילו לגילוי גנים מועמדים חדשניים הקשורים לפתולוגיות במוח1,2,3,4. מחקרים אלה היו מועילים במיוחד בהבנת הפרעות נוירופסיכיאטריות הרסניות כגון סכיזופרניה (SCZ), שם חקירת גנים חדשניים שימשה כנקודת השקה עבור קווים חדשים של מחקר והתערבות טיפולית5,6. גנים המעניקים סיכון ל- SCZ מראים ביטוי מוטה בקליפת המוח הקדם-מצחית (PFC) במהלך התפתחות טרום לידתית ותחילת הלידה, אזור מעורב בפתולוגיה של מספר הפרעות נוירופסיכיאטריות7. בנוסף, מודלים של עכבר של הפרעות פסיכיאטריות להפגין פעילות חריגה ברשתות PFC6,8,9. תוצאות אלה מצביעות על כך שגנים הקשורים ל- SZC עשויים לשחק תפקיד בחיווט ההתפתחותי של אזור זה. חקירה נוספת באמצעות מודלים של בעלי חיים נדרשת כדי להבין את תרומתם של גנים מועמדים אלה להקמת קשרים ב- PFC ולקבוע אם לגנים אלה יש תפקיד סיבתי בפתוגנזה של הפרעות נוירופסיכיאטריות. טכניקות מניפולציה גנטית בעכברים המאפשרות חקר שינויים בביטוי גנים במעגלים עצביים ספציפיים במהלך התפתחות טרום לידתית ותחילת הלידה הן שיטה מבטיחה להבנת המנגנונים המולקולריים המקשרים בין שינויים בביטוי הגנים לתפקוד לקוי של PFC.
קווי עכבר גנטיים מציעים שיטה לחקור את ההשפעה של גנים מסוימים על התפתחות המוח ותפקודו. עם זאת, הסתמכות על עכברים מהונדסים יכולה להיות מגבילה שכן לא תמיד יש קווים זמינים מסחרית כדי לבחון את ההשפעות של גנים ספציפיים על פיתוח מעגלים עצביים. יתר על כן, זה יכול להיות יקר מאוד זמן רב לפתח קווי עכבר מותאמים אישית. השימוש באסטרטגיות מניפולציה גנטית מצטלבות המשלבות עכברים מהונדסים עם גישות ויראליות חולל מהפכה בהבנת המוח10,11,12. למרות התקדמות רבה, אסטרטגיות ויראליות מגיעות עם מגבלות מסוימות בהתאם לסוג הווקטור הנגיפי, כולל מגבלות ביכולת האריזה שיכולות להגביל ביטוי ויראלי13 ורעילות תאים הקשורים לביטוי ויראלי14. יתר על כן, ברוב התנאים הניסיוניים, ביטוי גנים חזק באמצעות וירוס הקשורים אדנו (AAVs) דורש כ 2 עד 4 שבועות15, מה שהופך אסטרטגיות ויראליות שגרתיות בלתי אפשרי לתפעל גנים במהלך התפתחות מוקדמת לאחר הלידה.
ב electroporation הרחם (IUE) היא גישה חלופית המאפשרת העברת גנים מהירה וזולה16,17 כי, בשילוב עם תיוג פלואורסצנטי וגישות פרמקוגנטיות או אופטוגנטיות, מספק פלטפורמה רבת עוצמה לנתח את הפונקציה של מעגלים עצביים. בנוסף, עם התפתחות הגנום CRISPR-Cas9 עריכת גנים ניתן להגזים או לשנות במדויק באמצעות סוג התא ספציפי להפיל או לדפוק מתוך גנים ספציפיים או באמצעות אפנון של מקדמים18,19. גישות מניפולציה גנים באמצעות IUE הם יתרון במיוחד כאשר ההשפעה של גנים על מעגלים עצביים צריך להיבדק במהלך חלונות התפתחותיים צרים20. IUE היא טכניקה רב-תכליתית וניתן להשיג בקלות ביטוי יתר על-ידי החדרת גן לווקטור ביטוי תחת מקדם ספציפי. שליטה נוספת של ביטוי גנים יכולה להיות מושגת על ידי הנעת ביטוי באמצעות מקדמים של עוצמות שונות או באמצעות מקדמים בלתי ניתנים להכלה המסוגלים לשלוט זמנית ביטוי גנים21,22. בנוסף, IUE מאפשר מיקוד של תאים בתוך שכבות קליפת המוח ספציפיות, סוגי תאים ואזורי מוח, אשר לא תמיד ריאלי באמצעות גישות אחרות5,17. ההתקדמות האחרונה בתצורת IUE המבוססת על שימוש בשלוש אלקטרודות, המייצרת התפלגות יעילה יותר של שדה חשמלי, הרחיבה את הרפרטואר הפונקציונלי של שיטה זו ואיפשרה למדענים למקד סוגי תאים חדשים ולהגדיל את היעילות, הדיוק ומספר התאים שניתן להתמקד בהם23,24. טכניקה זו שימשה לאחרונה כדי לקבוע את התפקיד הסיבתי של רכיב משלים 4A (C4A), גן המקושר SCZ, בפונקציה PFC וקוגניציה מוקדמת5.
להלן צינור ניסיוני המשלב גישות להעברת גנים כדי למקד אוכלוסיות גדולות של נוירונים מעוררים בקליפת המוח הקדמית, כולל ה- PFC, עם פרדיגמות התנהגותיות שלא רק מאפשרות לימוד שינויים ברמת התא והמעגל, אלא גם מאפשרות ניטור התנהגות לאורך ההתפתחות המוקדמת לאחר הלידה והבגרות. הראשון שתואר הוא שיטה ל transfect דו צדדי אוכלוסיות גדולות של שכבות (L) 2/3 נוירונים פירמידליים באזורים קליפת המוח הקדמית. לאחר מכן, משימות כדי לתחקר התנהגות חברתית בעכברים צעירים ומבוגרים מתוארים. ספירת תאים ניתן להשיג עם השלמת משימות התנהגותיות כדי לכמת את היקף ומיקום של transfection התא. יתר על כן, מספר התאים transfected יכול להיות בקורלציה עם נתונים התנהגותיים כדי לקבוע אם מספר גדול יותר של תאים transfected מוביל הפרעות גדולות יותר בהתנהגות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:664px;" width="663">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">13mm Silk Black Braided Suture</td>
			<td style="width:121px;">Havel&#39;s</td>
			<td style="width:161px;">SB77D</td>
			<td style="width:167px;">Suture skin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Adson Forceps</td>
			<td style="width:121px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:161px;">11006-12</td>
			<td>IUE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">C270 Webcam</td>
			<td style="width:121px;">Logitech</td>
			<td style="width:161px;">N/A</td>
			<td>Record behavior</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Electroporator</td>
			<td style="width:121px;">Custom-built</td>
			<td style="width:161px;">N/A</td>
			<td>See Figure 1 and 2 and Bullmann et al, 2015</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EZ-500 Spin Column Plasmid DNA Maxi-preps Kit, 20preps</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td style="width:161px;">BS466</td>
			<td>Pladmid preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Fast Green FCF</td>
			<td style="width:121px;">Sigma</td>
			<td>F7252-5G</td>
			<td>Dye for DNA solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Fine scissors- sharp</td>
			<td style="width:121px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:161px;">14060-09</td>
			<td>IUE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fisherbrand Gauze Sponges</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1376152</td>
			<td>IUE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gaymar Heating/Cooling</td>
			<td style="width:121px;">Braintree</td>
			<td style="width:161px;">TP-700</td>
			<td style="width:167px;">Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Glass pipette puller</td>
			<td>Sutter Instrument,</td>
			<td style="width:161px;">P-97</td>
			<td>IUE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Glass pipettes</td>
			<td>Sutter Instrument,</td>
			<td>BF150-117-10</td>
			<td>IUE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Hair Removal Lotion</td>
			<td style="width:121px;">Nair</td>
			<td style="width:161px;">N/A</td>
			<td>Hair removal</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hartman Hemostats</td>
			<td style="width:121px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:161px;">13002-10</td>
			<td>IUE</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Open field maze- homemade acrylic arena</td>
			<td style="width:121px;">Custom-built</td>
			<td style="width:161px;">N/A</td>
			<td>50 &#215; 50 &#215; 30 cm length-width-height</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">pCAG-GFP</td>
			<td style="width:121px;">Addgene</td>
			<td>11150</td>
			<td>Mammalian expression vector for expression of GFP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Picospritzer III</td>
			<td>Parker Hannifin</td>
			<td style="width:161px;">N/A</td>
			<td>pressure injector</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Retractor - 2 Pronged Blunt</td>
			<td style="width:121px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:161px;">17023-13</td>
			<td>IUE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Ring forceps</td>
			<td style="width:121px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:161px;">11103-09</td>
			<td>IUE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sterilizer, dry bead</td>
			<td style="width:121px;">Sigma</td>
			<td>Z378569</td>
			<td>sterelize surgical tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SUTURE, 3/0 PGA, FS-2, VIOLET FOR VET USE ONLY</td>
			<td>Havel&#39;s</td>
			<td>HJ398</td>
			<td>Suture muscle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Water bath</td>
			<td style="width:121px;">Cole-Parmer</td>
			<td>EW-12105-84</td>
			<td style="width:167px;">warming sterile saline</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a pipeline using bilateral in utero electroporation to interrogate genetic influences on rodent behavior

כמו מחקרי עמותה הגנום כולו לשפוך אור על היסודות הגנטיים הטרוגניים של מחלות נוירולוגיות רבות, הצורך לחקור את תרומתם של גנים ספציפיים להתפתחות המוח ותפקוד עולה. הסתמכות על מודלים של עכבר כדי ללמוד את התפקיד של מניפולציות גנטיות ספציפיות לא תמיד ריאלי מאז קווי עכבר מהונדסים הם יקרים למדי גנים רבים הקשורים למחלות חדשניות עדיין אין קווים גנטיים זמינים מסחרית. בנוסף, ייתכן שידרשו שנים של פיתוח ואימות כדי ליצור קו עכבר. ב electroporation הרחם מציע שיטה מהירה יחסית וקלה לתפעל ביטוי גנים באופן ספציפי סוג התא vivo כי רק דורש פיתוח פלסמיד DNA כדי להשיג מניפולציה גנטית מסוימת. ניתן להשתמש באל-דו-צדדי באלקטרופורציה של הרחם כדי למקד אוכלוסיות גדולות של נוירונים פירמידליים בקליפת המוח הקדמית. שילוב שיטת העברת גנים זו עם גישות התנהגותיות מאפשר לחקור את ההשפעות של מניפולציות גנטיות על תפקודן של רשתות קליפת המוח הקדם-מצחית ועל ההתנהגות החברתית של עכברים צעירים ומבוגרים.

פיתוח ויישום מוצלחים של אלקטרופורטור שנבנה בהתאמה אישית ושלושה שיניים- אלקטרודה. עבור IUEs, אלקטרופורטור זול שנבנה בהתאמה אישית נבנה על בסיס עיצוב שתואר קודם לכן27 (איור 1A ואיור 2). אלקטרודה בעלת שלושה שיניים נוצרה23,<s...

Watch this Scientific Journal Video about A Pipeline using Bilateral In Utero Electroporation to Interrogate Genetic Influences on Rodent Behavior at JoVE.com

A Pipeline using Bilateral In Utero Electroporation to Interrogate Genetic Influences on Rodent Behavior

התפקיד של גנים הקשורים למחלות שהתגלו לאחרונה בפתוגנזה של הפרעות נוירופסיכיאטריות נשאר מעורפל. דו-צדדי שונה בטכניקת אלקטרופורציה ברחם מאפשר העברת גנים באוכלוסיות גדולות של נוירונים ובחינת ההשפעות הסיבתיות של שינויים בביטוי גנים על ההתנהגות החברתית.

צינור באמצעות אלקטרופורציה דו-צדדית ברחם כדי לחקור השפעות גנטיות על התנהגות מכרסמים

As genome-wide association studies shed light on the heterogeneous genetic underpinnings of many neurological diseases, the need to study the contribution ...

Research

JoVE Journal

Biology

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

בשנת הזרקה תוך חדרי ברחם ו electroporation של E16 עוברים עכברוש

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic rat neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

בשנת הזרקה תוך חדרי ברחם ו electroporation E15 של עוברי עכברים

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic mouse neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

שיטת לתרבות מוקדם של עוברים צ&#39;יק לשעבר vivo (תרבות חדש)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

הר שלם כפול באתרו הכלאה של עוברים צ&#39;יק מוקדם

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

שיטת מכתים נוגדן שלם הר ב צ&#39;יק

Assay for Neural Induction in the Chick Embryo

Assay עבור אינדוקציה עצבית בעובר צ&#39;יק

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

ב electroporation ברחם לשעבר vivo על ביטוי גנים בתאים עכבר גנגליון רשתית

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

Genetic Studies of Human DNA Repair Proteins Using Yeast as a Model System 

מחקרים גנטיים של חלבונים תיקון דנ&quot;א אנושי באמצעות שמרים כמודל למערכת

Understanding the roles of human DNA repair proteins in genetic pathways is a formidable challenge to many researchers.  Genetic studies in mammalian ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

שימוש ג&#39;ין Pulser מערכת MXcell electroporation כדי Transfect תאים ראשוניים עם יעילות גבוהה

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Monitoring Endoplasmic Reticulum Calcium Homeostasis Using a Gaussia Luciferase SERCaMP

Monitoring Endoplasmic Reticulum Calcium Homeostasis Using a Gaussia Luciferase SERCaMP

ניטור הומאוסטזה סידן endoplasmic reticulum שימוש<em&gt; Gaussia</em&gt; לוציפראז SERCaMP

The endoplasmic reticulum (ER) contains the highest level of intracellular calcium, with concentrations approximately 5,000-fold greater than cytoplasmic ...