Name: extra cellular matrix-based and extra cellular matrix-free generation of murine testicular organoids
Uploaded: 2020-10-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Extra Cellular Matrix-Based and Extra Cellular Matrix-Free Generation of Murine Testicular Organoids at JoVE.com

Эта работа финансировалась Национальными институтами здравоохранения, Национальным институтом детского здоровья и развития человека (NICHD) F31 HD089693, Национальным институтом экологических наук здоровья / Национальным центром продвижения трансляционных наук (NIEHS/NCATS) UH3TR001207 и 4UH3ES029073-03, а также Мемориальным профессором Томаса Дж.
Авторы хотели бы поблагодарить Эрика В. Рота за помощь в передаче электронной микроскопии. В этой работе использовался объект BioCryo Центра NUANCE Северо-Западного университета, который получил поддержку от ресурса мягкой и гибридной нанотехнологии (SHyNE) (NSF ECCS-1542205); программа MRSEC (NSF DMR-1720139) в Научно-исследовательском центре материалов; Международный институт нанотехнологий (IIN); и штата Иллинойс, через IIN. Он также использовал оборудование CryoCluster, которое получило поддержку от программы МРТ (NSF DMR-1229693). Графика на рисунке 1 была разработана с использованием BioRender.com.

Все эксперименты с мышью были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) Северо-Западного университета, и все процедуры были выполнены в соответствии с утвержденными МАКУК протоколами.
1. Подготовка энзиматических растворов для диссоциации тканей
<ol><li>И?...

С завершением этого протокола генерации органоидов, пользователь будет иметь четыре различных методов культуры доступны для них для сборки яичек конструкций и органоидов в ecM или ECM-свободной среде. Важно отметить, что все четыре метода позволяют исследователю неинвазивно наблюдать о?...

Органоиды яичек являются новаторской техникой для изучения развития яичек, сперматогенеза ифизиологии в пробирке 1,,2,,3,,4. Было изучено несколько методов для генерации органоидов; к ним относятся различные внеклеточные матричные (ЭКМ) и системы культуры, свободные от ЭКМ, как в двухмерных (2D), так и в трехмерных (3D) ориентациях. Различные методы генерации могут способствовать разработке различных стратегий клеточной сборки; это приводит к высокому уровню морфологической и функциональной изменчивости между опубликованными органоидными моделями. Цель этой статьи состоит в том, чтобы обсудить текущее состояние в пробирке тестикулярных моделей, и служить в качестве шаблона для будущих исследователей, при разработке яичек органоидных экспериментов. В рамках настоящего исследования в экспериментальном процессе и биологическом исходе определены и охарактеризованы четыре различных архетипа системы культуры. К ним относятся: 2D ECM-Free, 2D ECM, 3D ECM-Free и 3D ECM методы культуры. Представленные в настоящем деле стратегии призваны быть простыми, доступными и воспроизводимыми между различными лабораториями и исследовательскими группами.
Исторически для яичка, обозначение "in vitro", был использован для нескольких различных методов культуры яичек тканей и клеток. К ним относятся органотипические ткани / орган культуры методы (т.е.эксплант культуры) 5, изолированные семенной трубчатойкультуры 6,яичек клеточной культуры 7, и методы де Новотканиморфогенез (т.е., биологические конструкции и органоиды) 1 . Первые исследования в пробирке сперматогенез были проведены около 100 лет назад, с культурой кролика яичка explants в 19208, а затем в 1937 году с мышью explants9. В рамках этих первоначальных экспериментов сперматозоиды наблюдались в значительной степени вырождаются в течение первой недели культуры, хотя некоторые мейотически дифференциации клеток были определены. Напоминая эти исторические отчеты, тестис explant культуры был возрожден и оптимизирован в 2011 году, чтобы стать возможным методом для изучения яичка10. С 2011 года, explant культуры производится плодородия компетентных спермыв нескольких докладах 11,12,13. Тем не менее, из-за explant культуры зависимость от уже существующих местных труб яички, эти последние достижения более точно описаны как примеры "ex vivo" функции яичек и сперматогенез, функции тканей, которая была сохранена или возобновлена после удаления из организма организма. Несмотря на свою распространенность в литературе, долгосрочное поддержание зародышевых клеток и дифференциации в яичках explants является сложнойзадачей для репликации 14,15,16,17,18, особенно в течение таймфреймов достаточнодолго,чтобы полностью наблюдать в пробирке сперматогенез (35дней у мышей 19 и 74 у людей20). Это интригует, чтобы оценить, что многие из тех же проблем, с которыми сталкиваются 100 лет назад, все еще испытываются в ex vivo сперматогенез сегодня.
В отличается от подходов ex vivo, органоиды яичек de novo собраны микротызы, полностью генерируемые в пробирке из клеточных источников (т.е. первичных яичек). Тестикулярные органоиды обеспечивают творческую стратегию, чтобы обойти историческую зависимость поля от уже существующих местных тканей, и резюмировать биологии яичек полностью in vitro. Есть несколько требований, разделяемых большинством моделей органоидных тканей; к ним относятся (1) виво-миметическая морфология тканей или архитектура, (2) несколько основных типов клеток представленной ткани, (3) самосделки или самоорганизации в их поколении, и (4) способность имитировать некоторый уровень функциипредставленной ткани и физиологии 21,22,23,24. Для яичка, это может быть захвачено в четырех основных признаков: (1) включение основных типов яичек клеток, зародыши, Сертоли, Лейдиг, перитубулярные и другие интерстициальные клетки, (2) клеточной сборки тканей, (3) надлежащим образом разобщенные типы клеток в отдельные трубчатые отсеки (зародыши и сертолии) и интерстициальные области (все другие типы клеток), и (4) некоторую степень функции тканей (например, секреция репродуктивных гормонов или тканей). Учитывая исторические проблемы в поддержании дифференциации зародышевых клеток ex vivo и in vitro, повторение виво-миметических архитектур яичек (т.е. структур, напоминающих семенные трубочки) с дополнительными маркерами, предполагающими моделирование физиологии яичек (например, эндокринная функция), являются приоритетными вехами в направлении генерации органоидов, которые в один прекрасный день могут выдержать в пробирке.
Большинство опубликованных методов органоидов яичка воспользоваться коммерчески доступны ECM (например, коллагена или собственной ECM формулировки)25,26,27 или пользовательских источников ECMs (т.е. децеллюляризованных яичка ECM полученных гидрогели)28,29,30. Экзогенный ECM способствует образованию тканей de novo путем предоставления сборочно-поддерживающего эшафота для генерации тканей. ECM методы позволили впечатляющий уровень формирования тканей, в том числе некоторые присутствия зародышевых клеток и ткани-мимететическойморфологии 25,28. Тем не менее, ECMs они используют не всегда универсально доступны (т.е., decellularized ECM полученных гидрогели), и некоторые методы требуют сложных гель и клеточных ориентаций посева (например, 3-слойные градиенты ECM и 3D-печати)25,31,32. Методы, свободные от строительных лесов (например, висячие капли и неадъедерные пластины культуры)33,,34,35 такжесоздали надежные и высоко воспроизводимые органоиды без необходимости ECM гелей или эшафотов. Тем не менее, морфология тканей этих эшафот-свободных органоидов часто отличается от in vivo яички, и большинство из этих докладов включают биохимические добавки ECM длясодействия образованию тканей 33,34,36, или в качестве альтернативы, полагаться на центрифугации для принудительной агрегации клеток и уплотнения34, что делает их менее идеальными для изучения клеточной миграции и самоорганизации.
Четыре метода генерации органоидов, представленные в этой рукописи, включают как зависимые от ЭКМ, так и независимые стратегии, каждая из которых использует простое клеточное посевное, позволяющее осуществлять наблюдение за клеточной органоидной самосожжением. Все четыре метода могут быть выполнены из тех же подвесок клеток или могут использовать пользовательские и клеточного типа обогащенных популяций. Сила этих методов является способность наблюдать органоидов самостоятельно собираться в режиме реального времени, и непосредственно сравнить, как яичек структуры самостоятельной сборки между различными микроокноронами культуры. Фенотипические различия между этими четырьмя методами культуры должны быть рассмотрены для их воздействия на исследовательский вопрос или предмет следователя. Каждый метод производит биологические конструкции или органоиды в пределах 24 ч или менее. В заключение, методы, представленные здесь обеспечивают инструментарий органоидных методов сборки для изучения органоидной сборки яичек, развития тканей и физиологии яичек в пробирке.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 um Media Sterile Filters</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>scgpu05re</td>
			<td>For sterile filtering media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3&#946;HSD primary antibody</td>
			<td>Cosmo Bio Co</td>
			<td>K0607</td>
			<td>Leydig cell marker, 1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AlexaFluor 568 &#945;-Mouse</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-21202</td>
			<td>Fluorescence-tagged secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AlexaFluor 568 &#945;-Rabbit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A10042</td>
			<td>Fluorescence-tagged secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alpha Minimum Essential Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11-095-080</td>
			<td>Base of culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Worthington Bio</td>
			<td>LS004197</td>
			<td>For dissociation solution 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Membrane Matrix, LDEV-free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td>Extracellular matrix used for casting 2D and 3D ECM culture gels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess Cell counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C10227</td>
			<td>Autmated cell counter (hemacytometer machine)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess Cell Counting Chamber Slides</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C10228</td>
			<td>Hemacytometer slide for use with Countess automated counter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DDX4 primary antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>138540</td>
			<td>Spermatogonia marker, 1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I (2,280 u/mgDW)</td>
			<td>Worthington Bio</td>
			<td>LS002140</td>
			<td>For dissociation solution 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS 1X, + CaCl + MgCl</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14040182</td>
			<td>For reconstituting Hyaluronidase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline +Ca/+Mg</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14040117</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryo Grade H2O</td>
			<td>MIllipore Sigma</td>
			<td>W1503</td>
			<td>For reconstituting Collagenase I and Dnase I</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>16000044</td>
			<td>For quencing enzyme dissocation solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Follicle stimulating hormone</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab51888</td>
			<td>For long-term organoid culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human chorionic gonadotropin</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C1063</td>
			<td>For long-term organoid culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase, from bovine testes</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>H4272</td>
			<td>For dissociation solution 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inhibin B Enzyme-linked Immunosorbent Assay</td>
			<td>Ansh Labs</td>
			<td>AL-107</td>
			<td>Inhibin B ELISA Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut Serum Replacement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10828-028</td>
			<td>Serum source for Basal media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroTissues 3D Petri Dish micro-mold spheroids (24-35, 5x7 array)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>Z764051</td>
			<td>For 3D ECM-Free organoid fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc, Lab Tek II Chamber Slide System, 4-well</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12-565-7</td>
			<td>For 2D ECM-free, and 2D, 3D ECM culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td>Antibiotic for media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Richard-Allan Scientific; Histogel, Specimen processing gel</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>HG-4000-012</td>
			<td>For aiding paraffin embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOX9 primary antibody</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>AB5535</td>
			<td>Sertoli Marker, 1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tedklad Global Mouse Chow (Breeder)</td>
			<td>Teklad Global</td>
			<td>2920</td>
			<td>Mouse food without phytoestrogens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tedklad Global Mouse Chow (Maintenance)</td>
			<td>Teklad Global</td>
			<td>2916</td>
			<td>Mouse food without phytoestrogens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testosterone Enzyme-linked Immunosorbent Assay</td>
			<td>Calbiotech</td>
			<td>TE373S</td>
			<td>Testosterone ELISA Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15250061</td>
			<td>For cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;SMA primary antibody</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>A2547</td>
			<td>Peritubular marker, 1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;Catenin primary antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>610154</td>
			<td>Sertoli Cytoplasm marker, 1:100 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extra cellular matrix-based and extra cellular matrix-free generation of murine testicular organoids

Органоиды яичек обеспечивают инструмент для изучения развития яичек, сперматогенеза и эндокринологии in vitro. Несколько методов были разработаны для того, чтобы создать органоиды яичек. Многие из этих методов полагаются на внеклеточную матрицу (ЭКМ) для содействия сборке тканей de novo, однако существуют различия между методами с точки зрения биомиметического морфологии и функции тканей. Кроме того, существует мало прямых сравнений опубликованных методов. Здесь прямое сравнение делается путем изучения различий в протоколах генерации органоидов, с предоставленными результатами. Описаны четыре метода архетипического поколения: (1) 2D ECM-free, (2) 2D ECM, (3) 3D ECM-free и (4) 3D ECM культура. Для оценки генерации органоидов яичек были использованы три основных эталона. Это клеточная самосвека, включение основных типов клеток (Сертоли, Лейдиг, зародыш и перитубулярные клетки), а также соответствующая разобщенные архитектуры тканей. Из четырех протестированных сред 2D ECM и 3D ECM-свободные культуры генерировали органоиды с внутренними морфологиями, наиболее похожими на отечественные яички, включая де-ново-разобщенизацию трубчатых и интерстициальных типов клеток, развитие трубчатых структур и установленную долгосрочную эндокринную функцию. Все изучаемые методы использовали несортированные, первичные суспензии яичек мурина и использовали общедоступные культурные ресурсы. Эти методы генерации органоидов яичек обеспечивают очень доступный и воспроизводимый инструментарий для исследовательских инициатив в области органогенеза яичек и физиологии in vitro.

Органоидное поколение считалось неудачным, если клетки яичек не собирались в пределах 72 ч от культуры, однако, все методы, представленные здесь, собираются в пределах 24 ч при использовании несовершеннолетних (5 dpp) murine клеток. Отказ поколения биологической конструкции представлен как пр...

Watch this Scientific Journal Video about Extra Cellular Matrix-Based and Extra Cellular Matrix-Free Generation of Murine Testicular Organoids at JoVE.com

Extra Cellular Matrix-Based and Extra Cellular Matrix-Free Generation of Murine Testicular Organoids

Здесь описаны четыре метода генерации органоидов яичек из первичных неонатальных яичек, т.е. внеклеточной матрицы (ECM) и 2D и 3D-культуры ECM. Эти методы имеют несколько исследовательских применений и особенно полезны для изучения развития яичек и физиологии in vitro.

Дополнительные сотовые матрицы на основе и экстра сотовой матрицы свободного поколения Murine яичка органоидов

Testicular organoids provide a tool for studying testicular development, spermatogenesis, and endocrinology in vitro. Several methods have been developed ...

Эти протоколы позволяют пользователю производить большое количество структурно миметических и эндокринных функциональных органоидов яичек как в условиях, свободных от ЭКМ, так и в условиях 2D или 3D культуры. Эти методы воспроизводятся, легко применяются к стандартным биологическим лабораторным настройкам и используют только общие инструменты и материалы. Органоиды яичек являются новым инструментом для имитации сперматогенеза и репродуктивной эндокринологии в пробирке, и может в один прекрасный день позволить изучение в пробирке gametogenesis.Начните с размещения усыпленной мыши на коврик для вскрытия и стерилизации живота с 70% этанола. Палатка кожи нижней части живота с миппами и открыть его ножницами. Найдите яички в нижних левых и правых паховых областях живота и разрежьте их соединения с сосудами deferens и любой якорной соединительной ткани.Затем поднимите все яички от животного. Поместите его в чашку Петри предварительно equilibrated БМ. Под микроскопом вскрытия сделайте небольшой разрез в тунике альбугине на одном конце каждого яичка либо с небольшими микро-рассечением ножницами, либо нежно разрывая двумя мелкими типсами. Удерживая яичка с противоположного конца разреза, аккуратно сожмите его мелкими типсами и нажмите радикальным движением к отверстию в тунике, которое выпустит ткани яичка как один сплоченный кусок.Ткань разрезать на более мелкие кусочки. Поместите кусочки в один миллилитр довоенного раствора диссоциации один и инкубировать их при 37 градусов по Цельсию в течение 10 минут. После инкубации, осторожно тритурировать яички куски 50 раз с P1000 пипетки.Убедитесь, что трубоубийки отделены друг от друга и от интерстициальной ткани. Если сгустки остаются, инкубировать в течение дополнительных пяти минут и тритурировать снова. Добавьте 33 микролитров раствора гиалуронидазы на один миллилитр диссоциарной смеси.Затем тритурат 50 раз с P1000 пипетки и инкубировать образец при 37 градусов по Цельсию в течение пяти минут. После инкубации, тритурировать его 50 раз с P200 пипетки. После обеспечения того, чтобы не было видимых трубок или скоплений клеток, утолить ферменты диссоциации, добавив FBS до 10% от общего объема образца и тритурировать его несколько раз с P200 пипетки.Влажный центр 40 микрометровый ситечко клетки со средствами массовой информации и аспирировать его прочь, а затем добавить образец предварительно смочеется ситечко и фильтровать его для производства одноклеточной подвески. Центрифуга подвески при 100 раз г в течение семи минут. Откажитесь от супернатанта и повторно помеская клетки в свежем БМ. Подсчитайте жизнеспособные клетки на гемоцитометре, используя трипан синее исключение, затем повторно центрифуга и повторное использование их в свежем БМ. Для 2D ECM-свободной культуры, пластины одноклеточных суспензий непосредственно на четыре хорошо камеры слайдов и место слайдов в 35 градусов по Цельсию инкубатор.Для 2D ECM-культуры, обойтись 100 микролитров холодного один к одному разбавленной внеклеточной матрицы среды в четыре хорошо камеры слайд, гарантируя, что гель охватывает блюдо дно. Поместите слайд в инкубатор в течение как минимум 30 минут, чтобы ECM полимеризуется в гель, а затем добавить подвеску клетки сверху. Для 3D ECM-свободной культуры, место агарозы 3D Петри блюда в 24-ну культуры блюдо и покрыть их с одним миллилитр БМ. Пусть блюда равноденствия в БМ, по крайней мере 30 минут в 35 градусов по Цельсию инкубатор, а затем отказаться от БМ и повторить equilibration еще раз с одним миллилитров свежего БМ. Удалите все БМ из хорошо и обойтись 200 микролитров свежих БМ вокруг, но не внутри центральной ниши 3D Петри блюдо, а затем собрать все оставшиеся БМ изнутри центральной ячейки посева углубление микро хорошо вставить.Выделяйте одноклеточную подвеску в центральный углубление и аккуратно тритурировать вверх и вниз. Поместите блюдо в увлажненные 35 градусов по Цельсию инкубатор для культуры. На следующий день, медленно и осторожно удалить существующие средства массовой информации со всего агарозы 3D Петри блюдо и заменить один миллилитр свежего БМ. Органоиды должны были уплотняться на ночь, позволяя им отдыхать внизу.Для 3D культуры ECM подготовьтесь к одноклеточной подвеске, сочетая равные части клеточной подвески в БМ с холодным предварительно оттаял ecM. Тритурат несколько раз, чтобы убедиться, что он хорошо смешивается. Затем немедленно вылейте смесь в четырех-хорошо камерной слайд, гарантируя, что она охватывает все дно пластины.Инкубировать слайды камеры при 35 градусах по Цельсию и позволить его содержимому полимеризировать, по крайней мере 30 минут. После полимеризации добавьте 500 микролитров БМ поверх культуры. Культура всех видов органоидных моделей при 35 градусах по Цельсию.Для всех типов культур, обмен половины своих средств массовой информации со свежимИ БМ каждые два дня. Этот протокол был использован для достижения органоидного поколения в течение 24 часов с использованием несовершеннолетних клеток яичка мурина. Успешно сгенерированные ткани первоначально наблюдались как кластеры 3D-клеток.В средах ECM кластеры ячеек обладали четкой маржой между кластером и окружающей средой. Было также отмечено, что кластеры клеток мигрируют через ECM и объединяются. Культура 3D ECM требовала значительно больше времени для сборки структур de novo, чем все другие методы культуры.А культура, свободная от 3D ECM, производила самые большие кластеры с одним большим и компактным скоплением в каждой колодец из 3D-блюда агарозы Петри. Для оценки того, напоминают ли органоидные модели родную ткань, биологические конструкции были исследованы для клеточных маркеров и визуализированы с помощью иммунофлуоресценции. Методы, свободные от 2D ECM и 3D ECM, производили органоиды с внутренней морфологией, высокомиметической разобщенной яичек.Долгосрочный анализ был проведен на 3D ЭКМ-свободных собранных органоидов. Органоиды были культурны в течение 14 дней, а затем исследовали для клеток и структуры конкретных маркеров. Наблюдались трубчатые структуры.Органоиды, свободные от 3D ECM, также изучались для эндокринной функции в 12-недельной культуре со стимуляцией гонадотропина. Тестостерон и инхибин B были количественно из органоидных условий среды. После 12 недель, гонадотропины были удалены в течение 48 часов, в результате чего тестостерон и inhibin B концентрации уменьшаются.Когда гонадотропины были возвращены, концентрации гормонов значительно возросли, демонстрируя надлежащую эндокринную отзывчивость. Органоидная сборка использует автономное поведение жизнеспособных незрелых клеток яичек. Творческие эксперименты могут быть легко разработаны с помощью индивидуальных клеток отсортированы или гибридные смеси клеток.После посева клеток для количественной оценки органоидной самосожжения можно использовать живую видеосъему или промежуток времени. По всей культуре, органоиды и состояние среды могут быть собраны для гистологических и амино анализ анализов.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Экс Utero электропорации и Органотипической фрагмент Культура мыши ткани гиппокампа

Mouse genetics offers a powerful tool determining the role of specific genes during development. Analyzing the resulting phenotypes by immunohistochemical ...

Generation of Genetically Modified Organotypic Skin Cultures Using Devitalized Human Dermis

Генерация генетически модифицированных культур Органотипической кожи Использование нежизнеспособных Human дермы

Organotypic cultures allow the reconstitution of a 3D environment critical for cell-cell contact and cell-matrix interactions which mimics the function ...

Isolation of Murine Embryonic Hemogenic Endothelial Cells

Выделение мышиной эмбриональных кроветворных эндотелиальных клеток

The specification of hemogenic endothelial cells from embryonic vascular endothelium occurs during brief developmental periods within distinct tissues, ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Оценка травмы индуцированного старения и в естественных условиях перепрограммирования в скелетных мышцах

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

In Vivo Tracking of Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells in a Rat Knee Osteoarthritis Model with Fluorescent Lipophilic Membrane Dye

In Vivo Tracking of Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells in a Rat Knee Osteoarthritis Model with Fluorescent Lipophilic Membrane Dye

В естественных условиях Отслеживание человека жировой производные мезенхимальных стволовых клеток в мышиной модели артроз колена с красителем липофильных флуоресцентных мембраны

In order to support the clinical application of human adipose-derived mesenchymal stem cell (haMSC) therapy for knee osteoarthritis (KOA), we examined the ...

Visualization of Cellular Electrical Activity in Zebrafish Early Embryos and Tumors

Визуализация сотовой электрической активности в Zebrafish ранних эмбрионов и опухоли

Bioelectricity, endogenous electrical signaling mediated by ion channels and pumps located on the cell membrane, plays important roles in signaling ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Поколение эшафот бесплатно, трехмерные инсулина выражая Pancreatoids от мыши поджелудочной железы прародителями в пробирке

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

Индукция и проверки клеточного старения в первичных клеток человека

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Generation of Organoids from Mouse Extrahepatic Bile Ducts

Поколение Organoids от мыши внепеченочных желчных протоков

Cholangiopathies, which affect extrahepatic bile ducts (EHBDs), include biliary atresia, primary sclerosing cholangitis, and cholangiocarcinoma. They have ...

Generation of Multicellular Human Primary Endometrial Organoids

Поколение многоклеточных органов эндометрия человека

The human endometrium is one of the most hormonally responsive tissues in the body and is essential for the establishment of pregnancy. This tissue can ...