Name: creating matched in vivo/in vitro patient-derived model pairs of pdx and pdx-derived organoids for cancer pharmacology research
Uploaded: 2021-05-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Creating Matched In vivo/In vitro Patient-Derived Model Pairs of PDX and PDX-Derived Organoids for Cancer Pharmacology Research at JoVE.com

Yazarlar, makalenin eleştirel okunması ve düzenlenmesi için Dr. Jody Barbeau, Federica Parisi ve Rajendra Kumari'ye teşekkür eder. Yazarlar ayrıca Crown Bioscience Oncology in vitro ve in vivo ekibine büyük teknik çabaları için teşekkür eder.

Çalışmaların yürütülmesinden önce, hayvanların bakımı ve kullanımı ile ilgili tüm protokoller ve değişiklikler veya prosedürler Crown Bioscience Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır. Hayvanların bakımı ve kullanımı, AAALAC (Laboratuvar Hayvan Bakımını Değerlendirme ve Akreditasyon Derneği) Uluslararası kılavuzlarına uygun olarak, Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Rehberi, Ulusal Araştırma Konseyi (2011) ...

<ol>
	<li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+tumour+xenografts+as+models+for+oncology+drug+development.">Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 9 (6), 338-350 (2012).</li><li>Gao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+using+patient-derived+tumor+xenografts+to+predict+clinical+trial+drug+response.">High-throughput screening using patient-derived tumor xenografts to predict clinical trial drug response.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1318-1325 (2015).</li><li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+erlotinib+resistance+with+tailored+treatment+regimen+in+patient-derived+xenografts+from+naive+Asian+NSCLC+patients.">Overcoming erlotinib resistance with tailored treatment regimen in patient-derived xenografts from naive Asian NSCLC patients.</a> International Journal of Cancer. 132 (2), 74-84 (2013).</li><li>Li, Q. X., Feuer, G., Ouyang, X., An, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+modeling+for+immuno-oncology.">Experimental animal modeling for immuno-oncology.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 173, 34-46 (2017).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Drost, J., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids+in+Cancer+Researchearch.">Organoids in Cancer Researchearch.</a> Nature Reviews Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).</li><li>Muthuswamy, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+Models+of+Cancer+Explode+with+Possibilities.">Organoid Models of Cancer Explode with Possibilities.</a> Cell Stem Cell. 22 (3), 290-291 (2018).</li><li>Sachs, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Living+Biobank+of+Breast+Cancer+Organoids+Captures+Disease+Heterogeneity.">A Living Biobank of Breast Cancer Organoids Captures Disease Heterogeneity.</a> Cell. 172 (1-2), 373-386 (2018).</li><li>Weeber, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preserved+genetic+diversity+in+organoids+cultured+from+biopsies+of+human+colorectal+cancer+metastases.">Preserved genetic diversity in organoids cultured from biopsies of human colorectal cancer metastases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (43), 13308-13311 (2015).</li><li>Vlachogiannis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+organoids+model+treatment+response+of+metastatic+gastrointestinal+cancers.">Patient-derived organoids model treatment response of metastatic gastrointestinal cancers.</a> Science. 359 (6378), 920-926 (2018).</li><li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-Derived+Organoids+Predict+Chemoradiation+Responses+of+Locally+Advanced+Rectal+Cancer.">Patient-Derived Organoids Predict Chemoradiation Responses of Locally Advanced Rectal Cancer.</a> Cell Stem Cell. 26 (1), 17-26 (2020).</li><li>Ganesh, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rectal+cancer+organoid+platform+to+study+individual+responses+to+chemoradiation.">A rectal cancer organoid platform to study individual responses to chemoradiation.</a> Nature Medicine. 25 (10), 1607-1614 (2019).</li><li>van de Wetering, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+derivation+of+a+living+organoid+biobank+of+colorectal+cancer+patients.">Prospective derivation of a living organoid biobank of colorectal cancer patients.</a> Cell. 161 (4), 933-945 (2015).</li><li>Yang, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+RNAi+library+based+on+partially+randomized+consensus+sequences+of+nuclear+receptors:+identifying+the+receptors+involved+in+amyloid+beta+degradation.">A novel RNAi library based on partially randomized consensus sequences of nuclear receptors: identifying the receptors involved in amyloid beta degradation.</a> Genomics. 88 (3), 282-292 (2006).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+subset+of+gastric+cancers+with+EGFR+amplification+and+overexpression+respond+to+cetuximab+therapy.">A subset of gastric cancers with EGFR amplification and overexpression respond to cetuximab therapy.</a> Scientific Reports. 3, 2992 (2013).</li><li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+set+of+defined+oncogenic+mutation+alleles+seems+to+better+predict+the+response+to+cetuximab+in+CRC+patient-derived+xenograft+than+KRAS+12/13+mutations.">A set of defined oncogenic mutation alleles seems to better predict the response to cetuximab in CRC patient-derived xenograft than KRAS 12/13 mutations.</a> Oncotarget. 6 (38), 40815-40821 (2015).</li><li>Guo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Pathology+of+Patient+Tumors,+Patient-Derived+Xenografts,+and+Cancer+Cell+Lines.">Molecular Pathology of Patient Tumors, Patient-Derived Xenografts, and Cancer Cell Lines.</a> Cancer Research. 76 (16), 4619-4626 (2016).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+expansion+of+epithelial+organoids+from+human+colon,+adenoma,+adenocarcinoma,+and+Barrett's+epithelium.">Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett's epithelium.</a> Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).</li><li>Tiriac, H., French, R., Lowy, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Patient-derived+Pancreatic+Ductal+Adenocarcinoma+Organoid+Models.">Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models.</a> Journal of Visualized Experiments. (155), (2020).</li><li>Kopper, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organoid+platform+for+ovarian+cancer+captures+intra-+and+interpatient+heterogeneity.">An organoid platform for ovarian cancer captures intra- and interpatient heterogeneity.</a> Nature Medicine. 25 (5), 838-849 (2019).</li><li>Corcoran, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+BRAF+and+MEK+Inhibition+With+Dabrafenib+and+Trametinib+in+BRAF+V600-Mutant+Colorectal+Cancer.">Combined BRAF and MEK Inhibition With Dabrafenib and Trametinib in BRAF V600-Mutant Colorectal Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. , (2015).</li><li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+culture+of+genome-stable+bipotent+stem+cells+from+adult+human+liver.">Long-term culture of genome-stable bipotent stem cells from adult human liver.</a> Cell. 160 (1-2), 299-312 (2015).</li></ol>

Bu raporda pdx-/PDXO-CR2110 için ön veriler, her iki model de hastanın orijinal CSC'sinden elde edilen hastalık formlarını temsil ettiği için, genomik, histopatoloji ve farmakoloji açısından PDX ve türevi PDXO arasındaki biyolojik eşdeğerliği desteklemektedir. Her iki model de hasta kaynaklı hastalık modelleridir, potansiyel olarak hastaların klinik yanıtını tahmin eden10 , 11,12,<sup class="xref...

Kanserler çeşitli genetik ve immünolojik bozuklukların bir koleksiyonudur. Etkili tedavilerin başarılı gelişimi, klinik sonuçları etkili bir şekilde öngören deneysel modellere oldukça bağlıdır. İyi karakterize hasta kaynaklı ksinograftların (PDX) büyük kütüphaneleri, uzun zamandır, hasta tümör özelliklerini, heterojenliği ve hasta ilaç yanıtını1yeniden yakalama yetenekleri nedeniyle kemoterapi ve / veya hedefli tedavileri test etmek için tercih edilen çevirisel in vivo sistemi olarak görmektedir, böylece Faz II benzeri fare klinik çalışmalarının klinik başarıyı iyileştirmesini sağlar2,3. PDX'ler genellikle hücre hattı türetilmiş ksinograftların aksine genetik stabiliteye sahip kanser kök hücre hastalıkları olarak kabul edilir2. Son birkaç on yılda, dünya çapında büyük PDX koleksiyonları oluşturuldu ve bugün kanser ilacı geliştirmenin atı haline geldi. Yaygın olarak kullanılmasına ve büyük çeviri değerine sahip olmasına rağmen, bu hayvan modelleri özünde maliyetli, zaman alıcı ve düşük verime sahiptir, bu nedenle büyük ölçekli tarama için yetersizdir. PDX ayrıca bağışıklıktan zarar gören bir doğa nedeniyle immün-onkoloji (GÇ) testi için istenmeyen4. Bu nedenle, mevcut büyük PDX kütüphanesinden tam olarak yararlanmak pratik değildir.
Hans Clevers'in laboratuvarı5tarafından öncülük edilen son keşifler, epitel kökenli çoğu insan organında yetişkin kök hücrelerden üretilen organoidlerin in vitro kültürlerinin kurulmasına yol açmıştır5. Bu protokoller, çeşitli endikasyonların insan karsinomlarında varsayılan CSC'lerden organoidlerin büyümesine izin vermek için daha da rafine edilmiştir6,7. Bu hasta kaynaklı organoidler (PDO' lar) genomik olarak stabil8,9'dur ve klinik tedavi sonuçları 10 , 11,12'yioldukça tahmin ettiği gösterilmiştir. Ek olarak, PDO'ların in vitro doğası yüksek verimli tarama (HTS)13, böylece potansiyel olarak in vivo modellere göre bir avantaj sunar ve hasta popülasyonunun bir vekili olarak büyük organoid kütüphanelerinden yararlanır. PDO'lar, yukarıda açıklanan PDX'lerin birçok sınırlamasının üstesinden gelerek önemli bir keşif ve çeviri platformu olmaya hazırdır.
Hem PDO hem de PDX, terapötikleri kişiselleştirilmiş tedavi veya klinik çalışma formatı bağlamında değerlendirme yeteneğine sahip hasta kaynaklı ve CSC odaklı modellerdir. Bu nedenle,14, 15, 16, 17>3000 PDX'lerin tescilli koleksiyonu gibi mevcut büyük PDX kütüphaneleri, tümör organoidlerinin (PDX türevli organoidler veya PDXO) kütüphanelerinin hızlı üretimi için uygundur ve bu da eşleştirilmiş PDX ve PDXO modellerinin eşleştirilmiş bir kütüphanesiyle sonuçlanır. Bu rapor, kolorektal kanser PDXO-CR2110'u ebeveyn PDX-CR2110 model16ile ilgili olarak oluşturma ve karakterize etme prosedürünü açıklar.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12634028</td>
			<td>Base medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>Washing medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenese type II</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>17101015</td>
			<td>Digest tumor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td>Organoid culture matrix (Basement Membrane Extract, growth factor reduced)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Ac</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9165</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A83-01</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2939</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17504044</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N0636</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB202190</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7076</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gastrin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9145</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rspondin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-38-1000</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>35050038</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15630056</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin-streptomycin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Abmole</td>
			<td>M1817</td>
			<td>Organoid culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17105041</td>
			<td>Screening assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo 3D</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G9683</td>
			<td>Screening assay (luminescent ATP indicator)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multidrop dispenser</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>Multidrop combi</td>
			<td>Plating organoids/CellTiter-Glo 3D addition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital dispener</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>D300e</td>
			<td>Compound addition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Envision Plate reader</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>2104</td>
			<td>Luminescence reading</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balb/c nude mice</td>
			<td>Beijing HFK Bio-Technology Co</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAeasy Mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td>tRNA purification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAeasy Blood &#38; Tissue Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69506</td>
			<td>DNA purification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histogel</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>HG-4000-012</td>
			<td>Organoid embedding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

creating matched in vivo/in vitro patient-derived model pairs of pdx and pdx-derived organoids for cancer pharmacology research

Hasta kaynaklı tümör ksinograftları (PDX'ler), büyük ölçüde geleneksel kanser ilacı değerlendirmesi için kanser kök hücreleri (CSC) tarafından yönlendirildiğine inanılan en tahmine dayalı preklinik modeller olarak kabul edilir. Büyük bir PDX kütüphanesi hasta popülasyonlarının çeşitliliğini yansıtır ve böylece nüfusa dayalı preklinik çalışmalara olanak tanır ("Faz II benzeri fare klinik çalışmaları"); ancak, PDX düşük aktarım hızı, yüksek maliyetler ve uzun süre pratik sınırlamalara sahiptir. Aynı zamanda hasta kaynaklı CSC güdümlü modeller olan tümör organoidleri, büyük organoid veya bileşik kütüphaneleriyle başa çıkmak için belirli PDX sınırlamalarının üstesinden gelen PDX'in in vitro eşdeğeri olarak kabul edilebilir. Bu çalışma, PDX türevi organoidler (PDXO) oluşturmak için bir yöntem açıklar, böylece in vitro ve in vivo farmakoloji araştırmaları için eşleştirilmiş modeller elde edilir. Deri altı nakledilen PDX-CR2110 tümörleri tümör taşıyan farelerden, tümörler onaylanmış bir otopsi prosedürü başına 200-800 mm3'e ulaştığında, ardından bitişik tümör dışı dokuların çıkarılması ve küçük tümör parçalarına ayrışması toplanmıştır. Küçük tümör parçaları yıkandı ve enkazı gidermek için 100 μm hücre süzgecinden geçirildi. Hücre kümeleri bodrum membran özü (BME) çözeltisinde toplanıp askıya alındı ve CO 2 inkübatörde büyümek için çevreleyen sıvı ortama sahip katı bir damlacık olarak6 kuyulu bir plakaya kaplandı. Organoid büyümesi ışık mikroskopisi altında haftada iki kez izlendi ve fotoğrafla kaydedildi, ardından haftada 2 veya 3 kez sıvı orta değişim izlendi. Yetiştirilen organoidler, tripin ilavesi ve 10 μM Y-27632 ilavesi ile birlikte mekanik kesme kullanarak BME gömülü organoidleri bozarak 1:2 oranında daha fazla geçiş yaptı (7 gün sonra). Organoidler, bme'den santrifüjleme ile serbest bırakıldıktan sonra uzun süreli depolama için kriyo tüplerde kriyopreziteserv edildi ve ayrıca daha fazla karakterizasyon için örneklendi (örneğin, DNA, RNA ve FFPE bloğu).

Hafif mikroskopi altındaki organoidlere özgü ve H&E boyama başına ebeveyn PDX ile tutarlı olan PDBO'ların morfolojisi Işık mikroskopisi altında PDXO-CR2110, daha önce hasta kaynaklı organoidler (PDO) için açıklandığı gibi tipik kistik morfolojiyi (Şekil 1A),pdxo ve PDO arasındaki benzerliği aynı kültür koşullarında destekleyen kanıtları göstermektedir.
H&E boyama ile yapılan histopatolojik inceleme, PDXO-CR2110 dok...

Watch this Scientific Journal Video about Creating Matched In vivo/In vitro Patient-Derived Model Pairs of PDX and PDX-Derived Organoids for Cancer Pharmacology Research at JoVE.com

Creating Matched In vivo/In vitro Patient-Derived Model Pairs of PDX and PDX-Derived Organoids for Cancer Pharmacology Research

İn vitro tarama için hasta kaynaklı ksinograftlar (PDX) kullanılarak organoidler oluşturmak için bir yöntem açıklanmıştır, bu da eşleşen in vivo/in vitro model çiftleri ile sonuçlanır. PDX tümörleri mekanik veya enzmatik olarak küçük parçalara ayrıldı/işlendi, ardından Clevers'in orijinal PDX'e karşı pas geçen, kriyoprezerserve edilen ve karakterize edilen tümör organoidlerini yetiştirme yöntemi izlendi.

Kanser Farmakolojisi Araştırmaları için PDX ve PDX Türevli Organoidlerin Eşleştirilmiş In vivo/In vitro Hasta Kaynaklı Model Çiftlerinin Oluşturulması

Patient-derived tumor xenografts (PDXs) are considered the most predictive preclinical models, largely believed to be driven by cancer stem cells (CSC) ...

Bu protokol, eşleştirilmiş hasta türetilmiş ksinograftlar veya PDX ve buna karşılık gelen hasta türevi organoid çizgilerinden oluşan eşleştirilmiş bir kitaplık oluşturmak için kullanılabilir. Bu yöntemin avantajı, in vitro tarama için PDX kullanarak organoid oluşturmak için kullanılabilmesidir, bu da eşleşen in vivo / in vitro model çiftleri ile sonuçlanır. Tümörleri toplayarak ve metin el yazmasında açıklandığı gibi dokuyu işleyerek başlayın.Doku sindirimi sonrası, beş mililitre steril plastik pipet ile dokuyu yukarı ve aşağı pipet. Daha sonra homojenliğe 20 mililitre AD + ekleyin ve 100 mikrometre hücre süzgeci ile filtreleyin. Filtratı AD+ ile iki kez yıkayın, ardından plastik bir tüpe aktarın ve beş dakika boyunca 450 kez G'de santrifüjleyin.BME'deki hücreleri yeniden biriktirin ve buzda tutun. Organoid kültürünü hazırlamak için, hücre süspansiyonunun 200 mikrolitresini altı kuyulu bir plakanın her kuyusuna aktarın ve plakayı 37 santigrat derecede 30 dakika kuluçkaya bırakın. Her kuyuya iki mililitre organoid ortam ekleyin ve temsilcinin mikroskop altında düştüğünü görüntüleyin.Organoid kültürlerini 37 santigrat derecede ve %5 karbondioksitte, her üç ila dört günde bir orta değişikliklerle ve her yedi günde bir-iki oranında geçişle koruyun. Organoidleri ayrıştırtıktan sonra, 70 mikrometrelik bir filtreden 50 mililitrelik plastik bir tüpe geçirin. Organoidleri mikroskop altında sayın ve %5'lik son konsantrasyon için bme'de buz üzerinde yeniden depolayın Her 384 kuyu plakasına 50 mikrolitre organoid süspansiyonu ekleyin ve kuyu başına 200 CR2110 PDBO tohumlama yoğunluğu için sıvı bir dağıtıcı ile ekleyin.Seri seyreltmede her kuyuya SN38 eklemek için dijital dağıtıcıyı kullanın. Dijital dağıtıcı yazılım aracını kullanarak bir plaka haritası oluşturun. Tedaviler% 100 canlılığa sahip negatif kontrol aracını ve% 0 canlılığa sahip beş mikromolar Staurosporine pozitif kontrolünü içermelidir.Bittiğinde, ilaçla tedavi edilen 384 kuyu plakasını 37 santigrat derece inkübatöre geri yerleştirin. Hafif mikroskopi altında PDXO CR2110, pdx türevi organoidler ile hasta kaynaklı organoidler arasındaki benzerliği gösteren tipik kistik morfolojiyi aynı kültür koşullarında göstermektedir. H&E boyama ile yapılan histopatolojik inceleme, PDXO CR2110'un doku yapılarının ve hücre tiplerinin orijinal PDX CR2110 ile benzer olduğunu ortaya koymaktadır.PDX ve PDXO'nun genomik profil karşılaştırmaları transkriptom ekspresyonunun %94,92 korelasyonunu ve DNA mutasyonlarının %97,67'sini göstererek bu model çifti arasında genel bir genomik benzerlik olduğunu göstermektedir. PDXO CR2110'da 384 kuyu plakasında uyuşturucu duyarlılığı tahlilleri yapıldı. PDXO CR2110, PDX tedavi sonuçlarına uygun olarak irinotekan duyarlı ve cisplatine karşı dirençliydi.Eşleşen in vitro ve in vivo modelleri, in vitro tarama ve in vivo doğrulama için birbirlerine iltifat edebilir, ilaç keşfinin başarı oranını iyileştirir ve klinik gelişimde yıpratma oranlarını potansiyel olarak azaltabilir.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

Bir melanom hasta-türetilen xenograft model

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Kanser Araştırmaları

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Mide kanseri hasta-türetilen xenograft modelleri ve primer hücre hatları kurulması

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Testing Targeted Therapies in Cancer using Structural DNA Alteration Analysis and Patient-Derived Xenografts

Yapısal DNA Alterasyon Analizi ve Hasta Kaynaklı Ksenogreftler Kullanılarak Kanserde Hedefli Tedavilerin Test Edilmesi

We present here an integrative approach for testing efficacy of targeted therapies that combines the next generation sequencing technolo-gies, therapeutic ...

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

Hasta Kaynaklı Tümör Organoidleri Kullanılarak Yüksek Verimli In Vitro Tahlil

Patient-derived tumor organoids (PDOs) are expected to be a preclinical cancer model with better reproducibility of disease than traditional cell culture ...

Profiling Sensitivity to Targeted Therapies in EGFR-Mutant NSCLC Patient-Derived Organoids

EGFR-Mutant NSCLC Hasta Kaynaklı Organoidlerde Hedefe Yönelik Tedavilere Duyarlılığın Profillenmesi

Novel 3D cancer organoid cultures derived from clinical patient specimens represent an important model system to evaluate intratumor heterogeneity and ...

Generation and Culturing of High-Grade Serous Ovarian Cancer Patient-Derived Organoids

Yüksek Dereceli Seröz Yumurtalık Kanseri Hasta Kaynaklı Organoidlerin Üretimi ve Kültürlenmesi

Organoids are 3D dynamic tumor models that can be grown successfully from patient-derived ovarian tumor tissue, ascites, or pleural fluid and aid in the ...

Establishment and Culture of Patient-Derived Breast Organoids

Hasta kaynaklı meme organoidlerinin kurulması ve kültürü

Breast cancer is a complex disease that has been classified into several different histological and molecular subtypes. Patient-derived breast tumor ...

Visualizing DNA Damage Repair Proteins in Patient-Derived Ovarian Cancer Organoids via Immunofluorescence Assays

Visualizing DNA Damage Repair Proteins in Patient-Derived Ovarian Cancer Organoids via Immunofluorescence Assays

İmmünofloresan Tahlilleri ile Hasta Kaynaklı Yumurtalık Kanseri Organoidlerinde DNA Hasar Onarım Proteinlerinin Görselleştirilmesi

Immunofluorescence is one of the most widely used techniques to visualize target antigens with high sensitivity and specificity, allowing for the accurate ...

Establishment of Zebrafish Patient-Derived Xenografts from Pancreatic Cancer for Chemosensitivity Testing

Kemosensitivite Testi için Pankreas Kanserinden Zebra Balığı Hasta Kaynaklı Ksenogreftlerin Kurulması

Cancer is one of the main causes of death worldwide, and the incidence of many types of cancer continues to increase. Much progress has been made in terms ...

Ovarian Cancer Patient-Derived Organoid Models for Pre-Clinical Drug Testing

Klinik Öncesi İlaç Testi için Yumurtalık Kanseri Hasta Kaynaklı Organoid Modeller

Ovarian cancer is a fatal gynecologic cancer and the fifth leading cause of cancer death among women in the United States. Developing new drug treatments ...