Name: use of primary cultured hippocampal neurons to study the assembly of axon initial segments
Uploaded: 2021-02-12T13:30:00
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我们感谢加里·班克博士对神经元培养协议的建议。这项工作得到了霍华德·休斯医学研究所、美国国家卫生研究院的资助和乔治·巴特·盖勒教授职位（V.B）的支持。

注：这种产后0天ANK3-E22/23f/f小鼠的海马神经元培养方法改编自加里·班克的胶质/神经元共同培养系统。因此，使用消毒工具在清洁罩中进行解剖后执行所有步骤至关重要。此协议最多需要 1 个月。工作流程显示在图3 中。该协议遵循杜克大学的动物指南。
1. 准备盖片和神经元电镀菜肴
<ol><li>在文化日前至少一周，盖片架上的负载盖片，?...

<ol>
	<li>Nelson, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction:+Ankyrin-G+regulates+forebrain+connectivity+and+network+synchronization+via+interaction+with+GABARAP.">Correction: Ankyrin-G regulates forebrain connectivity and network synchronization via interaction with GABARAP.</a> Molecular Psychiatry. , (2019).</li><li>Tseng, W. C., Jenkins, P. M., Tanaka, M., Mooney, R., Bennett, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Giant+ankyrin-G+stabilizes+somatodendritic+GABAergic+synapses+through+opposing+endocytosis+of+GABAA+receptors.">Giant ankyrin-G stabilizes somatodendritic GABAergic synapses through opposing endocytosis of GABAA receptors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the U S A. 112 (4), 1214-1219 (2015).</li><li>Tai, Y., Gallo, N. B., Wang, M., Yu, J. R., Van Aelst, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axo-axonic+Innervation+of+Neocortical+Pyramidal+Neurons+by+GABAergic+Chandelier+Cells+Requires+AnkyrinG-Associated+L1CAM.">Axo-axonic Innervation of Neocortical Pyramidal Neurons by GABAergic Chandelier Cells Requires AnkyrinG-Associated L1CAM.</a> Neuron. 102 (2), 358-372 (2019).</li><li>Hofflin, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+the+Axon+Initial+Segment+in+Interneurons+and+Pyramidal+Cells+of+Rodent+Visual+Cortex.">Heterogeneity of the Axon Initial Segment in Interneurons and Pyramidal Cells of Rodent Visual Cortex.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 332 (2017).</li><li>Schluter, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+Plasticity+of+Synaptopodin+in+the+Axon+Initial+Segment+during+Visual+Cortex+Development.">Structural Plasticity of Synaptopodin in the Axon Initial Segment during Visual Cortex Development.</a> Cerebral Cortex. 27 (9), 4662-4675 (2017).</li><li>Kuba, H., Oichi, Y., Ohmori, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+activity+regulates+Na(+)+channel+distribution+at+the+axon+initial+segment.">Presynaptic activity regulates Na(+) channel distribution at the axon initial segment.</a> Nature. 465 (7301), 1075-1078 (2010).</li><li>Grubb, M. S., Burrone, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+relocation+of+the+axon+initial+segment+fine-tunes+neuronal+excitability.">Activity-dependent relocation of the axon initial segment fine-tunes neuronal excitability.</a> Nature. 465 (7301), 1070-1074 (2010).</li><li>Pan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+common+ankyrin-G-based+mechanism+retains+KCNQ+and+NaV+channels+at+electrically+active+domains+of+the+axon.">A common ankyrin-G-based mechanism retains KCNQ and NaV channels at electrically active domains of the axon.</a> Journal of Neuroscience. 26 (10), 2599-2613 (2006).</li><li>Cooper, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Made+for+"anchorin":+Kv7.2/7.3+(KCNQ2/KCNQ3)+channels+and+the+modulation+of+neuronal+excitability+in+vertebrate+axons.">Made for "anchorin": Kv7.2/7.3 (KCNQ2/KCNQ3) channels and the modulation of neuronal excitability in vertebrate axons.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 22 (2), 185-192 (2011).</li><li>Zhou, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AnkyrinG+is+required+for+clustering+of+voltage-gated+Na+channels+at+axon+initial+segments+and+for+normal+action+potential+firing.">AnkyrinG is required for clustering of voltage-gated Na channels at axon initial segments and for normal action potential firing.</a> The Journal of Cell Biology. 143 (5), 1295-1304 (1998).</li><li>Kordeli, E., Lambert, S., Bennett, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AnkyrinG.+A+new+ankyrin+gene+with+neural-specific+isoforms+localized+at+the+axonal+initial+segment+and+node+of+Ranvier.">AnkyrinG. A new ankyrin gene with neural-specific isoforms localized at the axonal initial segment and node of Ranvier.</a> Journal of Biological Chemistry. 270 (5), 2352-2359 (1995).</li><li>Jenkins, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Giant+ankyrin-G:+a+critical+innovation+in+vertebrate+evolution+of+fast+and+integrated+neuronal+signaling.">Giant ankyrin-G: a critical innovation in vertebrate evolution of fast and integrated neuronal signaling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the U S A. 112 (4), 957-964 (2015).</li><li>Jenkins, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=E-cadherin+polarity+is+determined+by+a+multifunction+motif+mediating+lateral+membrane+retention+through+ankyrin-G+and+apical-lateral+transcytosis+through+clathrin.">E-cadherin polarity is determined by a multifunction motif mediating lateral membrane retention through ankyrin-G and apical-lateral transcytosis through clathrin.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (20), 14018-14031 (2013).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nature Protocol. 1 (5), 2406-2415 (2006).</li><li>Berger, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localized+Myosin+II+Activity+Regulates+Assembly+and+Plasticity+of+the+Axon+Initial+Segment.">Localized Myosin II Activity Regulates Assembly and Plasticity of the Axon Initial Segment.</a> Neuron. 97 (3), 555-570 (2018).</li><li>Yang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurodevelopmental+mutation+of+giant+ankyrin-G+disrupts+a+core+mechanism+for+axon+initial+segment+assembly.">Neurodevelopmental mutation of giant ankyrin-G disrupts a core mechanism for axon initial segment assembly.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the U S A. 116 (39), 19717-19726 (2019).</li></ol>

AIS 的大会由 480 kDa 安基林 - G 组织。然而，安基林-G具有较短的等形，可以瞄准野生型神经元的AIS，这可能导致难以解释AIS装配的结构功能分析。在这里，我们介绍了一种使用来自ANK3-E22/23-flox小鼠的神经元的方法，允许研究AIS的无结。 通过在 3 分与 Cre-BFP 传输，我们消除了安基林-G 的所有内源同位素。我们也可以共同翻译 480 kda 安基林 - G， 以拯救 Ais 的形成。这允许在一个干净的?...

轴向初始段位于大多数脊椎动物神经元的近轴。在功能上，AIS 是由于该地区电压门钠通道的高密度而启动行动潜力的地方。一些兴奋神经元的AIS也通过形成GABAergic突触1，2，3成为抑制性内质体的目标。因此，AIS 是集成细胞信号和调节神经元兴奋性的关键站点。AIS 通常长度为 20-60 μm，位于细胞体的 20μm 范围内。AIS的长度和位置在大脑区域的神经元以及同一神经元4、5的不同发育阶段各不相同。累积的证据表明，AIS的组成和位置是动态的，以响应神经元活动的变化4，5，6，7。
480 kDa安基林-G是AIS的主要组织者。480 kDa 安基林-G 是一种膜相关适配器蛋白，直接与电压门控钠通道以及其他主要 AIS 蛋白质（包括β4-spectrin） 结合， KCNQ2/3 通道调节钠通道活性8、9和 186 kDa 神经法辛，L1CAM 将 GABAergic 突触导导到 AIS2、10。480 kDa 安基林-G 共享在短 190 kDa 安基林-G 等形形式 （ANK 重复， 幽灵绑定域， 监管域） 中发现的规范安基林域， 但由一个巨大的外显子区分， 只存在于脊椎动物中， 并特别表示在神经元 （图 1A）11，12。AIS形成12需要480 kDa安基林-G神经元特定域（NSD）。190 kDa 安基林-G 不促进 AIS 组装或目标 AIS 在安基林 - G - 空神经元12。然而，190 kDa安基林-G集中在AIS包含480千达安基林-G12。190 kDa 安基林-G 瞄准野生类型神经元预组装 AIS 的能力在文献中引起了混乱，并减缓了对 AIS 组装中 480 kDa ankyrin-G 关键专业功能的欣赏。因此，在缺乏预组装AIS的安基林-G-空神经元中研究AIS组件至关重要。
在这里，我们提出了一种方法，利用来自ANK3-E22/23-flox小鼠的培养海马神经元来研究AIS的组装和结构，该神经元消除了安基林-G13的所有等形形式（图1B）。通过在AIS组装之前用Cre-BFP结构传输神经元，我们生成了完全缺乏AIS的安基林-G缺乏神经元（图1B，图2）。AIS 的组装在与 Cre-BFP 质粒共同传输 480 kDa 安基林 - G - GFP 质粒后完全获救。此方法提供了在非预组装 AIS 环境中研究 AIS 装配的方法。我们还修改了Gary Banker的胶质-神经元共同培养系统，没有使用抗生素，以前为胚胎日18神经元设计，用于产后小鼠神经元，并调整AIS量数方法，平均AIS测量从多个神经元，以正常化AIS14，15的变化。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10xHBSS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14065-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18mm coverglass (1.5D)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-545-84-1D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>190kDa ankyrin-G-GFP</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#31059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5% Tripsin without phenol red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14065-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>480kDa ankyrin-G-GFP</td>
			<td>lab made</td>
			<td>Provide upon request</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANK3-E22/23f/f mice</td>
			<td>JAX</td>
			<td>Stock No: 029797</td>
			<td>B6.129-Ank3tm2.1Bnt/J;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 serum-free supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A3582801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B6768</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer with 70-mm mesh</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ceramic coverslip-staining rack</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>8542E40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre-BFP</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#128174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11995073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX-I supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1286001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11668030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM with Earle&#8217;s salts and L-glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11095-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>21103-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitric acid 70%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>225711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>31985062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>26124-78-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1310-58-3</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of primary cultured hippocampal neurons to study the assembly of axon initial segments

神经元轴星初始片段 （AIS） 是行动潜力的启动点，并对其分子结构、组装和活动依赖可塑性进行了广泛的研究。AIS的主要组织者巨型安基林-G直接与膜跨电压门控钠（VSVG）和钾通道（KCNQ2/3）以及186 kDa神经法辛（L1CAM细胞粘附分子）关联。巨型安基林-G还与细胞质AIS分子结合并招募，包括β-4-光谱素，以及微管结合蛋白EB1/EB3和Ndel1。巨型安基林-G足以在安基林-G缺乏神经元中拯救AIS的形成。Ankyrin-G 还包括一个较小的 190 kDa 等位体，位于树突状脊柱，而不是 AIS，它无法瞄准 AIS 或在安基林 - G 缺乏神经元中拯救 AIS。在这里，我们描述了一个协议，使用培养海马神经元从ANK3-E22/23-flox小鼠，当与Cre-BFP的传输显示失去所有同位素-G和损害AIS的形成。 结合经过改造的银行家胶质/神经元共培养系统，我们开发了一种用480 kDa安基林-G-GFP质粒来传输安基林-G空神经元的方法，这足以挽救AIS的形成。我们进一步采用了由Salzer及其同事开发的量化方法，以处理AIS与海马神经元培养物中发生的神经元细胞体距离的变化。该协议允许对 AIS 的无组件和动态行为进行定量研究。

一整套实验应包括Cre-BFP仅将转染为负控制，Cre-BFP加480 kDa安基林-G共同变质作为正对照，将非转染条件作为技术控制。在Cre-BFP中，仅控制，变质神经元缺乏AIS标记的积累，包括安基林-G（安克格）、β4-光谱素（β4-光谱素）、神经法辛（Nf）和电压门控钠通道（VSVG）（图4A）16。相比之下，Cre 和 480 kDa 安基林-G 共同传输的神经元已经完全组装了 AIS，该神经元...

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Use of Primary Cultured Hippocampal Neurons to Study the Assembly of Axon Initial Segments

在这里，我们描述了一个协议，定量地研究海马神经元的轴向初始段 （AIS） 的组装和结构，由于没有一个巨大的安基林-G，缺乏预组装的 AIS。

使用初级培养的希波坎帕神经元来研究Axon初始片段的组装

Neuronal axon initial segments (AIS) are sites of initiation of action potentials and have been extensively studied for their molecular structure, ...

此协议用于定量研究由于缺少巨型安基林-G而缺乏预组装 AIS 的希波坎地区神经元的轴向初始片段的组装和结构。首先，从产后解剖六到八只海马，一天大的幼崽在培养皿中带有HBSS介质。用解剖剪刀将海马切成小块，然后从菜中转移到15毫升的管子上。用五毫升的 HBSS 两次清洗海马，洗净后将它们放在 4.5 毫升的 HBSS 中。将 0.5 毫升 2.5% 的 trypsin 添加到 4.5 毫升 HBSS 中，在 37 摄氏度的水浴中孵育 15 分钟，每 5 分钟倒管一次。消化良好的海马应该变得粘稠，并形成一个集群。如果需要，再延长消化五分钟。每次洗三次HBSS清洗海马，每次洗五分钟。洗涤后，加入两毫升的 HBSS 和移液器海马上下用巴斯德移液器 15 次。用火抛光的巴斯德移液器将组织修剪10次，将管子休息5分钟，直到所有块都固定在底部。重复与剩余块的三次，直到他们中的大多数已经消失。然后，使用一毫升移液器尖端将含有分离神经元的超自然体轻轻地转移到电镀盘上。直接将其添加到预孵化电镀介质中，轻轻摇动板。播种后两到四个小时，用光显微镜检查电镀盘。大多数神经元应该附着在盖滑上。使用细尖钳，翻转盖滑到胶质细胞馈线盘包含预先条件的神经元培养介质与蜡点侧朝下。神经元可以在胶质细胞喂食器中生长长达一个月。每七天用一毫升新鲜神经元培养介质喂养神经元。在体外的第三天，翻转盖滑与蜡点侧朝上进入一个胶质细胞馈线盘与条件神经元培养介质。将 0.25 微克 CRE BFP DNA 与 0.5 微克安基林-G GFP DNA 混合在 1.7 毫升管中，以传输四个盖片。最佳添加 100 微升。然后混合管子，放在架子上。如果只有CRE BFP被转染，GFP质子骨干用于匹配DNA的总量。将三微升的变异试剂与 100 微升最佳菌液混合在一个新的 1.7 毫升管中，并在室温下孵育管 5 分钟。然后，将先前混合的DNA中的100微升与100微升的转染试剂混合，并将其放在架子上5至10分钟。通过在不接触盖条的情况下插入介质正下方的尖端，在每个盖滑的顶部添加 50 微升 DNA 组合。派珀特缓慢，以避免传播DNA混合物。慢慢地将菜带回孵化器，并留在那里30至45分钟。翻转盖滑回家庭胶质喂食盘与蜡点侧朝下，并把菜回到孵化器。对于 AIS 定量，请打开斐济的 Z 系列图像，并生成图像的最大投影。从图像中减去空盖滑动背景信号后，沿 AIS 画一条线，确保线的宽度完全覆盖 AIS。在AIS信号在背景上方升起之前启动线路，并在它下降到后台后停止。测量沿线的平均像素强度，并将其导入电子表格。然后，运行 MATLAB 脚本以生成最终数字。实验应包括Cre-BFP仅将转染为负控制，Cre-BFP加480千达顿安基林-G共传递作为正对照，以及非转染条件作为技术控制。在Cre-BFP中，受感染的神经元缺乏AIS标记物的积累，包括安基林-G、β4光谱素、神经法辛和电压门控钠通道。相比之下，Cre 和 480 千达顿安基林-G 共同传输的神经元已完全组装 AIS，AIS 标记的存在就证明了这一点。重要的是要通过与非变质菜肴的比较来确认文化的质量。不健康的神经元往往显示异常的AIS结构，如停产或异位AIS。为了评估安基林-G人类神经发育障碍突变如何影响AIS组装，平均AIS强度绘制从索马到心斧。AIS 富集的蛋白质通常显示来自近轴的信号的快速增加和向离散轴发出的信号的缓慢减少。当与未变形 AIS 对齐时，突变曲线更宽，曲线峰值较低，表明 AIS 的结构变化。野生类型安基林-G组装AIS与未受感染的AIS紧密对齐。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection和胚胎小鼠海马和皮层神经元的原代培养

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

科研

神经科学

Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) of Fluorescence Tagged Proteins in Dendritic Spines of Cultured Hippocampal Neurons

Fluorescence Recovery After Photobleaching FRAP of Fluorescence Tagged Proteins in Dendritic Spines of Cultured Hippocampal Neurons

漂白后荧光标记蛋白的荧光恢复（FRAP）在培养海马神经元的树突棘

FRAP has been used to quantify the mobility of GFP-tagged proteins. Using a strong excitation laser, the fluorescence of a GFP-tagged protein is bleached ...

Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons

培养成年的背根神经节神经元轴突再生的遗传研究

It is well known that mature neurons in the central nervous system (CNS) cannot regenerate their axons after injuries due to diminished intrinsic ability ...

Imaging pHluorin-tagged Receptor Insertion to the Plasma Membrane in Primary Cultured Mouse Neurons

成像pHluorin标记插入到质膜受体原代培养的小鼠神经元

A better understanding of the mechanisms governing receptor trafficking between the plasma membrane (PM) and intracellular compartments requires an ...

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange (ABE)

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange ABE

检测蛋白质棕榈酰化培养海马神经元通过免疫沉淀和酰基-生物素交易所（ABE）

Palmitoylation is a post-translational lipid  modification involving the attachment of a 16-carbon saturated fatty acid,  palmitate, to cysteine residues ...

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

原代海马神经元的磷酸钙转染

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

Use of pHluorin to Assess the Dynamics of Axon Guidance Receptors in Cell Culture and in the Chick Embryo

使用普洛林来评估阿克森指导受体在细胞培养和小鸡胚胎中的动力学

During development, axon guidance receptors play a crucial role in regulating axons sensitivity to both attractive and repulsive cues. Indeed, activation ...

Imaging Dendritic Spines of Rat Primary Hippocampal Neurons using Structured Illumination Microscopy

成像大鼠原代海马神经元树突棘使用结构照明显微镜

Dendritic spines are protrusions emerging from the dendrite of a neuron and represent the primary postsynaptic targets of excitatory inputs in the brain. ...