Name: modeling hepatitis b virus infection in non-hepatic 293t-ne-3nrs cells
Uploaded: 2020-06-05T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af National Natural Science Foundation of China (nr. 81870432 og 81570567 til X.L.Z.), (nr. 81571994 til P.N.S.), Research Fund for International Young Scientists (nr. 81950410640 til W.I.); Li Ka Shing Shantou University Foundation (Nr. L1111 2008 til P.N.S.). Vi vil gerne takke prof. Stanley Lin fra Shantou University Medical College for nyttige råd.

Kultur, indsamling af supernatanter fra HepG2.2.15-celler og HBV-infektion bør udføres i laboratorium på niveau II (P2) eller biosikkerhedsniveau III (P3) i henhold til landets retningslinjer for biosikkerhed. Laboratoriesikkerhedspraksis bør følges for at sikre laboratoriepersonalets sikkerhed, og alle bør vaccineres og påvises HBsAb-positiv, før der udføres HBV-forsøg. Overhold cellernes tilstand ved hvert trin, før du fortsætter til næste trin. Human serum prøver blev anvendt i overensstemmelse med godke...

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+hepatitis+report,+2017.">Global hepatitis report, 2017.</a> World Health Organization. , (2017).</li><li>Yoffe, B., Burns, D. K., Bhatt, H. S., Combes, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+hepatitis+B+virus+DNA+sequences+in+patients+with+acute+hepatitis+B+infection.">Extrahepatic hepatitis B virus DNA sequences in patients with acute hepatitis B infection.</a> Hepatology. 12, 187-192 (1990).</li><li>Mason, A., Wick, M., White, H., Perrillo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+replication+in+diverse+cell+types+during+chronic+hepatitis+B+virus+infection.">Hepatitis B virus replication in diverse cell types during chronic hepatitis B virus infection.</a> Hepatology. 18, 781-789 (1993).</li><li>Yan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+taurocholate+cotransporting+polypeptide+is+a+functional+receptor+for+human+hepatitis+B+and+D+virus.">Sodium taurocholate cotransporting polypeptide is a functional receptor for human hepatitis B and D virus.</a> eLife. 1, 00049 (2012).</li><li>Tang, H., McLachlan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+regulation+of+hepatitis+B+virus+by+nuclear+hormone+receptors+is+a+critical+determinant+of+viral+tropism.">Transcriptional regulation of hepatitis B virus by nuclear hormone receptors is a critical determinant of viral tropism.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 1841-1846 (2001).</li><li>Sells, M. A., Chen, M. L., Acs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+hepatitis+B+virus+particles+in+Hep+G2+cells+transfected+with+cloned+hepatitis+B+virus+DNA.">Production of hepatitis B virus particles in Hep G2 cells transfected with cloned hepatitis B virus DNA.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84, 1005-1009 (1987).</li><li>Sells, M. A., Zelent, A. Z., Shvartsman, M., Acs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicative+intermediates+of+hepatitis+B+virus+in+HepG2+cells+that+produce+infectious+virions.">Replicative intermediates of hepatitis B virus in HepG2 cells that produce infectious virions.</a> Journal of Virology. 62, 2836-2844 (1988).</li><li>Watashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclosporin+A+and+its+analogs+inhibit+hepatitis+B+virus+entry+into+cultured+hepatocytes+through+targeting+a+membrane+transporter,+sodium+taurocholate+cotransporting+polypeptide+(NTCP).">Cyclosporin A and its analogs inhibit hepatitis B virus entry into cultured hepatocytes through targeting a membrane transporter, sodium taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP).</a> Hepatology. 59, 1726-1737 (2014).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defined+host+factors+support+HBV+infection+in+non-hepatic+293T+cells.">Defined host factors support HBV infection in non-hepatic 293T cells.</a> Journal of Cell and Molecular Medicine. 24, 2507-2518 (2020).</li><li>Xia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell-derived+hepatocytes+as+a+model+for+hepatitis+B+virus+infection,+spreading+and+virus-host+interactions.">Human stem cell-derived hepatocytes as a model for hepatitis B virus infection, spreading and virus-host interactions.</a> Journal of Hepatology. 66, 494-503 (2017).</li><li>Ortega-Prieto, A. M., Cherry, C., Gunn, H., Dorner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Model+Systems+for+Hepatitis+B+Virus+Research.">In Vivo Model Systems for Hepatitis B Virus Research.</a> ACS Infectious Diseases. 5, 688-702 (2019).</li><li>Liang, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B:+the+virus+and+disease.">Hepatitis B: the virus and disease.</a> Hepatology. 49, 13-21 (2009).</li><li>Nie, Y. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recapitulation+of+hepatitis+B+virus-host+interactions+in+liver+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Recapitulation of hepatitis B virus-host interactions in liver organoids from human induced pluripotent stem cells.</a> EBioMedicine. 35, 114-123 (2018).</li><li>Nishinakamura, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+kidney+organoids:+progress+and+remaining+challenges.">Human kidney organoids: progress and remaining challenges.</a> Nature Reviews Nephrology. 15, 613-624 (2019).</li></ol>

Her introducerer vi protokoller for HBV-infektion i ikke-lever 293T-NE-3NRs og hepatoma-baserede HepG2-NE-celler. 293T-NE-3NR'er var egnede til HBV-infektion ved både høj og lav GEq. Følgende kritiske trin skal tages i betragtning, når du bruger vores protokol. Cellestatus er en vigtig faktor for en vellykket infektion. Infektionsmediet skal skiftes rettidigt efter den indledende periode med HBV-infektion. 293T-NE-3NRs celler er typisk skrøbelige efter infektion med høje virale titere. Derfor skal disse celler vask...

Hepatitis B påvirker livet for mere end 2 milliarder mennesker og er en af de største trusler mod folkesundheden. Omkring 257 millioner mennesker er kronisk inficeret med hepatitis B-virus (HBV) på verdensplan, hvilket medfører en stor byrde for samfundet1. Hepatocytter er ikke de eneste celler inficeret med HBV og andre celler i ikke-levervæv, såsom nyre og testiker, er også inficeret med denne virus2,3. I øjeblikket, HBV infektion cellemodeller er begrænset til humane hepatocytter med kun få ikke-hepatisk celle linje modeller. Dette hæmmer studiet af HBV-infektion og HBV-relateret patologi af ikke-levervæv. Her præsenterer vi protokoller for at studere HBV-infektion i ikke-lever 293T celler samt i hepatoma-baserede celler.
Natrium taurocholate co-transport polypeptid (NTCP) er en funktionel receptor for human hepatitis B og hepatitis D virus4. Hepatocyt nuklear faktor 4α (HNF4α), retinoid X receptor α (RXRα) og peroxisome proliferator-aktiveret receptor α (PPARα) er leverberigede transskriptionsfaktorer, der begrænser viral tropisme i HBV. De er blevet verificeret for at fremme HBV pregenomic RNA syntese og støtte HBV replikation i en nonhepatoma cellelinje5. Vi konstrueret tre forskellige cellelinjer, HepG2 cellelinjer udtrykker NTCP (HepG2-NE), 293T cellelinje udtrykker NTCP (293T-NE) og 293T cellelinje udtrykke fire vært gener; NTCP, HNF4α, RXRα og PPARα (293T-NE-3NRs). Der blev udviklet to metoder til HBV-infektion baseret på 293T-NE-3NRs (figur 1). Den første metode anvender vaccination i 293T-NE-3NRs med høj viral genomækvivalens (høj GEq (150), DMSO og PEG8000) i 24 timer. Den anden metode anvender co-dyrkning 293T-NE-3NRs med HepG2.2.15, som kan producere HBV partikler (lav GEq (ca. 1,83) uden DMSO og PEG8000), og dermed tæt efterligne naturlige forhold.
HepG2.2.15 celler er afledt af HepG2 linje og kronisk udskiller infektiøse HBV, samt subvirale partikler i kulturmediet6,7. Cyclosporin A (CsA) er et immunhæmmende middel, der anvendes klinisk til undertrykkelse af xenograftafstødning. Undersøgelser har vist, at CsA hæmmer HBV's indtræden i dyrkede hepatocytter ved at hæmme NTCP's transportaktivitet og blokere bindingen af NTCP til store kuvertproteiner8.
HepG2-NE-celler blev anvendt som positiv kontrol, mens CsA-behandlede celler blev anvendt som negativ kontrol. Ved at sammenligne med de positive og negative kontrolgrupper kan vi finde ud af, hvilke værtsgener der spiller en afgørende rolle i HBV-infektion. Derudover, gennem denne form for HBV infektion, kan vi også finde andre nye mekanismer eller vært gener involveret i HBV infektion.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.45&#956;m membrane filter</td>
			<td>Millex-HV</td>
			<td>SLHU033RB</td>
			<td>Filter for HepG 2.2.15 supernatant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T-NE</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T-NE-3NRs</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>594 labeled goat against rabbit IgG</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZF-0516</td>
			<td>For immunofluorescence assay,second antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>TCP010006</td>
			<td>For co-culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra 15 ml</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC910008</td>
			<td>For concentration of HepG 2.2.15 supernatant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>ST023</td>
			<td>For immunofluorescence assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclosporin A</td>
			<td>Sangon biotech</td>
			<td>59865-13-3</td>
			<td>inhibitor of HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C1006</td>
			<td>For nuclear staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diagnostic kit for Quantification of Hepatitis B Virus DNA(PCR-Fluorescence Probing)</td>
			<td>DAAN GENE</td>
			<td>7265-2013</td>
			<td>For HBV DNA detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>HyClong</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5879</td>
			<td>For improvement of infection efficiency</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum&#65288;FBS&#65289;</td>
			<td>CLARK Bioscience</td>
			<td>FB25015</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Axio observer Z1</td>
			<td>For immunofluorescence assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HepG2-NE</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBcAg antibody</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZA-0121</td>
			<td>For immunofluorescence assay, primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZLI-9062</td>
			<td>For cell wash</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG8000</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P8260</td>
			<td>For infection medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin-Glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10378016</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transwell</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>3412</td>
			<td>For co-culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>sigma-Aldrich</td>
			<td>WXBB7485V</td>
			<td>For PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virkon</td>
			<td>Douban</td>
			<td>6971728840012</td>
			<td>Viruside</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling hepatitis b virus infection in non-hepatic 293t-ne-3nrs cells

HBV hovedsageligt inficerer humane hepatocytter, men det har også vist sig at inficere extrahepatic væv såsom nyre og testikler. Ikke desto mindre er cellebaserede HBV-modeller begrænset til hepatomacellelinjer (såsom HepG2 og Huh7), der overexpresserer en funktionel HBV-receptor, natrium taurocholate-co-transport af polypeptid (NTCP). Her brugte vi 293T-NE-3NRs (293T overexpressing humanE NTCP, HNF4α, RXRα og PPARα) og HepG2-NE (HepG2 overexpressing NTCP) som modelcellelinjer.   HBV-infektion i disse cellelinjer blev udført enten ved hjælp af koncentrerede HBV-viruspartikler fra HepG2.2.15 eller ved co-culturing HepG2.2.15 med målcellelinjerne. HBcAg immunofluorescens for HBcAg blev udført for at bekræfte HBV-infektion. De to metoder, der præsenteres her, vil hjælpe os med at studere HBV-infektion i ikke-levercellelinjer.

Vi konstruerede pSIN-NTCP-EGFP plasmid, der udtrykker NTCP- og EGFP-fusion og med puromycinresistens. Plasmidet blev transficeret til HepG2- og 293T-celler for at konstruere stabile cellelinjer HepG2-NE og 293T-NE, der udtrykker NTCP og EGFP. Plasmider (pSIN-HNF4α, pSIN-RXRα, pLV-PPARα-puro-flag) med puromycinresistens og udtryk blev transficeret til 293T-NE-celler for at konstruere en stabil cellelinje, der udtrykker 4 værtsgener9. Udtrykket ntcp-EGFP kan observeres ved grøn fluorescens, og ...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells at JoVE.com

Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells

Dette manuskript beskriver en detaljeret protokol for Hepatitis B-virus (HBV) infektion i nye manipuleret 293T celler (293T-NE-3NRs, der udtrykker menneskelige NTCP, HNF4α, RXRα og PPARα) og traditionelle leverceller (HepG2-NE, der udtrykker menneskelige NTCP).

Modellering Hepatitis B Virus Infektion i ikke-hepatisk 293T-NE-3NRs celler

HBV mainly infects human hepatocytes, but it has also been found to infect extrahepatic tissues such as kidney and testis. Nonetheless, cell-based HBV ...

HBV viral replikation i ekstrahepatisk spiller en vigtig rolle i patogenesen af ekstrahepatiske syndromer. I øjeblikket, cellekultur modeller for at starte ekstrahepatisk HBV infektion er begrænset. Vi præsenterer en in vitro ikke-hepatisk infektion model til at hjælpe med at identificere nye vært faktorer, der påvirker HBV replikation og undersøge HBV-relaterede nyresygdomme.Sammenlignet med traditionelle HBV infektion modeller, vi vedtaget og manipuleret 293T celle linje, 293T-NE-3NR, og co-kulturperlede det med HepG2.2.15. HBV-infektion skal udføres i et biosikkerhedsniveau 2 eller biosikkerhedsniveau 3 laboratorium. Laboratoriesikkerhedspraksis bør følges for at sikre laboratoriepersonalets sikkerhed, og alle forskere bør vaccineres og påvise HBS-antistof positivt, før hbv-forsøg udføres.Begynd med at dyrke HepG2.2.15 cellerne under hensyntagen til, at cellesupernatanten samt alle spidser, kolber, plader og rør, der kommer i kontakt med HepG2.2.15, skal lægges i blød i 2%virucide natten før bortskaffelse. Fjern hætteglasset indeholdende HepG2.2.15 celler fra flydende nitrogen og tø det i blid hvirvlende i en 37 grader Celsius vandbad. Overfør cellerne til en 25 centimeter kvadratisk vævskulturkolbe og tilsæt fire milliliter komplet kulturmedium.Kultur HepG2.2.15 celler ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid i en befugtet inkubator. Skift mediet hver tredje dag. Når du er klar, indsamles cellesupernatanten i et 50 milliliter centrifugerør.Luk låget fast og pak det med paraffinfilm. For at fjerne cellefragmenterne filtreres HepG2.2.15 supernatant med en 0,45 mikrometermembran i et nyt 50 milliliter centrifugerør. Derefter tilsættes 14 milliliter filtreret supernatant til en viruskoncentrator kolonne og lukke låget.Centrifuge kolonnen ved 3, 200 gange g i 35 minutter i en vandret roterende centrifuge og indsamle HepG2.2.15 supernatant koncentrat i en 1,5 milliliter rør. Kør pcr i realtid for at sikre, at koncentrationen, hvis HBV-DNA i HepG2.2.15 supernatantkoncentratet ligger inden for standardkurveområdet. Koncentratet fortyndes 20 gange ved at tilsætte 10 mikroliter til 190 mikroliter DMEM i et 1,5 milliliter mikrocentrifugerør.Sammen med supernatant koncentrat, forberede en negativ kontrol, positiv kontrol, og fire fortyndinger af den kvantitative reference. Der tilsættes 450 mikroliter HBV DNA-ekstraktionsbuffer til hver prøve, og de centrifugeres ved 12.000 gange g i fem minutter ved stuetemperatur. Kombiner 27 mikroliter PCR-mastermix og tre mikroliter Taq polymeraseenzym pr. prøve i PCR-rør placeret på is.Derefter tilsættes 20 mikroliter af den centrifugerede prøve til hvert rør. Udfør PCR i realtid i henhold til manuskriptanvisninger og eksporter CT-værdierne for at opnå en standardkurve. Del HepG2.2.15 supernatant koncentrat i aliquots og gemme det på minus 80 grader Celsius indtil klar til brug.Forbered infektion medium i henhold til manuskript retninger. Derefter frø HepG2-NE i to brønde, 293T-NE-3NR celler i to brønde, og 293T-NE i en brønd. Inkuber cellerne ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid i en befugtet inkubator i 24 timer.Efter inkubationen observere cellerne og fortsætte med infektion, hvis de er sunde. Tilføj 500 mikroliter af infektionen kompleks til hver brønd og inkubere cellerne i yderligere 24 timer. Cellerne vaskes to gange med 500 mikroliter PBS.Derefter tilsættes en milliliter medium til hver brønd. Skift mediet forsigtigt hver anden dag. På dag 11 vaskes cellerne forsigtigt to gange med 500 mikroliter PBS, og cellerne fastgørs med iskold methanol for immunfluorescens.Seed 100, 000 celler pr brønd af HepG-NE i to brønde, 293T-NE-3NRs i to brønde, og 293T-NE i en brønd af pladen. Frø 100, 000 celler pr brønd af HepG2.2.15 i fem membran skær i en separat seks-brønd plade. Inkuber cellerne i 24 timer.Efter inkubationen skal du sikre dig, at cellerne alle er tilhængst og i god stand. Kassér mediet i seks-brøndpladen og cellemembranen skær. Derefter placeres membranen skær med HepG2.2.15 i seks-godt plade seedet med HepG-NE, 293T-NE-3NRs, og 293T-NE.Inkuber cellerne ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid i en befugtet inkubator, ændre mediet hver tre til fire dage. Efter 10 dage fjernes membranindsatserne, cellerne vaskes forsigtigt to gange, og cellerne fastgøres med iskold methanol for immunfluorescens. Inkubation med HBcAg primære antistof og DAPI resulterede i en særskilt farvning, når observeret med en 10X mål på en fluorescerende inverteret mikroskop.Nuklear lokalisering blev bekræftet ved farvning med DAPI og NTCP-EGFP udtryk blev identificeret med grøn fluorescens. Udtrykket steder af HBcAg var placeret med rød fluorescens. Når DAPI, NTCP og HBcAg er i samme celle, er cellen blevet inficeret med HBV.Cyclosporin En gruppe var det negative kontrolelement, fordi det forhindrer HBV i at komme ind i celler ved at blokere NTCP. HBcAg blev påvist i 293T-NE-3NRs, men ikke i 293T-NE celler angiver NTCP er ikke den eneste faktor afgørende for HBV infektion i 293T. God cellestatus og effektiv drift er de vigtigste punkter for at få vellykkede infektionsresultater.Skånsom vask og ændring af medierne efter infektion er også vigtigt. Som et alternativ, HBV infektion metode med hepatoma-baserede HepG2-NE celler har højere infektion effektivitet end denne metode og er egnet til anti-HBV drug screening. Modellering HBV infektion i 293T-NE-3NR er en nyttig kompliment til den traditionelle cellemodel på grund af den ikke-leverbaggrund af disse celler.Denne metode vil lette studiet af HBV-infektion i ikke-leverceller samt værtsfaktorer, der kræves til lever af HBV.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

RNAi Screening for Host Factors Involved in Vaccinia Virus Infection using Drosophila Cells

RNAi Screening for Host Factors Involved in Vaccinia Virus Infection using Drosophila Cells

Viral pathogens represent a significant public health threat; not only can viruses cause natural epidemics of human disease, but their potential use in ...

Recombinant Retroviral Production and Infection of B Cells

The transgenic expression of genes in eukaryotic cells is a powerful reverse genetic approach in which a gene of interest is expressed under the control ...

Visualizing Dengue Virus through Alexa Fluor Labeling

The early events in the interaction between virus and cell can have profound influence on the outcome of infection. Determining the factors 
that ...

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication

En protokol til at analysere Hepatitis C virus Replication

Hepatitis C Virus (HCV) affects 3% of the world&#8217;s population and causes serious liver ailments including&#160;chronic hepatitis, cirrhosis, and ...

Modeling The Lifecycle Of Ebola Virus Under Biosafety Level 2 Conditions With Virus-like Particles Containing Tetracistronic Minigenomes

Modeling Lifecycle af Ebola virus Under biosikkerhedsniveau 2 Betingelser med virus-lignende partikler indeholdende Tetracistronic minigenomer

Ebola viruses cause severe hemorrhagic fevers in humans and non-human primates, with case fatality rates as high as 90%. There are no approved vaccines or ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Neutrofil Isolering og analyse for at fastslå deres rolle i lymfom Cell Følsomhed til terapeutiske midler

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle

Udvikling af en hepatitis B virus Reporter system til at overvåge tidlige stadier af Replication Cycle

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), ...

Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

Påvisning af lav kopi nummer integreret Viral DNA dannet af In Vitro Hepatitis B infektion

Hepatitis B Virus (HBV) is a common blood-borne pathogen causing liver cancer and liver cirrhosis resulting from chronic infection. The virus generally ...

"Liver-on-a-Chip" Cultures of Primary Hepatocytes and Kupffer Cells for Hepatitis B Virus Infection

"Lever-on-a-Chip" kulturer af primære hepatocytter og Kupffer celler for Hepatitis B virusinfektion

Despite the exceptional infectivity of the hepatitis B virus (HBV) in vivo, where only three viral genomes can result in a chronicity of experimentally ...