Name: measurement of insulin- and contraction-stimulated glucose uptake in isolated and incubated mature skeletal muscle from mice
Uploaded: 2021-05-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Insulin- and Contraction-Stimulated Glucose Uptake in Isolated and Incubated Mature Skeletal Muscle from Mice at JoVE.com

Dette arbejde er støttet af bevillinger fra Det Frie Forskningsråd - Medicinsk Videnskab (FSS8020-00288B) og Novo Nordisk Fonden (NNF160C0023046). Dette arbejde blev også støttet af en forskningsbevilling til Rasmus Kjøbsted fra Danish Diabetes Academy, som er finansieret af Novo Nordisk Fonden, bevillingsnummer NNF17SA0031406. Forfatterne vil gerne takke Karina Olsen, Betina Bolmgren og Irene Bech Nielsen (Institut for Idræt og Ernæring, Det Natur- og Biovidenskabelige Fakultet, Københavns Universitet) for deres dygtige tekniske bistand.

Forsøg, der involverer forsøgsdyr, bør udføres i overensstemmelse med relevante retningslinjer og lokal lovgivning. Alle dyreforsøg, der blev anvendt til dette forsøg, var i overensstemmelse med den europæiske konvention om beskyttelse af hvirveldyr, der anvendes til forsøg og andre videnskabelige formål, og blev godkendt af Det Danske Dyreforsøgsinspektorat.
1. Forberedelse af forsøgsapparatet og sutursløjferne
BEMÆRK: Til denne undersøgelse skal du bru...

Intakt regulering af glukoseoptagelsen i skeletmuskulaturen er vigtig for at bevare det generelle helbred1. Således tjener undersøgelse af muskelglukoseoptagelse ofte som en primær aflæsning, når man evaluerer forskellige sundhedsændrende interventioner. Her beskriver vi en ex vivo-metode til måling af glukoseoptagelse i isolerede og inkuberede soleus- og EDL-muskler fra mus som reaktion på insulin og elektrisk inducerede sammentrækninger. Metoden er hurtig og pålidelig og muliggør en p...

Skeletmuskulatur besidder evnen til at udtrække store mængder glukose fra det ekstracellulære rum som reaktion på insulin og motion. Dette hjælper med at opretholde glukosehomeostase i hele kroppen og sikrer glukoseforsyningen i tider med høj energiefterspørgsel. Da intakt regulering af skeletmuskulaturens glukoseoptagelse har vist sig at være vigtig for den generelle sundhed og fysiske ydeevne 1,2, har målinger af muskelglukoseoptagelse under forskellige forhold fået stor opmærksomhed. Hos mennesker og dyr er den hyperinsulinæmiske-euglykæmiske klemme blevet anvendt som guldstandardteknik til vurdering af insulinfølsomhed in vivo 3,4. I modsætning til resultater opnået ved en oral glukosetolerancetest kræver den hyperinsulinemiske-euglykæmiske klemmeteknik ikke intakt gastrointestinal funktion eller insulinsekretion fra bugspytkirtlen og gør det således muligt at sammenligne insulinresponser mellem forsøgspersoner, der udviser variationer i mave-tarm- og/eller bugspytkirtelfunktionen. Målinger af muskelglukoseoptagelse in vivo under træning hos mennesker er blevet udført hyppigt siden 1960'erne5. Først ved anvendelse af arteriovenøse balanceteknikker6 og senere ved anvendelse af positronemissionstomografi (PET) billeddannelse i kombination med en positron, der udsender glucoseanalog, f.eks. 18F-Fluor-deoxy-glucose7. Hos gnavere udføres træningsstimuleret muskelglukoseoptagelse in vivo typisk ved anvendelse af radioaktive eller stabile isotopmærkede glucoseanaloger 8,9,10.
En supplerende metode til målinger af muskelglukoseoptagelse in vivo er at isolere og inkubere små muskler fra gnavere og efterfølgende måle glukoseoptagelsen ved hjælp af radioaktive eller stabile isotopmærkede glucoseanaloger 11,12,13. Denne metode muliggør nøjagtig og pålidelig kvantificering af glukoseoptagelseshastigheder i moden skeletmuskel og kan udføres i nærvær af forskellige insulinkoncentrationer og under sammentrækning fremkaldt af elektrisk stimulering. Endnu vigtigere er målinger af glukoseoptagelse i isoleret og inkuberet skeletmuskulatur af relevans, når man undersøger muskelmetabolisk fænotype hos mus, der har gennemgået forskellige interventioner (f.eks. Ernæring, fysisk aktivitet, infektion, terapi). Den isolerede skeletmuskelmodel er også et egnet redskab til test af farmakologiske forbindelser, der kan påvirke glukoseoptagelsen i sig selv og/eller ændre insulinfølsomheden12,14. På denne måde kan effekten af forbindelser, der er designet til at regulere muskelglukosemetabolismen, testes og evalueres i et stærkt kontrolleret miljø inden efterfølgende in vivo-test i prækliniske dyremodeller.
Under visse omstændigheder kan metabolisk levedygtighed udgøre en udfordring i det isolerede og inkuberede skeletmuskelmodelsystem. Manglen på et kredsløbssystem i de inkuberede muskler indebærer faktisk, at levering af substrater (f.eks. Ilt og næringsstoffer) helt afhænger af simpel diffusion mellem muskelfibrene og det omgivende miljø. I den forbindelse er det vigtigt, at de inkuberede muskler er små og tynde og dermed udgør en mindre barriere for iltdiffusion under inkubation15. Især under langvarige inkubationer i flere timer kan hypoxiske tilstande udvikle sig på grund af utilstrækkelig iltforsyning, hvilket resulterer i muskelenergiudtømning15. Selvom forskellige markører for metabolisk levedygtighed i inkuberet rottemuskel tidligere er blevet rapporteret sammen med identifikationen af vigtige variabler, der hjælper med at opretholde rottemuskelens levedygtighed15, er en omfattende evaluering af metabolisk levedygtighed i små inkuberede musemuskler stadig berettiget. Derfor er glykogenindholdet i øjeblikket hovedsageligt blevet anvendt som en markør for metabolisk levedygtighed i inkuberet museskeletmuskel16,17.
Her beskriver vi en detaljeret protokol til måling af basal-, insulin- og sammentrækningsstimuleret glukoseoptagelse i isoleret og inkuberet soleus- og EDL-muskel fra mus ved hjælp af radioaktivt mærket [3H]2-deoxy-D-glucose og [14C]mannitol som en ekstracellulær markør. I den foreliggende undersøgelse blev glukoseoptagelsen målt over en periode på 10 minutter, og metoden præsenteres ved anvendelse af submaksimalt og maksimalt effektive insulinkoncentrationer samt en enkelt sammentrækningsprotokol. Imidlertid kan de protokoller, der er beskrevet heri, let ændres med hensyn til inkubationstid, insulindosering og elektrisk stimuleringsprotokol. Desuden giver vi en grundig karakterisering af forskellige markører for metabolisk levedygtighed i inkuberet soleus og EDL musemuskel. Resultaterne indikerer, at glukosetilskud til inkubationsbufferen er afgørende for at bevare metabolisk levedygtighed af muskler inkuberet i 1 time.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>[14C]D-mannitol</td>
			<td>American Radiolabeled Chemicals, Inc.</td>
			<td>ARC 0127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>[3H]2-deoxy-D-glucose&#160;</td>
			<td>American Radiolabeled Chemicals, Inc.</td>
			<td>ART 0103A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Deoxy-D-glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 USP non-sterile surgical nylon suture</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>51-7698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin/HRP (Conjugate)</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>P0397</td>
			<td>Used to detect ACC protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Akt2 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>3063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMPK&#945;2 antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>SC-19131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>aprotinin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A1153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>benzamidine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B6505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1020831000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration kit (force)</td>
			<td>Danish Myo Technology A/S</td>
			<td>300041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemiluminescence</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>WBLUF0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1084180100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Mannitol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M4125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data collection program</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>LabVIEW software version 7.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing</td>
			<td>Visking</td>
			<td>DTV.12000.09 Size No.9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital imaging system</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>ChemiDoc MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma EDS</td>
			<td>E9884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E4378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical Pulse Stimulator</td>
			<td>Digitimer</td>
			<td>D330 MultiStim System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7637</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IGEPAL CA-630&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I8896</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Novo Nordisk</td>
			<td>Actrapid, 100 IE/mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1049361000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104873025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>leupeptin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1058860500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Muscle Strip Myograph System</td>
			<td>Danish Myo Technology A/S</td>
			<td>Model 820MS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-Orthovanadate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-Pyrophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>221368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-Pyruvate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106041000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaF</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S1504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>VWR</td>
			<td>27778260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pACC Ser212 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>3661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pAkt Thr308 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pAMPK Thr172 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylmethylsulfonylfluoride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum electrodes</td>
			<td>Danish Myo Technology A/S</td>
			<td>300145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pTBC1D4 Ser588 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scintillation counter</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Tri-Carb-2910TR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scintillation fluid&#160;</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>6013329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Statistical analyses software</td>
			<td>Systat</td>
			<td>SigmaPlot version 14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBC1D4 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab189890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II&#160;</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>Merck</td>
			<td>Milli-Q Reference A+ System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9422</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of insulin- and contraction-stimulated glucose uptake in isolated and incubated mature skeletal muscle from mice

Skeletmuskulatur er et insulinresponsivt væv og optager typisk det meste af den glukose, der kommer ind i blodet efter et måltid. Desuden er det blevet rapporteret, at skeletmuskulatur kan øge ekstraktionen af glukose fra blodet med op til 50 gange under træning sammenlignet med hvileforhold. Stigningen i muskelglukoseoptagelsen under træning og insulinstimulering afhænger af translokationen af glukosetransportør 4 (GLUT4) fra intracellulære rum til muskelcelleoverflademembranen samt fosforylering af glucose til glucose-6-phosphat ved hexokinase II. Isolering og inkubation af musemuskler som m. soleus og m. extensor digitorum longus (EDL) er en passende ex vivo-model til at studere virkningerne af insulin og elektrisk induceret sammentrækning (en model til træning) på glukoseoptagelse i moden skeletmuskel. Ex vivo-modellen tillader således evaluering af muskelinsulinfølsomhed og gør det muligt at matche muskelkraftproduktionen under sammentrækning, hvilket sikrer ensartet rekruttering af muskelfibre under målinger af muskelglukoseoptagelse. Desuden er den beskrevne model velegnet til farmakologisk forbindelsestestning, der kan have indflydelse på muskelinsulinfølsomheden eller kan være til hjælp, når man forsøger at afgrænse den regulatoriske kompleksitet af skeletmuskulaturglukoseoptagelse.
Her beskriver og giver vi en detaljeret protokol om, hvordan man måler insulin- og sammentrækningsstimuleret glukoseoptagelse i isolerede og inkuberede soleus- og EDL-muskelpræparater fra mus ved hjælp af radioaktivt mærket [3H]2-deoxy-D-glucose og [14C]mannitol som en ekstracellulær markør. Dette muliggør nøjagtig vurdering af glukoseoptagelsen i moden skeletmuskulatur i fravær af forvirrende faktorer, der kan forstyrre den intakte dyremodel. Derudover giver vi oplysninger om metabolisk levedygtighed af inkuberet museskeletmuskulatur, hvilket tyder på, at den anvendte metode har nogle forbehold under visse betingelser, når man studerer muskelenergimetabolisme.

Som vist i figur 2 var de basale glukoseoptagelseshastigheder ens mellem isoleret soleus og EDL-muskel fra hunmus. Dette er også blevet rapporteret flere gange før 12,13,19,20. Glukoseoptagelsen steg med ~0,8 og ~0,6 gange og nåede 12 og 9 μmol/g protein/h i henholdsvis soleus- og EDL-muskel som reaktion på en submaksimalt effe...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Insulin- and Contraction-Stimulated Glucose Uptake in Isolated and Incubated Mature Skeletal Muscle from Mice at JoVE.com

Measurement of Insulin- and Contraction-Stimulated Glucose Uptake in Isolated and Incubated Mature Skeletal Muscle from Mice

Intakt regulering af muskelglukoseoptagelse er vigtig for at opretholde glukosehomeostase i hele kroppen. Denne protokol præsenterer vurdering af insulin- og sammentrækningsstimuleret glukoseoptagelse i isoleret og inkuberet moden skeletmuskel, når man afgrænser virkningen af forskellige fysiologiske interventioner på hele kroppens glukosemetabolisme.

Måling af insulin- og sammentrækningsstimuleret glukoseoptagelse i isoleret og inkuberet moden skeletmuskulatur fra mus

Skeletal muscle is an insulin-responsive tissue and typically takes up most of the glucose that enters the blood after a meal. Moreover, it has been ...

Ex vivo-modellen er en nyttig metode til evaluering af virkningen af forskellige fysiologiske interventioner og farmakologiske forbindelser og muskelglukoseoptagelse. Denne teknik gør det muligt at foretage en nøjagtig vurdering af glukoseoptagelsen i isolerede museskeletmuskler i fravær af forvirrende faktorer, der kan forstyrre en intakt dyremodel. Før du begynder et eksperiment, skal du tænde for det integrerede muskelstrimmelbiografisystem og opvarme kamrene til 30 grader celsius.Åbn dataindsamlingssoftwaren, og kalibrer de tvungne transducere for at sikre sammenlignelighed mellem datasæt. Tilsæt fire milliliter forvarmet 30 grader celsius basal inkubationsmedium til hvert inkubationskammer, og sørg for, at mediet kontinuerligt iltes med 95% ilt og 5% kuldioxid. Placer musen i den udsatte position på en dissektionsbakke og bekræft manglende reaktion på pedalrefleks.Fastgør derefter en enkelt forpote med en nål. Brug en saks til at fjerne huden fra underbenet, indtil både akillessenen og knæleddet er synlige. Til dissektion af soleusmusklen skal du fastgøre en enkelt sutursløjfe med en diameter på 0,4 centimeter fremstillet af et 16 centimeter ikke-absorberbart kirurgisk nylonstykke sutur til akillessenen og fastgøre peen tang til akillessenen distalt til løkken.Skær for at frigøre soleus- og gastrocnemiusmusklerne fra poten og skub forsigtigt peen-tangen over musen for at udsætte soleusmusklen. Fastgør peentangen og læg en anden sutursløjfe omkring den proksimale sene i soleusmusklen. Skær den proksimale sene og dissekere soleus inklusive de to vedhæftede sutursløjfer fri for gastrocnemius-musklen.Ved indsamling skal du bruge løkkerne til hurtigt at fastgøre soleusmusklen til de respektive kroge i et af inkubationskamrene. Brug tang til at fjerne fascia, der dækker tibialis forreste muskel. De distale sener i tibialis forreste eller EDL muskler skal være klare hvide, synlige og adskilt fra hinanden.Skær destillationssenen af tibialis forreste muskel og dissekere musklen. Brug tang til forsigtigt at frigøre EDL-musklen fra det omgivende væv, så musklen er intakt uden at skære senerne. Placer individuelle sutursløjfer omkring destillering og proksimale EDL-sener.Når løkkerne er placeret, skal du skære senerne for at frigøre EDL-musklen med sutursløjferne fastgjort og hurtigt fastgøre løkkerne til krogene i det andet inkubationskammer. Juster derefter hvilespændingen i hver muskel til ca. fem millinewton og lad musklerne ligestille i mediet i mindst 10 minutter, før eksperimentet påbegyndes. For at måle den insulinstimulerede glukoseoptagelse skal du erstatte det basale inkubationsmedium i kamrene med inkubationsmediet uden insulin, en submaksimalt effektiv insulinkoncentration eller en maksimalt effektiv insulinkoncentration i en 20 minutters inkubation.Ved stimuleringsperiodens afslutning udskiftes inkubationsmediet med glucoseoptagelsesinkubationsmedium indeholdende en identisk koncentration af insulin i en 10 minutters inkubation. Ved afslutningen af glukoseoptagelsesinkubationen skal du forsigtigt fjerne musklerne fra inkubationskamrene og vaske prøverne i iskoldt basalinkubationsmedium. Efter vasken tørres musklerne hurtigt på filterpapir og fryses vævet uden sutursløjferne i flydende nitrogen.Saml derefter 100 mikroliter glukoseoptagelsesinkubationsmediet fra hvert kammer til 20 grader celsius opbevaring og muskelglukoseoptagelsesanalyse. For at måle den sammentrækningsstimulerede glukoseoptagelse skal du placere platinelektroder centralt og på begge sider af musklerne i inkubationskamrene og starte muskelkontraktion umiddelbart efter udskiftning af det basale inkubationsmedium med glukoseoptagelsesinkubationsmedium. Optag den tvungne produktion fra hver inkuberet muskel.Efter 10 minutter opsamles og fryses musklerne forsigtigt som påvist, idet der opbevares 100 mikroliter aliquots af glukoseoptagelsesinkubationsmediet fra hvert kammer til muskelglukoseoptagelsesanalyse som påvist. For at bestemme den myocellulære signalering ved vestlig blottinganalyse i det samme sæt muskelprøver homogeniseres hver frossen muskelprøve i 400 mikroliter iskold homogeniseringsbuffer og drejes prøveenden over ende i en time ved fire grader celsius. Opsaml derefter licate ved centrifugalisering og mål mængden af protein af interesse inden for hver prøvepalle i henhold til standard western blot-analyseprotokoller.For at måle glukoseoptagelsen i hver prøve tilsættes 150 mikroliter supernatant fra hver prøve og 25 mikroliter glucoseoptagelsesinkubationsmedium fra de tilsvarende inkubationskamre til separate flydende scintillationstællingshætteglas indeholdende tre milliliter flydende scintillationsvæske pr. hætteglas. Læg derefter hætteglassene på en flydende scintillationstæller og mål radioaktiviteten af to deoxyglucose og mannitol i henhold til producentens retningslinjer. I denne repræsentative analyse var de basale glukoseoptagelseshastigheder ens mellem soleus- og EDL-muskler isoleret fra hunmus.Glukoseoptagelsen steg i soleus- og EDL-musklerne som reaktion på både submaksimalt og maksimalt effektive insulinkoncentrationer. Desuden var både submaksimale og maksimale insulinstimulerede glukoseoptag signifikant højere i soleusmusklen. I modsætning hertil var sammentrækningsinduceret glukoseoptagelse signifikant højere i EDL sammenlignet med soleusmusklen.Her kan den maksimale muskelkraft, der produceres i soleus- og EDL-muskler i løbet af 10 minutters stimuleringsperioden, observeres. Som forventet genererede EDL-musklen mere kraft i den indledende del af stimuleringsperioden, efterfulgt af et hurtigt fald senere i stimuleringsperioden. Submaksimale og maksimale insulinkoncentrationer inducerede en stigning i fosforyleringen af Akt threonin 308 og TBC1D4 Serin 588, mens sammentrækning inducerede en stigning i fosforyleringen af AMPK Alpha threonin 172 og ACC serin 212.Hverken insulin eller sammentrækning førte til en ændring i det samlede proteinindhold. Før du forsøger at måle glukoseoptagelsen i isolerede musemuskler, er det vigtigt at øve dissektion af soleus- og EDL-musklerne grundigt. Efter vurderingen af muskelglukoseoptagelsen kan det resterende muskelproteinlysat anvendes til yderligere biokemisk analyse, der kan belyse de observerede ændringer i glukoseoptagelseshastigheden.

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Fluorescens-baserede Måling af Store betjente Calcium indtastning i levende celler: fra kulturperler kræftcellen til at Skeletmuskel Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Vurdering af kontraktilitet, udmattelse og Alternans i isoleret skeletmuskulatur

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Isolering og dyrkning af individuelle myofibre og deres satellit celler fra voksne skeletmuskler

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

Vurdering af Calcium Sparks i intakte Skeletal muskelfibre

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle

Isolering af blod-fartøj-afledt Multipotente Forstadier fra human skeletmuskel

Since the discovery of mesenchymal stem/stromal cells (MSCs), the native identity and localization&#160;of MSCs have been obscured by their retrospective ...

Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

Måling af Glat muskel funktion i den isolerede vævsbad-ansøgninger til Farmakologi Research

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues.  ...