Name: creating matched in vivo/in vitro patient-derived model pairs of pdx and pdx-derived organoids for cancer pharmacology research
Uploaded: 2021-05-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Creating Matched In vivo/In vitro Patient-Derived Model Pairs of PDX and PDX-Derived Organoids for Cancer Pharmacology Research at JoVE.com

Forfatterne vil gerne takke Dr. Jody Barbeau, Federica Parisi og Rajendra Kumari for kritisk læsning og redigering af manuskriptet. Forfatterne vil også gerne takke Crown Bioscience Oncology in vitro og in vivo team for deres store tekniske indsats.

Alle protokoller og ændringer eller procedurer vedrørende pasning og anvendelse af dyr blev gennemgået og godkendt af Crown Bioscience Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC), inden undersøgelserne blev gennemført. Pasning og anvendelse af dyr blev udført i overensstemmelse med AAALAC (Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care) Internationale retningslinjer som rapporteret i Vejledning for Pasning og brug af forsøgsdyr, National Research Council (2011). Alle dyreforsøg var...

<ol>
	<li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+tumour+xenografts+as+models+for+oncology+drug+development.">Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 9 (6), 338-350 (2012).</li><li>Gao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+using+patient-derived+tumor+xenografts+to+predict+clinical+trial+drug+response.">High-throughput screening using patient-derived tumor xenografts to predict clinical trial drug response.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1318-1325 (2015).</li><li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+erlotinib+resistance+with+tailored+treatment+regimen+in+patient-derived+xenografts+from+naive+Asian+NSCLC+patients.">Overcoming erlotinib resistance with tailored treatment regimen in patient-derived xenografts from naive Asian NSCLC patients.</a> International Journal of Cancer. 132 (2), 74-84 (2013).</li><li>Li, Q. X., Feuer, G., Ouyang, X., An, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+modeling+for+immuno-oncology.">Experimental animal modeling for immuno-oncology.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 173, 34-46 (2017).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Drost, J., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids+in+Cancer+Researchearch.">Organoids in Cancer Researchearch.</a> Nature Reviews Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).</li><li>Muthuswamy, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+Models+of+Cancer+Explode+with+Possibilities.">Organoid Models of Cancer Explode with Possibilities.</a> Cell Stem Cell. 22 (3), 290-291 (2018).</li><li>Sachs, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Living+Biobank+of+Breast+Cancer+Organoids+Captures+Disease+Heterogeneity.">A Living Biobank of Breast Cancer Organoids Captures Disease Heterogeneity.</a> Cell. 172 (1-2), 373-386 (2018).</li><li>Weeber, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preserved+genetic+diversity+in+organoids+cultured+from+biopsies+of+human+colorectal+cancer+metastases.">Preserved genetic diversity in organoids cultured from biopsies of human colorectal cancer metastases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (43), 13308-13311 (2015).</li><li>Vlachogiannis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+organoids+model+treatment+response+of+metastatic+gastrointestinal+cancers.">Patient-derived organoids model treatment response of metastatic gastrointestinal cancers.</a> Science. 359 (6378), 920-926 (2018).</li><li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-Derived+Organoids+Predict+Chemoradiation+Responses+of+Locally+Advanced+Rectal+Cancer.">Patient-Derived Organoids Predict Chemoradiation Responses of Locally Advanced Rectal Cancer.</a> Cell Stem Cell. 26 (1), 17-26 (2020).</li><li>Ganesh, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rectal+cancer+organoid+platform+to+study+individual+responses+to+chemoradiation.">A rectal cancer organoid platform to study individual responses to chemoradiation.</a> Nature Medicine. 25 (10), 1607-1614 (2019).</li><li>van de Wetering, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+derivation+of+a+living+organoid+biobank+of+colorectal+cancer+patients.">Prospective derivation of a living organoid biobank of colorectal cancer patients.</a> Cell. 161 (4), 933-945 (2015).</li><li>Yang, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+RNAi+library+based+on+partially+randomized+consensus+sequences+of+nuclear+receptors:+identifying+the+receptors+involved+in+amyloid+beta+degradation.">A novel RNAi library based on partially randomized consensus sequences of nuclear receptors: identifying the receptors involved in amyloid beta degradation.</a> Genomics. 88 (3), 282-292 (2006).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+subset+of+gastric+cancers+with+EGFR+amplification+and+overexpression+respond+to+cetuximab+therapy.">A subset of gastric cancers with EGFR amplification and overexpression respond to cetuximab therapy.</a> Scientific Reports. 3, 2992 (2013).</li><li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+set+of+defined+oncogenic+mutation+alleles+seems+to+better+predict+the+response+to+cetuximab+in+CRC+patient-derived+xenograft+than+KRAS+12/13+mutations.">A set of defined oncogenic mutation alleles seems to better predict the response to cetuximab in CRC patient-derived xenograft than KRAS 12/13 mutations.</a> Oncotarget. 6 (38), 40815-40821 (2015).</li><li>Guo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Pathology+of+Patient+Tumors,+Patient-Derived+Xenografts,+and+Cancer+Cell+Lines.">Molecular Pathology of Patient Tumors, Patient-Derived Xenografts, and Cancer Cell Lines.</a> Cancer Research. 76 (16), 4619-4626 (2016).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+expansion+of+epithelial+organoids+from+human+colon,+adenoma,+adenocarcinoma,+and+Barrett's+epithelium.">Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett's epithelium.</a> Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).</li><li>Tiriac, H., French, R., Lowy, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Patient-derived+Pancreatic+Ductal+Adenocarcinoma+Organoid+Models.">Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models.</a> Journal of Visualized Experiments. (155), (2020).</li><li>Kopper, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organoid+platform+for+ovarian+cancer+captures+intra-+and+interpatient+heterogeneity.">An organoid platform for ovarian cancer captures intra- and interpatient heterogeneity.</a> Nature Medicine. 25 (5), 838-849 (2019).</li><li>Corcoran, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+BRAF+and+MEK+Inhibition+With+Dabrafenib+and+Trametinib+in+BRAF+V600-Mutant+Colorectal+Cancer.">Combined BRAF and MEK Inhibition With Dabrafenib and Trametinib in BRAF V600-Mutant Colorectal Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. , (2015).</li><li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+culture+of+genome-stable+bipotent+stem+cells+from+adult+human+liver.">Long-term culture of genome-stable bipotent stem cells from adult human liver.</a> Cell. 160 (1-2), 299-312 (2015).</li></ol>

De foreløbige data for PDX-/PDXO-CR2110 i denne rapport understøtter den biologiske ækvivalens mellem PDX og dets afledte, PDXO, med hensyn til genomik, histopatologi og farmakologi, da begge modeller repræsenterer sygdomsformerne fra den oprindelige CSC af patienten. Begge modeller er patient-afledte sygdomsmodeller, potentielt forudsigende for den kliniske respons hos patienter10,11,12,21...

Kræft er en samling af forskellige genetiske og immunologiske lidelser. Vellykket udvikling af effektive behandlinger er meget afhængig af eksperimentelle modeller, der effektivt forudsiger kliniske resultater. Store biblioteker af velkarakteriseret patient-afledte xenografts (PDX) har længe været betragtet som translationelle in vivo system valg til at teste kemo-og / eller målrettede behandlinger på grund af deres evne til at opsummere patientens tumor egenskaber, heterogenitet og patient lægemiddelrespons1, hvilket gør det muligt fase II-lignende mus kliniske forsøg for at forbedre klinisk succes2,3. PDX'er betragtes generelt som kræftstamcellesygdomme med genetisk stabilitet i modsætning til cellelinje afledt xenografts2. I løbet af de sidste par årtier, store samlinger af PDX'er er blevet skabt i hele verden, bliver arbejdshest af kræft lægemiddeludvikling i dag. Selv om disse dyremodeller er meget udbredte og med stor translationel værdi, er de i sig selv dyre, tidskrævende og lave gennemløb, hvilket er utilstrækkeligt til storstilet screening. PDX er også uønskede for immuno-onkologi (IO) test på grund af en immun-kompromitteret karakter4. Det er derfor upraktisk at drage fuld fordel af det tilgængelige store bibliotek af PDX'er.
Nylige opdagelser, banebrydende af Hans Clevers 'laboratorium5, har ført til etablering af in vitro kulturer af organoider genereret fra voksne stamceller i de fleste menneskelige organer af epiteloprindelse5. Disse protokoller er blevet yderligere forfinet for at muliggøre vækst af organoider fra formodede CSC'er i humane carcinomer af forskellige indikationer6,7. Disse patient-afledte organoider (BOB) er genomisk stabile8,9 og har vist sig at være meget forudsigende for kliniske behandlingsresultater10,11,12. Derudover muliggør in vitro-karakteren af BOB'er højoverførselsscreening (HTS)13, hvilket potentielt giver en fordel i forhold til in vivo-modeller og udnytter store organoidbiblioteker som surrogat for patientpopulationen. PDA'er er klar til at blive en vigtig opdagelses- og oversættelsesplatform, der overvinder de mange begrænsninger af PDX'er, der er beskrevet ovenfor.
Både BOB og PDX er patient-afledte og CSC-drevne modeller, med evnen til at evaluere terapeutiske i forbindelse med enten personlig behandling eller klinisk forsøg format. Eksisterende store biblioteker af PDX'er, som den proprietære samling af >3000 PDXs14,15,16,17, er derfor velegnede til den hurtige generering af biblioteker af tumororganoider (PDX-afledte organoider eller PDXO), hvilket resulterer i et matchet bibliotek med parrede PDX- og PDXO-modeller. Denne rapport beskriver proceduren for at skabe og karakterisere kolorektal cancer PDXO-CR2110 i forhold til sin forældre PDX-CR2110 model16.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12634028</td>
			<td>Base medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>Washing medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenese type II</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>17101015</td>
			<td>Digest tumor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td>Organoid culture matrix (Basement Membrane Extract, growth factor reduced)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Ac</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9165</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A83-01</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2939</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17504044</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N0636</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB202190</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7076</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gastrin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9145</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rspondin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-38-1000</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>35050038</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15630056</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin-streptomycin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Abmole</td>
			<td>M1817</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17105041</td>
			<td>Screening assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo 3D</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G9683</td>
			<td>Screening assay (luminescent ATP indicator)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multidrop dispenser</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>Multidrop combi</td>
			<td>Plating organoids/CellTiter-Glo 3D addition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital dispener</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>D300e</td>
			<td>Compound addition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Envision Plate reader</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>2104</td>
			<td>Luminescence reading</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balb/c nude mice</td>
			<td>Beijing HFK Bio-Technology Co</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAeasy Mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td>tRNA purification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAeasy Blood &#38; Tissue Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69506</td>
			<td>DNA purification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histogel</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>HG-4000-012</td>
			<td>Organoid embedding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

creating matched in vivo/in vitro patient-derived model pairs of pdx and pdx-derived organoids for cancer pharmacology research

Patient-afledt tumor xenografts (PDXs) betragtes som de mest prædiktive prækliniske modeller, stort set menes at være drevet af kræft stamceller (CSC) for konventionelle kræft stof evaluering. Et stort bibliotek af PDX'er afspejler patientpopulationernes mangfoldighed og muliggør således befolkningsbaserede prækliniske forsøg ("Fase II-lignende kliniske museforsøg").); PDX har dog praktiske begrænsninger af lav overførselshastighed, høje omkostninger og lang varighed. Tumororganoider, der også er patient-afledte CSC-drevne modeller, kan betragtes som in vitro-ækvivalenten af PDX, der overvinder visse PDX-begrænsninger for håndtering af store biblioteker af organoider eller forbindelser. Denne undersøgelse beskriver en metode til at skabe PDX-afledte organoider (PDXO), hvilket resulterer i parrede modeller til in vitro og in vivo farmakologiforskning. Subkutant transplanterede PDX-CR2110 tumorer blev indsamlet fra tumorbærende mus, da tumorerne nåede 200-800 mm3, pr. En godkendt obduktionsprocedure, efterfulgt af fjernelse af de tilstødende ikke-tumorvæv og dissociation i små tumorfragmenter. De små tumorfragmenter blev vasket og passeret gennem en 100 μm celle si for at fjerne snavset. Celleklynger blev indsamlet og ophængt i BME-opløsning (Basement Membrane Extract) og belagt i en 6-brøndsplade som en solid dråbe med omgivende flydende medier til vækst i en CO 2-inkubator. Organoid vækst blev overvåget to gange om ugen under lys mikroskopi og registreres af fotografering, efterfulgt af flydende medium forandring 2 eller 3 gange om ugen. De dyrkede organoider blev yderligere passeret (7 dage senere) ved et 1:2-forhold ved at forstyrre BME-indlejrede organoider ved hjælp af mekanisk klipning, hjulpet ved tilsætning af trypsin og tilsætning af 10 μM Y-27632. Organoider blev kryopræserveret i kryorør til langtidsopbevaring, efter frigivelse fra BME ved centrifugering, og også udtaget (f.eks. DNA, RNA og FFPE-blok) til yderligere karakterisering.

Morfologi af PDCO'er, typisk for organoider under let mikroskopi, og i overensstemmelse med forældrenes PDX pr H &E farvning Under lysmikroskopi demonstrerer PDXO-CR2110 typisk cystisk morfologi (Figur 1A), som beskrevet tidligere for patient-afledte organoider (BOB), dokumentation til støtte for ligheden mellem PDXO og BOB under de samme kulturforhold.
Histopatologiske undersøgelser foretaget af H&E farvning viser, at vævsstrukturer og cel...

Watch this Scientific Journal Video about Creating Matched In vivo/In vitro Patient-Derived Model Pairs of PDX and PDX-Derived Organoids for Cancer Pharmacology Research at JoVE.com

Creating Matched In vivo/In vitro Patient-Derived Model Pairs of PDX and PDX-Derived Organoids for Cancer Pharmacology Research

En metode beskrives for at skabe organoider ved hjælp af patientafledte xenografts (PDX) til in vitro-screening, hvilket resulterer i matchede par in vivo/in vitro-modeller. PDX tumorer blev høstet / forarbejdet i små stykker mekanisk eller enzymatisk, efterfulgt af Clevers 'metode til at dyrke tumor organoider, der blev passeret, cryopreserved og karakteriseret mod den oprindelige PDX.

Oprettelse matchede In vivo / In vitro Patient-Afledte Model Par af PDX og PDX-afledte organoider til Cancer Farmakologi Research

Patient-derived tumor xenografts (PDXs) are considered the most predictive preclinical models, largely believed to be driven by cancer stem cells (CSC) ...

Denne protokol kan bruges til at etablere et matchende bibliotek af parrede patient-afledte xenografts, eller PDX, og tilsvarende patient-afledte organoid linjer. Fordelen ved denne metode er, at den kan bruges til at oprette organoider ved hjælp af PDX til in vitro-screening, hvilket resulterer i matchede par in vivo / in vitro-modeller. Begynd med at høste tumorerne og behandle vævet som beskrevet i tekstmanuskriptet.Efter væv fordøjelsen, pipette vævet op og ned med en fem milliliter steril plast pipette. Derefter tilsættes 20 milliliter AD + til homogenatet og filtrere det med en 100 mikrometer celle si. Vask filtrat to gange med AD + derefter overføre det til et plastrør og centrifuge det på 450 gange G i fem minutter.Genbrug cellerne i BME og holde dem på is. For at forberede organoidkulturen overføres 200 mikroliter af celleaffjedringen til hver brønd af en seksbrøndsplade og inkubere pladen ved 37 grader Celsius i 30 minutter. Tilføj to milliliter organoid medier til hver brønd og billede repræsentanten falder under et mikroskop.Vedligehold organoidkulturerne ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid med medium ændringer hver tredje til fjerde dag og passage ved et 1-til-to-forhold hver syvende dag. Efter dissociering af organoiderne skal du køre dem gennem et 70 mikrometer filter i et 50 milliliter plastrør. Tæl organoiderne under et mikroskop og opsætte dem i BME på is til en endelig koncentration på 5%Tilsæt 50 mikroliter af organoid suspensionen i hver 384-brønds plade med en flydende dispenser til en såningstæthed på 200 CR2110 PDCO'er pr. brønd.Brug den digitale dispenser til at tilføje SN38 til hver brønd i seriel fortynding. Opret et pladekort ved hjælp af det digitale dispensersoftwareværktøj. Behandlingerne bør omfatte et køretøj med negativ kontrol med 100 % levedygtighed og positiv kontrol af fem mikromolar staurosporin med en levedygtighed på 0 %.Når du er færdig, skal du placere de lægemiddelbehandlede 384-brøndsplader tilbage i 37 grader Celsius inkubator. Under lysmikroskopi viser PDXO CR2110 typisk cystisk morfologi, der demonstrerer ligheden mellem PDX-afledte organoider og patientafledte organoider under de samme kulturforhold. Histopatologiske undersøgelse af H &E farvning viser, at væv strukturer og celletyper af PDXO CR2110 svarer til den oprindelige PDX CR2110.Genomiske profilsammenligninger af PDX og PDXO viser en 94,92% korrelation mellem transskriptionsudtryk og en 97,67% overensstemmelse mellem DNA-mutationer, hvilket tyder på en samlet genomisk lighed mellem dette par modeller. Drug følsomhed assays blev udført på PDXO CR2110 i 384-godt plader. PDXO CR2110 var følsom over for irinotecan og resistent over for cisplatin, i overensstemmelse med PDX behandlingsresultater.De matchede par in vitro- og in vivo-modeller kan komplimentere hinanden for in vitro-screening og validering in vivo, hvilket forbedrer succesraten for lægemiddelforskning og potentielt reducerer nedslidningsraterne i klinisk udvikling.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

En melanom patient afledt xenograft-model

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Etablering af gastrisk Cancer patient afledte xenograft-modeller og primære cellelinjer

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Testing Targeted Therapies in Cancer using Structural DNA Alteration Analysis and Patient-Derived Xenografts

Test målrettede behandlinger i kræft ved hjælp af strukturel dna ændringsanalyse og patient-afledte Xenografts

We present here an integrative approach for testing efficacy of targeted therapies that combines the next generation sequencing technolo-gies, therapeutic ...

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay ved hjælp af patient-afledte tumor organoider

Patient-derived tumor organoids (PDOs) are expected to be a preclinical cancer model with better reproducibility of disease than traditional cell culture ...

Profiling Sensitivity to Targeted Therapies in EGFR-Mutant NSCLC Patient-Derived Organoids

Profilering af følsomhed over for målrettede terapier i EGFR-mutant NSCLC-patientafledte organoider

Novel 3D cancer organoid cultures derived from clinical patient specimens represent an important model system to evaluate intratumor heterogeneity and ...

Generation and Culturing of High-Grade Serous Ovarian Cancer Patient-Derived Organoids

Generering og dyrkning af højkvalitets serøs ovariecancer patientafledte organoider

Organoids are 3D dynamic tumor models that can be grown successfully from patient-derived ovarian tumor tissue, ascites, or pleural fluid and aid in the ...

Establishment and Culture of Patient-Derived Breast Organoids

Etablering og kultur af patientafledte brystorganoider

Breast cancer is a complex disease that has been classified into several different histological and molecular subtypes. Patient-derived breast tumor ...

Visualizing DNA Damage Repair Proteins in Patient-Derived Ovarian Cancer Organoids via Immunofluorescence Assays

Visualizing DNA Damage Repair Proteins in Patient-Derived Ovarian Cancer Organoids via Immunofluorescence Assays

Visualisering af DNA-skadereparationsproteiner i patientafledte ovariecancerorganoider via immunofluorescensassays

Immunofluorescence is one of the most widely used techniques to visualize target antigens with high sensitivity and specificity, allowing for the accurate ...

Establishment of Zebrafish Patient-Derived Xenografts from Pancreatic Cancer for Chemosensitivity Testing

Etablering af zebrafisk patientafledte xenotransplantater fra kræft i bugspytkirtlen til kemosensitivitetstest

Cancer is one of the main causes of death worldwide, and the incidence of many types of cancer continues to increase. Much progress has been made in terms ...

Ovarian Cancer Patient-Derived Organoid Models for Pre-Clinical Drug Testing

Ovariecancerpatientafledte organoidmodeller til præklinisk lægemiddeltest

Ovarian cancer is a fatal gynecologic cancer and the fifth leading cause of cancer death among women in the United States. Developing new drug treatments ...