Name: measurement of insulin- and contraction-stimulated glucose uptake in isolated and incubated mature skeletal muscle from mice
Uploaded: 2021-05-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Insulin- and Contraction-Stimulated Glucose Uptake in Isolated and Incubated Mature Skeletal Muscle from Mice at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra Dansk råd for uavhengig forskning - Medical Sciences (FSS8020-00288B) og Novo Nordisk Foundation (NNF160C0023046). Dette arbeidet ble også støttet av et forskningsstipend til Rasmus Kjøbsted fra Det danske diabetesakademiet, som er finansiert av Novo Nordisk Foundation, tilskuddsnummer NNF17SA0031406. Forfatterne vil takke Karina Olsen, Betina Bolmgren og Irene Bech Nielsen (Institutt for ernæring, trening og idrett, Det vitenskapelige fakultet, Københavns Universitet) for deres dyktige tekniske assistanse.

Prosedyrer som involverer forskningsdyr bør utføres i samsvar med relevante retningslinjer og lokal lovgivning. Alle dyreforsøk som ble brukt til denne studien fulgte den europeiske konvensjonen om beskyttelse av virveldyrdyr som brukes til eksperimentelle og andre vitenskapelige formål og ble godkjent av det danske dyreforsøksinspektøratet.
1. Forberedelse av eksperimentelt apparat og suturløkker
MERK: I denne studien bruker du et integrert muskelstripe-myogra...

Intakt regulering av glukoseopptak i skjelettmuskulatur er viktig for å bevare den generelle helsen1. Dermed fungerer undersøkelse av muskelglukoseopptak ofte som en primær avlesning når man vurderer ulike helseforandrende intervensjoner. Her beskriver vi en ex vivo-metode for måling av glukoseopptak i isolert og inkubert soleus og EDL-muskel fra mus som respons på insulin og elektrisk induserte sammentrekninger. Metoden er rask og pålitelig og tillater en presis kontroll av det omkringligg...

Skjelettmuskulaturen har evnen til å trekke ut store mengder glukose fra det ekstracellulære rommet som respons på insulin og trening. Dette bidrar til å opprettholde glukose homeostase i hele kroppen og sikrer glukoseforsyning i tider med høy energibehov. Siden intakt regulering av skjelettmuskulaturglukoseopptak har vist seg å være viktig for generell helse og fysisk ytelse 1,2, har målinger av muskelglukoseopptak under ulike forhold fått mye oppmerksomhet. Hos mennesker og dyr har den hyperinsulinemisk-euglykemiske klemmen blitt brukt som gullstandardteknikk for å vurdere insulinfølsomhet in vivo 3,4. I motsetning til funn hentet fra en oral glukosetoleransetest, krever den hyperinsulinemiske-euglykemiske klemmeteknikken ikke intakt gastrointestinal funksjon eller insulinsekresjon fra bukspyttkjertelen og tillater dermed insulinresponser å bli sammenlignet mellom personer som viser variasjoner i gastro-tarm- og / eller bukspyttkjertelfunksjon. Målinger av muskelglukoseopptak in vivo under trening hos mennesker har blitt utført ofte siden 1960-tallet5. Først ved bruk av arteriovenøse balanseteknikker6 og senere ved bruk av positronutslippstomografi (PET) avbildning i kombinasjon med en positron som avgir glukoseanalogi, for eksempel 18F-Fluoro-deoksy-glukose7. Hos gnagere utføres treningsstimulerte muskelglukoseopptak in vivo vanligvis ved bruk av radioaktive eller stabile isotopmerkede glukoseanaloger 8,9,10.
En komplementær metode for målinger av muskelglukoseopptak in vivo, er å isolere og inkubere små muskler fra gnagere og deretter måle glukoseopptak ved hjelp av radioaktive eller stabile isotopmerkede glukoseanaloger 11,12,13. Denne metoden tillater nøyaktig og pålitelig kvantifisering av glukoseopptakshastigheter i moden skjelettmuskulatur og kan utføres i nærvær av ulike insulinkonsentrasjoner og under sammentrekning fremkalt av elektrisk stimulering. Enda viktigere er at målinger av glukoseopptak i isolert og inkubert skjelettmuskulatur er relevante når man undersøker muskelmetabolisk fenotype av mus som har gjennomgått ulike intervensjoner (f.eks. ernæring, fysisk aktivitet, infeksjon, terapeutiske stoffer). Den isolerte skjelettmuskulaturmodellen er også et egnet verktøy for farmakologisk sammensatt testing som kan påvirke glukoseopptaket i seg selv og/eller endre insulinfølsomheten12,14. På denne måten kan effekten av forbindelser designet for å regulere muskelglukosemetabolismen testes og evalueres i et svært kontrollert miljø før etterfølgende in vivo-testing i prekliniske dyremodeller.
Under noen forhold kan metabolsk levedyktighet utgjøre en utfordring i det isolerte og inkuberte skjelettmuskulaturmodellsystemet. Faktisk innebærer mangelen på et sirkulasjonssystem i de inkuberte musklene at levering av substrater (f.eks. oksygen og næringsstoffer) avhenger helt av enkel diffusjon mellom muskelfibrene og omgivelsene. Når det gjelder dette, er det av betydning at de inkuberte musklene er små og tynne og dermed representerer mindre av en barriere for oksygendiffusjon under inkubasjon15. Spesielt under langvarige inkubasjoner i flere timer kan hypoksiske tilstander utvikle seg på grunn av utilstrekkelig oksygentilførsel som resulterer i muskelenergiuttømming15. Selv om ulike markører for metabolsk levedyktighet i inkubert rottemuskel har blitt rapportert tidligere sammen med identifisering av viktige variabler som bidrar til å opprettholde rottemuskelens levedyktighet15, er en omfattende evaluering av metabolsk levedyktighet i små inkuberte musemuskler fortsatt berettiget. Derfor har glykogeninnhold for tiden hovedsakelig blitt brukt som en markør for metabolsk levedyktighet i inkubert mus skjelettmuskel16,17.
Her beskriver vi en detaljert protokoll for å måle basal, insulin- og sammentrekningsstimulert glukoseopptak i isolert og inkubert soleus og EDL muskel fra mus ved hjelp av radiomerket [3H]2-deoxy-D-glukose og [14C]mannitol som en ekstracellulær markør. I den nåværende studien ble glukoseopptak målt i løpet av en 10-minutters periode, og metoden presenteres ved bruk av submaksimalt og maksimalt effektive insulinkonsentrasjoner samt en enkelt sammentrekningsprotokoll. Protokollene som er beskrevet her, kan imidlertid enkelt endres med hensyn til inkubasjonstid, insulindosering og elektrisk stimuleringsprotokoll. Videre gir vi en grundig karakterisering av ulike markører av metabolsk levedyktighet i inkubert soleus og EDL musemuskel. Resultatene indikerer at glukosetilskudd til inkubasjonsbufferen er avgjørende for å bevare metabolsk levedyktighet av muskel inkubert i 1 time.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>[14C]D-mannitol</td>
			<td>American Radiolabeled Chemicals, Inc.</td>
			<td>ARC 0127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>[3H]2-deoxy-D-glucose&#160;</td>
			<td>American Radiolabeled Chemicals, Inc.</td>
			<td>ART 0103A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Deoxy-D-glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 USP non-sterile surgical nylon suture</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>51-7698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin/HRP (Conjugate)</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>P0397</td>
			<td>Used to detect ACC protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Akt2 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>3063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMPK&#945;2 antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>SC-19131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>aprotinin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A1153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>benzamidine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B6505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1020831000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration kit (force)</td>
			<td>Danish Myo Technology A/S</td>
			<td>300041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemiluminescence</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>WBLUF0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1084180100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Mannitol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M4125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data collection program</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>LabVIEW software version 7.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing</td>
			<td>Visking</td>
			<td>DTV.12000.09 Size No.9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital imaging system</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>ChemiDoc MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma EDS</td>
			<td>E9884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E4378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical Pulse Stimulator</td>
			<td>Digitimer</td>
			<td>D330 MultiStim System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7637</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IGEPAL CA-630&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I8896</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Novo Nordisk</td>
			<td>Actrapid, 100 IE/mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1049361000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104873025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>leupeptin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1058860500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Muscle Strip Myograph System</td>
			<td>Danish Myo Technology A/S</td>
			<td>Model 820MS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-Orthovanadate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-Pyrophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>221368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-Pyruvate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106041000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaF</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S1504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>VWR</td>
			<td>27778260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pACC Ser212 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>3661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pAkt Thr308 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pAMPK Thr172 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylmethylsulfonylfluoride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum electrodes</td>
			<td>Danish Myo Technology A/S</td>
			<td>300145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pTBC1D4 Ser588 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scintillation counter</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Tri-Carb-2910TR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scintillation fluid&#160;</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>6013329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Statistical analyses software</td>
			<td>Systat</td>
			<td>SigmaPlot version 14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBC1D4 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab189890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II&#160;</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>Merck</td>
			<td>Milli-Q Reference A+ System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9422</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of insulin- and contraction-stimulated glucose uptake in isolated and incubated mature skeletal muscle from mice

Skjelettmuskulatur er et insulinresponsivt vev og tar vanligvis opp det meste av glukosen som kommer inn i blodet etter et måltid. Videre har det blitt rapportert at skjelettmuskulatur kan øke utvinningen av glukose fra blodet med opptil 50 ganger under trening sammenlignet med hvileforhold. Økningen i muskelglukoseopptaket under trening og insulinstimulering er avhengig av translokasjon av glukosetransportør 4 (GLUT4) fra intracellulære rom til muskelcelleoverflatemembranen, samt fosforylering av glukose til glukose-6-fosfat ved hexokinase II. Isolasjon og inkubasjon av musemuskler som m. soleus og m. extensor digitorum longus (EDL) er en passende ex vivo-modell for å studere effekten av insulin og elektrisk indusert sammentrekning (en modell for trening) på glukoseopptak i moden skjelettmuskulatur. Dermed tillater ex vivo-modellen evaluering av muskelinsulinfølsomhet og gjør det mulig å matche muskelkraftproduksjonen under sammentrekning, noe som sikrer jevn rekruttering av muskelfibre under målinger av muskelglukoseopptak. Videre er den beskrevne modellen egnet for farmakologisk sammensatt testing som kan ha innvirkning på muskelinsulinfølsomhet eller kan være til hjelp når du prøver å avgrense den regulatoriske kompleksiteten i skjelettmuskulaturglukoseopptaket.
Her beskriver og gir vi en detaljert protokoll om hvordan man måler insulin- og sammentrekningsstimulert glukoseopptak i isolert og inkubert soleus og EDL muskelpreparater fra mus ved hjelp av radiomerket [3H]2-deoksy-D-glukose og [14C]mannitol som en ekstracellulær markør. Dette tillater nøyaktig vurdering av glukoseopptak i moden skjelettmuskulatur i fravær av forvirrende faktorer som kan forstyrre den intakte dyremodellen. I tillegg gir vi informasjon om metabolsk levedyktighet av inkubert mus skjelettmuskulatur som antyder at metoden som brukes har noen advarsler under visse forhold når du studerer muskelenergimetabolisme.

Som vist i figur 2 var basalglukoseopptaksratene like mellom isolert soleus og EDL-muskel fra kvinnelige mus. Dette er også rapportert flere ganger før 12.13.19.20. Glukoseopptaket økte med henholdsvis ~0,8 og ~0,6 ganger 12 og 9 μmol/g protein/t i soleus- og EDL-muskel, som svar på en submaksimalt effektiv insulinkonsentrasjon...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Insulin- and Contraction-Stimulated Glucose Uptake in Isolated and Incubated Mature Skeletal Muscle from Mice at JoVE.com

Measurement of Insulin- and Contraction-Stimulated Glucose Uptake in Isolated and Incubated Mature Skeletal Muscle from Mice

Intakt regulering av muskelglukoseopptak er viktig for å opprettholde hele kroppen glukose homeostase. Denne protokollen presenterer vurdering av insulin- og sammentrekningsstimulert glukoseopptak i isolert og inkubert moden skjelettmuskulatur ved avgrensning av virkningen av ulike fysiologiske inngrep på hele kroppens glukosemetabolisme.

Måling av insulin- og sammentrekningstimulert glukoseopptak i isolert og inkubert moden skjelettmuskulatur fra mus

Skeletal muscle is an insulin-responsive tissue and typically takes up most of the glucose that enters the blood after a meal. Moreover, it has been ...

Ex vivo-modellen er en nyttig metode for å evaluere effekten av ulike fysiologiske intervensjoner og farmakologiske forbindelser og muskelglukoseopptak. Denne teknikken muliggjør nøyaktig vurdering av glukoseopptak i isolert mus skjelettmuskulatur i fravær av forvirrende faktorer som kan forstyrre en intakt dyremodell. Før du begynner et eksperiment, slå på det integrerte muskelstripebiografsystemet og varm kamrene til 30 grader celsius.Åpne datainnsamlingsprogramvaren og kalibrer de tvungne transduserne for å sikre sammenlignbarhet mellom datasett. Tilsett fire milliliter forvarmet 30 grader celsius basal inkubasjonsmedium til hvert inkubasjonskammer og sørg for at mediet kontinuerlig oksygeneres med 95% oksygen og 5% karbondioksid. Plasser musen i utsatt posisjon på en disseksjonsbrett og bekreft mangel på respons på pedal refleks.Deretter pin ned en enkelt foran pote med en nål. Bruk saks for å fjerne huden fra underbenet til både akillessenen og kneleddet er synlige. For disseksjon av soleusmuskelen, fest en enkelt sutursløyfe med en diameter på 0,4 centimeter fremstilt fra et 16 centimeter ikke-absorberbart kirurgisk nylonstykke sutur til akillessenen og sikre peen tang til akillessenen distalt til løkken.Klipp for å frigjøre sålen og gastrocnemius musklene fra poten og skyv forsiktig peen tang over musen for å avsløre soleusmuskelen. Fest peen tang og plasser en andre sutur sløyfe rundt den proksimale senen av soleus muskelen. Klipp den proksimale senen og disseker sålen, inkludert de to vedlagte suturløkkene fri for gastrocnemius-muskelen.Ved innsamling, bruk løkkene til raskt å feste soleusmuskelen til de respektive krokene i et av inkubasjonskamrene. Bruk tang for å fjerne fascia som dekker tibialis fremre muskel. De distale sener av tibialis fremre eller EDL muskler bør være klare hvite, synlige og skilt fra hverandre.Klipp destilleren av tibialis fremre muskel og disseker ut muskelen. Bruk tang for å forsiktig frigjøre EDL-muskelen fra det omkringliggende vevet, slik at muskelen er intakt uten å kutte senene. Plasser individuelle suturløkker rundt destilleren og proksimale EDL-sener.Når løkkene er plassert, kutt senene for å frigjøre EDL-muskelen med suturløkkene festet og fest raskt løkkene til krokene i det andre inkubasjonskammeret. Juster deretter hvilespenningen til hver muskel til omtrent fem millinewton og la musklene likevekte i mediet i minst 10 minutter før du starter eksperimentet. For å måle insulin stimulert glukoseopptak, erstatt basal inkubasjonsmediet i kamrene med inkubasjonsmediet uten insulin, en submaksimalt effektiv insulinkonsentrasjon eller en maksimal effektiv insulinkonsentrasjon for en 20 minutters inkubasjon.På slutten av stimuleringsperioden erstatter du inkubasjonsmediet med glukoseopptak inkubasjonsmedium som inneholder en identisk konsentrasjon av insulin i en 10 minutters inkubasjon. På slutten av glukoseopptaket inkubasjon, fjern forsiktig musklene fra inkubasjonskamrene og vask prøvene i iskald basal inkubasjonsmedium. Etter vasken tørker du raskt musklene på filterpapir og fryser vevet uten suturløkkene i flytende nitrogen.Samle deretter 100 mikroliter av glukoseopptak inkubasjonsmediet fra hvert kammer for 20 grader celsius lagring og muskelglukoseopptaksanalyse. For å måle sammentrekningen stimulert glukoseopptak, plasser platinaelektroder sentralt og på begge sider av musklene i inkubasjonskamrene, og start muskelkontraksjon umiddelbart etter å ha erstattet basal inkubasjonsmediet med glukoseopptak inkubasjonsmedium. Registrer tvungen produksjon fra hver inkubert muskel.Etter 10 minutter samler og fryser du forsiktig musklene som demonstrert, og lagrer 100 mikroliter aliquots av glukoseopptak inkubasjonsmediet fra hvert kammer for muskelglukoseopptaksanalyse som vist. For å bestemme myocellulær signalering ved vestlig blotting analyse i samme sett med muskelprøver, homogenisere hver frossen muskelprøve i 400 mikroliter av iskald homogenisering buffer og rotere prøven ende over ende i en time ved fire grader celsius. Samle deretter licate ved sentrifugalisering og mål mengden protein av interesse i hver prøvepalle i henhold til standard vestlige blotanalyseprotokoller.For å måle glukoseopptaket i hver prøve, tilsett 150 mikroliter supernatant fra hver prøve og 25 mikroliter glukoseopptak inkubasjonsmedium fra de tilsvarende inkubasjonskamrene for å skille flytende scintillation teller hetteglass som inneholder tre milliliter flytende scintillation væske per hetteglass. Last deretter hetteglassene på en flytende scintillation counter og mål radioaktivitet av to deoksyglucose og mannitol i henhold til produsentens retningslinjer. I denne representative analysen var basal glukoseopptaksraten lik mellom soleus og EDL-muskler isolert fra kvinnelige mus.Glukoseopptaket økte i soleus- og EDL-muskler som respons på både submaksimalt og maksimalt effektive insulinkonsentrasjoner. Videre var både submaksimale og maksimale insulin stimulerte glukoseopptak betydelig høyere i soleusmuskelen. I kontrast var sammentrekningen indusert glukoseopptak betydelig høyere i EDL sammenlignet med soleusmuskelen.Her kan den maksimale muskelkraften som produseres i soleus- og EDL-muskler i løpet av den 10 minutters stimuleringsperioden observeres. Som forventet genererte EDL-muskelen mer kraft i den første delen av stimuleringsperioden, etterfulgt av en rask nedgang senere i stimuleringsperioden. Submaksimale og maksimale insulinkonsentrasjoner førte til en økning i fosforylering av Akt threonine 308 og TBC1D4 Serine 588, mens sammentrekning induserte en økning i fosforylering av AMPK Alfa-troonin 172 og ACC-serin 212.Verken insulin eller sammentrekning førte til en endring i det totale proteininnholdet. Før du prøver å måle glukoseopptak i isolerte musemuskler, er det viktig å grundig praktisere disseksjonen av soleus- og EDL-musklene. Etter vurderingen av muskelglukoseopptaket kan det gjenværende muskelproteinlysatet brukes til ytterligere biokjemisk analyse som kan belyse de observerte endringene i glukoseopptakshastigheten.

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Fluorescens-basert Måling av Store-opererte Calcium Entry i levende celler: fra Helstøpt Cancer Cell til Skeletal Muscle Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Vurdering av kontraktilitet, trettbarhet og Alternans i isolerte skjelettmuskulatur

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Isolasjon og kultur av individuelle myofibers og deres satellitt celler fra voksne Skeletal Muscle

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

Vurdering av kalsium Sparks i Intakt skjelettmuskelfibre

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle

Isolering av Blood-fartøy-avledet multipotent Forstadier fra Menneskelig Skeletal Muscle

Since the discovery of mesenchymal stem/stromal cells (MSCs), the native identity and localization&#160;of MSCs have been obscured by their retrospective ...

Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

Måling av Smooth muskelfunksjon i de Isolert Tissue Bath-applikasjoner til Farmakologi Forskning

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues.  ...