Name: rna blot analysis for the detection and quantification of plant micrornas
Uploaded: 2020-07-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about RNA Blot Analysis for the Detection and Quantification of Plant MicroRNAs at JoVE.com

Авторы признают доступ к радиационной лаборатории, предоставленной принимающим институтом и BRIT для радиоизотопа. Лаборатория ПВС поддерживается Национальным центром биологических наук, Институтом фундаментальных исследований и грантов Тата (BT/PR12394/AGIII/103/891/2014; BT/IN/Swiss/47/JGK/2018-19; BT/PR25767/GET/119/151/2017) от Департамента биотехнологии, правительство Индии. Депутат признает DBT-исследования ассоциированных, DBT, правительство Индии.

1. Приготовление 15% денатурированного полиакриламида гель
<ol><li>Взвешивать и добавлять 4,8 г мочевины, добавить 3,75 мл 40% акриламида: бисакриламид (19:1) раствор и 1 mL 10x TBE pH 8.2 в стерильную трубку 50 мл.</li>
	<li>Растворите мочевину с помощью водяной ванны, установленной при 60 градусов по Цельсию, в ?...

<ol>
	<li>Baulcombe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+silencing+in+plants.">RNA silencing in plants.</a> Nature. 431, 356-363 (2004).</li><li>Anushree, N., Shivaprasad, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Plant+miRNA+Biogenesis.">Regulation of Plant miRNA Biogenesis.</a> Proceedings of the Indian National Science Academy. 95, (2017).</li><li>Narjala, A., Nair, A., Tirumalai, V., Hari Sundar, G. V., Shivaprasad, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conserved+sequence+signature+is+essential+for+robust+plant+miRNA+biogenesis.">A conserved sequence signature is essential for robust plant miRNA biogenesis.</a> Nucleic Acids Research. , (2020).</li><li>Chen, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=22-Nucleotide+RNAs+trigger+secondary+siRNA+biogenesis+in+plants.">22-Nucleotide RNAs trigger secondary siRNA biogenesis in plants.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107, 15269-15274 (2010).</li><li>Shivaprasad, P. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microRNA+superfamily+regulates+nucleotide+binding+site-leucine-rich+repeats+and+other+mRNAs.">A microRNA superfamily regulates nucleotide binding site-leucine-rich repeats and other mRNAs.</a> Plant Cell. 24, 859-874 (2012).</li><li>Shivaprasad, P. V., Dunn, R. M., Santos, B. A., Bassett, A., Baulcombe, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraordinary+transgressive+phenotypes+of+hybrid+tomato+are+influenced+by+epigenetics+and+small+silencing+RNAs.">Extraordinary transgressive phenotypes of hybrid tomato are influenced by epigenetics and small silencing RNAs.</a> The EMBO Journal. 31, 257-266 (2012).</li><li>Akbergenov, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+geminivirus-derived+small+RNAs+in+different+plant+species.">Molecular characterization of geminivirus-derived small RNAs in different plant species.</a> Nucleic Acids Research. 34, 462-471 (2006).</li><li>Tirumalai, V., Swetha, C., Nair, A., Pandit, A., Shivaprasad, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR828+and+miR858+regulate+VvMYB114+to+promote+anthocyanin+and+flavonol+accumulation+in+grapes.">miR828 and miR858 regulate VvMYB114 to promote anthocyanin and flavonol accumulation in grapes.</a> Journal of Experimental Botany. , (2019).</li><li>Li, C., Zamore, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Small+RNAs+by+Northern+Hybridization.">Analysis of Small RNAs by Northern Hybridization.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (8), (2018).</li><li>Swetha, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Major+domestication-related+phenotypes+in+indica+rice+are+due+to+loss+of+miRNA-mediated+laccase+silencing.">Major domestication-related phenotypes in indica rice are due to loss of miRNA-mediated laccase silencing.</a> The Plant Cell. , (2018).</li></ol>

Этот метод может широко использоваться для обнаружения и количественной оценки малых РНК, включая менее обильные миРНК. Протокол в основном описывает шаги для денатурации общей РНК в погрузочном буфере, разделение размера гелевым электрофорезом, перенос РНК к мембране, перекрестная с...

Недавнее открытие небольших регуляторных РНК, микроРНК, привело исследования в понимании их и их роль в растениях и животных1. Длинные прекурсоры miRNAs обрабатываются в 21 до 24 nt зрелых miRNAs HYL1 и конкретных dicer-как белки2,3. 22 nt miRNA может инициировать каскадное заглушение, генерируя вторичные siRNAs4. Исследования показали роль miRNAs и вторичных siRNAs в развитии, судьба клеток и стресс ответы5,6.
Северная гибридизация является экспериментальным методом, обычно используемым для обнаружения конкретных молекул РНК. Этот метод настраивает его использование в обнаружении примерно 19 -24 nt длинных малых РНК из пула общего RNAs7. В этой демонстрации мы иллюстрируем использование этого метода для обнаружения и количественной оценки миРНК. Этот метод использует маркировку зондов с использованием радиоизотопов; таким образом, уровни миРНК в образце могут быть обнаружены с повышенной чувствительностью. В отличие от методов на основе ПЦР, этот метод обеспечивает количественную оценку экспрессии, а также определение размера miRNAs. В этом протоколе мы показываем важные шаги, которые улучшают обнаружение miRNA. Мы модифицировали шаги в blotting и гибридизации для получения высокого разрешения обнаружения сигнала miRNAs. Этот метод также может быть использован для обнаружения других эндогенных малых РНК, таких как siRNAs, tasi-вторичных РНК и snoRNAs.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>40% Acrylamide-bisacrylamide solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium persulphate (APS)</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1610700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blotting paper</td>
			<td>whatmann blotting paper I</td>
			<td>1001-125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B5525-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capillary loading tips</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>2239915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized formamide</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>AM9342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating block</td>
			<td>Eppendorff</td>
			<td>5350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybond N+nylon membrane</td>
			<td>GE</td>
			<td>RPN203B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization bottle</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z374792-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Oven</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1211V79</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N,N&#8217;,N&#8217;-Tetramethylethylenediamine (TEMED)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T7024-25ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhosphorImager</td>
			<td>GE- Typhoon scanner</td>
			<td>29187194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhosphorImager screen and cassette</td>
			<td>GE healthcare</td>
			<td>GE28-9564-75</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Gilson, models: P20 and P10</td>
			<td>FA10002M, FA10003M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic pipette</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>357550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyacrylamide gel apparatus</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1658003EDU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sephadex G-25 column</td>
			<td>GE healthcare</td>
			<td>27532501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Speed Vac Concentrator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>20-548-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinwin</td>
			<td>Tarsons</td>
			<td>1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 Polynucleotide Kinase (PNK)</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0201S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transblot apparatus</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1703946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ULTRAHyb hybridization buffer</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>AM8670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urea</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>15985</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-crosslinker</td>
			<td>UVP</td>
			<td>CL-1000L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>Tarsons</td>
			<td>3020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>NEOLAB</td>
			<td>D-8810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene cyanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X4126-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rna blot analysis for the detection and quantification of plant micrornas

МикроРНК (miRNAs) являются классом эндогенно выраженных некодирующих, 21 nt малых РНК, участвующих в регуляции экспрессии генов как у растений, так и у животных. Большинство миРНК действуют как отрицательные переключатели экспрессии генов, нацеленные на ключевые гены. В растениях первичные миРНК (pri-miRNAs) транскрипты генерируются РНК-полимеразой II, и они образуют различную длину стабильных структур стволовых циклов, называемых премиРНА. Эндонуклеазы, Dicer-like1, обрабатывает премиРНК в дуплексы миРН-миРНАЗ. Одна из нитей из дуплекса miRNA-miRNA выбирается и загружается на белок Argonaute 1 или его омологи, чтобы остеклеть расщепление мРНК. Хотя миРНК являются ключевыми сигнальными молекулами, их обнаружение часто осуществляется менее оптимальными методами на основе ПЦР вместо чувствительного северного анализа помарки. Мы описываем простой, надежный и чрезвычайно чувствительный северный метод, который идеально подходит для количественной оценки уровней миРНК с очень высокой чувствительностью, буквально из любой ткани растений. Кроме того, этот метод может быть использован для подтверждения размера, стабильности и обилия miRNAs и их предшественников.

В этой демонстрации, мы обнаружили и количественно выражение miR397 в различных тканях риса Indica var whiteponni (Рисунок 1). miR397 является 22 nt miRNA и сохраненной миРНК. Выражение miR397 можно обнаружить во всех проверенных образцах. Согласно данным секвенирования следующего по?...

Watch this Scientific Journal Video about RNA Blot Analysis for the Detection and Quantification of Plant MicroRNAs at JoVE.com

RNA Blot Analysis for the Detection and Quantification of Plant MicroRNAs

Этот метод демонстрирует использование метода северной гибридизации для обнаружения miRNAs от общего экстракта РНК.

Анализ РНК-блотов для обнаружения и количественной оценки микроРНК растений

MicroRNAs (miRNAs) are a class of endogenously expressed non-coding, ~21 nt small RNAs involved in the regulation of gene expression in both plants and ...

Привет. Так что это небольшой РНК северного протокола. Это производная протокола, первоначально оптимизированного доктором Рашидом Акбергеновым.В этом методе, можно обнаружить небольшие РНК в любом месте между 20-24 нуклеотидов в длину, очень точно и с очень высоким разрешением. Протокол в основном модифицированная форма традиционного северного анализа, но здесь процент акриламида довольно высок, это 15 процентов. Этот север может быть использован для обнаружения уже известных малых РНК, либо микро РНК или другой набор малых РНК, когда последовательность известна или она может быть использована для подтверждения обилия небольшой РНК из следующего поколения секвенирования наборов данных.Преимущество этого метода заключается в том, что можно не только посмотреть на изобилие микро РНК, но и обилие прекурсоров, например микро РНК может оставить предшественник, который составляет около 30 может быть несколько сотен нуклеотидов долго, это также может быть обнаружено одновременно, наряду с микро РНК. Протокол очень прост, очень прямо вперед, но нужно быть очень осторожным при выполнении некоторых критических шагов, которые перечислены в конце этого протокола. Для приготовления смеси геля 10 мл добавьте 4,8 грамма мочевины, 3,75 мл раствора 40%акриламида и 1 мл свежеприготовленного 10X TBE, pH 8.2 и аккуратно перемешайте раствор.Растворите мочевину полностью, нагревая смесь на водяной бане, пока раствор не будет вы выясок. Составить объем до 10 мл, используя стерильную воду Милли и охладить гель смесь до комнатной температуры. Вымойте необходимый аппарат с моющим средством, скраб их осторожно, чтобы удалить остаточные TBE и акриламид.Далее промойте их водой Милли и дайте ей высохнуть. Соберите стеклянную пластину вместе, убедитесь, что оба находятся на одном уровне. Поместите их твердо на губку.Добавьте 8 микролитров TEMED и 80 микролитров 10% свежеприготовленного APS в гель-микс. Аккуратно перемешать и залить гель смесью для собранных пластин. Убедитесь, что гель не протекает.Поместите гребень осторожно. Дайте гелю полимеризуться в течение примерно 45 минут. После полимеризации геля снимите стеклянные пластины со сборки.Вымойте стеклянные тарелки водой Милли. И поместите их в бегущую кассету. Поместите бегущую кассету внутрь бака.Налейте свежеприготовленный 1X TBE, рН 8.2. Снимите гребень осторожно. Вымойте колодцы геля тщательно путем трубопроводов буфера.Этот шаг удаляет осадки мочевины из хорошо и облегчает РНК для запуска равномерно через гель. Закройте крышку аппарата и предварительно запустите пустой гель на 80 вольт в течение 30 минут, чтобы проверить наличие утечки буфера. Для приготовления 10 мл погрузочного красителя, взвесить 5 мг бромофенола синего, 5 мг ксилена цианола и добавить 10 мл дейоинизированного формамида и хорошо перемешать.Aliquot красителя и хранить на 4 градуса для дальнейшего использования. Aliquot 10 микрограмм общей РНК в стерильные 1,5 мл труб. Убедитесь, что качество РНК, т.е.соотношение 260:230 больше или ближе к двум. Поместите трубку внутри speedVac и вакуум высушите образцы. Повторно приостанавливать высушенные образцы РНК в 8 микролитров погрузочного красителя.Нагрейте образцы при температуре 98 градусов в течение двух минут. Охладить их в течение одной минуты при комнатной температуре. Vortex охлажденных образцов РНК для обеспечения надлежащей повторной подвески в погрузке красителя.Вращай трубки. Повторите шаги нагрева, охлаждения и вихря в течение трех раз для получения свободного течет РНК. Остановите предварительный запуск геля.Тщательно промыть скважины, перед загрузкой образца, чтобы удалить отложения мочевины внутри скважин. Нагрейте повторно приостановленные образцы РНК при температуре 98 градусов в течение одной минуты. Загрузите образцы горячими в скважины с помощью капиллярных наконечников.Избегайте введения пузырьков воздуха. Полная загрузка всех образцов и сборка крышки. Запустите гель на 80 вольт в течение трех часов или до бромофено синий работает полностью.Используйте положительно заряженную нейлоновую мембрану для переноса. Вырежьте его до размеров стеклянной пластины. Наклеить этикетку на мембрану в правом верхнем углу.Аккуратно поместите мембрану на поверхность стерильной воды Milli' убедитесь, что место этикетки стороне вниз, лицом к поверхности воды. Возьмите чистый лоток и подготовить гель бутерброд для электро-передачи. Поместите серую сторону кассеты вниз.Налейте 1X TBE немного выше уровня кассеты. Предварительно промокнуть волоконную прокладку в 1X TBE и сжать его, чтобы удалить пузырьки воздуха. Вырезать два куска бумаги blotting размером с волокна колодки.Предварительно мокрый кусок бумаги в 1X TBE и поместите его на волоконную прокладку. Удалите пузырьки воздуха, прокатки пластиковой пипетки над бумагой. Предварительно мокрый еще один кусок бумаги в 1X TBE и положить его на кассету.Переверните, чтобы удалить пузырьки воздуха. Теперь установка сэндвича готова к электро-передаче. После завершения электрофорез, остановить запуск и снять крышку с аппарата.Удалите бегущую кассету из установки. Вынул стеклянные пластины из бегущей кассеты. Аккуратно удалите гель из сборки.Положите его на бумагу, так что первый загруженный образец РНК справа от вас. Аккуратно окуните предварительно пропитанную мембрану в 1X TBE и поместите ее над гелем, лицом к помеченной стороне вниз. Не позволяйте мембране и гелю высохнуть.Аккуратно переверните, чтобы удалить пузырьк воздуха. Опустите один кусок бумаги в 1X TBE и положите его на мембрану. Удалите пузырьки воздуха.Поместите еще один кусок бумаги и удалить пузырьки воздуха. Завершите сэндвич, заложив волоконную прокладку над сборкой. Закройте кассету твердо.Поместите транс-помарку кассеты в модуль. Заполните бак с 1X TBE, рН 8.2, до blotting знака. Закройте крышку аппарата и перенесите на 10 вольт на ночь при 4 градусах или в холодном помещении.Держите УФ крест linker готов и установить его до 1200, незадолго до завершения электро передачи. После завершения передачи снимите кассету с модуля. Поместите влажную мембрану на лист A4, поместив отмеченную сторону вверх.Перекрестная связь РНК с мембраной путем облучения 254 нанометровым ультрафиолетовым светом при 120 миллиджолях. Поперечная помарка может храниться на четырех градусах или использоваться для гибридизации. Дизайн зонда, который является полностью бесплатным для небольшой РНК, которая должна быть обнаружена.Конец этикетки зонда на его пять премьер-конец с помощью фермента PNK и объединить компоненты, как показано на. Инкубировать реакционной смеси при 37 градусах в течение 30 минут. После 30 минут инкубации используйте колонны G-25 для отделяния неописанной зондов от реакционной смеси.Для улучшения маркировки зонда подготовьтесь к колонне G-25 перед использованием. Поместите пятно, РНК стороны лицом вверху, внутри бутылки гибридизации. Энергично смешивайте буфер гибридизации перед использованием.Добавить 10 мл буфера гибридизации внутри и поместить бутылку гибридизации внутри печи гибридизации, поддерживать при 35 градусах с вращением. Выполните предварительную гибридизацию в течение 20-30 минут. После предварительной гибридизации вынюхив бутылку из духовки.Аккуратно добавьте помеченный зонд в буфер гибридизации. Убедитесь, что пузырьки воздуха не создаются. Инкубировать пятно внутри духовки при температуре 35 градусов с вращением в течение 12 часов.После гибридизации удалите буфер гибридизации из бутылки. Выполните быструю стирку помарки, используя буфер для мытья-I. Этот шаг выполняется для удаления избыточного решения гибридизации из пятен.Далее инкубировать пятна при 35 градусах в течение 30 минут с помощью буфера мытья-I. Выполните еще одну стирку с помощью буфера-II при 35 градусах в течение 30 минут. После мытья помарки поместите ее в крышку гибридизации, удалите лишний буфер и запечатав его.Поместите его в кассету и подвергните его свободному от радиации экрану фосфо-изображения в течение 12 часов. Обнаружить сигнал гибридизации с помощью тайфуна биомолекулярного изображения и проанализировать результаты с помощью программного обеспечения ImageJ. Для гибридизации помарки с другими зондами, выполните зачистки шаги, как показано на иллюстрации.С помощью этого метода можно оценить обилие микро РНК, а также его длину. На этом изображении выражение микроРНК 397 может быть обнаружено во всех образцах. В этой помарке, обилие образца одно приблизительно 5 читает в миллион, в соответствии с данными последовательности следующего поколения, предлагая что наша техника может обнаружить более менее обильные микро RNAs слишком.Кроме того, с помощью программного обеспечения для количественной оценки ImageJ можно количественно оценить выражение микро 397 среди образцов. Здесь мы использовали U6 и микро РНК 168 в качестве управления загрузкой. Я буду говорить о некоторых важных шагов, которые должны быть рассмотрены при выполнении эксперимента.Убедитесь в том, чтобы использовать хорошее качество РНК для подготовки образца. В то время как вакуум сушки образцов, избежать более сушки их. Повторное приостановление РНК в погрузочном красителе имеет решающее значение.Убедитесь в том, чтобы подготовить свободный струящийся образец. Необходимо позаботиться о загрузке геля. Скважины геля должны быть вымыты и образец должен быть загружен по прямой линии внутри колодцев.Во время электро переноса, распространения мембраны в воде, перед погружением в 1X TBE имеет важное значение, это улучшает передачу. Гибридизация помарки должна быть выполнена при 35 градусах. Поддерживайте температуру духовки гибридизации.Для повторного использования помарки, мембраны должны храниться при 4 градусах. Они должны быть влажными в 2X SSE. В отличие от других методов, основанных на ПЦР, этот метод обеспечивает количественную оценку выражения, а также определение размера микро РНК.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Isolation of High-density Lipoproteins for Non-coding Small RNA Quantification

Выделение липопротеидов высокой плотности для Некодирующих малых РНК квантификации

The diversity of small non-coding RNAs (sRNA) is rapidly expanding and their roles in biological processes, including gene regulation, are emerging. Most ...

Experimental Design for Laser Microdissection RNA-Seq: Lessons from an Analysis of Maize Leaf Development

Экспериментальный дизайн для лазерных микродиссекция РНК-Seq: уроки из анализа развития листьев кукурузы

Genes with important roles in development frequently have spatially and/or temporally restricted expression patterns. Often these gene transcripts are not ...

An Efficient Method for the Isolation of Highly Purified RNA from Seeds for Use in Quantitative Transcriptome Analysis

Эффективный метод для выделения высокоочищенного РНК из семян для использования в количественном анализе Транскриптом

Plant seeds accumulate large amounts of storage reserves comprising biodegradable organic matter. Humans rely on seed storage reserves for food and as ...

A Simple Fractionated Extraction Method for the Comprehensive Analysis of Metabolites, Lipids, and Proteins from a Single Sample

Простой фракционированный метод экстракции для комплексного анализа метаболитов, липидов и белков из одного образца

Understanding of complex biological systems requires the measurement, analysis and integration of multiple compound classes of the living cell, usually ...

Horizontal Gel Electrophoresis for Enhanced Detection of Protein-RNA Complexes

Горизонтальный гель-электрофорез для расширенного обнаружения комплексов протеин-РНК

Native polyacrylamide gel electrophoresis is a fundamental tool of molecular biology that has been used extensively for the biochemical analysis of ...

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis (QDB)

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis QDB

Высокая пропускная способность, абсолютное определение содержания выбранной белка на уровнях тканей, с использованием количественных Dot блот анализ (QDB)

Lacking a convenient, quantitative, high throughput immunoblot method for absolute determination of the content of a specific protein at cellular and ...

Mouse Adipose Tissue Collection and Processing for RNA Analysis

Мышь жировой ткани сбора и обработки для анализа РНК

Compared to other tissues, white adipose tissue has a considerably less RNA and protein content for downstream applications such as real-time PCR and ...

Toeprinting Analysis of Translation Initiation Complex Formation on Mammalian mRNAs

Toeprinting анализ перевода инициации комплекс формирования на Mammalian mRNAs

Translation initiation is the rate-limiting step of protein synthesis and represents a key point at which cells regulate their protein output. Regulation ...

2 in 1: One-step Affinity Purification for the Parallel Analysis of Protein-Protein and Protein-Metabolite Complexes

2 в 1: один шаг очищение сродства для параллельного анализа протеин протеина и белка метаболит комплексов

Cellular processes are regulated by interactions between biological molecules such as proteins, metabolites, and nucleic acids. While the investigation of ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

Использование в Vitro флуоресценции резонанс передачи энергии для изучения динамики белковых комплексов в масштабе времени миллисекунду

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...