Name: a cell culture model for studying the role of neuron-glia interactions in ischemia
Uploaded: 2020-11-14T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Cell Culture Model for Studying the Role of Neuron-Glia Interactions in Ischemia at JoVE.com

Los autores reconocen el apoyo de financiación de la Fundación para la Ciencias y la Tecnología a través de los Proyectos UIDB/00709/2020, POCI-01-0145-FEDER-029311 y la beca SFRH/BD/135936/2018 a JP, por ''Programa Operacional do Centro, Centro 2020" a través del proyecto CENTRO-01-0145-FEDER-000013 y financiación a la Plataforma PPBI-Portugués de BioImaging a través del Proyecto POCI-01-0145-FEDER-022122.

Todos los animales utilizados fueron criados en el Centro de Investigación Científica de la Salud CICS-UBI de acuerdo con los requisitos éticos nacionales para la investigación animal y con el Convenio Europeo para la Protección de los Animales Vertebrados utilizados para fines experimentales y otros fines científicos (Directiva 2010/63/UE).
1. Cultivo de la corteza primaria de la corteza de embriones de rata
<ol><li>Preparación de medios culturales<ol>
<li>Preparar el medio neurobasa...

<ol>
	<li>Donkor, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke+in+the+21(st)+Century:+A+Snapshot+of+the+Burden,+Epidemiology,+and+Quality+of+Life.">Stroke in the 21(st) Century: A Snapshot of the Burden, Epidemiology, and Quality of Life.</a> Stroke Research and Treatment. 2018, 3238165 (2018).</li><li>Dirnagl, U., Iadecola, C., Moskowitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathobiology+of+ischaemic+stroke:+an+integrated+view.">Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view.</a> Trends in Neurosciences. 22 (9), 391-397 (1999).</li><li>Woodruff, T. 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K., Abbruscato, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+model+of+ischemic+stroke.">An in vitro model of ischemic stroke.</a> Methods in Molecular Biology. 814, 451-466 (2012).</li><li>Holloway, P. M., Gavins, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+Ischemic+Stroke+In+Vitro:+Status+Quo+and+Future+Perspectives.">Modeling Ischemic Stroke In Vitro: Status Quo and Future Perspectives.</a> Stroke. 47 (2), 561-569 (2016).</li><li>Rossi, D. J., Brady, J. D., Mohr, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte+metabolism+and+signaling+during+brain+ischemia.">Astrocyte metabolism and signaling during brain ischemia.</a> Nature Neuroscience. 10 (11), 1377-1386 (2007).</li></ol>

El método aquí descrito consiste en el aislamiento de astrocitos y neuronas del tejido cortical embrionario de rata, permitiendo el establecimiento de cultivos enriquecidos con neuronas o astrocitos o cultivos de neurona-glia. Fue adaptado de un estudio previo de nuestro grupo5,donde se describió el aislamiento de las neuronas corticales-glia y los cultivos embrionarios enriquecidos con neuronas y se caracterizaron los dos cultivos. Usando estas culturas, Roque et al. encontraron que los astroc...

Según datos de la Organización Mundial de la Salud, alrededor de 5,5 millones de personas mueren cada año a causa del accidente cerebrovascular isquémico1. Esta condición se caracteriza por la interrupción del flujo sanguíneo a una determinada región cerebral, lo que resulta en una pérdida reversible o irreversible en el suministro de oxígeno y nutrientes al tejido, que altera la función tisular y conduce a la disfunción mitocondrial, desregulación del calcio, excitotoxicidad glutamato, inflamación y pérdida celular2,,3.
Aparte de las células vasculares, las células neuronales y gliales están involucradas en la fisiopatología del accidente cerebrovascular isquémico4. En particular, los astrocitos son esenciales para el mantenimiento de las neuronas y recientemente se demostró que desempeñan un papel crítico en la respuesta a la lesión isquémica5. Este tipo de célula glial realiza funciones de soporte estructural, defensa contra el estrés oxidativo, síntesis de neurotransmisores, estabilización de la comunicación célula-célula, entre otros6. Junto con las neuronas, los astrocitos juegan un papel directo en la transmisión sináptica, regulando la liberación de moléculas como el trifosfato de adenosina, el ácido gamma-aminobutírico y el glutamato7. Parte de la lesión inducida por la isquemia es causada por la liberación excesiva de glutamato y su acumulación en la hendidura sináptica, lo que conduce a la desactivación excesiva de los receptores de N-metil-D-aspartato, activando cascadas de señalización aguas abajo, resultando en última instancia en excitotoxicidad8. Dado que los astrocitos son capaces de eliminar el glutamato de la hendidura sináptica y convertirlo en glutamina, son cruciales en la defensa contra la excitotoxicidad, ejerciendo así un efecto neuroprotector sobre la isquemia. Estas células también juegan un papel en la neuroinflamación inducida por isquemia. Después del insulto isquémico, los astrocitos activados sufren cambios morfológicos (hipertrofia), proliferan y muestran un aumento en la expresión de la proteína ácida fibribrinaria glial (GFAP). Pueden volverse reactivas (astrogliosis), liberando citoquinas proinflamatorias como el factor de necrosis tumoral-α, interleucina-1 e interleucina-1o, y produciendo radicales libres, incluyendo óxido nítrico y superóxido, que a su vez pueden inducir la muerte neuronal9,,10. Por el contrario, los astrocitos reactivos también pueden reproducir un efecto neuroprotector, ya que liberan citoquinas antiinflamatorias, como la transformación del factor de crecimiento β, que se regula al al al ras detrás del accidentecerebrovascular 11. Además, pueden generar una cicatriz glial, que puede limitar la regeneración tisular mediante la inhibición de la brotación axonal; sin embargo, esta cicatriz glial puede aislar el sitio de la lesión del tejido viable, evitando así una onda en cascada de daño tisular incontrolado12,13.
Por lo tanto, es imperativo establecer modelos que permitan estudiar las interacciones de la neurona-glia bajo una lesión isquémica con el fin de encontrar estrategias terapéuticas que limiten o reviertan los efectos de la lesión isquémica. En comparación con otros modelos utilizados para estudiar lesiones isquémicas, a saber, los modelos in vivo 14,15,16, cultivos organotípicos17,18,19 y rebanadas cerebrales agudas20,21,22, cultivos de células primarias son menos complejos, lo que hace posible el estudio de las contribuciones individuales de cada tipo de célula en la fisiopatología de los accidentes cerebrovasculares isquémicos y cómo cada tipo de célula responde posible a las metas terapéuticas posibles. Típicamente, con el fin de estudiar las interacciones entre cultivos enriquecidos con neuronas y cultivos enriquecidos con astrocitos, las neuronas y células gliales de origen posnatal se utilizan23,,24, o células gliales postnatales y neuronas embrionarias25,,26. Aquí se propone un enfoque simple para establecer cultivos enriquecidos con neuronas o astrocitos y cultivos de neurona-glia del mismo tejido. Estas células primarias se obtienen de corteza embrionaria de rata, una región frecuentemente afectada por el accidente cerebrovascular27,,28. Además, la disociación del tejido se realiza sólo mediante un procedimiento mecánico. Por lo tanto, este protocolo permite aislar las células en la misma etapa de desarrollo, de una manera rápida y económica, y con alto rendimiento y reproducibilidad.
La conversación cruzada entre astrocitos y neuronas se puede explorar utilizando un sistema de co-cultivo en el que las neuronas cultivadas en cubreobjetos se mantienen en contacto con una monocapa de astrocitos sembrados en placas multipocillos. Se pueden utilizar pequeñas esferas de parafina para garantizar la separación de los dos cultivos celulares. Este enfoque permite la manipulación independiente de cada tipo de celda antes de que se entren en contacto. Por ejemplo, es posible silenciar un gen específico en los astrocitos y ver cómo puede influir en la vulnerabilidad neuronal o la protección contra el daño inducido por isquémica. Un método establecido para inducir condiciones isquémicas in vitro es la privación de oxígeno y glucosa (OGD)3, que consiste en reemplazar la atmósfera regular (95% aire y 5% CO2)por una atmósfera anóxica (95% N2 y 5% CO2), asociada con la omisión de glucosa.
El método descrito es adecuado para estudiar las interacciones entre neuronas y astrocitos en el contexto del accidente cerebrovascular isquémico, de una manera simple, rápida, reproducible y económica.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 -well culture plates</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>142475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% N2/5% CO2 gas cylinder</td>
			<td>ArL&#237;quido</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse conjugated to Alexa Fluor 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11001</td>
			<td>1/1000 dilution; incubation period - 1 h at room temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit conjugated to Alexa Fluor 546</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11010</td>
			<td>1/1000 dilution; incubation period - 1 h at room temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement (50x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako Fluorescence Mounting Medium</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose anhydrous</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>G/0450/60</td>
			<td>3.4 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epifluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>AxioObserver Z1x</td>
			<td>63x objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>S0615</td>
			<td>10%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G1272</td>
			<td>120 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8415</td>
			<td>25&#181;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G3126</td>
			<td>0.5 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>H1399</td>
			<td>2 &#181;M; incubation period - 10 min at room temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypoxia incubation chamber</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>27310</td>
			<td>Chamber used for OGD induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I5500</td>
			<td>5 mg/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>K-002</td>
			<td>87.5 mg/Kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minimum Essential Medium Eagle medium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0268</td>
			<td>warm up to 37 &#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Anti-MAP2</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>Sc-74421</td>
			<td>1/500 dilution; incubation period overnight at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103-049</td>
			<td>warm up to 37 &#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin pastilles for histology</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1.07164</td>
			<td>Solidification point 56-58&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma -Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td>4% in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin/Streptomycin</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>A 2213</td>
			<td>penicillin (12U/mL) /streptomycin (12&#181;g/mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-D-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Anti-GFAP</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>Z0334</td>
			<td>1/2000 dilution; incubation period overnight at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydrogen carbonate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/4240/60</td>
			<td>2.2g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X1126</td>
			<td>12 mg/Kg</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a cell culture model for studying the role of neuron-glia interactions in ischemia

El accidente cerebrovascular isquémico es una condición clínica caracterizada por hipoperfusión del tejido cerebral, que conduce a la privación de oxígeno y glucosa, y la consiguiente pérdida neuronal. Numerosas pruebas sugieren que la interacción entre las células gliales y neuronales ejerce efectos beneficiosos después de un evento isquémico. Por lo tanto, para explorar posibles mecanismos de protección, es importante desarrollar modelos que permitan estudiar las interacciones neurona-glia en un entorno isquémico. Aquí presentamos un enfoque sencillo para aislar astrocitos y neuronas de la corteza embrionaria de ratas, y que mediante el uso de medios de cultivo específicos, permite el establecimiento de cultivos enriquecidos con neuronas o astrocitos o cultivos de neurona-glia con alto rendimiento y reproducibilidad.
Para estudiar la conversación cruzada entre astrocitos y neuronas, proponemos un enfoque basado en un sistema de co-cultivo en el que las neuronas cultivadas en cubrelips se mantienen en contacto con una monocapa de astrocitos chapadas en placas multipocillos. Las dos culturas se mantienen separadas por pequeñas esferas de parafina. Este enfoque permite la manipulación independiente y la aplicación de tratamientos específicos a cada tipo de célula, lo que representa una ventaja en muchos estudios.
Para simular lo que ocurre durante un accidente cerebrovascular isquémico, los cultivos se someten a un protocolo de privación de oxígeno y glucosa. Este protocolo representa una herramienta útil para estudiar el papel de las interacciones neurona-glia en el accidente cerebrovascular isquémico.

Para caracterizar los cultivos, la inmunocitoquímica para evaluar el número de células que expresaron GFAP o MAP2, se realizaron marcadores ampliamente utilizados de astrocitos y neuronas (Figura 2), en cada tipo de cultivo cortical. Este análisis reveló que los cultivos enriquecidos con astrocitos presentaban el 97% de las células que expresaban GFAP (Figura 2A). En cuanto al cultivo enriquecido con neuronas, el 78% de las células expresaron MAP2, el 4% ...

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A Cell Culture Model for Studying the Role of Neuron-Glia Interactions in Ischemia

Aquí, presentamos un enfoque simple utilizando medios de cultivo específicos que permiten el establecimiento de culturas enriquecidas con neuronas y astrocitos, o cultivos de neurona-glia de la corteza embrionaria, con alto rendimiento y reproducibilidad.

Un modelo de cultivo celular para estudiar el papel de las interacciones de neuronas y glia en isquemia

Ischemic stroke is a clinical condition characterized by hypoperfusion of brain tissue, leading to oxygen and glucose deprivation, and the consequent ...

El accidente cerebrovascular isquémico es una condición clínica caracterizada por hipoperfusión del tejido cerebral y resulta en pérdida neuronal. Numerosas evidencias sugieren que la interacción entre la glia y las células urinarias ejerce los efectos de presión después de un evento isquémico. Con el fin de explorar posibles mecanismos de protección, es importante desarrollar modelos que permitan estudiar las interacciones neurona-glia en un entorno isquémico.Aquí presentamos un enfoque sencillo para aislar astrocitos y neuronas de la corteza embrionaria de rata, y que mediante el uso de un medio cultural específico permite el establecimiento de culturas neurona o enriquecidas con astrocitos o cultivos neo-glia con alto rendimiento y reproducibilidad. Para estudiar la conversación cruzada entre astrocitos y neuronas, proponemos un enfoque, basado en un sistema de co-cultivo, en el que las neuronas cultivadas en los resbalones de cubierta se mantienen en contacto con una monocapa de astrocitos chapadas en placas multi-pozo. Las dos culturas son mantenidas una parte por pequeñas esferas de parafina.Este enfoque permite la manipulación independiente y la aplicación de un tratamiento específico a cada tipo de célula, lo que representa una ventaja en muchos estudios. Para simular lo que ocurre durante un accidente cerebrovascular isquémico, los cultivos se someten a un protocolo de privación de oxígeno y glucosa. Este protocolo representa una herramienta útil para estudiar el papel de las interacciones neurona-glia en el accidente cerebrovascular isquémico.Comience con aislamiento de corteza embrionaria de rata. Los embriones se obtuvieron de una familia de ratas a los 15 días de gestación y se colocan en un tubo estéril De Falcon que contiene PBS. Todavía dentro de los embriones de yema se colocan dentro de un plato de petri que contiene PBS frío.Con la ayuda de tijeras y pinzas, el saco de yema se rompe, y el embrión se retira y se coloca en otro plato de petri que contiene PBS frío sobre una bolsa de hielo. Es necesario tener mucho cuidado al romper el saco de yema para no dañar el embrión. Coloque el embrión bajo un microscopio diseccionador, fije suavemente el embrión usando un twizzer.La incisión inicial debe ser paralela a la corteza. Tenga cuidado de no decapitar al animal. El cuero cabelludo y se retiran cuidadosamente para no dañar el tejido cerebral cortical.Esta siguiente incisión separa la corteza. Retire los vasos sanguíneos presentes en el tejido. Por último, con una pipeta, transfiera el tejido cortical a un tubo Falcon con PBS.La suspensión de una sola célula se obtiene a través de la digestión mecánica del tejido cerebral cortical utilizando puntas con diámetro decreciente. Asegúrese de que el tejido esté bien homogeneizado Después de la digestión, centrifugar el material a 400 Gs durante tres minutos. Desechar el sobrenadante, y resuspender el sedimento en medio de cultivo, previamente calentado a 37 grados.Calcular el número total de células presentes en la suspensión utilizando una cámara Neubauer y preparar la dilución para la densidad celular adecuada. Finalmente, sembrar las células en el multi-pozo e incubar a 37 grados. Para preparar el material para el sistema de cultivo conjunta, calentar la parafina en un bloque de calentamiento hasta que se vuelva líquido.Luego, con la ayuda de una pipeta Pasteur de vidrio estéreo, prepara pequeñas esferas sobre los resbalones de la cubierta que anteriormente se colocaban en un pozo múltiple, y recubiertas con Poli-D-Lisina. 24 horas antes de que las dos culturas entren en contacto, cambie el medio de cultivo de las neuronas y astrocitos para complementarlo NBM con o sin calor inactivado FBS. Cuando los dos cultivos estén listos para usar, transfiera la neurona, sentada en los resbalones de cubierta con esferas de parafina a pozos que contienen astrocitos usando una pinza previamente sumergida en 70%etanol.Después de colocar ambos tipos de células en contacto, espere de ocho a 12 horas y, a continuación, inicie los diferentes estímulos y procedimientos. La privación de oxígeno y glucosa se realiza en un cultivo con siete días de crecimiento. Retire el medio de cultivo y lave las células dos veces con el medio HBSS sin suplementos de glucosa.Asegúrese de que todo el medio que contiene glucosa está lavado. Selle la Cámara de Hipoxia y añada la mezcla de gas que contiene 95% de nitrógeno y 5% de dióxido de carbono durante cuatro minutos con un flujo de 20 litros durante minutos para reemplazar el oxígeno presente en el interior de la cámara. Luego, detenga el flujo y coloque la Cámara de Hipoxia en una incubadora a 37 grados.Después del período de privación de oxígeno y glucosa, reemplace el medio, HBSS sin suplementos de glucosa con el medio de cultivo adecuado para los procedimientos restantes e incubar las células a 37 grados. Con el fin de caracterizar el tipo de cultivo cortical, realizamos inmunohistoquímica en los tres tipos de cultivos corticales para evaluar el número de células que expresaron GFPA o MAP2, que son marcadores ampliamente utilizados para células astrocíticas y neuronales respectivamente. Este análisis reveló que cuando este protocolo, pudimos obtener un cultivo enriquecido puro de astrocitos con alrededor del 97% de las células que expresaban GFAP.En cuanto al cultivo enriquecido con neuronas, verificamos alrededor del 78% de las células que expresan MAP2. Sin embargo, identificamos alrededor del 18% de las células negativas GFAP y MAP2. Para el cultivo cortical neurona-glia, Se observó que alrededor del 49% de las células son MAP2 positivo.31%son GFAP positivos. Y el 20% no son responsables de GFAP ni MAP2. Siete días después del establecimiento de cultivos corticales, el cultivo de la neurona-glia y el cultivo enriquecido con neuronas fueron sometidos a un procedimiento OGD durante 4 y 6 horas.Después de este procedimiento, las células fueron etiquetadas con MAP2 y luego el número de células positivas MAP2 se cuantificaron mediante microscopía de fluorescencia. En el cultivo de neurona-glia, se observó una disminución de aproximadamente 30%en el número de las neuronas, cuando el cultivo fue sometido a un período OGD de 4 horas. Después de un período OGD de 6 horas, la extensión de la lesión aumenta, alcanzando alrededor del 60% de la pérdida neuronal.En cuanto al cultivo enriquecido de las neuronas expuestas a OGD, se observó alrededor de 41%y 64%disminución en el número de células MAP2. Por otra parte, se observó que en el cultivo enriquecido con neuronas, hubo un ligero aumento en la extensión de la lesión en comparación con el cultivo de la neurona-glia también expuesto a OGD durante 4 horas. En conclusión, aquí se representa un modelo in vitro para estudiar el accidente cerebrovascular isquémico establecido de una manera simple, rápida, rápida y costosa y reproducible.Además, el método descrito también permite implementar neuronas y cultivos primarios enriquecidos con astrocitos, pero también un cultivo de neurona-glia. Por lo tanto, proporcionando un gran modelo in vitro para modelar varias enfermedades cerebrales con un mayor nivel de complejidad, que las líneas celulares inmortalizadas y los cultivos neuronales o gliales puros.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

Un procedimiento para el estudio de la reposición de estímulo eléctrico plantar inducido por la cocaína Buscando en ratas de laboratorio

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

Investigación

Neurociencias

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Aislamiento y cultivo de células de la cresta neural de embriones murinos del Tubo Neural

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Dos registros electrofisiológicos de sinápticamente respuestas evocadas neuronal y astroglial en agudas rodajas de hipocampo

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Métodos para el estudio de los mecanismos de acción de los fármacos antipsicóticos en<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is a simple genetic organism amenable to  large-scale forward and reverse genetic screens and chemical genetic screens. The C.  ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

La inducción de la plasticidad de astrocítico Receptores por manipulación de Neuronales cocción Precios

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Mouse Adulto Preparación músculo-nervio para estudiar las propiedades de cocción de los aferentes musculares

Muscle sensory neurons innervating muscle spindles and Golgi tendon organs encode length and force changes essential to proprioception. Additional ...

Live Imaging of Nicotine Induced Calcium Signaling and Neurotransmitter Release Along Ventral Hippocampal Axons

Imágenes en vivo de nicotina señalización de calcio inducido y neurotransmisor lanzamiento Junto ventrales hipocampo axones

Sustained enhancement of axonal signaling and increased neurotransmitter release by the activation of pre-synaptic nicotinic acetylcholine receptors ...

Utilizing Combined Methodologies to Define the Role of Plasma Membrane Delivery During Axon Branching and Neuronal Morphogenesis

Utilizando metodologías combinadas para definir el papel de la membrana plasmática de entrega Durante Axon ramas y morfogénesis neuronal

During neural development, growing axons extend to multiple synaptic partners by elaborating axonal branches. Axon branching is promoted by extracellular ...

The Indirect Neuron-astrocyte Coculture Assay: An In Vitro Set-up for the Detailed Investigation of Neuron-glia Interactions

The Indirect Neuron-astrocyte Coculture Assay: An In Vitro Set-up for the Detailed Investigation of Neuron-glia Interactions

La indirecta neurona-astrocito Coculture Ensayo: Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Puesta en marcha de la investigación detallada de las interacciones neurona-glía

Proper neuronal development and function is the prerequisite of the developing and the adult brain. However, the mechanisms underlying the highly ...

The Optical Fractionator Technique to Estimate Cell Numbers in a Rat Model of Electroconvulsive Therapy

La técnica del fraccionador óptico para estimar los números de células en un modelo de rata de terapia electroconvulsiva

Stereological methods are designed to describe quantitative parameters without making assumptions about size, shape, orientation and distribution of cells ...