Name: measurement of insulin- and contraction-stimulated glucose uptake in isolated and incubated mature skeletal muscle from mice
Uploaded: 2021-05-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Insulin- and Contraction-Stimulated Glucose Uptake in Isolated and Incubated Mature Skeletal Muscle from Mice at JoVE.com

Detta arbete stöddes av anslag från det danska rådet för oberoende forskning - medicinska vetenskaper (FSS8020-00288B) och Novo Nordisk Foundation (NNF160C0023046). Detta arbete stöddes också av ett forskningsanslag till Rasmus Kjøbsted från Danska Diabetesakademin, som finansieras av Novo Nordisk Foundation, anslagsnummer NNF17SA0031406. Författarna vill tacka Karina Olsen, Betina Bolmgren och Irene Bech Nielsen (Institutionen för kost, motion och idrott, Naturvetenskapliga fakulteten, Köpenhamns universitet) för deras skickliga tekniska bistånd.

Försök med försök med försök med försök bör utföras i enlighet med relevanta riktlinjer och lokal lagstiftning. Alla djurförsök som användes för denna studie uppfyllde den europeiska konventionen om skydd av ryggradsdjur som används för experimentella och andra vetenskapliga ändamål och godkändes av den danska djurförsöksinspektionen.
1. Beredning av experimentapparaten och suturslingorna
OBS: För denna studie, använd ett integrerat muskelremsa ...

Intakt reglering av glukosupptag i skelettmuskeln är viktigt för att bevara den allmänna hälsan1. Således fungerar undersökning av muskelglukosupptag ofta som en primär avläsning vid utvärdering av olika hälsoförändrande ingrepp. Här beskriver vi en ex vivo-metod för att mäta glukosupptag i isolerade och inkuberade soleus- och EDL-muskler från möss som svar på insulin och elektriskt inducerade sammandragningar. Metoden är snabb och tillförlitlig och möjliggör en exakt kontrol...

Skelettmuskeln har förmågan att extrahera stora mängder glukos från det extracellulära utrymmet som svar på insulin och motion. Detta hjälper till att upprätthålla hela kroppen glukoshomeostas och säkrar glukosförsörjningen under tider med högt energibehov. Eftersom intakt reglering av glukosupptaget i skelettmuskeln har visat sig vara viktigt för den allmänna hälsan och fysiskaprestationen 1,2 har mätningar av muskelglukosupptag under olika förhållanden fått stor uppmärksamhet. Hos människor och djur har den hyperinsulinemiska-euglykemiska klämman använts som guldstandardteknik för att bedöma insulinkänslighet in vivo 3,4. Till skillnad från fynd som erhållits från ett oralt glukostoleranstest kräver hyperinsulinemisk-euglykemisk klämteknik inte intakt gastrointestinal funktion eller insulinsekretion från bukspottkörteln och tillåter därmed insulinsvar att jämföras mellan försökspersoner som uppvisar variationer i mag-tarm- och / eller bukspottkörtelfunktionen. Mätningar av muskelglukosupptag in vivo under träning hos människor har utförts ofta sedan 1960-talet5. Först genom användning av arteriovenösa balanstekniker6 och senare genom användning av positronemissionstomografi (PET) i kombination med en positronemitterande glukosanalog, t.ex. 18F-fluor-deoxi-glukos7. Hos gnagare utförs träningsstimulerat muskelglukosupptag in vivo typiskt genom användning av radioaktiva eller stabila isotopmärkta glukosanaloger 8,9,10.
En kompletterande metod till mätningar av muskelglukosupptag in vivo är att isolera och inkubera små muskler från gnagare och därefter mäta glukosupptaget med hjälp av radioaktiva eller stabila isotopmärkta glukosanaloger 11,12,13. Denna metod möjliggör noggrann och tillförlitlig kvantifiering av glukosupptagningshastigheter i mogen skelettmuskel och kan utföras i närvaro av olika insulinkoncentrationer och under sammandragning framkallad av elektrisk stimulering. Ännu viktigare är att mätningar av glukosupptag i isolerade och inkuberade skelettmuskler är relevanta när man undersöker den muskelmetaboliska fenotypen hos möss som har genomgått olika ingrepp (t.ex. näring, fysisk aktivitet, infektion, terapi). Den isolerade skelettmuskelmodellen är också ett lämpligt verktyg för farmakologisk föreningstestning som kan påverka glukosupptaget i sig och / eller modifierainsulinkänsligheten 12,14. På detta sätt kan effekten av föreningar som är utformade för att reglera muskelglukosmetabolismen testas och utvärderas i en mycket kontrollerad miljö före efterföljande in vivo-testning i prekliniska djurmodeller.
Under vissa förhållanden kan metabolisk livskraft utgöra en utmaning i det isolerade och inkuberade skelettmuskelmodellsystemet. Faktum är att bristen på ett cirkulationssystem i de inkuberade musklerna innebär att leverans av substrat (t.ex. syre och näringsämnen) helt beror på enkel diffusion mellan muskelfibrerna och den omgivande miljön. Med hänsyn till detta är det av vikt att de inkuberade musklerna är små och tunna och därmed utgör mindre av en barriär för syrediffusion under inkubation15. Speciellt under långvariga inkubationer i flera timmar kan hypoxiska tillstånd utvecklas på grund av otillräcklig syretillförsel vilket resulterar i muskelenergiutarmning15. Även om olika markörer för metabolisk livskraft i inkuberad råttmuskel har rapporterats tidigare tillsammans med identifieringen av viktiga variabler som hjälper till att upprätthålla råttmuskelns livskraft15, är en omfattande utvärdering av metabolisk livskraft i små inkuberade musmuskler fortfarande motiverad. Därför har glykogenhalten för närvarande huvudsakligen använts som en markör för metabolisk livskraft i inkuberad musskelettmuskel 16,17.
Här beskriver vi ett detaljerat protokoll för att mäta basal-, insulin- och sammandragningsstimulerat glukosupptag i isolerad och inkuberad soleus- och EDL-muskel från möss med hjälp av radioaktivt märkt [3H]2-deoxi-D-glukos och [14C]mannitol som en extracellulär markör. I den aktuella studien mättes glukosupptaget under en 10-minutersperiod och metoden presenteras med användning av submaximalt och maximalt effektiva insulinkoncentrationer samt ett enda sammandragningsprotokoll. De protokoll som beskrivs här kan emellertid enkelt modifieras med avseende på inkubationstid, insulindosering och elektriskt stimuleringsprotokoll. Dessutom ger vi en grundlig karakterisering av olika markörer för metabolisk livskraft i inkuberad soleus och EDL musmuskel. Resultaten indikerar att glukostillskott till inkubationsbufferten är avgörande för att bevara metabolisk livskraft hos muskler inkuberade i 1 timme.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>[14C]D-mannitol</td>
			<td>American Radiolabeled Chemicals, Inc.</td>
			<td>ARC 0127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>[3H]2-deoxy-D-glucose&#160;</td>
			<td>American Radiolabeled Chemicals, Inc.</td>
			<td>ART 0103A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Deoxy-D-glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 USP non-sterile surgical nylon suture</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>51-7698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin/HRP (Conjugate)</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>P0397</td>
			<td>Used to detect ACC protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Akt2 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>3063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMPK&#945;2 antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>SC-19131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>aprotinin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A1153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>benzamidine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B6505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1020831000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration kit (force)</td>
			<td>Danish Myo Technology A/S</td>
			<td>300041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemiluminescence</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>WBLUF0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1084180100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Mannitol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M4125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data collection program</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>LabVIEW software version 7.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing</td>
			<td>Visking</td>
			<td>DTV.12000.09 Size No.9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital imaging system</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>ChemiDoc MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma EDS</td>
			<td>E9884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E4378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical Pulse Stimulator</td>
			<td>Digitimer</td>
			<td>D330 MultiStim System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7637</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IGEPAL CA-630&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I8896</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Novo Nordisk</td>
			<td>Actrapid, 100 IE/mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1049361000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104873025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>leupeptin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1058860500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Muscle Strip Myograph System</td>
			<td>Danish Myo Technology A/S</td>
			<td>Model 820MS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-Orthovanadate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-Pyrophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>221368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-Pyruvate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106041000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaF</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S1504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>VWR</td>
			<td>27778260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pACC Ser212 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>3661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pAkt Thr308 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pAMPK Thr172 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylmethylsulfonylfluoride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum electrodes</td>
			<td>Danish Myo Technology A/S</td>
			<td>300145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pTBC1D4 Ser588 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scintillation counter</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Tri-Carb-2910TR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scintillation fluid&#160;</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>6013329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Statistical analyses software</td>
			<td>Systat</td>
			<td>SigmaPlot version 14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBC1D4 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab189890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II&#160;</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>Merck</td>
			<td>Milli-Q Reference A+ System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9422</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of insulin- and contraction-stimulated glucose uptake in isolated and incubated mature skeletal muscle from mice

Skelettmuskeln är en insulinresponsiv vävnad och tar vanligtvis upp det mesta av glukosen som kommer in i blodet efter en måltid. Dessutom har det rapporterats att skelettmuskeln kan öka extraktionen av glukos från blodet med upp till 50 gånger under träning jämfört med viloförhållandena. Ökningen av muskelglukosupptaget under träning och insulinstimulering är beroende av translokationen av glukostransportör 4 (GLUT4) från intracellulära fack till muskelcellens ytmembran, liksom fosforylering av glukos till glukos-6-fosfat av hexokinas II. Isolering och inkubation av musmuskler som m. soleus och m. extensor digitorum longus (EDL) är en lämplig ex vivo-modell för att studera effekterna av insulin och elektriskt inducerad sammandragning (en modell för träning) på glukosupptaget i mogen skelettmuskel. Således tillåter ex vivo-modellen utvärdering av muskelinsulinkänslighet och gör det möjligt att matcha muskelkraftproduktionen under sammandragning vilket säkerställer enhetlig rekrytering av muskelfibrer under mätningar av muskelglukosupptag. Dessutom är den beskrivna modellen lämplig för farmakologisk föreningstestning som kan påverka muskelinsulinkänsligheten eller kan vara till hjälp när man försöker avgränsa den regulatoriska komplexiteten hos skelettmuskelglukosupptaget.
Här beskriver och tillhandahåller vi ett detaljerat protokoll för hur man mäter insulin- och sammandragningsstimulerat glukosupptag i isolerade och inkuberade soleus- och EDL-muskelpreparat från möss med hjälp av radioaktivt märkt [3H]2-deoxi-D-glukos och [14C]mannitol som en extracellulär markör. Detta möjliggör noggrann bedömning av glukosupptaget i mogen skelettmuskel i avsaknad av förvirrande faktorer som kan störa den intakta djurmodellen. Dessutom tillhandahåller vi information om metabolisk livskraft hos inkuberad musskelettmuskel som tyder på att den tillämpade metoden har vissa försiktighetsåtgärder under vissa förhållanden när man studerar muskelenergimetabolism.

Som visas i figur 2 var de basala glukosupptagningshastigheterna likartade mellan isolerade soleus- och EDL-muskler från honmöss. Detta har också rapporterats flera gånger före 12,13,19,20. Glukosupptaget ökade med ~ 0,8 och ~ 0,6 gånger och nådde 12 och 9 μmol / g protein / h i soleus respektive EDL-muskler som svar på en...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Insulin- and Contraction-Stimulated Glucose Uptake in Isolated and Incubated Mature Skeletal Muscle from Mice at JoVE.com

Measurement of Insulin- and Contraction-Stimulated Glucose Uptake in Isolated and Incubated Mature Skeletal Muscle from Mice

Intakt reglering av muskelglukosupptag är viktigt för att upprätthålla glukoshomeostas i hela kroppen. Detta protokoll presenterar bedömning av insulin- och kontraktionsstimulerat glukosupptag i isolerad och inkuberad mogen skelettmuskel när man avgränsar effekterna av olika fysiologiska ingrepp på hela kroppens glukosmetabolism.

Mätning av insulin- och sammandragningsstimulerat glukosupptag i isolerade och inkuberade mogna skelettmuskler från möss

Skeletal muscle is an insulin-responsive tissue and typically takes up most of the glucose that enters the blood after a meal. Moreover, it has been ...

Ex vivo-modellen är en användbar metod för att utvärdera effekterna av olika fysiologiska ingrepp och farmakologiska föreningar och muskelglukosupptag. Denna teknik möjliggör en noggrann bedömning av glukosupptaget i isolerade musskelettmuskler i frånvaro av förvirrande faktorer som kan störa en intakt djurmodell. Innan du börjar ett experiment, slå på det integrerade muskelremsans biografsystem och värm kamrarna till 30 grader celsius.Öppna datainsamlingsprogramvaran och kalibrera tvångsgivare för att säkerställa jämförbarhet mellan datauppsättningar. Tillsätt fyra milliliter förvärmt 30 grader celsius basalt inkubationsmedium till varje inkubationskammare och se till att mediet kontinuerligt syresätts med 95% syre och 5% koldioxid. Placera musen i det benägna läget på ett dissektionsfack och bekräfta brist på svar på pedalreflex.Fäst sedan ner en enda främre tass med en nål. Använd sax för att ta bort huden från underbenet tills både hälsenan och knäleden är synliga. För dissektion av soleusmuskeln, fäst en enda suturslinga med en diameter på 0,4 centimeter framställd av en 16 centimeter icke-absorberbar kirurgisk nylonsuturbit till hälsenan och säkra peen pincett på akillessenen distalt till öglan.Klipp för att frigöra soleus- och gastrocnemiusmusklerna från tassen och försiktigt skjuta peen tången över musen för att exponera soleusmuskeln. Fäst ner peen tången och placera en andra suturslinga runt den proximala senan i soleusmuskeln. Skär den proximala senan och dissekera soleus inklusive de två bifogade suturöglorna fria från gastrocnemiusmuskeln.Vid insamling, använd öglorna för att snabbt fästa soleusmuskeln på respektive krokar i en av inkubationskamrarna. Använd pincett för att ta bort fascian som täcker tibialis främre muskel. De distala senorna i tibialis främre eller EDL-muskler ska vara klara vita, synliga och separerade från varandra.Skär destillessenen i tibialis främre muskel och dissekera ut muskeln. Använd pincett för att försiktigt frigöra EDL-muskeln från de omgivande vävnaderna och lämna muskeln intakt utan att skära senorna. Placera enskilda suturslingor runt destillen och proximala EDL-senor.När öglorna har placerats, skär senorna för att frigöra EDL-muskeln med suturöglorna fästa och fäst snabbt öglorna på krokarna i den andra inkubationskammaren. Justera sedan vilospänningen för varje muskel till cirka fem millinewton och låt musklerna balansera i mediet i minst 10 minuter innan experimentet startas. För att mäta det insulinstimulerade glukosupptaget, ersätt det basala inkubationsmediet i kamrarna med inkubationsmediet utan insulin, en submaximellt effektiv insulinkoncentration eller en maximalt effektiv insulinkoncentration för en 20 minuters inkubation.Vid slutet av stimuleringsperioden, ersätt inkubationsmediet med glukosupptagningsinkubationsmedium innehållande en identisk koncentration av insulin för en 10 minuters inkubation. Vid slutet av glukosupptagningen, ta försiktigt bort musklerna från inkubationskamrarna och tvätta proverna i iskallt basalt inkubationsmedium. Efter tvätten torkar du musklerna snabbt på filterpapper och fryser vävnaden utan suturslingorna i flytande kväve.Samla sedan 100 mikroliter av glukosupptagningsmediet från varje kammare för 20 grader celsius lagring och analys av muskelglukosupptag. För att mäta sammandragningsstimulerat glukosupptag, placera platinaelektroder centralt och på båda sidor av musklerna i inkubationskamrarna och initiera muskelkontraktion omedelbart efter att ha ersatt det basala inkubationsmediet med glukosupptagningsinkubationsmedium. Spela in den tvingade produktionen från varje inkuberad muskel.Efter 10 minuter, samla försiktigt och frys musklerna som visat, lagra 100 mikroliter alikvoter av glukosupptagsinkubationsmediet från varje kammare för analys av muskelglukosupptag som visat. För att bestämma den myocellulära signaleringen genom western blotting-analys i samma uppsättning muskelprover, homogenisera varje fruset muskelprov i 400 mikroliter iskall homogeniseringsbuffert och rotera provänden över änden i en timme vid fyra grader celsius. Samla sedan lakatet genom centrifugalisering och mät mängden protein av intresse inom varje provpall enligt standard western blot analysprotokoll.För att mäta glukosupptaget i varje prov, tillsätt 150 mikroliter supernatant från varje prov och 25 mikroliter glukosupptagningsinterkubationsmedium från motsvarande inkubationskammare för att separera flytande scintillationsräknande injektionsflaskor innehållande tre milliliter flytande scintillationsvätska per injektionsflaska. Ladda sedan injektionsflaskorna på en flytande scintillationsräknare och mät radioaktiviteten hos två deoxiglukos och mannitol enligt tillverkarens riktlinjer. I denna representativa analys var de basala glukosupptagningshastigheterna likartade mellan soleus- och EDL-muskler isolerade från kvinnliga möss.Glukosupptaget ökade i soleus- och EDL-musklerna som svar på både submaximala och maximalt effektiva insulinkoncentrationer. Dessutom var både submaximaler och maximala insulinstimulerade glukosupptag signifikant högre i soleusmuskeln. Däremot var sammandragningsinducerad glukosupptagning signifikant högre i EDL jämfört med soleusmuskeln.Här kan den maximala muskelkraften som produceras i soleus- och EDL-muskler under 10 minuters stimuleringsperiod observeras. Som förväntat genererade EDL-muskeln mer kraft under den första delen av stimuleringsperioden, följt av en snabb nedgång senare under stimuleringsperioden. Submaximaala och maximala insulinkoncentrationer inducerade en ökning av fosforyleringen av Akt treonin 308 och TBC1D4 Serine 588, medan sammandragning inducerade en ökning av fosforyleringen av AMPK Alpha treonin 172 och ACC serin 212.Varken insulin eller sammandragning ledde till en förändring av det totala proteininnehållet. Innan du försöker mäta glukosupptaget i isolerade musmuskler är det viktigt att noggrant öva dissektionen av soleus- och EDL-musklerna. Efter bedömningen av muskelglukosupptaget kan det återstående muskelproteinlysatet användas för ytterligare biokemisk analys som kan belysa de observerade förändringarna i glukosupptagningshastigheterna.

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

In vivo Micro-cirkulation Mätning i skelettmuskel genom Intra-vitala Mikroskopi

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Adulta och embryonala skelettmuskler Microexplant Kultur och Isolering av skelettet muskelceller Stem

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

Mitokondriell Isolering från skelettmuskulatur

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

Rening av stamceller från skelettmuskulatur

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Fluorescens-baserad Mätning av Store-drivs kalcium Entry i levande celler: från odlade Cancer Cell till skelettmuskulatur Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex vivo Bedömning av kontraktilitet, fatigability och Alternans i isolerade skelettmuskler

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Isolering och odling av individuella Myofibers och deras satellit celler från vuxna skelettmuskulatur

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

I Intakta Skeletal Muscle Fibers Bedömning av Kalcium Sparks

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle

Isolering av blod-kärl-härledda multi prekursorer från Human Skeletal Muscle

Since the discovery of mesenchymal stem/stromal cells (MSCs), the native identity and localization&#160;of MSCs have been obscured by their retrospective ...

Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

Mätning av Smooth muskelfunktion i isolerad vävnad Bath-ansökningar till farmakologi Research

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues.  ...