Name: culture of neurospheres derived from the neurogenic niches in adult prairie voles
Uploaded: 2020-06-10T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Culture of Neurospheres Derived from the Neurogenic Niches in Adult Prairie Voles at JoVE.com

وقد دعم هذا البحث من المنح الوطنية الوطنية 252756 و253631؛ UNAM-DGAPA-PAPIIT IN202818 و IN203518; INPER 2018-1-163، وNIH P51OD11132. ونشكر ديسي غاسكا، وكارلوس لوزانو، ومارتين غارسيا، وألياندرا كاستيا، ونيديا هرنانديز، وجيسيكا نوريس، وسوزانا كاسترو على مساعدتهم التقنية الممتازة.

وقد وافقت على الدراسة لجنة أخلاقيات البحوث التابعة لـ معهد علم الأعصاب، وجامعة المكسيك الوطنية المستقلة، والمكسيك، والمعهد الوطني للبيطن (2018-1-163). وقد أنشئت النهايات الإنجابية والرعاية والإنسانية للحيوانات وفقا للمعيار المكسيكي الرسمي (NOM-062-Z00-1999) القائم على "القانون العام لـ Ley General de Salud e...

<ol>
	<li>Portillo, W., Paredes, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motivational+Drive+in+Non-copulating+and+Socially+Monogamous+Mammals.">Motivational Drive in Non-copulating and Socially Monogamous Mammals.</a> Frontiers Behavioral Neuroscience. 13, 238 (2019).</li><li>Walum, H., Young, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neural+mechanisms+and+circuitry+of+the+pair+bond.">The neural mechanisms and circuitry of the pair bond.</a> Nature Reviews Neurosciences. 19 (11), 643-654 (2018).</li><li>Gobrogge, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex,+drugs,+and+violence:+neuromodulation+of+attachment+and+conflict+in+voles.">Sex, drugs, and violence: neuromodulation of attachment and conflict in voles.</a> Current Topics Behavioral Neurosciences. 17, 229-264 (2014).</li><li>Perkeybile, A. M., Bales, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intergenerational+transmission+of+sociality:+the+role+of+parents+in+shaping+social+behavior+in+monogamous+and+non-monogamous+species.">Intergenerational transmission of sociality: the role of parents in shaping social behavior in monogamous and non-monogamous species.</a> Journal of Experimental Biology. 220, 114-123 (2017).</li><li>McGraw, L. A., Young, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prairie+vole:+an+emerging+model+organism+for+understanding+the+social+brain.">The prairie vole: an emerging model organism for understanding the social brain.</a> Trends in Neuroscience. 33 (2), 103-109 (2010).</li><li>Fowler, C. D., Liu, Y., Ouimet, C., Wang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+social+environment+on+adult+neurogenesis+in+the+female+prairie+vole.">The effects of social environment on adult neurogenesis in the female prairie vole.</a> Journal of Neurobiology. 51 (2), 115-128 (2002).</li><li>Yang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-omic+Profiling+Reveals+Dynamics+of+the+Phased+Progression+of+Pluripotency.">Multi-omic Profiling Reveals Dynamics of the Phased Progression of Pluripotency.</a> Cell Systems. 8 (5), 427-445 (2019).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255 (5052), 1707-1710 (1992).</li><li>Gritti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotential+stem+cells+from+the+adult+mouse+brain+proliferate+and+self-renew+in+response+to+basic+fibroblast+growth+factor.">Multipotential stem cells from the adult mouse brain proliferate and self-renew in response to basic fibroblast growth factor.</a> Journal of Neurosciences. 16 (3), 1091-1100 (1996).</li><li>Ostenfeld, T., Svendsen, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+neurogenesis+to+proceed+through+the+division+of+neuronal+progenitors+following+differentiation+of+epidermal+growth+factor+and+fibroblast+growth+factor-2-responsive+human+neural+stem+cells.">Requirement for neurogenesis to proceed through the division of neuronal progenitors following differentiation of epidermal growth factor and fibroblast growth factor-2-responsive human neural stem cells.</a> Stem Cells. 22 (5), 798-811 (2004).</li><li>Paxinos, G., Keith, B. J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mouse brain in stereotaxic coordinates. , (2001).</li><li>Conti, L., Cattaneo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cell+systems:+physiological+players+or+in+vitro+entities.">Neural stem cell systems: physiological players or in vitro entities.</a> Nature Reviews Neuroscience. 11 (3), 176-187 (2010).</li><li>Lieberwirth, C., Liu, Y., Jia, X., Wang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+isolation+impairs+adult+neurogenesis+in+the+limbic+system+and+alters+behaviors+in+female+prairie+voles.">Social isolation impairs adult neurogenesis in the limbic system and alters behaviors in female prairie voles.</a> Hormones and Behavior. 62 (4), 357-366 (2012).</li><li>Ruscio, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pup+exposure+elicits+hippocampal+cell+proliferation+in+the+prairie+vole.">Pup exposure elicits hippocampal cell proliferation in the prairie vole.</a> Behavioral Brain Research. 187 (1), 9-16 (2008).</li><li>Wojtowicz, J. M., Kee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BrdU+assay+for+neurogenesis+in+rodents.">BrdU assay for neurogenesis in rodents.</a> Nature Protocols. 1 (3), 1399-1405 (2006).</li><li>Eack, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonalities+in+social+and+non-social+cognitive+impairments+in+adults+with+autism+spectrum+disorder+and+schizophrenia.">Commonalities in social and non-social cognitive impairments in adults with autism spectrum disorder and schizophrenia.</a> Schizophrenia Research. 148 (1-3), 24-28 (2013).</li><li>Pinkham, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+comparison+of+social+cognitive+performance+in+autism+spectrum+disorder+and+schizophrenia.">Comprehensive comparison of social cognitive performance in autism spectrum disorder and schizophrenia.</a> Psychological Medicine. , 1-9 (2019).</li><li>Yirmiya, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+the+arginine+vasopressin+1a+receptor+(AVPR1a)+gene+and+autism+in+a+family-based+study:+mediation+by+socialization+skills.">Association between the arginine vasopressin 1a receptor (AVPR1a) gene and autism in a family-based study: mediation by socialization skills.</a> Molecular Psychiatry. 11 (5), 488-494 (2006).</li><li>Montag, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+and+oxytocin+receptor+gene+polymorphisms+and+risk+for+schizophrenia:+a+case-control+study.">Oxytocin and oxytocin receptor gene polymorphisms and risk for schizophrenia: a case-control study.</a> The World Journal of Biological Psychiatry. 14 (7), 500-508 (2013).</li><li>Harony, H., Wagner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contribution+of+oxytocin+and+vasopressin+to+mammalian+social+behavior:+potential+role+in+autism+spectrum+disorder.">The contribution of oxytocin and vasopressin to mammalian social behavior: potential role in autism spectrum disorder.</a> Neurosignals. 18 (2), 82-97 (2010).</li><li>Bachner-Melman, R., Ebstein, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+oxytocin+and+vasopressin+in+emotional+and+social+behaviors.">The role of oxytocin and vasopressin in emotional and social behaviors.</a> Handbook of Clinical Neurology. 124, 53-68 (2014).</li><li>Wegiel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neuropathology+of+autism:+defects+of+neurogenesis+and+neuronal+migration,+and+dysplastic+changes.">The neuropathology of autism: defects of neurogenesis and neuronal migration, and dysplastic changes.</a> Acta Neuropathologica. 119 (6), 755-770 (2010).</li><li>Kaushik, G., Zarbalis, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prenatal+Neurogenesis+in+Autism+Spectrum+Disorders.">Prenatal Neurogenesis in Autism Spectrum Disorders.</a> Frontiers in Chemistry. 4, 12 (2016).</li><li>Sheu, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Critical+Period+for+the+Development+of+Schizophrenia-Like+Pathology+by+Aberrant+Postnatal+Neurogenesis.">A Critical Period for the Development of Schizophrenia-Like Pathology by Aberrant Postnatal Neurogenesis.</a> Frontiers in Neuroscience. 13, 635 (2019).</li><li>Donaldson, Z. R., Young, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relative+contribution+of+proximal+5'+flanking+sequence+and+microsatellite+variation+on+brain+vasopressin+1a+receptor+(Avpr1a)+gene+expression+and+behavior.">The relative contribution of proximal 5' flanking sequence and microsatellite variation on brain vasopressin 1a receptor (Avpr1a) gene expression and behavior.</a> PLoS Genetics. 9 (8), 1003729 (2013).</li><li>Rice, M. A., Hobbs, L. E., Wallace, K. J., Ophir, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryptic+sexual+dimorphism+in+spatial+memory+and+hippocampal+oxytocin+receptors+in+prairie+voles+(Microtus+ochrogaster).">Cryptic sexual dimorphism in spatial memory and hippocampal oxytocin receptors in prairie voles (Microtus ochrogaster).</a> Hormones and Behavior. 95, 94-102 (2017).</li></ol>

مرحلة للحصول على ثقافة الخلايا الجذعية العصبية هي فترة الهضم مع محلول انزيمي، والتي يجب ألا تتجاوز أكثر من 30 دقيقة لأنها قد تقلل من صلاحية الخلية. وينبغي أن تظهر في 8-10 أيام من الاستزراع الأولي. إذا لم تظهر في اليوم 12 ، وتجاهل الثقافة وتكرار التجربة ، والحد من فترة الهضم. وثمة مسألة أخرى هي ا?...

و vole المرج(ميكروتوس ochrogaster)، وهو عضو في الأسرة Cricetidae ، هو الثدييات الصغيرة التي تتطور استراتيجية الحياة كنوع أحادية الزواج اجتماعيا ومؤنس للغاية. كل من الذكور والإناث إقامة علاقة الزوج دائم بعد التزاوج أو فترات طويلة من التعايش التي تتميز تقاسم العش، والدفاع عن أراضيهم، وعرض الرعاية بين الوالدين لذريتهم1،2،3،4. وهكذا، فإن المرج فول هو نموذج قيم لفهم الأساس العصبي البيولوجي للسلوك الاجتماعي والجنسي والعاهات في الإدراك الاجتماعي5.
النشوء العصبي للبالغين هي واحدة من العمليات الأكثر أهمية لللدونة العصبية التي تؤدي إلى تغييرات سلوكية. على سبيل المثال، ذكرت مجموعتنا البحثية في ذكور أن التعايش الاجتماعي مع التزاوج يزيد من انتشار الخلايا في المنطقة دون البطينية (VZ) والمنطقة دون الرعية في الجيروسكوب (DG) من قرن آمون، مما يشير إلى أن التكاثر العصبي للبالغين يمكن أن يلعب دورًا في تكوين الترابط الناجم عن التزاوج في البراري (البيانات غير المنشورة). من ناحية أخرى، على الرغم من أن مناطق الدماغ حيث يتم توليد الخلايا العصبية الجديدة ومتكاملة معروفة جيدا، والآليات الجزيئية والخلوية المشاركة في هذه العمليات لا تزال غير محددة بسبب العيوب التقنية في نموذج الدماغ كله6. على سبيل المثال، مسارات الإشارة التي تتحكم في التعبير الجيني والأنشطة الخلوية الأخرى لها فترة تنشيط قصيرة نسبيا (الكشف عن phosphoproteome)7. نموذج بديل واحد هو الخلايا الجذعية العصبية البالغة المعزولة والمزاجة أو الخلايا السلف لتوضيح المكونات الجزيئية المشاركة في تكوين الأعصاب للبالغين.
كان النهج الأول للحفاظ على السلائف العصبية في المختبر من الثدييات البالغة (الفأرة) الدماغ هو مقايسة من الخلايا العصبية ، والتي هي المجاميع الخلوية التي تنمو في ظل ظروف غير مطيعة التي تحافظ على إمكاناتها متعددة القدرات لتوليد الخلايا العصبية ، وكذلك الخلايا الفلكية8،9،10. خلال تطورها، وهناك عملية اختيار حيث السلائف فقط سوف تستجيب لميوجين مثل عامل النمو البشرة (EGF) وعامل النمو الليفي 2 (FGF2) لتكاثر وتوليد الخلايا العصبية8،9،10.
على حد علمنا، لم يتم الإبلاغ عن أي بروتوكول في الأدب للحصول على السلف العصبية الكبار من voles. هنا، أنشأنا ظروف الثقافة لعزل السلف العصبية من المنافذ العصبية وصيانة في المختبر من خلال فحص تشكيل الغلاف العصبي. وهكذا، يمكن تصميم التجارب لتحديد الآليات الجزيئية والخلوية التي تشارك في انتشار وهجرة وتمايز وبقاء الخلايا الجذعية العصبية وذرية، وهي عمليات لا تزال غير معروفة في المرج. وعلاوة على ذلك، يمكن توضيح الاختلافات في المختبر في خصائص الخلايا المستمدة من VZ وDG تقديم معلومات حول دور المنافذ العصبية في اللدونة العصبية المرتبطة بالتغيرات في السلوك الاجتماعي والجنسي والسلوكيات المعرفية، والعجز في التفاعلات الاجتماعية (اضطراب طيف التوحد والفصام)، والتي يمكن أن تكون أيضا تعتمد على الجنس.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Antibody ID</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Nestin</td>
			<td>GeneTex</td>
			<td>GTX30671</td>
			<td>RRID:AB_625325</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Doublecortin</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>AB2253</td>
			<td>RRID:AB_1586992</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Ki67</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab66155</td>
			<td>RRID:AB_1140752</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-MAP2</td>
			<td>GeneTex</td>
			<td>GTX50810</td>
			<td>RRID:AB_11170769</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFAP</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>G3893</td>
			<td>RRID:AB_477010</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Mouse Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11029</td>
			<td>RRID:AB_2534088</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor 568</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11036</td>
			<td>RRID:AB_10563566</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Guinea Pig Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11073</td>
			<td>RRID:AB_2534117</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td>
			<td>15240062</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td>
			<td>17504044</td>
			<td>50X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase, Type IV</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td>
			<td>17104019</td>
			<td>Powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td>
			<td>17105041</td>
			<td>Powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12, HEPES</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td>
			<td>11330032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>any brand</td>
			<td></td>
			<td>Powder, Cell Culture Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td>
			<td>35050061</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>any brand</td>
			<td></td>
			<td>Powder, Cell Culture Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Laminin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354232</td>
			<td>1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td>
			<td>17502048</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NAHCO3</td>
			<td>any brand</td>
			<td></td>
			<td>Powder, Suitable for Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td>
			<td>21103049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-ornithine hydrobromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3655</td>
			<td>Powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human FGF-basic</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td>
			<td>A1110501</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well Clear Flat Bottom Ultra-Low Attachment Multiple Well Plates</td>
			<td>Corning/Costar</td>
			<td>3473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well Clear TC-treated Multiple Well Plates</td>
			<td>Corning/Costar</td>
			<td>3526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td>Corning/Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td>Blue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle Top Vacuum Filter, 0.22 &#181;m pore</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431118</td>
			<td>PES membrane, 45 mm diameter neck</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Pyrogenic Sterile Centrifuge Tube</td>
			<td>any brand</td>
			<td></td>
			<td>with conical bottom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Pyrogenic sterile tips of 1,000 &#181;l, 200 &#181;l and 10 &#181;l.</td>
			<td>any brand</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile cotton gauzes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile microcentrifuge tubes of 1.5 mL</td>
			<td>any brand</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile serological pipettes of 5, 10 and 25 mL</td>
			<td>any brand</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile surgical gloves</td>
			<td>any brand</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Filters, 0.22 &#181;m pore</td>
			<td>Merk Millipore</td>
			<td>SLGPR33RB</td>
			<td>Polyethersulfone (PES) membrane, 33 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment and surgical instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biological safety cabinet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Motorized Pipet Filler/Dispenser</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blades</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless-steel Spatula</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

culture of neurospheres derived from the neurogenic niches in adult prairie voles

المغنطيس العصبي هي مجاميع الخلايا الأولية التي تضم الخلايا الجذعية العصبية والخلايا السلف. هذه الهياكل ثلاثية الأبعاد هي أداة ممتازة لتحديد التمايز واحتمالات الانتشار للخلايا الجذعية العصبية ، وكذلك لتوليد خطوط الخلايا مما يمكن أن يكون مقايسة مع مرور الوقت. أيضا، يمكن أن تخلق neurospheres مكانة (في المختبر) الذي يسمح نموس بيئة متغيرة ديناميكية، مثل عوامل النمو المختلفة، والهرمونات، والناقلات العصبية، من بين أمور أخرى. ميكروتوس ochrogaster (المرج فول) هو نموذج فريد لفهم الأساس العصبي البيولوجي للسلوكيات الاجتماعية والجنسية والإدراك الاجتماعي. ومع ذلك، فإن الآليات الخلوية المشاركة في هذه السلوكيات ليست معروفة جيدا. ويهدف البروتوكول إلى الحصول على خلايا السلف العصبي من محاريب عصبية من فول البراري الكبار، التي يتم استزراعها في ظل ظروف غير منسجمة، لتوليد الخلايا العصبية. يعتمد حجم وعدد الخلايا العصبية على المنطقة (المنطقة دون البطينية أو الجيروسكوبات) وجنس المرج. هذه الطريقة هي أداة رائعة لدراسة الاختلافات المعتمدة على الجنس في المنافذ العصبية في المختبر وتغيرات المرونة العصبية المرتبطة بالسلوكيات الاجتماعية مثل الترابط بين الزوجين والرعاية بين الوالدين. أيضا، يمكن فحص الظروف المعرفية التي تنطوي على العجز في التفاعلات الاجتماعية (اضطرابات طيف التوحد والفصام).

تشكلت الخلايا العصبية من الخلايا الجذعية العصبية المعزولة عن VZ وDG لكل من الإناث والذكور الكبار البراري voles. حوالي 8-10 أيام بعد بدء الثقافة، يجب أن تكون الخلايا قد شكلت neurospheres. لاحظ أن اللوحة قد تحتوي على حطام في الثقافة الأولية (الشكل 3A). ومع ذلك، في مرور 1 يجب أن تتكون الثقافة...

Watch this Scientific Journal Video about Culture of Neurospheres Derived from the Neurogenic Niches in Adult Prairie Voles at JoVE.com

Culture of Neurospheres Derived from the Neurogenic Niches in Adult Prairie Voles

أنشأنا الظروف لثقافة الخلايا السلف العصبي من المنطقة دون البطينية و gyrus dentate من الدماغ الكبار من فولز، كدراسة تكميلية في المختبر، لتحليل الاختلافات التي تعتمد على الجنس بين المنافذ العصبية التي يمكن أن تكون جزءا من التغييرات البلاستيكية الوظيفية المرتبطة بالسلوكيات الاجتماعية.

ثقافة الخلايا العصبية المشتقة من المنافذ العصبية في الكبار فولز

Neurospheres are primary cell aggregates that comprise neural stem cells and progenitor cells. These 3D structures are an excellent tool to determine the ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في التحقيق في الاختلافات المعتمدة على الجنس في المنافذ العصبية ، وفهم المرونة العصبية ، والتغيرات التي تؤكد التفاعلات الاجتماعية في المرج. إن فحص الخلايا العصبية هو أداة ممتازة لتحديد انتشار وتمايز الخلايا الجذعية العصبية والخلايا السلف. للبدء، ضع طبق بيتري على سطح محاط بالثلج.إيداع الدماغ على الطبق وإضافة 20 ملليلتر من محلول غسل الباردة. في الطائرة التاجية، تقسيم الدماغ إلى كتلتين من الأنسجة باستخدام مشرط، وأداء القطع على مستوى بريما في المحور الأمامي الأمامي. استخراج المنطقة دون البطينية، أو VZ، الأنسجة من كتلة روسترالية، والجيروزات، أو DG، الأنسجة من كتلة السد.لتشريح VZ ، عقد واحدة من نصفي الكرة الأرضية مع ملقط دومون ، وإدراج نصائح غرامة من ملقط الثاني تحت الأنسجة التي خطوط caudate- putamen. افتح الملاطس على طول المحور الظهري البطني لفصل الأنسجة، وجمع VZ في أنبوب الطرد المركزي مع مليلترين من محلول الغسيل البارد. لا تجمع نسيج أكثر من حيوانين.كرر microdissection في نصف الكرة الأرضية الآخر وتخزين أنبوب مع الأنسجة على الجليد. لتشريح DG، استخدم مشرط لجعل قطع إكليلية في كتلة السد، للحصول على شريحتين التي لوحظ تشكيل فرس النهر. استخدام ملقط دومون لعقد واحدة من شرائح، وجعل قطع أفقي بين DG وCA1 مع ملقط آخر.ثم، إجراء شق عمودي بين DG وCA3، لفصل DG. كرر التشريح في نصف الكرة الأرضية الآخر من الشريحة الأولى، ثم في نصفي الكرة الأرضية في الشريحة الثانية. جمع أربع قطع DG من كل فول في أنبوب الطرد المركزي. ضع أنابيب الطرد المركزي داخل خزانة السلامة البيولوجية وانتظر حوالي 10 دقائق حتى تترسب شظايا الأنسجة بالجاذبية.ثم، إزالة محلول الغسيل وإضافة ملليلتر واحد من محلول الأنزيمات الدافئ لكل أنبوب. احتضان الأنابيب في 37 درجة لمدة 10 دقائق. لتفكك شظايا الأنسجة، ماصة لهم صعودا وهبوطا مع طرف ملليلتر واحد، ولكن لا الماصات أكثر من 30 مرة.كرر الحضانة في 37 درجة مئوية، ثم ماصة الأنسجة مرة أخرى. إضافة تسعة ملليلتر من N-2 المتوسطة لكل أنبوب لتخفيف العلاج الأنزيمي، والطرد المركزي الأنابيب في 200 مرة ز لمدة أربع دقائق. تخلص من المُندفع، واغسل الخلايا بـ 10 ملليلترات من N-2 المتوسطة، وكرر الطرد المركزي.إزالة ناظر من كل أنبوب، وإعادة تعليق الكريات الخلية من VZ وDG في مليلتر وميليلتر واحد من متوسطة B-27، على التوالي. قم بتميّز كل تعليق خلية بمزاج 40 ميكرومتر لإزالة أي نسيج غير مهضم. ثقافة الخلايا المصفاة في مرفق منخفضة للغاية 24-جيدا لوحة، وذلك باستخدام اثنين من الآبار لVZ وبيرامل واحدة لDG. إضافة 20 نانوغرام لكل ملليلتر من عامل النمو الليفي 2، و 20 نانوغرام لكل ملليلتر من عامل النمو البشرة لكل بئر، ثم احتضان لوحة في 37 درجة مئوية، 5٪ ثاني أكسيد الكربون، والرطوبة العالية لمدة 48 ساعة.بعد الحضانة، وإزالة نصف المتوسطة الثقافة واستبدالها ببي 27 المتوسطة الطازجة، تستكمل مع تركيزات مزدوجة من عوامل النمو. كرر هذه العملية كل يوم ثالث. في الأيام التي لا يكون فيها من الضروري تغيير الوسط الثقافي، أضف عوامل النمو إلى التركيز النهائي لـ 1X.تشكلت الخلايا العصبية من الخلايا الجذعية العصبية المعزولة من المنطقة دون البطينية و gyrus دنتات من كل من الإناث والذكور الكبار البراري voles. وعلى الرغم من وجود حطام في الثقافة الأولية، لم تكن توجد سوى الـ"neurophes" بعد مرورها الأول. وقد تم الحصول على عدد أكبر من الخلايا العصبية من المنطقة دون البطينية للأنثى مقارنة بالمنطقة دون البطينية للذكور، أو الجيروسكوبات الزفيرة للإناث والذكور على حد سواء، مما يشير إلى أن عدد الخلايا العصبية التي تم الحصول عليها يعتمد على المنطقة التكاثرية والجنس.قُسّر قطر الـ neurospheres في أيام 8 و11 و14. هو زاد تدريجيّا ل [فجر] ذكرا وأنثى في كلا مناطق عصبيّة, غير أنّ [نيووسفيرس] يستنتج من الذكر أدمغة كان صغيرة [إين فّو] إلى أنّ [إين فّي ا] من الدماغ أنثويّة. تم تمييز الـ neurosphers في اليوم السادس في وجود عوامل النمو، أو في اليوم 15 دون عوامل نمو.في اليوم السادس، في ظل ظروف غير متمايزة، عبرت الخلايا المشتقة من الغلاف العصبي عن نستين، وهي علامة للنسل العصبي. وكان من الممكن أيضا تحديد الخلايا الإيجابية المزدوجة الكورتين وعلامة الانتشار كي-67، التي تشير إلى وجود إما سلائف الخلايا العصبية أو الخلايا العصبية غير ناضجة. ومع ذلك، فإن عدم حوسبة كي-67 مع DCX يشير إلى وجود الأروميستات العصبية بعد اللتفت.في اليوم 15، في ظل ظروف التمايز، تم العثور على الخلايا العصبية الناضجة والخلايا ذات النمط الظاهري الدالي، مما يدل على إمكانات التمايز للخلايا المعزولة. عند محاولة هذا البروتوكول، نضع في اعتبارنا أن القدرة على التعرف وبعد الممارسة السابقة في microdissection أمر أساسي لعزل الخلايا فقط من المنافذ العصبية. بعد هذا البروتوكول، يمكن تصميم التجارب لتحديد الآليات المشاركة في انتشار وتمايز وبقاء الخلايا الجذعية والنسل العصبية، وهي عمليات لا تزال غير معروفة في المرج.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

تشريح والثقافة من الخلايا العصبية من النخاع الشوكي صواري الجنينية

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Organotypic Culture of Full-thickness Adult Porcine Retina

عضوي النمط ثقافة كاملة ، سمك الشبكية خنزيري الكبار

There is a recognized demand for in vitro models that can replace or reduce animal experiments. Porcine retina has a similar neuronal structure to human ...

Progenitor-derived Oligodendrocyte Culture System from Human Fetal Brain

السلف المستمدة من نظام الثقافة دبقية قليلة التغصن من دماغ الجنين البشري

Differentiation of human neural progenitors into neuronal and glial cell types offers a model to study and compare molecular regulation of neural cell ...

An In-vitro Preparation of Isolated Enteric Neurons and Glia from the Myenteric Plexus of the Adult Mouse

An In-vitro Preparation of Isolated Enteric Neurons and Glia from the Myenteric Plexus of the Adult Mouse

على<em&gt; في المختبر</em&gt; إعداد الخلايا العصبية المعوية المعزولة والدبقية من الضفيرة العضلية المعوية من الماوس الكبار

The enteric nervous system is a vast network of neurons and glia running the length of the gastrointestinal tract that functionally controls ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

ماوس واحدة، واثنين من الثقافات: العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية العصبية من المناطق العصبية اثنان من الفئران الفردية

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...

Lineage-reprogramming of Pericyte-derived Cells of the Adult Human Brain into Induced Neurons

النسب-إعادة برمجة الخلايا المشتقة من خلية حوطية الدماغ البشري الكبار في الخلايا العصبية المستحثة

Direct lineage-reprogramming of non-neuronal cells into induced neurons (iNs) may provide insights into the molecular mechanisms underlying neurogenesis ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية البالغة العصبية من المنطقة تحت الثفني ماوس

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

وبسيطة خطوة واحدة بروتوكول تشريح لجبل لالجامع إعداد الكبار<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; أدمغة

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Simple Generation of a High Yield Culture of Induced Neurons from Human Adult Skin Fibroblasts

جيل بسيطة من ثقافة عالية الغلة المستحث الخلايا العصبية من الخلايا الليفية الجلد الكبار البشرية

Induced neurons (iNs), the product of somatic cells directly converted to neurons, are a way to obtain patient-derived neurons from tissue that is easily ...

Generation of Neurospheres from Mixed Primary Hippocampal and Cortical Neurons Isolated from E14-E16 Sprague Dawley Rat Embryo

جيل من المجالات العصبية من الخلايا العصبية خلية فرس النهر الأولية المختلطة والقشرية معزولة عن E14-E16 سبراغ دولي الفئران الجنين

Primary neuron culture is an essential technique in the field of neuroscience. To gain deeper mechanistic insights into the brain, it is essential to have ...