Name: creating matched in vivo/in vitro patient-derived model pairs of pdx and pdx-derived organoids for cancer pharmacology research
Uploaded: 2021-05-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Creating Matched In vivo/In vitro Patient-Derived Model Pairs of PDX and PDX-Derived Organoids for Cancer Pharmacology Research at JoVE.com

Forfatterne vil takke Dr. Jody Barbeau, Federica Parisi og Rajendra Kumari for kritisk lesing og redigering av manuskriptet. Forfatterne vil også takke Crown Bioscience Oncology in vitro og in vivo team for deres store tekniske innsats.

Alle protokoller og endringer eller prosedyrer som involverer pleie og bruk av dyr ble gjennomgått og godkjent av Crown Bioscience Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) før studiene ble gjennomført. Pleie og bruk av dyr ble utført i samsvar med AAALAC (Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care) Internasjonale retningslinjer som rapportert i Guide for care and use of Laboratory Animals, National Research Council (2011). Alle eksperimentelle prosedyrer for dyr var under steril...

<ol>
	<li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+tumour+xenografts+as+models+for+oncology+drug+development.">Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 9 (6), 338-350 (2012).</li><li>Gao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+using+patient-derived+tumor+xenografts+to+predict+clinical+trial+drug+response.">High-throughput screening using patient-derived tumor xenografts to predict clinical trial drug response.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1318-1325 (2015).</li><li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+erlotinib+resistance+with+tailored+treatment+regimen+in+patient-derived+xenografts+from+naive+Asian+NSCLC+patients.">Overcoming erlotinib resistance with tailored treatment regimen in patient-derived xenografts from naive Asian NSCLC patients.</a> International Journal of Cancer. 132 (2), 74-84 (2013).</li><li>Li, Q. X., Feuer, G., Ouyang, X., An, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+modeling+for+immuno-oncology.">Experimental animal modeling for immuno-oncology.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 173, 34-46 (2017).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Drost, J., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids+in+Cancer+Researchearch.">Organoids in Cancer Researchearch.</a> Nature Reviews Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).</li><li>Muthuswamy, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+Models+of+Cancer+Explode+with+Possibilities.">Organoid Models of Cancer Explode with Possibilities.</a> Cell Stem Cell. 22 (3), 290-291 (2018).</li><li>Sachs, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Living+Biobank+of+Breast+Cancer+Organoids+Captures+Disease+Heterogeneity.">A Living Biobank of Breast Cancer Organoids Captures Disease Heterogeneity.</a> Cell. 172 (1-2), 373-386 (2018).</li><li>Weeber, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preserved+genetic+diversity+in+organoids+cultured+from+biopsies+of+human+colorectal+cancer+metastases.">Preserved genetic diversity in organoids cultured from biopsies of human colorectal cancer metastases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (43), 13308-13311 (2015).</li><li>Vlachogiannis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+organoids+model+treatment+response+of+metastatic+gastrointestinal+cancers.">Patient-derived organoids model treatment response of metastatic gastrointestinal cancers.</a> Science. 359 (6378), 920-926 (2018).</li><li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-Derived+Organoids+Predict+Chemoradiation+Responses+of+Locally+Advanced+Rectal+Cancer.">Patient-Derived Organoids Predict Chemoradiation Responses of Locally Advanced Rectal Cancer.</a> Cell Stem Cell. 26 (1), 17-26 (2020).</li><li>Ganesh, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rectal+cancer+organoid+platform+to+study+individual+responses+to+chemoradiation.">A rectal cancer organoid platform to study individual responses to chemoradiation.</a> Nature Medicine. 25 (10), 1607-1614 (2019).</li><li>van de Wetering, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+derivation+of+a+living+organoid+biobank+of+colorectal+cancer+patients.">Prospective derivation of a living organoid biobank of colorectal cancer patients.</a> Cell. 161 (4), 933-945 (2015).</li><li>Yang, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+RNAi+library+based+on+partially+randomized+consensus+sequences+of+nuclear+receptors:+identifying+the+receptors+involved+in+amyloid+beta+degradation.">A novel RNAi library based on partially randomized consensus sequences of nuclear receptors: identifying the receptors involved in amyloid beta degradation.</a> Genomics. 88 (3), 282-292 (2006).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+subset+of+gastric+cancers+with+EGFR+amplification+and+overexpression+respond+to+cetuximab+therapy.">A subset of gastric cancers with EGFR amplification and overexpression respond to cetuximab therapy.</a> Scientific Reports. 3, 2992 (2013).</li><li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+set+of+defined+oncogenic+mutation+alleles+seems+to+better+predict+the+response+to+cetuximab+in+CRC+patient-derived+xenograft+than+KRAS+12/13+mutations.">A set of defined oncogenic mutation alleles seems to better predict the response to cetuximab in CRC patient-derived xenograft than KRAS 12/13 mutations.</a> Oncotarget. 6 (38), 40815-40821 (2015).</li><li>Guo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Pathology+of+Patient+Tumors,+Patient-Derived+Xenografts,+and+Cancer+Cell+Lines.">Molecular Pathology of Patient Tumors, Patient-Derived Xenografts, and Cancer Cell Lines.</a> Cancer Research. 76 (16), 4619-4626 (2016).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+expansion+of+epithelial+organoids+from+human+colon,+adenoma,+adenocarcinoma,+and+Barrett's+epithelium.">Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett's epithelium.</a> Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).</li><li>Tiriac, H., French, R., Lowy, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Patient-derived+Pancreatic+Ductal+Adenocarcinoma+Organoid+Models.">Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models.</a> Journal of Visualized Experiments. (155), (2020).</li><li>Kopper, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organoid+platform+for+ovarian+cancer+captures+intra-+and+interpatient+heterogeneity.">An organoid platform for ovarian cancer captures intra- and interpatient heterogeneity.</a> Nature Medicine. 25 (5), 838-849 (2019).</li><li>Corcoran, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+BRAF+and+MEK+Inhibition+With+Dabrafenib+and+Trametinib+in+BRAF+V600-Mutant+Colorectal+Cancer.">Combined BRAF and MEK Inhibition With Dabrafenib and Trametinib in BRAF V600-Mutant Colorectal Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. , (2015).</li><li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+culture+of+genome-stable+bipotent+stem+cells+from+adult+human+liver.">Long-term culture of genome-stable bipotent stem cells from adult human liver.</a> Cell. 160 (1-2), 299-312 (2015).</li></ol>

De foreløpige dataene for PDX-/PDXO-CR2110 i denne rapporten støtter den biologiske ekvivalensen mellom PDX og dets derivat, PDXO, med hensyn til genomikk, histopatologi og farmakologi, siden begge modellene representerer sykdomsformene avledet fra den opprinnelige CSC av pasienten. Begge modellene er pasientavledede sykdomsmodeller, potensielt prediktive for pasientenes kliniske respons10,11,12,21...

Kreft er en samling av ulike genetiske og immunologiske lidelser. Vellykket utvikling av effektive behandlinger er svært avhengig av eksperimentelle modeller som effektivt forutsier kliniske resultater. Store biblioteker med godt karakteriserte pasientavledede xenografts (PDX) har lenge blitt sett på som det translasjonelle in vivo-systemet som er valgt for å teste kjemo- og/eller målrettede terapier på grunn av deres evne til å rekapitulere pasientsvulstegenskaper, heterogenitet og pasientmedisinrespons1, slik at fase II-lignende muse kliniske studier kan forbedre klinisk suksess2,3. PDXer betraktes generelt som kreft stamcellesykdommer, med genetisk stabilitet, i motsetning til cellelinje avledet xenografts2. I løpet av de siste tiårene har store samlinger av PDXs blitt opprettet over hele verden, og blitt arbeidshest for utvikling av kreftmedisin i dag. Selv om de er mye brukt og med stor translasjonsverdi, er disse dyremodellene iboende kostbare, tidkrevende og lave gjennomstrømning, derfor utilstrekkelige for storskala screening. PDX er også uønsket for immuno-onkologi (IO) testing på grunn av en immunkompliserte natur4. Det er derfor upraktisk å dra full nytte av det tilgjengelige store biblioteket med PDXs.
Nylige funn, pionerer av Hans Clevers ' laboratorium5, har ført til etableringen av in vitro kulturer av organoider generert fra voksne stamceller i de fleste menneskelige organer av epitel opprinnelse5. Disse protokollene har blitt ytterligere raffinert for å tillate vekst av organoider fra antattE CSC-er i humane karsinomer av ulikeindikasjoner 6,7. Disse pasientavledede organoidene (PUD) er genomisk stabile8,9 og har vist seg å være svært prediktive for kliniske behandlingsutfall10,11,12. I tillegg muliggjør IN VITRO-naturen til PUD-er høy gjennomstrømningsscreening (HTS)13, og gir dermed potensielt en fordel i forhold til in vivo-modeller og utnytter store organoidbiblioteker som en surrogat av pasientpopulasjonen. PUD-er er klar til å bli en viktig oppdagelses- og oversettelsesplattform, og overvinner de mange begrensningene til PDXer beskrevet ovenfor.
Både PUD og PDX er pasientavledede og CSC-drevne modeller, med evne til å evaluere terapeutiske behandlinger i sammenheng med enten personlig behandling eller klinisk studieformat. Eksisterende store biblioteker av PDXs, som den proprietære samlingen av >3000 PDXs14,15,16,17, er derfor egnet for rask generering av biblioteker av tumororganoider (PDX-avledede organoider eller PDXO), noe som resulterer i et matchet bibliotek med parrede PDX- og PDXO-modeller. Denne rapporten beskriver prosedyren for å skape og karakterisere kolorektal kreft PDXO-CR2110 i forhold til foreldre PDX-CR2110 modell16.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12634028</td>
			<td>Base medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>Washing medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenese type II</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>17101015</td>
			<td>Digest tumor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td>Organoid culture matrix (Basement Membrane Extract, growth factor reduced)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Ac</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9165</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A83-01</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2939</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17504044</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N0636</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB202190</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7076</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gastrin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9145</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rspondin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-38-1000</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>35050038</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15630056</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin-streptomycin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Abmole</td>
			<td>M1817</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17105041</td>
			<td>Screening assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo 3D</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G9683</td>
			<td>Screening assay (luminescent ATP indicator)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multidrop dispenser</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>Multidrop combi</td>
			<td>Plating organoids/CellTiter-Glo 3D addition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital dispener</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>D300e</td>
			<td>Compound addition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Envision Plate reader</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>2104</td>
			<td>Luminescence reading</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balb/c nude mice</td>
			<td>Beijing HFK Bio-Technology Co</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAeasy Mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td>tRNA purification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAeasy Blood &#38; Tissue Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69506</td>
			<td>DNA purification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histogel</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>HG-4000-012</td>
			<td>Organoid embedding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

creating matched in vivo/in vitro patient-derived model pairs of pdx and pdx-derived organoids for cancer pharmacology research

Pasientavledede tumor xenografts (PDXs) regnes som de mest prediktive prekliniske modellene, i stor grad antatt å være drevet av kreft stamceller (CSC) for konvensjonell kreft narkotika evaluering. Et stort bibliotek med PDX-er gjenspeiler mangfoldet i pasientpopulasjoner og muliggjør dermed befolkningsbaserte prekliniske studier ("Fase II-lignende muse kliniske studier"); PDX har imidlertid praktiske begrensninger med lav gjennomstrømning, høye kostnader og lang varighet. Tumororganoider, som også er pasientavledede CSC-drevne modeller, kan betraktes som in vitro-ekvivalenten til PDX, og overvinne visse PDX-begrensninger for å håndtere store biblioteker av organoider eller forbindelser. Denne studien beskriver en metode for å lage PDX-avledede organoider (PDXO), noe som resulterer i parrede modeller for in vitro- og in vivo farmakologiforskning. Subkutant transplanterte PDX-CR2110 svulster ble samlet inn fra tumorbærende mus da svulstene nådde 200-800 mm3, per en godkjent obduksjonsprosedyre, etterfulgt av fjerning av tilstøtende ikke-tumorvev og dissosiasjon i små tumorfragmenter. De små tumorfragmentene ble vasket og passert gjennom en 100 μm cellesil for å fjerne rusk. Celleklynger ble samlet inn og suspendert i kjellermembranekstrakt (BME) oppløsning og belagt i en 6-brønns plate som en solid dråpe med omkringliggende flytende medier for vekst i en CO 2-inkubator. Organoid vekst ble overvåket to ganger ukentlig under lysmikroskopi og innspilt av fotografering, etterfulgt av flytende medium endring 2 eller 3 ganger i uken. De voksne organoidene ble ytterligere viderepassert (7 dager senere) med et 1:2-forhold ved å forstyrre BME innebygde organoider ved hjelp av mekanisk skjæring, hjulpet av tilsetning av trypsin og tilsetning av 10 μM Y-27632. Organoider ble kryopreservert i kryorør for langtidslagring, etter frigjøring fra BME ved sentrifugering, og også samplet (f.eks. DNA, RNA og FFPE-blokk) for videre karakterisering.

Morfologi av PDXOer, typisk for organoider under lysmikrokopi, og i samsvar med foreldre PDX per H&E farging Under lysmikroskopi demonstrerer PDXO-CR2110 typisk cystisk morfologi (figur 1A), som beskrevet tidligere for pasientavledede organoider (PUD), bevis som støtter likheten mellom PDXO og PUD under de samme kulturforholdene.
Histopatologiske undersøkelser ved H&E-farging viser at vevsstrukturer og celletyper av PDXO-CR2110 (<strong class...

Watch this Scientific Journal Video about Creating Matched In vivo/In vitro Patient-Derived Model Pairs of PDX and PDX-Derived Organoids for Cancer Pharmacology Research at JoVE.com

Creating Matched In vivo/In vitro Patient-Derived Model Pairs of PDX and PDX-Derived Organoids for Cancer Pharmacology Research

En metode er beskrevet for å lage organoider ved hjelp av pasientavledede xenografts (PDX) for in vitro screening, noe som resulterer i matchede par in vivo / in vitro-modeller. PDX-svulster ble høstet/behandlet i små biter mekanisk eller enzymatisk, etterfulgt av Clevers' metode for å dyrke tumororganoider som ble passasjert, kryopreservert og karakterisert mot den opprinnelige PDX.

Opprette matchede in vivo/in vitro pasientavledede modellpar av PDX- og PDX-avledede organoider for kreftfarmakologiforskning

Patient-derived tumor xenografts (PDXs) are considered the most predictive preclinical models, largely believed to be driven by cancer stem cells (CSC) ...

Denne protokollen kan brukes til å etablere et samsvarende bibliotek med sammenkoblede pasientavledede xenografter, eller PDX, og tilsvarende pasientavledede organoidlinjer. Fordelen med denne metoden er at den kan brukes til å lage organoider ved hjelp av PDX for in vitro screening, noe som resulterer i matchede par in vivo / in vitro-modeller. Begynn med å høste svulstene og behandle vevet som beskrevet i tekstmanuskriptet.Etter vevsfordøyelse, pipette vevet opp og ned med en fem milliliter steril plastpipette. Tilsett deretter 20 milliliter AD +til homogenatet og filtrer det med en 100 mikrometer cellesil. Vask filtratet to ganger med AD+, overfør det deretter til et plastrør og sentrifuger det ved 450 ganger G i fem minutter.Resuspend cellene i BME og holde dem på is. For å forberede organoidkulturen, overfør 200 mikroliter av cellefjæringen til hver brønn av en seksbrønnsplate og inkuber platen ved 37 grader Celsius i 30 minutter. Tilsett to milliliter organoidmedier til hver brønn og bilde representanten faller under et mikroskop.Oppretthold organoidkulturene ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid med middels endringer hver tredje til fjerde dag og passasje med et en-til-to-forhold hver syvende dag. Etter å ha dissosiert organoidene, kjør dem gjennom et 70 mikrometer filter i et 50 milliliter plastrør. Tell organoidene under et mikroskop og resuspend dem i BME på is for en endelig konsentrasjon på 5%Tilsett 50 mikroliter av organoid suspensjon i hver 384-brønns plate med en flytende dispenser for en såddtetthet på 200 CR2110 PDXOer per brønn.Bruk den digitale dispenseren til å tilsette SN38 i hver brønn i seriell fortynning. Lag et platekart ved hjelp av programvareverktøyet for digital dispenser. Behandlingene bør omfatte et negativt kontrollkjøretøy med 100% levedyktighet og positiv kontroll av fem mikromolar Staurosporine med 0% levedyktighet.Når du er ferdig, plasser de legemiddelbehandlede 384-brønnsplatene tilbake i 37 grader Celsius inkubator. Under lysmikroskopi viser PDXO CR2110 typisk cystisk morfologi som demonstrerer likheten mellom PDX-avledede organoider og pasientavledede organoider under de samme kulturforholdene. Histopatologiske undersøkelser ved H&E-farging viser at vevsstrukturer og celletyper av PDXO CR2110 ligner på den opprinnelige PDX CR2110.Genomiske profilsammenligninger av PDX og PDXO viser en 94,92% korrelasjon av transkripsjonsuttrykk og en 97,67% konkordans av DNA-mutasjoner, noe som tyder på en generell genomisk likhet mellom dette modellparet. Legemiddelfølsomhetsanalyser ble utført på PDXO CR2110 i 384-brønnsplater. PDXO CR2110 var følsom for irinotekan og motstandsdyktig mot cisplatin, i samsvar med PDX-behandlingsresultater.Det matchede paret in vitro- og in vivo-modeller kan komplimentere hverandre for in vitro screening og validering in vivo, forbedre suksessraten for narkotikaoppdagelse og potensielt redusere utmattelsesraten i klinisk utvikling.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

En melanom pasient-avledet Xenograft modell

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Etablering av magekreft pasient-avledet Xenograft modeller og primær celle Lines

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Testing Targeted Therapies in Cancer using Structural DNA Alteration Analysis and Patient-Derived Xenografts

Testing av målrettede behandlinger mot kreft ved hjelp av strukturell DNA-endringsanalyse og pasientavledede Xenografts

We present here an integrative approach for testing efficacy of targeted therapies that combines the next generation sequencing technolo-gies, therapeutic ...

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay ved bruk av pasientavledede tumororganoider

Patient-derived tumor organoids (PDOs) are expected to be a preclinical cancer model with better reproducibility of disease than traditional cell culture ...

Profiling Sensitivity to Targeted Therapies in EGFR-Mutant NSCLC Patient-Derived Organoids

Profilering av følsomhet for målrettede terapier i EGFR-mutant NSCLC pasientavledede organoider

Novel 3D cancer organoid cultures derived from clinical patient specimens represent an important model system to evaluate intratumor heterogeneity and ...

Generation and Culturing of High-Grade Serous Ovarian Cancer Patient-Derived Organoids

Generering og dyrking av høygradig serøs eggstokkreft Pasientavledede organoider

Organoids are 3D dynamic tumor models that can be grown successfully from patient-derived ovarian tumor tissue, ascites, or pleural fluid and aid in the ...

Establishment and Culture of Patient-Derived Breast Organoids

Etablering og kultur av pasientavledede brystorganoider

Breast cancer is a complex disease that has been classified into several different histological and molecular subtypes. Patient-derived breast tumor ...

Visualizing DNA Damage Repair Proteins in Patient-Derived Ovarian Cancer Organoids via Immunofluorescence Assays

Visualizing DNA Damage Repair Proteins in Patient-Derived Ovarian Cancer Organoids via Immunofluorescence Assays

Visualisering av DNA-skadereparasjonsproteiner i pasientavledede eggstokkreftorganoider via immunfluorescensanalyser

Immunofluorescence is one of the most widely used techniques to visualize target antigens with high sensitivity and specificity, allowing for the accurate ...

Establishment of Zebrafish Patient-Derived Xenografts from Pancreatic Cancer for Chemosensitivity Testing

Etablering av sebrafisk pasientderiverte xenotransplantater fra bukspyttkjertelkreft for kjemosensitivitetstesting

Cancer is one of the main causes of death worldwide, and the incidence of many types of cancer continues to increase. Much progress has been made in terms ...

Ovarian Cancer Patient-Derived Organoid Models for Pre-Clinical Drug Testing

Eggstokkreft pasientavledede organoidmodeller for preklinisk legemiddeltesting

Ovarian cancer is a fatal gynecologic cancer and the fifth leading cause of cancer death among women in the United States. Developing new drug treatments ...