Name: creating matched in vivo/in vitro patient-derived model pairs of pdx and pdx-derived organoids for cancer pharmacology research
Uploaded: 2021-05-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Creating Matched In vivo/In vitro Patient-Derived Model Pairs of PDX and PDX-Derived Organoids for Cancer Pharmacology Research at JoVE.com

Författarna vill tacka Dr. Jody Barbeau, Federica Parisi och Rajendra Kumari för kritisk läsning och redigering av manuskriptet. Författarna vill också tacka Crown Bioscience Oncology in vitro och in vivo-teamet för deras stora tekniska insatser.

Alla protokoll och ändringar eller förfaranden som rör vård och användning av djur granskades och godkändes av Crown Bioscience Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) innan studierna utfördes. Skötsel och användning av djur genomfördes i enlighet med AAALAC (Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care) Internationella riktlinjer som rapporterats i Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, National Research Council (2011). Alla djurförsöksförsök var sterila vid...

<ol>
	<li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+tumour+xenografts+as+models+for+oncology+drug+development.">Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 9 (6), 338-350 (2012).</li><li>Gao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+using+patient-derived+tumor+xenografts+to+predict+clinical+trial+drug+response.">High-throughput screening using patient-derived tumor xenografts to predict clinical trial drug response.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1318-1325 (2015).</li><li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+erlotinib+resistance+with+tailored+treatment+regimen+in+patient-derived+xenografts+from+naive+Asian+NSCLC+patients.">Overcoming erlotinib resistance with tailored treatment regimen in patient-derived xenografts from naive Asian NSCLC patients.</a> International Journal of Cancer. 132 (2), 74-84 (2013).</li><li>Li, Q. X., Feuer, G., Ouyang, X., An, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+modeling+for+immuno-oncology.">Experimental animal modeling for immuno-oncology.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 173, 34-46 (2017).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Drost, J., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids+in+Cancer+Researchearch.">Organoids in Cancer Researchearch.</a> Nature Reviews Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).</li><li>Muthuswamy, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+Models+of+Cancer+Explode+with+Possibilities.">Organoid Models of Cancer Explode with Possibilities.</a> Cell Stem Cell. 22 (3), 290-291 (2018).</li><li>Sachs, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Living+Biobank+of+Breast+Cancer+Organoids+Captures+Disease+Heterogeneity.">A Living Biobank of Breast Cancer Organoids Captures Disease Heterogeneity.</a> Cell. 172 (1-2), 373-386 (2018).</li><li>Weeber, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preserved+genetic+diversity+in+organoids+cultured+from+biopsies+of+human+colorectal+cancer+metastases.">Preserved genetic diversity in organoids cultured from biopsies of human colorectal cancer metastases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (43), 13308-13311 (2015).</li><li>Vlachogiannis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+organoids+model+treatment+response+of+metastatic+gastrointestinal+cancers.">Patient-derived organoids model treatment response of metastatic gastrointestinal cancers.</a> Science. 359 (6378), 920-926 (2018).</li><li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-Derived+Organoids+Predict+Chemoradiation+Responses+of+Locally+Advanced+Rectal+Cancer.">Patient-Derived Organoids Predict Chemoradiation Responses of Locally Advanced Rectal Cancer.</a> Cell Stem Cell. 26 (1), 17-26 (2020).</li><li>Ganesh, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rectal+cancer+organoid+platform+to+study+individual+responses+to+chemoradiation.">A rectal cancer organoid platform to study individual responses to chemoradiation.</a> Nature Medicine. 25 (10), 1607-1614 (2019).</li><li>van de Wetering, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+derivation+of+a+living+organoid+biobank+of+colorectal+cancer+patients.">Prospective derivation of a living organoid biobank of colorectal cancer patients.</a> Cell. 161 (4), 933-945 (2015).</li><li>Yang, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+RNAi+library+based+on+partially+randomized+consensus+sequences+of+nuclear+receptors:+identifying+the+receptors+involved+in+amyloid+beta+degradation.">A novel RNAi library based on partially randomized consensus sequences of nuclear receptors: identifying the receptors involved in amyloid beta degradation.</a> Genomics. 88 (3), 282-292 (2006).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+subset+of+gastric+cancers+with+EGFR+amplification+and+overexpression+respond+to+cetuximab+therapy.">A subset of gastric cancers with EGFR amplification and overexpression respond to cetuximab therapy.</a> Scientific Reports. 3, 2992 (2013).</li><li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+set+of+defined+oncogenic+mutation+alleles+seems+to+better+predict+the+response+to+cetuximab+in+CRC+patient-derived+xenograft+than+KRAS+12/13+mutations.">A set of defined oncogenic mutation alleles seems to better predict the response to cetuximab in CRC patient-derived xenograft than KRAS 12/13 mutations.</a> Oncotarget. 6 (38), 40815-40821 (2015).</li><li>Guo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Pathology+of+Patient+Tumors,+Patient-Derived+Xenografts,+and+Cancer+Cell+Lines.">Molecular Pathology of Patient Tumors, Patient-Derived Xenografts, and Cancer Cell Lines.</a> Cancer Research. 76 (16), 4619-4626 (2016).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+expansion+of+epithelial+organoids+from+human+colon,+adenoma,+adenocarcinoma,+and+Barrett's+epithelium.">Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett's epithelium.</a> Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).</li><li>Tiriac, H., French, R., Lowy, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Patient-derived+Pancreatic+Ductal+Adenocarcinoma+Organoid+Models.">Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models.</a> Journal of Visualized Experiments. (155), (2020).</li><li>Kopper, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organoid+platform+for+ovarian+cancer+captures+intra-+and+interpatient+heterogeneity.">An organoid platform for ovarian cancer captures intra- and interpatient heterogeneity.</a> Nature Medicine. 25 (5), 838-849 (2019).</li><li>Corcoran, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+BRAF+and+MEK+Inhibition+With+Dabrafenib+and+Trametinib+in+BRAF+V600-Mutant+Colorectal+Cancer.">Combined BRAF and MEK Inhibition With Dabrafenib and Trametinib in BRAF V600-Mutant Colorectal Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. , (2015).</li><li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+culture+of+genome-stable+bipotent+stem+cells+from+adult+human+liver.">Long-term culture of genome-stable bipotent stem cells from adult human liver.</a> Cell. 160 (1-2), 299-312 (2015).</li></ol>

De preliminära uppgifterna för PDX-/PDXO-CR2110 i denna rapport stöder den biologiska motsvarigheten mellan PDX och dess derivat PDXO när det gäller genomik, histopatologi och farmakologi, eftersom båda modellerna representerar de sjukdomsformer som härrör från patientens ursprungliga CSC. Båda modellerna är patientbaserade sjukdomsmodeller, potentiellt prediktiva för det kliniska svaret hos patienter10,11,12,</...

Cancer är en samling olika genetiska och immunologiska störningar. Framgångsrik utveckling av effektiva behandlingar är starkt beroende av experimentella modeller som effektivt förutsäger kliniska resultat. Stora bibliotek av väl karakteriserade patient-härledda xenografts (PDX) har länge betraktats som det translationella in vivo-systemet för att testa cellgifter och/ eller riktade terapier på grund av deras förmåga att rekapitulera patientens tumöregenskaper, heterogenitet och patientläkemedelssvar1, vilket möjliggör fas II-liknande mus kliniska prövningar för att förbättra kliniskframgång 2,3. PDX anses i allmänhet vara cancerstamcellssjukdomar, med genetisk stabilitet, i motsats till cellinje härledda xenografts2. Under de senaste decennierna har stora samlingar av PDX skapats över hela världen och blivit arbetshästen för utveckling av cancerläkemedel idag. Även om de används i stor utsträckning och med stort translationellt värde är dessa djurmodeller i sig kostsamma, tidskrävande och låga genomströmning, därför otillräckliga för storskalig screening. PDX är också oönskade för immunonkologi (IO) testning på grund av att en immun-komprometterad natur4. Det är därför opraktiskt att dra full nytta av det tillgängliga stora biblioteket med PDX.
Nya upptäckter, pionjärer av Hans Clevers laboratorium5, har lett till upprättandet av in vitro-kulturer av organoider som genereras från vuxna stamceller i de flesta mänskliga organ av epitelialt ursprung5. Dessa protokoll har förfinats ytterligare för att möjliggöra tillväxt av organoider från förmodade CSCs i humant carcinom av olikaindikationer 6,7. Dessa patient-härledda organoider (PDO) är genomiskt stabila8,9 och har visat sig vara mycket prediktiva för kliniska behandlingsresultat10,11,12. Dessutom möjliggör pdos in vitro-karaktär screening med hög genomströmning (HTS)13, vilket potentiellt erbjuder en fördel jämfört med in vivo-modeller och utnyttjar stora organoidbibliotek som surrogat hos patientpopulationen. PDO:er är redo att bli en viktig identifierings- och översättningsplattform som övervinner de många begränsningarna i PDX som beskrivs ovan.
Både PDO och PDX är patientbaserade och CSC-drivna modeller, med förmågan att utvärdera terapier i samband med antingen personlig behandling eller kliniskt prövningsformat. Befintliga stora bibliotek av PDX, som den proprietära samlingen av >3000 PDXs14,15,16,17, är därför lämpliga för snabb generering av bibliotek av tumörorganoider (PDX-härledda organoider eller PDXO), vilket resulterar i ett matchat bibliotek med parade PDX- och PDXO-modeller. I den här rapporten beskrivs proceduren för att skapa och karakterisera kolorektalcancer PDXO-CR2110 i förhållande till dess föräldra-PDX-CR2110-modell16.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12634028</td>
			<td>Base medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>Washing medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenese type II</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>17101015</td>
			<td>Digest tumor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td>Organoid culture matrix (Basement Membrane Extract, growth factor reduced)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Ac</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9165</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A83-01</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2939</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17504044</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N0636</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB202190</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7076</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gastrin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9145</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rspondin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-38-1000</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>35050038</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15630056</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin-streptomycin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Abmole</td>
			<td>M1817</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17105041</td>
			<td>Screening assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo 3D</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G9683</td>
			<td>Screening assay (luminescent ATP indicator)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multidrop dispenser</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>Multidrop combi</td>
			<td>Plating organoids/CellTiter-Glo 3D addition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital dispener</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>D300e</td>
			<td>Compound addition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Envision Plate reader</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>2104</td>
			<td>Luminescence reading</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balb/c nude mice</td>
			<td>Beijing HFK Bio-Technology Co</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAeasy Mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td>tRNA purification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAeasy Blood &#38; Tissue Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69506</td>
			<td>DNA purification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histogel</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>HG-4000-012</td>
			<td>Organoid embedding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

creating matched in vivo/in vitro patient-derived model pairs of pdx and pdx-derived organoids for cancer pharmacology research

Patient-härledda tumör xenografts (PDX) anses vara de mest prediktiva prekliniska modellerna, som till stor del tros drivas av cancerstamceller (CSC) för konventionell cancerläkemedelsutvärdering. Ett stort bibliotek med PDX återspeglar mångfalden av patientpopulationer och möjliggör därmed populationsbaserade prekliniska prövningar ("Fas II-liknande mus kliniska prövningar"); PDX har dock praktiska begränsningar av lågt genomströmning, höga kostnader och lång varaktighet. Tumörorganoider, som också är patientbaserade CSC-drivna modeller, kan betraktas som in vitro-motsvarigheten till PDX, vilket övervinner vissa PDX-begränsningar för att hantera stora bibliotek av organoider eller föreningar. Denna studie beskriver en metod för att skapa PDX-härledda organoider (PDXO), vilket resulterar i parade modeller för in vitro- och in vivo-farmakologiforskning. Subkutant-transplanterade PDX-CR2110 tumörer samlades in från tumör-bärande möss när tumörer nådde 200-800 mm3, enligt en godkänd obduktion förfarande, följt av avlägsnande av angränsande icke-tumör vävnader och dissociation i små tumör fragment. De små tumörfragmenten tvättades och passerade genom en 100 μm cellsil för att ta bort skräpet. Cellkluster samlades in och suspenderades i källaren membran extrakt (BME) lösning och pläteras i en 6-brunnsplatta som en fast droppe med omgivande flytande medier för tillväxt i en CO2 inkubator. Organoid tillväxt övervakades två gånger i veckan under lätta mikroskopi och registreras genom fotografering, följt av flytande medium förändring 2 eller 3 gånger i veckan. De odlade organoiderna passagerades ytterligare (7 dagar senare) vid ett 1:2-förhållande genom att störa BME inbäddade organoider med mekanisk savning, med hjälp av tillsats av trypsin och tillsats av 10 μM Y-27632. Organoider var cryopreserved i cryo-tubes för långsiktig lagring, efter utsläpp från BME genom centrifugering, och även provsmakas (t.ex. DNA, RNA och FFPE block) för ytterligare karakterisering.

Morfologi av PDO: er, typiska för organoider under ljusmikroskopi, och överensstämmer med föräldrarnas PDX per H&E-färgning Under lätt mikroskopi visar PDXO- CR2110 typisk cystisk morfologi (figur 1A), som beskrivits tidigare för patientbaserade organoider (PDO), bevis som stöder likheten mellan PDXO och PDO under samma odlingsförhållanden.
Histopatologisk undersökning av H&E-färgning visar att vävnadsstrukturerna och celltyperna ...

Watch this Scientific Journal Video about Creating Matched In vivo/In vitro Patient-Derived Model Pairs of PDX and PDX-Derived Organoids for Cancer Pharmacology Research at JoVE.com

Creating Matched In vivo/In vitro Patient-Derived Model Pairs of PDX and PDX-Derived Organoids for Cancer Pharmacology Research

En metod beskrivs för att skapa organoider med patientbaserade xenografter (PDX) för in vitro-screening, vilket resulterar i matchade par in vivo/in vitro-modeller. PDX tumörer skördades/bearbetades i små bitar mekaniskt eller enzymatically, följt av Clevers metod att odla tumör organoider som passages, cryopreserved och karakteriseras mot den ursprungliga PDX.

Skapa matchade in vivo/in vitro patient-härledda modellpar av PDX och PDX-härledda organoider för cancerfarmakologi forskning

Patient-derived tumor xenografts (PDXs) are considered the most predictive preclinical models, largely believed to be driven by cancer stem cells (CSC) ...

Detta protokoll kan användas för att upprätta ett matchat bibliotek med parade patient-härledda xenografts, eller PDX, och motsvarande patient-härledda organoid linjer. Fördelen med denna metod är att den kan användas för att skapa organoider med PDX för in vitro-screening, vilket resulterar i matchade par in vivo/ in vitro-modeller. Börja med att skörda tumörerna och bearbeta vävnaden enligt beskrivningen i textmanuskriptet.Efter vävnadsuppsmältning, pipett vävnaden upp och ner med en fem milliliter steril plastpipett. Tillsätt sedan 20 milliliter AD+till homogenatet och filtrera det med en 100 mikrometers cellsil. Tvätta filtratet två gånger med AD+och överför det sedan till ett plaströr och centrifugera det vid 450 gånger G i fem minuter.Återanvänd cellerna i BME och håll dem på is. För att förbereda den organoida kulturen, överför 200 mikroliter av cellupphängningen till varje brunn på en sexbrunnsplatta och inkubera plattan vid 37 grader Celsius i 30 minuter. Tillsätt två milliliter organoidmedel till varje brunn och avbilda de representativa dropparna under ett mikroskop.Behåll organoidkulturerna vid 37 grader Celsius och 5% koldioxid med medelstora förändringar var tredje till fjärde dag och passage med ett 1-till-två-förhållande var sjunde dag. Efter att ha dissocierat organoiderna, kör dem genom ett 70 mikrometerfilter till ett 50 milliliter plaströr. Räkna organoiderna under ett mikroskop och återanvänd dem i BME på is för en slutlig koncentration på 5%Tillsätt 50 mikroliter av den organoida suspensionen i varje 384-brunnsplatta med en flytande dispenser för en såddtäthet på 200 CR2110 PDXOs per brunn.Använd den digitala dispensern för att lägga till SN38 till varje brunn i seriell utspädning. Skapa en plåtkarta med hjälp av det digitala dispenserprogramvaran. Behandlingarna bör omfatta ett negativt kontrollfordon med 100% livskraft och positiv kontroll av fem mikromolar Staurosporine med 0% livskraft.När du är klar, placera de drogbehandlade 384-brunnsplattorna tillbaka i 37 grader Celsius inkubator. Under lätt mikroskopi visar PDXO CR2110 typisk cystisk morfologi som visar likheten mellan PDX-härledda organoider och patient-härledda organoider under samma odlingsförhållanden. Histopatologisk undersökning av H&E färgning visar att vävnad strukturer och cell typer av PDXO CR2110 liknar den ursprungliga PDX CR2110.Genomiska profil jämförelser av PDX och PDXO visar en 94,92%korrelation av transkriptom uttryck och en 97,67%överensstämmelse av DNA mutationer, vilket tyder på en övergripande genomisk likhet mellan detta par modeller. Läkemedelskänslighetsanalyser utfördes på PDXO CR2110 i 384-brunnsplattor. PDXO CR2110 var känslig för irinotecan och resistent mot cisplatin, överensstämmer med PDX behandling resultat.Det matchade paret in vitro- och in vivo-modeller kan komplettera varandra för in vitro-screening och validering in vivo, vilket förbättrar framgångsgraden för läkemedelsupptäckt och potentiellt minskar utmattningsfrekvensen i klinisk utveckling.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

En melanom patient-derived xenograft modell

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Inrättande av patienter med Ventrikelhärledd xenograft-modell och primära cellinjer

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Testing Targeted Therapies in Cancer using Structural DNA Alteration Analysis and Patient-Derived Xenografts

Testa riktade terapier i cancer med strukturell DNA-ändringsanalys och patientbaserade Xenografts

We present here an integrative approach for testing efficacy of targeted therapies that combines the next generation sequencing technolo-gies, therapeutic ...

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

In vitro-analys med hög genomströmning med patient-härledda tumörorganoider

Patient-derived tumor organoids (PDOs) are expected to be a preclinical cancer model with better reproducibility of disease than traditional cell culture ...

Profiling Sensitivity to Targeted Therapies in EGFR-Mutant NSCLC Patient-Derived Organoids

Profileringskänslighet mot riktade terapier i EGFR-mutanta NSCLC patientbaserade organoider

Novel 3D cancer organoid cultures derived from clinical patient specimens represent an important model system to evaluate intratumor heterogeneity and ...

Generation and Culturing of High-Grade Serous Ovarian Cancer Patient-Derived Organoids

Generering och odling av höggradig serös äggstockscancer patient-derived organoider

Organoids are 3D dynamic tumor models that can be grown successfully from patient-derived ovarian tumor tissue, ascites, or pleural fluid and aid in the ...

Establishment and Culture of Patient-Derived Breast Organoids

Etablering och odling av patient-härledda bröstorganoider

Breast cancer is a complex disease that has been classified into several different histological and molecular subtypes. Patient-derived breast tumor ...

Visualizing DNA Damage Repair Proteins in Patient-Derived Ovarian Cancer Organoids via Immunofluorescence Assays

Visualizing DNA Damage Repair Proteins in Patient-Derived Ovarian Cancer Organoids via Immunofluorescence Assays

Visualisera DNA-skador reparera proteiner i patient-derived äggstockscancer organoider via immunofluorescensanalyser

Immunofluorescence is one of the most widely used techniques to visualize target antigens with high sensitivity and specificity, allowing for the accurate ...

Establishment of Zebrafish Patient-Derived Xenografts from Pancreatic Cancer for Chemosensitivity Testing

Etablering av zebrafisk patient-derived xenografts från bukspottskörtelcancer för kemosensitivitetstestning

Cancer is one of the main causes of death worldwide, and the incidence of many types of cancer continues to increase. Much progress has been made in terms ...

Ovarian Cancer Patient-Derived Organoid Models for Pre-Clinical Drug Testing

Äggstockscancer patienthärledda organoidmodeller för preklinisk läkemedelstestning

Ovarian cancer is a fatal gynecologic cancer and the fifth leading cause of cancer death among women in the United States. Developing new drug treatments ...