Name: modeling hepatitis b virus infection in non-hepatic 293t-ne-3nrs cells
Uploaded: 2020-06-05T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (n. 81870432 e 81570567 a X.L.) (da n. 81571994 a P.N.S.), Fondo di ricerca per giovani scienziati internazionali (n. 81950410640 a W.I.); La Li Ka Shing Shantou University Foundation (n. Da L1111 2008 a P.N.S.). Ringraziamo il prof.

Coltura, raccolta di supernatanti da cellule HepG2.2.15 e infezione da HBV devono essere eseguite nel laboratorio di livello di biosicurezza II (P2) o di livello di biosicurezza III (P3) secondo le linee guida sulla biosicurezza nel paese. Le pratiche di sicurezza di laboratorio devono essere seguite per garantire la sicurezza del personale di laboratorio e tutte devono essere vaccinate e rilevate HBsAb positive prima di eseguire esperimenti HBV. Osservare lo stato delle cellule ad ogni passo prima di procedere al passag...

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	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+hepatitis+report,+2017.">Global hepatitis report, 2017.</a> World Health Organization. , (2017).</li><li>Yoffe, B., Burns, D. K., Bhatt, H. S., Combes, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+hepatitis+B+virus+DNA+sequences+in+patients+with+acute+hepatitis+B+infection.">Extrahepatic hepatitis B virus DNA sequences in patients with acute hepatitis B infection.</a> Hepatology. 12, 187-192 (1990).</li><li>Mason, A., Wick, M., White, H., Perrillo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+replication+in+diverse+cell+types+during+chronic+hepatitis+B+virus+infection.">Hepatitis B virus replication in diverse cell types during chronic hepatitis B virus infection.</a> Hepatology. 18, 781-789 (1993).</li><li>Yan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+taurocholate+cotransporting+polypeptide+is+a+functional+receptor+for+human+hepatitis+B+and+D+virus.">Sodium taurocholate cotransporting polypeptide is a functional receptor for human hepatitis B and D virus.</a> eLife. 1, 00049 (2012).</li><li>Tang, H., McLachlan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+regulation+of+hepatitis+B+virus+by+nuclear+hormone+receptors+is+a+critical+determinant+of+viral+tropism.">Transcriptional regulation of hepatitis B virus by nuclear hormone receptors is a critical determinant of viral tropism.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 1841-1846 (2001).</li><li>Sells, M. A., Chen, M. L., Acs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+hepatitis+B+virus+particles+in+Hep+G2+cells+transfected+with+cloned+hepatitis+B+virus+DNA.">Production of hepatitis B virus particles in Hep G2 cells transfected with cloned hepatitis B virus DNA.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84, 1005-1009 (1987).</li><li>Sells, M. A., Zelent, A. Z., Shvartsman, M., Acs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicative+intermediates+of+hepatitis+B+virus+in+HepG2+cells+that+produce+infectious+virions.">Replicative intermediates of hepatitis B virus in HepG2 cells that produce infectious virions.</a> Journal of Virology. 62, 2836-2844 (1988).</li><li>Watashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclosporin+A+and+its+analogs+inhibit+hepatitis+B+virus+entry+into+cultured+hepatocytes+through+targeting+a+membrane+transporter,+sodium+taurocholate+cotransporting+polypeptide+(NTCP).">Cyclosporin A and its analogs inhibit hepatitis B virus entry into cultured hepatocytes through targeting a membrane transporter, sodium taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP).</a> Hepatology. 59, 1726-1737 (2014).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defined+host+factors+support+HBV+infection+in+non-hepatic+293T+cells.">Defined host factors support HBV infection in non-hepatic 293T cells.</a> Journal of Cell and Molecular Medicine. 24, 2507-2518 (2020).</li><li>Xia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell-derived+hepatocytes+as+a+model+for+hepatitis+B+virus+infection,+spreading+and+virus-host+interactions.">Human stem cell-derived hepatocytes as a model for hepatitis B virus infection, spreading and virus-host interactions.</a> Journal of Hepatology. 66, 494-503 (2017).</li><li>Ortega-Prieto, A. M., Cherry, C., Gunn, H., Dorner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Model+Systems+for+Hepatitis+B+Virus+Research.">In Vivo Model Systems for Hepatitis B Virus Research.</a> ACS Infectious Diseases. 5, 688-702 (2019).</li><li>Liang, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B:+the+virus+and+disease.">Hepatitis B: the virus and disease.</a> Hepatology. 49, 13-21 (2009).</li><li>Nie, Y. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recapitulation+of+hepatitis+B+virus-host+interactions+in+liver+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Recapitulation of hepatitis B virus-host interactions in liver organoids from human induced pluripotent stem cells.</a> EBioMedicine. 35, 114-123 (2018).</li><li>Nishinakamura, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+kidney+organoids:+progress+and+remaining+challenges.">Human kidney organoids: progress and remaining challenges.</a> Nature Reviews Nephrology. 15, 613-624 (2019).</li></ol>

Qui, introduciamo protocolli per l'infezione da HBV in 293T-NE-3NR non epatici e cellule HepG2-NE basate sull'epatoma. 293T-NE-3NRs erano adatti per l'infezione da HBV sia ad alto che a basso GEq. I seguenti passaggi critici devono essere presi in considerazione durante l'utilizzo del nostro protocollo. Lo stato della cellula è un fattore importante per un'infezione di successo. Il mezzo di infezione deve essere cambiato tempestivamente dopo il periodo iniziale dell'infezione da HBV. Le cellule 293T-NE-3NRs sono tipicam...

L'epatite B influisce sulla vita di oltre 2 miliardi di persone ed è una delle principali minacce per la salute pubblica. Circa 257 milioni di persone sono cronicamente infettate dal virus dell'epatite B (HBV) in tutto il mondo, causando un grande fardello per la società1. Gli epatociti non sono le uniche cellule infettate da HBV e altre cellule nel tessuto non epatico, come rene e testicoli, sono anche infettate da questo virus2,3. Attualmente, i modelli cellulari di infezione da HBV sono limitati agli epatociti umani con solo pochi modelli di linee cellulari non epatiche. Ciò ostacola lo studio dell'infezione da HBV e della patologia correlata all'HBV dei tessuti non epatici. Qui presentiamo protocolli per studiare l'infezione da HBV nelle cellule 293T non epatiche e nelle cellule a base di epatoma.
Il polipeptide co-trasporto del taurocholato di sodio (NTCP) è un recettore funzionale per l'epatite B umana e il virus dell'epatite D4. Il fattore nucleare di epatocita 4 (HNF4), il recettore X dei resinoidi ( ) e il recettore attivato dal proliferatore perossisoso (PPAR) sono fattori di trascrizione arricchiti di fegato che limitano il tropismo virale dell'HBV. Sono stati verificati per promuovere la sintesi dell'RNA pregenomico HBV e supportano la replicazione dell'HBV in una linea cellulare non epatoma5. Abbiamo costruito tre diverse linee cellulari, le linee cellulari HepG2 che esprimono NTCP (HepG2-NE), la linea cellulare 293T che esprime NTCP (293T-NE) e la linea cellulare 293T che esprime quattro geni ospiti; NTCP, HNF4, RXR e PPAR (293T-NE-3NRs). Sono stati sviluppati due metodi per l'infezione da HBV sulla base di 293T-NE-3NRs (Figura 1). Il primo metodo utilizza l'inoculazione in 293T-NE-3NR con elevata equivalenza genomica virale (alto GEq (150), DMSO e PEG8000) per 24 h. Il secondo metodo impiega la co-coltura 293T-NE-3NRs con HepG2.2.15, che può produrre particelle HBV (basso GEq (circa 1,83) senza DMSO e PEG8000), emulando così da vicino le condizioni naturali.
Le cellule HepG2.2.15 sono derivate dalla linea EpG2 e secernono cronicamente particelle infettive HBV, così come particelle subvirali nel mezzo di coltura6,7. La ciclosporina A (CsA) è un immunosoppressore clinicamente utilizzato per la soppressione del rifiuto dello xenotrapianto. Gli studi hanno dimostrato che la CA inibisce l'ingresso dell'HBV negli epotociti coltivati inibendo l'attività di trasporto di NTCP e bloccando il legame di NTCP a grandi proteine di inviluppo8.
Le cellule EpG2-NE sono state usate come controllo positivo, mentre le cellule trattate dalla CsA sono state usate come controllo negativo. Confrontandoci con i gruppi di controllo positivi e negativi, possiamo scoprire quali geni ospiti svolgono un ruolo fondamentale nell'infezione da HBV. Inoltre, attraverso questa modalità di infezione da HBV, possiamo anche trovare altri nuovi meccanismi o geni ospiti coinvolti nell'infezione da HBV.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.45&#956;m membrane filter</td>
			<td>Millex-HV</td>
			<td>SLHU033RB</td>
			<td>Filter for HepG 2.2.15 supernatant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T-NE</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T-NE-3NRs</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>594 labeled goat against rabbit IgG</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZF-0516</td>
			<td>For immunofluorescence assay,second antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>TCP010006</td>
			<td>For co-culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra 15 ml</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC910008</td>
			<td>For concentration of HepG 2.2.15 supernatant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>ST023</td>
			<td>For immunofluorescence assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclosporin A</td>
			<td>Sangon biotech</td>
			<td>59865-13-3</td>
			<td>inhibitor of HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C1006</td>
			<td>For nuclear staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diagnostic kit for Quantification of Hepatitis B Virus DNA(PCR-Fluorescence Probing)</td>
			<td>DAAN GENE</td>
			<td>7265-2013</td>
			<td>For HBV DNA detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>HyClong</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5879</td>
			<td>For improvement of infection efficiency</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum&#65288;FBS&#65289;</td>
			<td>CLARK Bioscience</td>
			<td>FB25015</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Axio observer Z1</td>
			<td>For immunofluorescence assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HepG2-NE</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBcAg antibody</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZA-0121</td>
			<td>For immunofluorescence assay, primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZLI-9062</td>
			<td>For cell wash</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG8000</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P8260</td>
			<td>For infection medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin-Glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10378016</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transwell</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>3412</td>
			<td>For co-culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>sigma-Aldrich</td>
			<td>WXBB7485V</td>
			<td>For PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virkon</td>
			<td>Douban</td>
			<td>6971728840012</td>
			<td>Viruside</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling hepatitis b virus infection in non-hepatic 293t-ne-3nrs cells

L'HBV infetta principalmente gli epatociti umani, ma è stato anche trovato per infettare tessuti extraepatici come reni e testicoli. Ciò nonostante, i modelli HBV basati su cellule sono limitati alle linee cellulari dell'epatoma (come HepG2 e Huh7) sovraesprimendo un recettore HBV funzionale, il taurocholate di sodio co-trasportando polipeptide (NTCP). In questo caso, abbiamo utilizzato 293T-NE-3NRs (293T sovraesprimenti umani NTCP, HNF4, RXR e PPAR) e HepG2-NE (HepG2 sovraesprimendo NTCP) come linee cellulari del modello.   L'infezione da HBV in queste linee cellulari è stata eseguita utilizzando particelle di virus HBV concentrate da HepG2.2.15 o co-culcolando HepG2.2.15 con le linee cellulari di destinazione. L'immunofluorescenza HBcAg per HBcAg è stata eseguita per confermare l'infezione da HBV. I due metodi qui presentati ci aiuteranno a studiare l'infezione da HBV nelle linee cellulari non epatiche.

Abbiamo costruito pSIN-NTCP-EGFP plasmid esprimendo la fusione NTCP ed EGFP e con resistenza puromycina. Il plasmide è stato trasincato nelle cellule HepG2 e 293T per costruire linee cellulari stabili HepG2-NE e 293T-NE esprimendo NTCP ed EGFP. Plasmids (pSIN-HNF4, pSIN-RXR, pLV-PPAR-puro-flag) con resistenza ed espressione sono stati transinfettati in cellule 293T-NE per costruire una linea cellulare stabile che esprime 4 geni host9. L'espressione di NTCP-EGFP può essere osservata dalla fluores...

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Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells

Questo manoscritto descrive un protocollo dettagliato per l'infezione da virus dell'epatite B (HBV) in nuove cellule 293T ingegnerizzate (293T-NE-3NRs, che esprime NTCP umana, HNF4, RXR e PPAR) e cellule epatiche tradizionali (HepG2-NE, che esprimono NTCP umani).

Modellazione dell'infezione da virus dell'epatite B nelle cellule non epatiche 293T-NE-3NRs

HBV mainly infects human hepatocytes, but it has also been found to infect extrahepatic tissues such as kidney and testis. Nonetheless, cell-based HBV ...

La replicazione virale dell'HBV nell'extraepatico gioca un ruolo importante nella patogenesi delle sindromi extraepatiche. Attualmente, i modelli di coltura cellulare per l'avvio dell'infezione da HBV extraepatica sono limitati. Presentiamo un modello di infezione non epatica in vitro per aiutare a identificare nuovi fattori ospiti che influenzano la replicazione dell'HBV e indagare le malattie renali correlate all'HBV.Rispetto ai tradizionali modelli di infezione da HBV, abbiamo adottato e progettato la linea cellulare 293T, 293T-NE-3NR e l'abbiamo co-coltivata con HepG2.2.15. L'infezione da HBV deve essere eseguita in un laboratorio di livello due o biosicurezza di livello tre. Le pratiche di sicurezza di laboratorio dovrebbero essere seguite per garantire la sicurezza del personale di laboratorio e tutti i ricercatori dovrebbero essere vaccinati e rilevare gli anticorpi HBS positivi prima di eseguire esperimenti HBV.Inizia coltivando le cellule HepG2.2.15 tenendo presente che il supernatante cellulare e tutte le punte, le fiasche, le piastre e i tubi che entrano in contatto con HepG2.2.15 dovrebbero essere immersi nel 2% di virucidio durante la notte prima dello smaltimento. Rimuovere il flaconcino contenente cellule HepG2.2.15 dall'azoto liquido e scongelarlo in un delicato vortice in un bagno d'acqua di 37 gradi Celsius. Trasferire le cellule in un pallone da coltura del tessuto quadrato di 25 centimetri e aggiungere quattro millilitri di mezzo di coltura completo.Coltura le cellule HepG2.2.15 a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica in un incubatore umidificato. Cambia il mezzo ogni tre giorni. Quando è pronto, raccogliere il supernatante cellulare in un tubo di centrifuga da 50 millilitri.Chiudere saldamente il coperchio e avvolgerlo con pellicola di paraffina. Per rimuovere i frammenti cellulari, filtrare il supernatante HepG2.2.15 con una membrana di 0,45 micrometri in un nuovo tubo di centrifuga da 50 millilitri. Quindi aggiungere 14 millilitri di supernatante filtrato a una colonna concentratore di virus e chiudere il coperchio.Centrifugare la colonna a 3.200 volte g per 35 minuti in una centrifuga rotante orizzontale e raccogliere il concentrato supernatante HepG2.2.15 in un tubo da 1,5 millilitri. Eseguire PCR in tempo reale per assicurarsi che la concentrazione se il DNA HBV nel concentrato supernatante HepG2.2.15 si trova all'interno dell'intervallo di curve standard. Diluire il concentrato di 20 volte aggiungendo 10 microlitri a 190 microlitri di DMEM in un tubo di microcentrifugo da 1,5 millilitri.Insieme al concentrato supernatante, preparare un controllo negativo, un controllo positivo e quattro diluizioni del riferimento quantitativo. Aggiungere 450 microlitri di tampone di estrazione del DNA HBV a ciascun campione e centrifugarli a 12.000 volte g per cinque minuti a temperatura ambiente. Unire 27 microlitri di mix master PCR e tre microlitri di enzima Taq polimerasi per campione in tubi PCR posti sul ghiaccio.Quindi aggiungere 20 microlitri del campione centrifugato a ciascun tubo. Eseguire la PCR in tempo reale in base alle indicazioni manoscritte ed esportare i valori CT per ottenere una curva standard. Dividere il concentrato supernatante HepG2.2.15 in aliquote e conservarlo a meno 80 gradi Celsius fino a quando non è pronto per l'uso.Preparare il mezzo di infezione secondo le indicazioni manoscritte. Quindi seminare HepG2-NE in due pozzi, 293T-NE-3NR cellule in due pozzi e 293T-NE in un pozzo. Incubare le cellule a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica in un incubatore umidificato per 24 ore.Dopo l'incubazione, osservare le cellule e procedere con l'infezione se sono sane. Aggiungere 500 microlitri del complesso di infezione ad ogni pozzo e incubare le cellule per altre 24 ore. Lavare le cellule due volte con 500 microlitri di PBS.Quindi aggiungere un millilitro di mezzo ad ogni pozzo. Cambiare delicatamente il mezzo ogni due giorni. Il giorno 11, lavare delicatamente le cellule due volte con 500 microlitri di PBS e fissare le cellule con metanolo freddo ghiaccio per l'immunofluorescenza.Semina 100.000 cellule per pozzo di HepG-NE in due pozzi, 293T-NE-3NR in due pozzi e 293T-NE in un unico pozzo della piastra. Semina 100.000 cellule per pozzo di HepG2.2.15 in cinque inserti a membrana in una piastra separata a sei potti. Incubare le cellule per 24 ore.Dopo l'incubazione, assicurarsi che le cellule siano tutte aderenti e in buono stato. Scartare il mezzo nella piastra a sei pozzi e gli inserti della membrana cellulare. Quindi posizionare gli inserti della membrana con HepG2.2.15 nella piastra a sei pozzi seminata con HepG-NE, 293T-NE-3NRs e 293T-NE.Incubare le cellule a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica in un incubatore umidificato, cambiando il mezzo ogni tre o quattro giorni. Dopo 10 giorni, rimuovere gli inserti della membrana, lavare delicatamente le cellule con PBS due volte e fissare le cellule con metanolo freddo ghiaccio per l'immunofluorescenza. L'incubazione con l'anticorpo primario HBcAg e il DAPI ha portato a una colorazione distinta se osservata con un obiettivo 10X su un microscopio invertito fluorescente.La localizzazione nucleare è stata confermata dalla colorazione con l'espressione DAPI e NTCP-EGFP è stata identificata con la fluorescenza verde. I siti di espressione di HBcAg erano situati con fluorescenza rossa. Quando DAPI, NTCP e HBcAg si trovano nella stessa cella, la cella è stata infettata correttamente da HBV.Il gruppo Cyclosporin A era il controllo negativo perché impedisce all'HBV di entrare nelle celle bloccando NTCP. HBcAg è stato rilevato in 293T-NE-3NR, ma non in cellule 293T-NE che indicano NTCP non è l'unico fattore essenziale per l'infezione da HBV in 293T. Un buon stato cellulare e un funzionamento efficiente sono i punti chiave per ottenere risultati di infezione di successo.Anche il lavaggio delicato e il cambiamento del supporto dopo l'infezione sono importanti. In alternativa, il metodo di infezione da HBV con cellule HepG2-NE a base di epatoma ha una maggiore efficienza di infezione rispetto a questo metodo ed è adatto per lo screening anti-HBV dei farmaci. Modellare l'infezione da HBV in 293T-NE-3NR è un utile complimento per il modello cellulare tradizionale a causa dello sfondo non epatico di queste cellule.Questo metodo faciliterà lo studio dell'infezione da HBV nelle cellule non epatiche e dei fattori ospiti necessari per il fegato dell'HBV.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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Ricerca

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Rilevamento di copia basso numero di DNA virale integrato formato da In Vitro l'infezione di epatite B

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