Name: modeling hepatitis b virus infection in non-hepatic 293t-ne-3nrs cells
Uploaded: 2020-06-05T14:30:00
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Ces travaux ont été soutenus par la National Natural Science Foundation of China (no 81870432 et 81570567 à X.L.Z.), (no 81571994 à P.N.S.), Research Fund for International Young Scientists (no 81950410640 à W.I.); La Fondation de l’Université Li Ka Shing Shantou (No. L1111 2008 à P.N.S.). Nous tenons à remercier le Professeur Stanley Lin du Shantou University Medical College pour ses conseils utiles.

La culture, la collecte de supernatants provenant des cellules HepG2.2.15 et l’infection par le VHB doivent être effectuées en laboratoire de niveau BIOSécurité II (P2) ou de biosécurité III (P3), selon les directives de biosécurité dans le pays. Les pratiques de sécurité en laboratoire devraient être suivies pour assurer la sécurité du personnel de laboratoire, et tous devraient être vaccinés et détectés HBsAb positif avant d’effectuer des expériences VHB. Observez l’état des cellules à chaque ...

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	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+hepatitis+report,+2017.">Global hepatitis report, 2017.</a> World Health Organization. , (2017).</li><li>Yoffe, B., Burns, D. K., Bhatt, H. S., Combes, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+hepatitis+B+virus+DNA+sequences+in+patients+with+acute+hepatitis+B+infection.">Extrahepatic hepatitis B virus DNA sequences in patients with acute hepatitis B infection.</a> Hepatology. 12, 187-192 (1990).</li><li>Mason, A., Wick, M., White, H., Perrillo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+replication+in+diverse+cell+types+during+chronic+hepatitis+B+virus+infection.">Hepatitis B virus replication in diverse cell types during chronic hepatitis B virus infection.</a> Hepatology. 18, 781-789 (1993).</li><li>Yan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+taurocholate+cotransporting+polypeptide+is+a+functional+receptor+for+human+hepatitis+B+and+D+virus.">Sodium taurocholate cotransporting polypeptide is a functional receptor for human hepatitis B and D virus.</a> eLife. 1, 00049 (2012).</li><li>Tang, H., McLachlan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+regulation+of+hepatitis+B+virus+by+nuclear+hormone+receptors+is+a+critical+determinant+of+viral+tropism.">Transcriptional regulation of hepatitis B virus by nuclear hormone receptors is a critical determinant of viral tropism.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 1841-1846 (2001).</li><li>Sells, M. A., Chen, M. L., Acs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+hepatitis+B+virus+particles+in+Hep+G2+cells+transfected+with+cloned+hepatitis+B+virus+DNA.">Production of hepatitis B virus particles in Hep G2 cells transfected with cloned hepatitis B virus DNA.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84, 1005-1009 (1987).</li><li>Sells, M. A., Zelent, A. Z., Shvartsman, M., Acs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicative+intermediates+of+hepatitis+B+virus+in+HepG2+cells+that+produce+infectious+virions.">Replicative intermediates of hepatitis B virus in HepG2 cells that produce infectious virions.</a> Journal of Virology. 62, 2836-2844 (1988).</li><li>Watashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclosporin+A+and+its+analogs+inhibit+hepatitis+B+virus+entry+into+cultured+hepatocytes+through+targeting+a+membrane+transporter,+sodium+taurocholate+cotransporting+polypeptide+(NTCP).">Cyclosporin A and its analogs inhibit hepatitis B virus entry into cultured hepatocytes through targeting a membrane transporter, sodium taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP).</a> Hepatology. 59, 1726-1737 (2014).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defined+host+factors+support+HBV+infection+in+non-hepatic+293T+cells.">Defined host factors support HBV infection in non-hepatic 293T cells.</a> Journal of Cell and Molecular Medicine. 24, 2507-2518 (2020).</li><li>Xia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell-derived+hepatocytes+as+a+model+for+hepatitis+B+virus+infection,+spreading+and+virus-host+interactions.">Human stem cell-derived hepatocytes as a model for hepatitis B virus infection, spreading and virus-host interactions.</a> Journal of Hepatology. 66, 494-503 (2017).</li><li>Ortega-Prieto, A. M., Cherry, C., Gunn, H., Dorner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Model+Systems+for+Hepatitis+B+Virus+Research.">In Vivo Model Systems for Hepatitis B Virus Research.</a> ACS Infectious Diseases. 5, 688-702 (2019).</li><li>Liang, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B:+the+virus+and+disease.">Hepatitis B: the virus and disease.</a> Hepatology. 49, 13-21 (2009).</li><li>Nie, Y. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recapitulation+of+hepatitis+B+virus-host+interactions+in+liver+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Recapitulation of hepatitis B virus-host interactions in liver organoids from human induced pluripotent stem cells.</a> EBioMedicine. 35, 114-123 (2018).</li><li>Nishinakamura, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+kidney+organoids:+progress+and+remaining+challenges.">Human kidney organoids: progress and remaining challenges.</a> Nature Reviews Nephrology. 15, 613-624 (2019).</li></ol>

Ici, nous introduisons des protocoles pour l’infection par le VHB dans les cellules 293T-NE-3NR non hépatiques et les cellules hepG2-NE à base d’hépatome. 293T-NE-3NRs étaient appropriés pour l’infection de VHB à la fois haut et bas GEq. Les étapes critiques suivantes doivent être prises en considération lors de l’utilisation de notre protocole. Le statut cellulaire est un facteur important pour une infection réussie. Le milieu d’infection doit être modifié en temps opportun après la période initi...

L’hépatite B affecte la vie de plus de 2 milliards de personnes et constitue l’une des principales menaces pour la santé publique. Environ 257 millions de personnes sont infectées de façon chronique par le virus de l’hépatite B (VHB) dans le monde, ce qui représente un lourd fardeau pour la société1. Les hépatocytes ne sont pas les seules cellules infectées par le VHB et d’autres cellules dans les tissus non hépatiques, comme les reins et les testicules, sont également infectées par ce virus2,3. À l’heure actuelle, les modèles de cellules d’infection par le VHB sont limités aux hépatocytes humains avec seulement peu de modèles de lignée cellulaire non hépatique. Cela entrave l’étude de l’infection par le VHB et de la pathologie liée au VHB des tissus non hépatiques. Ici, nous présentons des protocoles pour étudier l’infection par le VHB dans les cellules non hépatiques 293T ainsi que dans les cellules à base d’hépatome.
Le polypeptide de co-transport du taurocholate de sodium (NTCP) est un récepteur fonctionnel de l’hépatite B humaine et du virus de l’hépatite D4. Le facteur nucléaire hépatocyte 4α (HNF4α), le récepteur X rétinoïde α (RXRα) et le récepteur α (PPARα) activé par proliférateur peroxisome sont des facteurs de transcription enrichis en foie qui limitent le tropisme viral du VHB. Ils ont été vérifiés pour promouvoir la synthèse prégénomique de l’ARN du VHB et soutenir la réplication du VHB dans une ligne de cellules non hépatomes5. Nous avons construit trois lignées cellulaires différentes, des lignées cellulaires HepG2 exprimant NTCP (HepG2-NE), une lignée cellulaire 293T exprimant NTCP (293T-NE) et une lignée cellulaire 293T exprimant quatre gènes hôtes; NTCP, HNF4α, RXRα et PPARα (293T-NE-3NR). Deux méthodes d’infection par le VHB ont été développées sur la base de 293T-NE-3NR (figure 1). La première méthode utilise l’inoculation dans 293T-NE-3NR avec une équivalence élevée du génome viral (GEq élevé (150), DMSO et PEG8000) pendant 24 h. La deuxième méthode utilise la co-culture 293T-NE-3NRs avec HepG2.2.15, qui peut produire des particules de VHB (faible GEq (environ 1,83) sans DMSO et PEG8000), imitant ainsi étroitement les conditions naturelles.
Les cellules hepG2.2.15 sont dérivées de la lignée HepG2 et sécrètent chroniquement le VHB infectieux, ainsi que les particules subvirales dans le milieu de culture6,7. La cyclosporine A (CsA) est un immunosuppresseur cliniquement utilisé pour la suppression du rejet de xénogreffe. Des études ont montré que le CsA inhibe l’entrée du VHB dans les hépatocytes cultivés en inhibant l’activité du transporteur du NTCP et en bloquant la liaison du NTCP aux protéines de grande enveloppe8.
Les cellules d’hepG2-NE ont été employées comme commande positive tandis que les cellules traitées de CsA ont été employées comme contrôle négatif. En comparant avec les groupes témoins positifs et négatifs, nous pouvons savoir quels gènes hôtes jouent un rôle critique dans l’infection par le VHB. En outre, grâce à ce mode d’infection par le VHB, nous pouvons également trouver d’autres mécanismes nouveaux ou des gènes hôtes impliqués dans l’infection par le VHB.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.45&#956;m membrane filter</td>
			<td>Millex-HV</td>
			<td>SLHU033RB</td>
			<td>Filter for HepG 2.2.15 supernatant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T-NE</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T-NE-3NRs</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>594 labeled goat against rabbit IgG</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZF-0516</td>
			<td>For immunofluorescence assay,second antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>TCP010006</td>
			<td>For co-culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra 15 ml</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC910008</td>
			<td>For concentration of HepG 2.2.15 supernatant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>ST023</td>
			<td>For immunofluorescence assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclosporin A</td>
			<td>Sangon biotech</td>
			<td>59865-13-3</td>
			<td>inhibitor of HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C1006</td>
			<td>For nuclear staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diagnostic kit for Quantification of Hepatitis B Virus DNA(PCR-Fluorescence Probing)</td>
			<td>DAAN GENE</td>
			<td>7265-2013</td>
			<td>For HBV DNA detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>HyClong</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5879</td>
			<td>For improvement of infection efficiency</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum&#65288;FBS&#65289;</td>
			<td>CLARK Bioscience</td>
			<td>FB25015</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Axio observer Z1</td>
			<td>For immunofluorescence assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HepG2-NE</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBcAg antibody</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZA-0121</td>
			<td>For immunofluorescence assay, primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZLI-9062</td>
			<td>For cell wash</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG8000</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P8260</td>
			<td>For infection medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin-Glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10378016</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transwell</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>3412</td>
			<td>For co-culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>sigma-Aldrich</td>
			<td>WXBB7485V</td>
			<td>For PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virkon</td>
			<td>Douban</td>
			<td>6971728840012</td>
			<td>Viruside</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling hepatitis b virus infection in non-hepatic 293t-ne-3nrs cells

Le VHB infecte principalement les hépatocytes humains, mais il a également été trouvé pour infecter les tissus extrahépatiques tels que les reins et les testicules. Néanmoins, les modèles de VHB à base de cellules sont limités aux lignées cellulaires d’hépatome (comme HepG2 et Huh7) surexprimant un récepteur fonctionnel du VHB, le polypeptide co-transport du taurocholate de sodium (NTCP). Ici, nous avons utilisé 293T-NE-3NRs (293T surexprimant NTCP humain, HNF4α, RXRα et PPARα) et HepG2-NE (HepG2 surexprimant NTCP) comme lignées cellulaires de modèle.   L’infection par le VHB dans ces lignées cellulaires a été effectuée soit en utilisant des particules concentrées du virus du VHB provenant d’HepG2.2.15, soit en co-organisant des hepG2.2.15 avec les lignées cellulaires cibles. L’immunofluorescence de HBcAg pour HBcAg a été exécutée pour confirmer l’infection de VHB. Les deux méthodes présentées ici nous aideront à étudier l’infection par le VHB dans les lignées cellulaires non hépatiques.

Nous avons construit le plasmide pSIN-NTCP-EGFP exprimant la fusion NTCP et EGFP et avec la résistance à la puromycine. Le plasmide a été transfecté en cellules HepG2 et 293T pour construire des lignées cellulaires stables HepG2-NE et 293T-NE exprimant NTCP et EGFP. Les plasmides (pSIN-HNF4α, pSIN-RXRα, pLV-PPARα-puro-flag) avec résistance et expression de puromycine ont été transfectés en cellules 293T-NE pour construire une lignée cellulaire stable exprimant 4 gènes hôtes9. L’e...

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Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells

Ce manuscrit décrit un protocole détaillé pour l’infection par le virus de l’hépatite B (VHB) dans de nouvelles cellules 293T (293T-NE-3NR, exprimant des NTCP humains, HNF4α, RXRα et PPARα) et des cellules hépatiques traditionnelles (PleG2-NE, exprimant le NTCP humain).

Modélisation de l’infection par le virus de l’hépatite B dans les cellules non hépatiques 293T-NE-3NRs

HBV mainly infects human hepatocytes, but it has also been found to infect extrahepatic tissues such as kidney and testis. Nonetheless, cell-based HBV ...

La réplication virale du VHB dans l’extrahépatique joue un rôle important dans la pathogénie des syndromes extrahépatiques. À l’heure actuelle, les modèles de culture cellulaire pour commencer l’infection extrahépatique par le VHB sont limités. Nous présentons un modèle in vitro d’infection non hépatique pour aider à identifier de nouveaux facteurs d’hôte qui affectent la réplication du VHB et à étudier les maladies rénales liées au VHB.Comparé aux modèles traditionnels d’infection de HBV, nous avons adopté et machiné la ligne cellulaire de 293T, 293T-NE-3NR, et l’avons co-cultivé avec HepG2.2.15. L’infection par le VHB devrait être effectuée dans un laboratoire de niveau de biosécurité deux ou de biosécurité de niveau trois. Les pratiques de sécurité en laboratoire devraient être suivies pour assurer la sécurité du personnel de laboratoire et tous les chercheurs devraient être vaccinés et détecter les anticorps HBS positifs avant d’effectuer des expériences sur le VHB.Commencez par la culture des cellules HepG2.2.15 en gardant à l’esprit que le supernatant cellulaire ainsi que tous les conseils, flacons, plaques et tubes qui entrent en contact avec HepG2.2.15 doivent être trempés dans 2% virucide pendant la nuit avant l’élimination. Retirez le flacon contenant des cellules HepG2.2.15 de l’azote liquide et décongelez-le en tourbillonnant doucement dans un bain d’eau de 37 degrés Celsius. Transférer les cellules dans un flacon de culture tissulaire carré de 25 centimètres et ajouter quatre millilitres de milieu de culture complet.Culture des cellules HepG2.2.15 à 37 degrés Celsius et 5% dioxyde de carbone dans un incubateur humidifié. Changez le milieu tous les trois jours. Une fois prêt, recueillir le supernatant cellulaire dans un tube centrifugeuse de 50 millilitres.Fermez fermement le couvercle et enveloppez-le avec du film de paraffine. Pour enlever les fragments de cellules, filtrez le supernatant HepG2.2.15 avec une membrane de 0,45 micromètre dans un nouveau tube de centrifugeuse de 50 millilitres. Ajoutez ensuite 14 millilitres de supernatant filtré à une colonne de concentrateur de virus et fermez le couvercle.Centrifugez la colonne à 3 200 g pendant 35 minutes dans une centrifugeuse horizontale et recueillez le concentré de supernatant HepG2.2.15 dans un tube de 1,5 millilitre. Exécutez un PCR en temps réel pour vous assurer que la concentration si l’ADN du VHB dans le concentré de supernatant HepG2.2.15 se trouve dans la plage de courbe standard. Diluer le concentré 20 fois en ajoutant 10 microlitres à 190 microlitres de DMEM dans un tube de microcentrifugeuse de 1,5 millilitre.Avec le concentré supernatant, préparez un contrôle négatif, un contrôle positif et quatre dilutions de la référence quantitative. Ajouter 450 microlitres de tampon d’extraction d’ADN du VHB à chaque échantillon et les centrifuger à 12 000 fois g pendant cinq minutes à température ambiante. Combinez 27 microlitres de mélange principal PCR et trois microlitres d’enzyme taq polymésase par échantillon dans des tubes PCR placés sur la glace.Ajouter ensuite 20 microlitres de l’échantillon centrifugé à chaque tube. Effectuez un PCR en temps réel selon les instructions manuscrites et exportez les valeurs CT pour obtenir une courbe standard. Divisez le concentré de supernatant HepG2.2.15 en aliquots et rangez-le à moins 80 degrés Celsius jusqu’à ce qu’il soit prêt à l’emploi.Préparer le milieu d’infection selon les directives manuscrites. Puis les graines HepG2-NE dans deux puits, 293T-NE-3NR cellules dans deux puits, et 293T-NE dans un puits. Incuber les cellules à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone dans un incubateur humidifié pendant 24 heures.Après l’incubation, observez les cellules et procédez à l’infection si elles sont en bonne santé. Ajouter 500 microlitres du complexe d’infection à chaque puits et incuber les cellules pendant encore 24 heures. Lavez les cellules deux fois avec 500 microlitres de PBS.Ajouter ensuite un millilitre de milieu à chaque puits. Changez doucement le milieu tous les deux jours. Le jour 11, lavez doucement les cellules deux fois avec 500 microlitres de PBS et fixez les cellules avec du méthanol glacé pour l’immunofluorescence.Graine 100 000 cellules par puits d’HepG-NE en deux puits, 293T-NE-3NRs en deux puits, et 293T-NE dans un puits de la plaque. Graine 100 000 cellules par puits d’HepG2.2.15 en cinq inserts membranaires dans une plaque séparée de six puits. Incuber les cellules pendant 24 heures.Après l’incubation, assurez-vous que les cellules sont toutes adhérentes et en bon état. Jeter le milieu dans la plaque de six puits et les inserts de la membrane cellulaire. Placez ensuite les inserts membranaires avec HepG2.2.15 dans la plaque de six puits ensemencée avec HepG-NE, 293T-NE-3NRs et 293T-NE.Incuber les cellules à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone dans un incubateur humidifié, en changeant le milieu tous les trois à quatre jours. Après 10 jours, retirer les inserts membranaires, laver délicatement les cellules avec PBS deux fois, et fixer les cellules avec du méthanol glacé pour l’immunofluorescence. L’incubation avec l’anticorps primaire HBcAg et le DAPI a eu comme conséquence une coloration distincte une fois observée avec un objectif de 10X sur un microscope inversé fluorescent.La localisation nucléaire a été confirmée par la coloration avec DAPI et l’expression de NTCP-EGFP a été identifiée avec la fluorescence verte. Les sites d’expression de HBcAg ont été localisés avec fluorescence rouge. Lorsque le DAPI, le NTCP et le HBcAg se trouvent dans la même cellule, la cellule a été infectée avec succès par le VHB.Le groupe Cyclosporin A était le contrôle négatif parce qu’il empêche le VHB d’entrer dans les cellules en bloquant le NTCP. HBcAg a été détecté dans 293T-NE-3NRs, mais pas dans 293T-NE cellules indiquant NTCP n’est pas le seul facteur essentiel pour l’infection par le VHB dans 293T. Un bon état cellulaire et un fonctionnement efficace sont les points clés pour obtenir des résultats d’infection réussis.Il est également important de laver et de changer les médias après l’infection. Comme alternative, la méthode d’infection par le VHB avec les cellules HepG2-NE à base d’hépatome a une efficacité d’infection plus élevée que cette méthode et convient au dépistage des médicaments anti-VHB. La modélisation de l’infection par le VHB dans 293T-NE-3NR est un complément utile au modèle cellulaire traditionnel en raison de l’arrière-plan non hépatique de ces cellules.Cette méthode facilitera l’étude de l’infection par le VHB dans les cellules non hépatiques ainsi que les facteurs d’hôte requis pour le foie du VHB.

Research

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Immunology and Infection

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Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

Détection de faibles copies numéro ADN Viral intégré formé par In Vitro l’infection par l’hépatite B

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