Name: extra cellular matrix-based and extra cellular matrix-free generation of murine testicular organoids
Uploaded: 2020-10-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Extra Cellular Matrix-Based and Extra Cellular Matrix-Free Generation of Murine Testicular Organoids at JoVE.com

Detta arbete finansierades av National Institutes of Health, National Institute of Child Health and Human Development (NICHD) F31 HD089693, National Institute for Environmental Health Sciences / National Center for Advancing Translational Sciences (NIEHS/NCATS) UH3TR001207 och 4UH3ES029073-03, och Thomas J. Watkin's Memorial Professorship.
Författarna vill tacka Eric W. Roth för deras hjälp med transmissionselektronmikroskopi. Detta arbete använt sig av BioCryo anläggningen i Northwestern University's NUANCE Center, som har fått stöd från Soft och Hybrid Nanotechnology Experimental (SHyNE) Resource (NSF ECCS-1542205); MRSEC-programmet (NSF DMR-1720139) vid Materials Research Center; internationella institutet för nanoteknik (IIN); och staten Illinois, genom IIN. Det gjorde också använda av CryoCluster utrustning, som har fått stöd från MRI programmet (NSF DMR-1229693). Grafik i figur 1 utformades med hjälp av BioRender.com.

Alla musexperiment godkändes av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) vid Northwestern University, och alla procedurer utfördes enligt IACUC-godkända protokoll.
1. Beredning av enzymatiska vävnad-dissociation lösningar
<ol><li>Använd två olika enzymatiska lösningar (Lösning 1 och lösning 2), båda gjorda med hjälp av en basal odlingsmedletlösning (BM).</li>
	<li>För att förbereda BM, tillsätt serum och penicillin-streptomycin till minsta väsentliga medelhöga ti...

Med slutförandet av denna organoid generation protokoll, kommer användaren att ha fyra olika kultur tekniker tillgängliga för dem för montering testikelkonstruktioner och organoider i antingen ECM eller ECM-fria miljöer. Viktigt, alla fyra metoder tillåter forskaren att icke-invasivt observera organoid självmontering över tiden genom time-lapse imaging eller videoinspelning, och att noninvasively samla betingade medier för analys av utsöndrade hormoner och cytokiner, utan störande vävnader under kultur. I al...

Testikelorganoider är en banbrytande teknik för att studera testikelutveckling, spermatogenes, och fysiologi in vitro1,2,3,4. Flera metoder har utforskats för organoid generation; dessa inkluderar en mängd olika extracellulära matrissystem (ECM) och ECM-fria odlingssystem, i både tvådimensionella (2D) och tredimensionella (3D) orienteringar. Olika generationsmetoder kan främja distinkta cellulära monteringsstrategier; detta resulterar i en hög nivå av morfologiska och funktionella variabilitet mellan publicerade organoidmodeller. Syftet med denna artikel är att diskutera det aktuella läget för in vitro testikelmodeller, och att fungera som en mall för framtida utredare, när man utformar testikelorganoida experiment. Inom den föreliggande studien definieras fyra olika kultursystems arketyper och karakteriseras i experimentell process och biologiskt utfall. Dessa inkluderar: 2D ECM-Free, 2D ECM, 3D ECM-Free, och 3D ECM-odlingsmetoder. De strategier som presenteras häri är avsedda att vara enkla, tillgängliga och mycket reproducerbara mellan olika laboratorier och forskargrupper.
Historiskt för testisen, beteckningen "in vitro", har använts för flera olika odlingsmetoder av testikelvävnader och celler. Dessa inkluderar organotypisk vävnad/organ odling metoder (dvs. explant kultur)5, isolerade seminiferous tubule kultur6, testikelcellsodling7, och metoder för de novo vävnad morphogenesis (dvs, biologiska konstruktioner och organoider)1. De första undersökningarna av in vitro-spermatogenes utfördes för ungefär 100 år sedan, med kulturen av kanintestis explants i 19208, och senare i 1937 med mus explants9. Inom dessa inledande experiment spermatogonia observerades till stor del urarta under den första veckan av kultur, även om vissa meiotically differentiera celler identifierades. Påminner om dessa historiska rapporter, testis explant kultur återupplivades och optimerades 2011 för att bli en genomförbar teknik för att studera testis10. Sedan 2011, explant kultur har producerat fertilitet kompetent spermie i flera rapporter11,12,13. Men på grund av explant kulturens beroende av redan existerande inhemska testis tubuli, dessa senaste framsteg är mer exakt beskrivs som exempel på "ex vivo" testikelfunktion och spermatogenes, vävnadsfunktion som bibehölls eller återupptogs vid avlägsnande från en organism kropp. Trots dess prevalens i litteraturen, långsiktiga könsceller underhåll och differentiering inom testikel explants är utmanande att replikera14,15,16,17,18, särskilt över tidsramar tillräckligt länge för att fullt ut observera in vitro spermatogenes (~ 35 dagar i möss19 och 74 hos människor20). Det är spännande att inse att många av de utmaningar som upplevdes för 100 år sedan, fortfarande upplevs inom ex vivo spermatogenes idag.
Annorlunda än ex vivo tillvägagångssätt, testikelorganoider är de novo monterade mikrotissues genereras helt in vitro från cellulära källor (dvs. primära testikelceller). Testikelorganoider ger en kreativ strategi för att kringgå fältets historiska tillit till redan existerande inhemska vävnad, och att rekapitulera testikelbiologi helt in vitro. Det finns flera krav som delas av de flesta organoid vävnadsmodeller; dessa inkluderar (1) in vivo-mimetic vävnad morfologi eller arkitektur, (2) flera större celltyper av den representerade vävnaden, (3) självmontering eller självorganisation i sin generation, och (4) förmågan att simulera en viss nivå av den representerade vävnadens funktion och fysiologi21,22,23,24. För testierna kan detta fångas upp i fyra större kännetecken: (1) införandet av större testikelcellstyper, groddar, Sertoli, Leydig, peritubular och andra interstitialceller, (2) cell-directed tissue assembly, (3) lämpligt-compartmentalized celltyper i separata tubular fack (könsceller och Sertoli) och interstitial regioner (alla andra celltyper), och (4) någon grad av vävnad funktion (t.ex., reproduktiv hormonsekretion eller vävnad svar, och könsceller underhåll och differentiering). Med tanke på de historiska utmaningarna i att upprätthålla könscellsdifferentiering ex vivo och in vitro, rekapitulation av in vivo-mimetic testikelarkitekturer (dvs strukturer som liknar seminiferous tubules) med ytterligare markörer som tyder på simulering av testikelfysiologi (t.ex. endokrina funktion), är prioriterade milstolpar mot att generera organoider som en dag kan upprätthålla i vitro spermaogenes.
Majoriteten av publicerade testikelorganoida metoder dra nytta av kommersiellt tillgängliga ECM (t.ex. kollagen eller egenutvecklade ECM formuleringar)25,26,27 eller custom-sourced ECMs (dvs, decellularized testis ECM-derived hydrogels)28,29,30. Exogen ECM främjar de novo vävnadsbildning genom att tillhandahålla en monterings-stödjande byggnadsställning för vävnadsgenerering. ECM metoder har gett en imponerande nivå av vävnadsbildning, inklusive vissa groddcell närvaro och vävnad-mimetic morfologi25,28. Men de ECM de utnyttjar är inte alltid allmänt tillgängliga (dvs. decellularized ECM-härledda hydrogels), och vissa metoder kräver sofistikerade gel och cell seedning orienteringar (t.ex. 3-lagers lutningar av ECM och 3D-utskrift)25,31,32. Byggnadsställningsfria metoder (t.ex. hängande droppe och nonadherent odlingsplattor)33,34,35 har också genererat robusta och mycket reproducerbara organoider utan behov av ECM-geler eller byggnadsställningar. Men vävnad morfologi av dessa byggnadsställning-fria organoider är ofta olika till in vivo testiklar, och de flesta av dessa rapporter införliva en biokemisk ECM tillsats för att främja vävnadsbildning33,34,36, eller alternativt, förlita sig på centrifugation för påtvingad cell aggregering och packning34, vilket gör dem mindre idealisk för att studera cell-riktad migration och självorganisering.
De fyra organoida generationsmetoderna som presenteras i detta manuskript omfattar både ECM-beroende och oberoende strategier, var och en med hjälp av enkel cellsådd som möjliggör observation av celldriven organoid självmontering. Alla fyra tekniker kan utföras från samma cell suspensioner eller kan använda sig av anpassade och cell-typ berikade populationer. En styrka av dessa metoder är förmågan att observera organoider självmontera i realtid, och att direkt jämföra hur testikelstrukturer själv montera mellan olika kultur mikromiljöer. De fenotypiska skillnaderna mellan dessa fyra odlingsmetoder bör övervägas för deras inverkan på forskningsfrågan eller föremål för prövaren. Varje metod producerar biologiska konstruktioner eller organoider inom 24 h eller mindre. Sammanfattningsvis de metoder som presenteras här ger en verktygslåda av organoid montering tekniker för att studera testikelorganoida församling, vävnad utveckling och testikelfysiologi in vitro.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 um Media Sterile Filters</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>scgpu05re</td>
			<td>For sterile filtering media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3&#946;HSD primary antibody</td>
			<td>Cosmo Bio Co</td>
			<td>K0607</td>
			<td>Leydig cell marker, 1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AlexaFluor 568 &#945;-Mouse</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-21202</td>
			<td>Fluorescence-tagged secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AlexaFluor 568 &#945;-Rabbit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A10042</td>
			<td>Fluorescence-tagged secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alpha Minimum Essential Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11-095-080</td>
			<td>Base of culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Worthington Bio</td>
			<td>LS004197</td>
			<td>For dissociation solution 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Membrane Matrix, LDEV-free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td>Extracellular matrix used for casting 2D and 3D ECM culture gels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess Cell counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C10227</td>
			<td>Autmated cell counter (hemacytometer machine)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess Cell Counting Chamber Slides</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C10228</td>
			<td>Hemacytometer slide for use with Countess automated counter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DDX4 primary antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>138540</td>
			<td>Spermatogonia marker, 1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I (2,280 u/mgDW)</td>
			<td>Worthington Bio</td>
			<td>LS002140</td>
			<td>For dissociation solution 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS 1X, + CaCl + MgCl</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14040182</td>
			<td>For reconstituting Hyaluronidase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline +Ca/+Mg</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14040117</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryo Grade H2O</td>
			<td>MIllipore Sigma</td>
			<td>W1503</td>
			<td>For reconstituting Collagenase I and Dnase I</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>16000044</td>
			<td>For quencing enzyme dissocation solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Follicle stimulating hormone</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab51888</td>
			<td>For long-term organoid culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human chorionic gonadotropin</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C1063</td>
			<td>For long-term organoid culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase, from bovine testes</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>H4272</td>
			<td>For dissociation solution 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inhibin B Enzyme-linked Immunosorbent Assay</td>
			<td>Ansh Labs</td>
			<td>AL-107</td>
			<td>Inhibin B ELISA Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut Serum Replacement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10828-028</td>
			<td>Serum source for Basal media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroTissues 3D Petri Dish micro-mold spheroids (24-35, 5x7 array)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>Z764051</td>
			<td>For 3D ECM-Free organoid fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc, Lab Tek II Chamber Slide System, 4-well</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12-565-7</td>
			<td>For 2D ECM-free, and 2D, 3D ECM culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td>Antibiotic for media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Richard-Allan Scientific; Histogel, Specimen processing gel</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>HG-4000-012</td>
			<td>For aiding paraffin embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOX9 primary antibody</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>AB5535</td>
			<td>Sertoli Marker, 1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tedklad Global Mouse Chow (Breeder)</td>
			<td>Teklad Global</td>
			<td>2920</td>
			<td>Mouse food without phytoestrogens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tedklad Global Mouse Chow (Maintenance)</td>
			<td>Teklad Global</td>
			<td>2916</td>
			<td>Mouse food without phytoestrogens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testosterone Enzyme-linked Immunosorbent Assay</td>
			<td>Calbiotech</td>
			<td>TE373S</td>
			<td>Testosterone ELISA Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15250061</td>
			<td>For cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;SMA primary antibody</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>A2547</td>
			<td>Peritubular marker, 1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;Catenin primary antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>610154</td>
			<td>Sertoli Cytoplasm marker, 1:100 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extra cellular matrix-based and extra cellular matrix-free generation of murine testicular organoids

Testikelorganoider ger ett verktyg för att studera testikelutveckling, spermatogenes, och endokrinologi in vitro. Flera metoder har utvecklats för att kunna skapa testikelorganoider. Många av dessa metoder förlitar sig på extracellulär matris (ECM) för att främja de novo vävnad montering, det finns dock skillnader mellan metoder i fråga om biomimetiska morfologi och funktion av vävnader. Dessutom finns det få direkta jämförelser av publicerade metoder. Här görs en direkt jämförelse genom att studera skillnader i organoid generation protokoll, med förutsatt resultat. Fyra arketypiska generationsmetoder: (1) 2D ECM-fri, (2) 2D ECM, (3) 3D ECM-fri, och (4) 3D ECM kultur beskrivs. Tre primära riktmärken användes för att bedöma testikelorganoid generation. Dessa är cellulära självmontering, införande av större celltyper (Sertoli, Leydig, groddar, och peritubular celler), och lämpligt uppdelade vävnad arkitektur. Av de fyra testade miljöerna genererade 2D ECM- och 3D ECM-fria kulturer organoider med interna morfologier som mest liknar inhemska testiklar, inklusive de novo-delutrymmet av tubular kontra interstitiell celltyper, utveckling av tubuli-liknande-strukturer, och en etablerad långsiktig endokrina funktion. Alla studerade metoder utnyttjas osorterade, primära murine testikelcell suspensioner och används vanligen tillgängliga kultur resurser. Dessa testikelorganoida generationen tekniker ger en mycket tillgänglig och reproducerbar verktygslåda för forskningsinitiativ i testikelorganogenes och fysiologi in vitro.

Organoid generation ansågs misslyckas om testikelceller inte själv montera inom 72 h av kultur, dock alla metoder som presenteras här montera inom 24 h när du använder juvenil (5 dpp) murin celler. Fel på biologisk konstruera generationen presenteras som en fortsättning av fritt upphängda celler (0 h kolumn i figur 1) även efter utökad kultur (72 h). I avsaknad av vävnad självmontering, någon uppenbar cell kluster lätt spridda i enskilda celler på ens mild manipulation (dvs. p...

Watch this Scientific Journal Video about Extra Cellular Matrix-Based and Extra Cellular Matrix-Free Generation of Murine Testicular Organoids at JoVE.com

Extra Cellular Matrix-Based and Extra Cellular Matrix-Free Generation of Murine Testicular Organoids

Här beskrivs fyra metoder för att generera testikelorganoider från primära neonatal murin testikelceller dvs, extracellulära matris (ECM) och ECM-fria 2D och 3D kultur miljöer. Dessa tekniker har flera forskningsapplikationer och är särskilt användbara för att studera testikelutveckling och fysiologi in vitro.

Extra Cellular Matrix-baserade och extra cellulära Matrix-Free Generation av Murine Testikelorganoider

Testicular organoids provide a tool for studying testicular development, spermatogenesis, and endocrinology in vitro. Several methods have been developed ...

Dessa protokoll gör det möjligt för användaren att producera ett stort antal strukturellt mimetiska och endokrina funktionella testikelorganoider i både ECM och DCM-fria miljöer i 2D eller 3D-odling villkor. Dessa tekniker är mycket reproducerbara, lätt tillämpas på standard biologiska laboratorieinställningar, och endast utnyttja gemensamma verktyg och material. Testikelorganoider är ett nytt verktyg för att simulera spermatogenes och reproduktiv endokrinologi in vitro, och kan en dag möjliggöra studier av in vitro gametogenesis.Börja med att placera den avlivade musen supine på en dissektion matta och sterilisera buken med 70%etanol. Tälta huden på nedre delen av buken med tänps och öppna den med sax. Lokalisera testikorna i nedre vänstra och högra inguinal regioner i buken och skär sina anslutningar till vas deferens och eventuella ankring bindväv.Lyft sedan hela testiken från djuret. Placera den i en petriskål av pre-equilibrated BM. Under ett dissekering mikroskop, gör ett litet snitt i tunica albuginea på ena änden av varje testis med antingen små mikro dissekering sax eller genom att försiktigt riva med två fina tlysp. Medan du håller testis från den motsatta änden av snittet, försiktigt pressa den med fina tänja och tryck i en svepande rörelse mot hålet i tunica, som kommer att släppa testikelvävnad som en sammanhängande pjäs.Skär vävnaden i mindre bitar. Placera bitarna i en milliliter av prewarm dissociation lösning en och inkubera dem på 37 grader Celsius i 10 minuter. Efter inkubationen triturtera försiktigt testikorna 50 gånger med en P1000-pipett.Se till att tubulina separeras från varandra och från den vardiska vävnaden. Om klumpar finns kvar, inkubera i ytterligare fem minuter och triturate igen. Tillsätt 33 mikroliter hyaluronidase stamlösning per en milliliter av dissociationsblandningen.Sedan triturate 50 gånger med en P1000 pipetter och inkubera provet på 37 grader Celsius i fem minuter. Efter inkubationen triturtera den 50 gånger med en P200-pipett. Efter att ha säkerställt att inga synliga tubler eller klumpar av celler är närvarande, släcka dissociation enzymer genom att lägga FBS till 10%av den totala volymen av provet och triturate det flera gånger med en P200 pipetter.Blöt mitten av en 40 mikrometer cell sil med media och aspirera bort det, tillsätt sedan provet till den förvråda silen och filtrera den för att producera en encellig suspension. Centrifugera suspensionen vid 100 gånger g i sju minuter. Kasta supernatant och resuspend cellerna i färska BM. Räkna de livskraftiga cellerna på en hemocytometer med trypan blå uteslutning, sedan åter centrifug och återanvända dem i färska BM. För 2D ECM-fri kultur, platta encelliga suspensioner direkt på fyra-väl kammare diabilder och placera bilderna i en 35 grader Celsius inkubator.För 2D ECM-kultur, dispensera 100 mikroliter av kalla en-till-en utspädd extracellulär matris medium i en fyra-väl kammare bild, se till att gelen täcker skålen botten. Placera bilden i inkubatorn i minst 30 minuter så att ECM att polymerisera till en gel, tillsätt sedan cellen suspension ovanpå. För en 3D ECM-fri kultur, placera agarrose 3D Petri rätter i en 24-brunn kultur skålen och täcka dem med en milliliter BM. Låt disken ekvilra i BM i minst 30 minuter i en 35 grader Celsius inkubator, sedan kasta BM och upprepa jämvikten en gång med en milliliter färsk BM. Ta bort alla BM från brunnen och dispensera 200 mikroliter av färsk BM runt men inte inuti centrum fördjupningen av 3D Petri-skålen, samla sedan eventuella kvarvarande BM från insidan av centrum cell seedningsfördjupning av mikro väl infoga.Dispensera encellsupphängningen i centrumfördjupningen och triturtera försiktigt upp och ner. Placera skålen i en befuktad 35 grader Celsius inkubator för kultur. På nästa dag, långsamt och försiktigt bort befintliga medier från runt agaros 3D Petri skålen och ersätta med en milliliter av färsk BM. De organoider bör ha komprimerat över natten, så att de kan vila längst ner.För 3D ECM-odling, förbered en encellig suspension genom att kombinera lika delar av cellupphängningen i BM med kall förtinad ECM. Triturate flera gånger för att säkerställa att det är väl blandat. Sedan omedelbart dispensera blandningen i en fyra-väl kammare slide, se till att den täcker hela botten av plattan.Inkubera kammaren glider på 35 grader Celsius och låt dess innehåll polymerisera i minst 30 minuter. Efter polymerisationen, tillsätt 500 mikroliter bm ovanpå kulturen. Kultur alla organoid modelltyper vid 35 grader Celsius.För alla kulturtyper, utbyte hälften av sina medier med färska BM varannan dag. Detta protokoll användes för att uppnå organoid generation inom 24 timmar med ungar murine testikelceller. Framgångsrikt genererade vävnader observerades ursprungligen som 3D-cell kluster.I ECM-miljöer hade cellklustren tydliga marginaler mellan klustret och deras omgivande miljö. Cellkluster observerades också för att migrera över ECM och säkring tillsammans. 3D ECM-kulturen krävde betydligt mer tid för att montera de novo-strukturer än alla andra odlingsmetoder.Och 3D ECM-fri kultur producerade de största klustren med ett enda stort och kompakt kluster inom varje brunn av 3D-agaros Petri-skålen. För att bedöma om de organoida modellerna liknar den inhemska vävnaden, var de biologiska konstruktioner probed för cell-specifika markörer och visualiseras med immunofluorescens. De 2D ECM och 3D ECM-fria metoder produceras organoider med en inre morfologi mycket mimetiska av testikel compartmentalization.En långsiktig analys utfördes på de 3D ECM-fria monterade organoider. Organoiderna var odlade i 14 dagar och sedan sonderade för cell och struktur-specifika markörer. Tubuli-liknande strukturer observerades.De 3D ECM-fria organoiderna studerades också för endokrina funktion i en 12-veckors kultur med gonadotropin stimulering. Testosteron och inhibin B var båda kvantifieras från organoid-conditioned medium. Efter 12 veckor, gonadotropiner togs bort för 48 timmar, orsakar testosteron och inhibin B koncentrationer att minska.När gonadotropinerna returnerades ökade båda hormonkoncentrationerna signifikant, vilket visade på korrekt endokrin reaktionsförmåga. Organoid montering drar nytta av det autonoma beteendet hos livskraftiga omogna testikelceller. Kreativa experiment kan lätt utformas genom att använda anpassade cell sorterade eller hybrid cell blandningar.Efter cell seeding, live video imaging eller time-lapse imaging kan användas för att kvantifiera organoid självmontering. Över kultur, organoider och tillstånd medium kan samlas in för histologiska och aminoanalys analyser.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Elektroporation och Organotypic Slice Kultur av Mouse hippocampus Tissue

Mouse genetics offers a powerful tool determining the role of specific genes during development. Analyzing the resulting phenotypes by immunohistochemical ...

Generation of Genetically Modified Organotypic Skin Cultures Using Devitalized Human Dermis

Generation av genetiskt modifierade Organotypiska Skin kulturer Använda devitaliserad Human Dermis

Organotypic cultures allow the reconstitution of a 3D environment critical for cell-cell contact and cell-matrix interactions which mimics the function ...

Isolation of Murine Embryonic Hemogenic Endothelial Cells

Isolering av murina embryonala Hemogenic endotelceller

The specification of hemogenic endothelial cells from embryonic vascular endothelium occurs during brief developmental periods within distinct tissues, ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Utvärdering av nervskade-inducerad åldras och In Vivo omprogrammering i skelettmuskulaturen

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

In Vivo Tracking of Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells in a Rat Knee Osteoarthritis Model with Fluorescent Lipophilic Membrane Dye

In Vivo Tracking of Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells in a Rat Knee Osteoarthritis Model with Fluorescent Lipophilic Membrane Dye

In Vivo Spårning av mänskliga Adipose-derived mesenkymala stamceller i en råtta knä artros modell med fluorescerande lipofila membran färgämne

In order to support the clinical application of human adipose-derived mesenchymal stem cell (haMSC) therapy for knee osteoarthritis (KOA), we examined the ...

Visualization of Cellular Electrical Activity in Zebrafish Early Embryos and Tumors

Visualisering av cellulära elektrisk aktivitet i zebrafiskar tidiga embryon och tumörer

Bioelectricity, endogenous electrical signaling mediated by ion channels and pumps located on the cell membrane, plays important roles in signaling ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation av byggnadsställning-fri, tredimensionella Insulin att uttrycka Pancreatoids från mus bukspottskörteln föräldraparets In Vitro

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

Induktion och validering av cellulära åldras i primära mänskliga celler

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Generation of Organoids from Mouse Extrahepatic Bile Ducts

Generation av Organoids från mus extrahepatiska gallgångarna

Cholangiopathies, which affect extrahepatic bile ducts (EHBDs), include biliary atresia, primary sclerosing cholangitis, and cholangiocarcinoma. They have ...

Generation of Multicellular Human Primary Endometrial Organoids

Generering av Multicellulära humana primära Endometrieorganoider

The human endometrium is one of the most hormonally responsive tissues in the body and is essential for the establishment of pregnancy. This tissue can ...