Name: modeling hepatitis b virus infection in non-hepatic 293t-ne-3nrs cells
Uploaded: 2020-06-05T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (nr. 81870432 en 81570567 tot X.L.Z.), (nr. 81571994 tot P.N.S.), Research Fund for International Young Scientists (nr. 81950410640 tot W.I.); De Li Ka Shing Shantou University Foundation (nr. L1111 2008 aan P.N.S.). Wij willen prof. Stanley Lin van het Shantou University Medical College bedanken voor nuttig advies.

Cultuur, verzameling van supernatants uit HepG2.2.15 cellen en HBV-infectie moeten worden uitgevoerd in bioveiligheid niveau II (P2) of bioveiligheid niveau III (P3) laboratorium volgens de bioveiligheid begeleiding in het land. Laboratoriumveiligheidspraktijken moeten worden gevolgd om de veiligheid van het laboratoriumpersoneel te waarborgen en alles moet worden gevaccineerd en HBsAb-positief worden gedetecteerd voordat hbv-experimenten worden uitgevoerd. Observeer de toestand van de cellen bij elke stap voordat u door...

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+hepatitis+report,+2017.">Global hepatitis report, 2017.</a> World Health Organization. , (2017).</li><li>Yoffe, B., Burns, D. K., Bhatt, H. S., Combes, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+hepatitis+B+virus+DNA+sequences+in+patients+with+acute+hepatitis+B+infection.">Extrahepatic hepatitis B virus DNA sequences in patients with acute hepatitis B infection.</a> Hepatology. 12, 187-192 (1990).</li><li>Mason, A., Wick, M., White, H., Perrillo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+replication+in+diverse+cell+types+during+chronic+hepatitis+B+virus+infection.">Hepatitis B virus replication in diverse cell types during chronic hepatitis B virus infection.</a> Hepatology. 18, 781-789 (1993).</li><li>Yan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+taurocholate+cotransporting+polypeptide+is+a+functional+receptor+for+human+hepatitis+B+and+D+virus.">Sodium taurocholate cotransporting polypeptide is a functional receptor for human hepatitis B and D virus.</a> eLife. 1, 00049 (2012).</li><li>Tang, H., McLachlan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+regulation+of+hepatitis+B+virus+by+nuclear+hormone+receptors+is+a+critical+determinant+of+viral+tropism.">Transcriptional regulation of hepatitis B virus by nuclear hormone receptors is a critical determinant of viral tropism.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 1841-1846 (2001).</li><li>Sells, M. A., Chen, M. L., Acs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+hepatitis+B+virus+particles+in+Hep+G2+cells+transfected+with+cloned+hepatitis+B+virus+DNA.">Production of hepatitis B virus particles in Hep G2 cells transfected with cloned hepatitis B virus DNA.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84, 1005-1009 (1987).</li><li>Sells, M. A., Zelent, A. Z., Shvartsman, M., Acs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicative+intermediates+of+hepatitis+B+virus+in+HepG2+cells+that+produce+infectious+virions.">Replicative intermediates of hepatitis B virus in HepG2 cells that produce infectious virions.</a> Journal of Virology. 62, 2836-2844 (1988).</li><li>Watashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclosporin+A+and+its+analogs+inhibit+hepatitis+B+virus+entry+into+cultured+hepatocytes+through+targeting+a+membrane+transporter,+sodium+taurocholate+cotransporting+polypeptide+(NTCP).">Cyclosporin A and its analogs inhibit hepatitis B virus entry into cultured hepatocytes through targeting a membrane transporter, sodium taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP).</a> Hepatology. 59, 1726-1737 (2014).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defined+host+factors+support+HBV+infection+in+non-hepatic+293T+cells.">Defined host factors support HBV infection in non-hepatic 293T cells.</a> Journal of Cell and Molecular Medicine. 24, 2507-2518 (2020).</li><li>Xia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell-derived+hepatocytes+as+a+model+for+hepatitis+B+virus+infection,+spreading+and+virus-host+interactions.">Human stem cell-derived hepatocytes as a model for hepatitis B virus infection, spreading and virus-host interactions.</a> Journal of Hepatology. 66, 494-503 (2017).</li><li>Ortega-Prieto, A. M., Cherry, C., Gunn, H., Dorner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Model+Systems+for+Hepatitis+B+Virus+Research.">In Vivo Model Systems for Hepatitis B Virus Research.</a> ACS Infectious Diseases. 5, 688-702 (2019).</li><li>Liang, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B:+the+virus+and+disease.">Hepatitis B: the virus and disease.</a> Hepatology. 49, 13-21 (2009).</li><li>Nie, Y. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recapitulation+of+hepatitis+B+virus-host+interactions+in+liver+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Recapitulation of hepatitis B virus-host interactions in liver organoids from human induced pluripotent stem cells.</a> EBioMedicine. 35, 114-123 (2018).</li><li>Nishinakamura, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+kidney+organoids:+progress+and+remaining+challenges.">Human kidney organoids: progress and remaining challenges.</a> Nature Reviews Nephrology. 15, 613-624 (2019).</li></ol>

Hier introduceren we protocollen voor HBV-infectie in niet-leverige 293T-NE-3NRs en hepatoma-gebaseerde HepG2-NE cellen. 293T-NE-3NRs waren geschikt voor HBV-infectie bij zowel hoge als lage GEq. Bij het gebruik van ons protocol moet rekening worden gehouden met de volgende kritieke stappen. De celstatus is een belangrijke factor voor een succesvolle infectie. Het infectiemedium moet tijdig worden gewijzigd na de eerste periode van HBV-infectie. 293T-NE-3NRs cellen zijn meestal kwetsbaar na infectie met hoge virale titer...

Hepatitis B beïnvloedt het leven van meer dan 2 miljard mensen en is een van de grootste bedreigingen voor de volksgezondheid. Ongeveer 257 miljoen mensen zijn chronisch besmet met het hepatitis B-virus (HBV) wereldwijd, waardoor een grote last voor de samenleving1. Hepatocyten zijn niet de enige cellen besmet met HBV en andere cellen in niet-leverweefsel, zoals nier- en testis, zijn ook geïnfecteerd door dit virus2,3. Momenteel, HBV infectie cel modellen zijn beperkt tot menselijke hepatocyten met slechts enkele niet-levercellijn modellen. Dit belemmert de studie van HBV-infectie en HBV-gerelateerde pathologie van niet-leverweefsels. Hier presenteren we protocollen om HBV-infectie te bestuderen in niet-levermatige 293T-cellen en in op hepatoma gebaseerde cellen.
Natrium taurocholaat co-transport polypeptide (NTCP) is een functionele receptor voor human hepatitis B en hepatitis D virus4. Hepatocyte nuclear factor 4α (HNF4α), retinoïde X receptor α (RXRα) en peroxisome proliferator-geactiveerde receptor α (PPARα) zijn met de lever verrijkte transcriptiefactoren die het virale tropisme van HBV beperken. Ze zijn geverifieerd om hbv pregenomic RNA synthese te bevorderen en HBV-replicatie te ondersteunen in een nonhepatoma-cellijn5. We bouwden drie verschillende cellijnen, HepG2-cellijnen die NTCP (HepG2-NE) uitdrukken, 293T-cellijn die NTCP (293T-NE) en 293T-cellijn uitdrukken die vier gastheergenen uitdrukken; NTCP, HNF4α, RXRα en PPARα (293T-NE-3NRs). Twee methoden voor HBV-infectie werden ontwikkeld op basis van 293T-NE-3NRs (figuur 1). De eerste methode maakt gebruik van inenting in 293T-NE-3NRs met een hoge virale genoom equivalentie (hoge GEq (150), DMSO en PEG8000) voor 24 uur. De tweede methode maakt gebruik van co-culturing 293T-NE-3NRs met HepG2.2.15, die HBV-deeltjes (lage GEq (ongeveer 1,83) zonder DMSO en PEG8000 kan produceren, waardoor de natuurlijke omstandigheden nauw kunnen worden geëmulgeerde.
HepG2.2.15 cellen zijn afgeleid van de HepG2 lijn en chronisch afscheiden besmettelijke HBV, evenals subvirale deeltjes in de cultuur medium6,7. Cyclosporin A (CsA) is een immunosuppressivum dat klinisch wordt gebruikt voor de onderdrukking van xenograftafstoting. Studies hebben aangetoond dat CsA de toegang van HBV tot gekweekte hepatocyten remt door de transportactiviteit van NTCP te remmen en de binding van NTCP aan grote envelopeiwitten te blokkeren8.
HepG2-NE cellen werden gebruikt als positieve controle, terwijl CsA behandelde cellen werden gebruikt als negatieve controle. Door te vergelijken met de positieve en negatieve controlegroepen, kunnen we erachter komen welke gastheergenen een cruciale rol spelen bij HBV-infectie. Bovendien, door middel van deze wijze van HBV-infectie, kunnen we ook andere nieuwe mechanismen of gastheer genen die betrokken zijn bij HBV-infectie.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.45&#956;m membrane filter</td>
			<td>Millex-HV</td>
			<td>SLHU033RB</td>
			<td>Filter for HepG 2.2.15 supernatant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T-NE</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T-NE-3NRs</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>594 labeled goat against rabbit IgG</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZF-0516</td>
			<td>For immunofluorescence assay,second antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>TCP010006</td>
			<td>For co-culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra 15 ml</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC910008</td>
			<td>For concentration of HepG 2.2.15 supernatant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>ST023</td>
			<td>For immunofluorescence assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclosporin A</td>
			<td>Sangon biotech</td>
			<td>59865-13-3</td>
			<td>inhibitor of HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C1006</td>
			<td>For nuclear staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diagnostic kit for Quantification of Hepatitis B Virus DNA(PCR-Fluorescence Probing)</td>
			<td>DAAN GENE</td>
			<td>7265-2013</td>
			<td>For HBV DNA detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>HyClong</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5879</td>
			<td>For improvement of infection efficiency</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum&#65288;FBS&#65289;</td>
			<td>CLARK Bioscience</td>
			<td>FB25015</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Axio observer Z1</td>
			<td>For immunofluorescence assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HepG2-NE</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBcAg antibody</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZA-0121</td>
			<td>For immunofluorescence assay, primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZLI-9062</td>
			<td>For cell wash</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG8000</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P8260</td>
			<td>For infection medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin-Glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10378016</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transwell</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>3412</td>
			<td>For co-culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>sigma-Aldrich</td>
			<td>WXBB7485V</td>
			<td>For PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virkon</td>
			<td>Douban</td>
			<td>6971728840012</td>
			<td>Viruside</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling hepatitis b virus infection in non-hepatic 293t-ne-3nrs cells

HBV infecteert voornamelijk menselijke hepatocyten, maar het is ook gevonden om extrahepatische weefsels zoals nier en testis te infecteren. Niettemin zijn op cel gebaseerde HBV-modellen beperkt tot hepatoma-cellijnen (zoals HepG2 en Huh7) die een functionele HBV-receptor overdonderen, natrium taurocholaat co-transporteren polypeptide (NTCP). Hier gebruikten we 293T-NE-3NRs (293T overexpressing human NTCP, HNF4α, RXRα en PPARα) en HepG2-NE (HepG2 overexpressing NTCP) als modelcellijnen.   HBV-infectie in deze cellijnen werd uitgevoerd door het gebruik van geconcentreerde HBV-virusdeeltjes uit HepG2.2.15 of co-culturing HepG2.2.15 met de doelcellijnen. HBcAg immunofluorescentie voor HBcAg werd uitgevoerd om HBV-infectie te bevestigen. De twee methoden hier gepresenteerd zal ons helpen studie HBV infectie in niet-levercellijnen.

We bouwden pSIN-NTCP-EGFP plasmid uitdrukken NTCP en EGFP fusie en met puromycine weerstand. De plasmide werd omgezet in HepG2 en 293T cellen om stabiele cellijnen HepG2-NE en 293T-NE uitdrukken NTCP en EGFP te construeren. Plasmiden (pSIN-HNF4α, pSIN-RXRα, pLV-PPARα-puro-flag) met puromycineweerstand en expressie werden omgezet in 293T-NE cellen om een stabiele cellijn te bouwen die 4 gastheergenenuitdrukt 9. De expressie van NTCP-EGFP kan worden waargenomen door groene fluorescentie, en gever...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells at JoVE.com

Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells

Dit manuscript beschrijft een gedetailleerd protocol voor hepatitis B-virus (HBV) infectie in nieuwe 293T cellen (293T-NE-3NRs, uitdrukken van menselijke NTCP, HNF4α, RXRα en PPARα) en traditionele levercellen (HepG2-NE, uitdrukken van menselijke NTCP).

Modellering hepatitis B-virusinfectie in niet-leverloze 293T-NE-3NRs-cellen

HBV mainly infects human hepatocytes, but it has also been found to infect extrahepatic tissues such as kidney and testis. Nonetheless, cell-based HBV ...

HBV virale replicatie in extrahepatic speelt een belangrijke rol in de pathogenese van extrahepatische syndromen. Momenteel zijn celkweekmodellen voor het starten van extrahepatische HBV-infectie beperkt. We presenteren een in vitro niet-leverinfectiemodel om nieuwe hostfactoren te identificeren die hbv-replicatie beïnvloeden en hbv-gerelateerde nierziekten te onderzoeken.Vergeleken met traditionele HBV-infectiemodellen hebben we 293T-cellijn, 293T-NE-3NR, aangenomen en gecoördineerd en mede-gekweekt met HepG2.2.15. HBV-infectie moet worden uitgevoerd in een bioveiligheid niveau twee of bioveiligheid niveau drie laboratorium. Laboratoriumveiligheidspraktijken moeten worden gevolgd om de veiligheid van het laboratoriumpersoneel te waarborgen en alle onderzoekers moeten worden gevaccineerd en HBS-antilichaampositief detecteren voordat ze HBV-experimenten uitvoeren.Begin met het kweken van de HepG2.2.15 cellen rekening houdend met het feit dat de cel supernatant evenals alle tips, kolven, platen en buizen die in contact komen met HepG2.2.15 moet worden gedrenkt in 2%virucide 's nachts voorafgaand aan verwijdering. Verwijder de flacon met HepG2.2.15 cellen uit vloeibare stikstof en ontdooi het in zachte wervelende in een 37 graden Celsius waterbad. Breng de cellen naar een 25 centimeter vierkante weefsel cultuur fles en voeg vier milliliter van volledige cultuur medium.Kweek de HepG2.2.15 cellen bij 37 graden Celsius en 5% kooldioxide in een bevochtigde couveuse. Verander het medium om de drie dagen. Wanneer klaar, verzamel de cel supernatant in een 50 milliliter centrifuge buis.Sluit het deksel stevig en wikkel het met paraffinefilm. Om de celfragmenten te verwijderen, filtert u de HepG2.2.15 supernatant met een membraan van 0,45 micrometer in een nieuwe centrifugebuis van 50 milliliter. Voeg vervolgens 14 milliliter gefilterde supernatant toe aan een virusconcentraatkolom en sluit het deksel.Centrifugeer de kolom op 3, 200 keer g gedurende 35 minuten in een horizontaal draaiende centrifuge en verzamel het HepG2.2.15 supernatant concentraat in een 1,5 milliliter buis. Voer real-time PCR uit om ervoor te zorgen dat de concentratie als HBV DNA in het HepG2.2.15 supernatant concentraat binnen het standaard curvebereik valt. Verdun het concentraat 20-voudig door 10 microliter toe te voegen aan 190 microliter DMEM in een 1,5 milliliter microcentrifugebuis.Bereid samen met het supernatant concentraat een negatieve controle, positieve controle en vier verdunningen van de kwantitatieve referentie voor. Voeg 450 microliters HBV DNA-extractiebuffer toe aan elk monster en centrifuge ze vijf minuten lang op kamertemperatuur op 12.000 g. Combineer 27 microliters van PCR master mix en drie microliters van Taq polymerase enzym per monster in PCR buizen geplaatst op ijs.Voeg vervolgens 20 microliter van het gecentrifugeerde monster toe aan elke buis. Voer real-time PCR uit volgens de handschriftaanwijzingen en exporteer de CT-waarden om een standaardcurve te verkrijgen. Verdeel de HepG2.2.15 supernatant concentraat in aliquots en bewaar het op min 80 graden Celsius tot klaar voor gebruik.Bereid infectie medium volgens manuscript richtingen. Dan zaad HepG2-NE in twee putten, 293T-NE-3NR cellen in twee putten, en 293T-NE in een put. Broed de cellen 24 uur lang in een bevochtigde couveuse in een bevochtigingsinator.Na de incubatie, observeer de cellen en ga verder met infectie als ze gezond zijn. Voeg 500 microliters van het infectiecomplex toe aan elke put en broed de cellen nog 24 uur uit. Was de cellen twee keer met 500 microliter PBS.Voeg vervolgens een milliliter medium toe aan elke put. Verander het medium voorzichtig om de twee dagen. Op dag 11, voorzichtig wassen van de cellen tweemaal met 500 microliters van PBS en bevestig de cellen met ijskoude methanol voor immunofluorescentie.Zaad 100,000 cellen per put van HepG-NE in twee putten, 293T-NE-3NRs in twee putten, en 293T-NE in een put van de plaat. Zaad 100.000 cellen per put van HepG2.2.15 in vijf membraaninserts in een aparte zesputige plaat. De cellen 24 uur uitbroeden.Zorg er na de incubatie voor dat de cellen allemaal aanhangend en in goede staat zijn. Gooi het medium in de zes-put plaat en de cel membraan inserts. Plaats vervolgens de membraan inserts met HepG2.2.15 in de zes-put plaat gezaaid met HepG-NE, 293T-NE-3NRs, en 293T-NE.Broed de cellen in op 37 graden Celsius en 5% kooldioxide in een bevochtigde couveuse, waardoor het medium om de drie tot vier dagen verandert. Na 10 dagen, verwijder de membraan inserts, voorzichtig wassen de cellen met PBS tweemaal, en bevestig de cellen met ijskoude methanol voor immunofluorescentie. Incubatie met de HBcAg primaire antilichaam en DAPI resulteerde in een duidelijke kleuring wanneer waargenomen met een 10X doelstelling op een fluorescerende omgekeerde microscoop.Nucleaire lokalisatie werd bevestigd door vlekken met DAPI en NTCP-EGFP expressie werd geïdentificeerd met groene fluorescentie. De expressiesites van HBcAg bevonden zich met rode fluorescentie. Wanneer DAPI, NTCP en HBcAg zich in dezelfde cel bevinden, is de cel met succes geïnfecteerd met HBV.De Cyclosporin A-groep was de negatieve controle omdat het HBV verhindert cellen binnen te komen door NTCP te blokkeren. HBcAg werd ontdekt in 293T-NE-3NRs, maar niet in 293T-NE cellen die aangeven dat NTCP niet de enige factor is die essentieel is voor HBV-infectie in 293T. Goede celstatus en efficiënte werking zijn de belangrijkste punten om succesvolle infectieresultaten te krijgen.Zachte wassen en het veranderen van de media na infectie is ook belangrijk. Als alternatief heeft hbv-infectiemethode met hepatoma-gebaseerde HepG2-NE-cellen een hogere infectieefficiëntie dan deze methode en is deze geschikt voor anti-HBV-geneesmiddelenscreening. Modellering HBV infectie in 293T-NE-3NR is een nuttig compliment aan de traditionele cel model als gevolg van de niet-leverische achtergrond van deze cellen.Deze methode zal de studie van HBV-infectie in niet-levercellen vergemakkelijken, evenals gastheerfactoren die nodig zijn voor de lever van HBV.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

RNAi Screening for Host Factors Involved in Vaccinia Virus Infection using Drosophila Cells

RNAi Screening for Host Factors Involved in Vaccinia Virus Infection using Drosophila Cells

RNAi Screening voor Host factoren die betrokken zijn in Vaccinia Virus infectie met behulp van Drosophila Cellen

Viral pathogens represent a significant public health threat; not only can viruses cause natural epidemics of human disease, but their potential use in ...

Recombinant Retroviral Production and Infection of B Cells

Recombinante retrovirale Productie en Infectie van B-cellen

The transgenic expression of genes in eukaryotic cells is a powerful reverse genetic approach in which a gene of interest is expressed under the control ...

Visualizing Dengue Virus through Alexa Fluor Labeling

Visualiseren van Dengue Virus via Alexa Fluor Labeling

The early events in the interaction between virus and cell can have profound influence on the outcome of infection. Determining the factors 
that ...

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Na Cell-lot in<em&gt; E. coli</em&gt; Na Infectie door Phage Lambda

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication

Een protocol voor het analyseren van hepatitis C virus replicatie

Hepatitis C Virus (HCV) affects 3% of the world&#8217;s population and causes serious liver ailments including&#160;chronic hepatitis, cirrhosis, and ...

Modeling The Lifecycle Of Ebola Virus Under Biosafety Level 2 Conditions With Virus-like Particles Containing Tetracistronic Minigenomes

Het modelleren van de levenscyclus van Ebola Virus onder Biosafety Level 2 Voorwaarden met het virus-achtige deeltjes die Tetracistronic minigenomen

Ebola viruses cause severe hemorrhagic fevers in humans and non-human primates, with case fatality rates as high as 90%. There are no approved vaccines or ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Neutrofielen Isolatie en analyse van hun rol in de Lymphoma Cell Gevoeligheid voor therapeutische middelen te bepalen

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle

Ontwikkeling van een Hepatitis B Virus reportersysteem de vroege stadia van de replicatiecyclus Monitor

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), ...

Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

Detectie van lage exemplaar nummer geïntegreerde viraal DNA gevormd door In Vitro Hepatitis B-infectie

Hepatitis B Virus (HBV) is a common blood-borne pathogen causing liver cancer and liver cirrhosis resulting from chronic infection. The virus generally ...

"Liver-on-a-Chip" Cultures of Primary Hepatocytes and Kupffer Cells for Hepatitis B Virus Infection

"Lever-on-a-Chip" culturen van primaire hepatocyten en Kupffer cellen voor Hepatitis B-virusinfectie

Despite the exceptional infectivity of the hepatitis B virus (HBV) in vivo, where only three viral genomes can result in a chronicity of experimentally ...