Name: modeling hepatitis b virus infection in non-hepatic 293t-ne-3nrs cells
Uploaded: 2020-06-05T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av National Natural Science Foundation of China (nr. 81870432 og 81570567 til X.L.Z.), (nr. 81571994 til P.N.S.), Research Fund for International Young Scientists (nr. 81950410640 til W.I.); Stiftelsen Li Ka Shing Shantou University (nr. L1111 2008 til P.N.S.). Vi vil gjerne takke prof. Stanley Lin fra Shantou University Medical College for nyttige råd.

Kultur, samling av supernatanter fra HepG2.2.15 celler og HBV-infeksjon bør utføres i biosikkerhetsnivå II (P2) eller biosikkerhetsnivå III (P3) laboratorium i henhold til biosikkerhetsveiledningen i landet. Laboratoriesikkerhetspraksis bør følges for å sikre sikkerheten til laboratoriepersonell, og alle bør vaksineres og oppdages HBsAb positivt før de utfører HBV-eksperimenter. Følg tilstanden til cellene på hvert trinn før du går videre til neste trinn. Human serum prøver ble brukt i samsvar med godkjenn...

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+hepatitis+report,+2017.">Global hepatitis report, 2017.</a> World Health Organization. , (2017).</li><li>Yoffe, B., Burns, D. K., Bhatt, H. S., Combes, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+hepatitis+B+virus+DNA+sequences+in+patients+with+acute+hepatitis+B+infection.">Extrahepatic hepatitis B virus DNA sequences in patients with acute hepatitis B infection.</a> Hepatology. 12, 187-192 (1990).</li><li>Mason, A., Wick, M., White, H., Perrillo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+replication+in+diverse+cell+types+during+chronic+hepatitis+B+virus+infection.">Hepatitis B virus replication in diverse cell types during chronic hepatitis B virus infection.</a> Hepatology. 18, 781-789 (1993).</li><li>Yan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+taurocholate+cotransporting+polypeptide+is+a+functional+receptor+for+human+hepatitis+B+and+D+virus.">Sodium taurocholate cotransporting polypeptide is a functional receptor for human hepatitis B and D virus.</a> eLife. 1, 00049 (2012).</li><li>Tang, H., McLachlan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+regulation+of+hepatitis+B+virus+by+nuclear+hormone+receptors+is+a+critical+determinant+of+viral+tropism.">Transcriptional regulation of hepatitis B virus by nuclear hormone receptors is a critical determinant of viral tropism.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 1841-1846 (2001).</li><li>Sells, M. A., Chen, M. L., Acs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+hepatitis+B+virus+particles+in+Hep+G2+cells+transfected+with+cloned+hepatitis+B+virus+DNA.">Production of hepatitis B virus particles in Hep G2 cells transfected with cloned hepatitis B virus DNA.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84, 1005-1009 (1987).</li><li>Sells, M. A., Zelent, A. Z., Shvartsman, M., Acs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicative+intermediates+of+hepatitis+B+virus+in+HepG2+cells+that+produce+infectious+virions.">Replicative intermediates of hepatitis B virus in HepG2 cells that produce infectious virions.</a> Journal of Virology. 62, 2836-2844 (1988).</li><li>Watashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclosporin+A+and+its+analogs+inhibit+hepatitis+B+virus+entry+into+cultured+hepatocytes+through+targeting+a+membrane+transporter,+sodium+taurocholate+cotransporting+polypeptide+(NTCP).">Cyclosporin A and its analogs inhibit hepatitis B virus entry into cultured hepatocytes through targeting a membrane transporter, sodium taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP).</a> Hepatology. 59, 1726-1737 (2014).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defined+host+factors+support+HBV+infection+in+non-hepatic+293T+cells.">Defined host factors support HBV infection in non-hepatic 293T cells.</a> Journal of Cell and Molecular Medicine. 24, 2507-2518 (2020).</li><li>Xia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell-derived+hepatocytes+as+a+model+for+hepatitis+B+virus+infection,+spreading+and+virus-host+interactions.">Human stem cell-derived hepatocytes as a model for hepatitis B virus infection, spreading and virus-host interactions.</a> Journal of Hepatology. 66, 494-503 (2017).</li><li>Ortega-Prieto, A. M., Cherry, C., Gunn, H., Dorner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Model+Systems+for+Hepatitis+B+Virus+Research.">In Vivo Model Systems for Hepatitis B Virus Research.</a> ACS Infectious Diseases. 5, 688-702 (2019).</li><li>Liang, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B:+the+virus+and+disease.">Hepatitis B: the virus and disease.</a> Hepatology. 49, 13-21 (2009).</li><li>Nie, Y. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recapitulation+of+hepatitis+B+virus-host+interactions+in+liver+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Recapitulation of hepatitis B virus-host interactions in liver organoids from human induced pluripotent stem cells.</a> EBioMedicine. 35, 114-123 (2018).</li><li>Nishinakamura, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+kidney+organoids:+progress+and+remaining+challenges.">Human kidney organoids: progress and remaining challenges.</a> Nature Reviews Nephrology. 15, 613-624 (2019).</li></ol>

Her introduserer vi protokoller for HBV-infeksjon i ikke-hepatiske 293T-NE-3NRs og hepatomabaserte HepG2-NE-celler. 293T-NE-3NRs var egnet for HBV-infeksjon ved både høy og lav GEq. Følgende kritiske tiltak må tas i betraktning mens du bruker protokollen vår. Cellestatusen er en viktig faktor for en vellykket infeksjon. Infeksjonsmediet må endres i tide etter den første perioden med HBV-infeksjon. 293T-NE-3NRs celler er vanligvis skjøre etter infeksjon med høye virale titers. Derfor må disse cellene vaskes fors...

Hepatitt B påvirker livene til mer enn 2 milliarder mennesker og er en av de store truslene mot folkehelsen. Omtrent 257 millioner mennesker er kronisk smittet med hepatitt B-virus (HBV) over hele verden, noe som forårsaker en stor byrde for samfunnet1. Hepatocytter er ikke de eneste cellene som er infisert av HBV og andre celler i ikke-levervev, som nyre og testis, er også smittet av dette viruset2,3. For tiden er HBV infeksjoncellemodeller begrenset til humane hepatocytter med bare få ikke-levercellelinjemodeller. Dette hindrer studien av HBV-infeksjon og HBV-relatert patologi av ikke-levervev. Her presenterer vi protokoller for å studere HBV-infeksjon i ikke-lever-293T-celler, så vel som i hepatomabaserte celler.
Natriumtaurolitt samtidig transport av polypeptid (NTCP) er en funksjonell reseptor for human hepatitt B og hepatitt D-virus4. Hepatocyt kjernefaktor 4α (HNF4α), retinoid X reseptor α (RXRα) og peroksisom proliferator-aktivert reseptor α (PPARα) er leverberikede transkripsjonsfaktorer som begrenser viral tropisme av HBV. De har blitt verifisert for å fremme HBV pregenomic RNA syntese og støtte HBV replikering i en nonhepatoma celle linje5. Vi konstruerte tre forskjellige cellelinjer, HepG2-cellelinjer som uttrykte NTCP (HepG2-NE), 293T cellelinje som uttrykker NTCP (293T-NE) og 293T cellelinje som uttrykker fire vertsgener; NTCP, HNF4α, RXRα og PPARα (293T-NE-3NR). To metoder for HBV-infeksjon ble utviklet basert på 293T-NE-3NRs (figur 1). Den første metoden bruker inokulasjon i 293T-NE-3NRs med høy viral genom ekvivalens (høy GEq (150), DMSO og PEG8000) for 24 timer. Den andre metoden benytter co-culturing 293T-NE-3NRs med HepG2.2.15, som kan produsere HBV partikler (lav GEq (ca 1,83) uten DMSO og PEG8000), og dermed tett emulere naturlige forhold.
HepG2.2.15 celler er avledet fra HepG2-linjen og kronisk utskiller smittsomme HBV, samt subvirale partikler i kulturmediet6,7. Cyklosporin A (CsA) er et immunsuppressivt middel som er klinisk brukt til undertrykkelse av xenograft-avvisning. Studier har vist at CsA hemmer HBV-inntreden i kultiverte hepatocytter ved å hemme transportøraktiviteten til NTCP og blokkere bindingen av NTCP til store konvoluttproteiner8.
HepG2-NE-celler ble brukt som positiv kontroll, mens CsA-behandlede celler ble brukt som negativ kontroll. Ved å sammenligne med de positive og negative kontrollgruppene, kan vi finne ut hvilke vertsgener som spiller en kritisk rolle i HBV-infeksjon. I tillegg, gjennom denne modusen for HBV-infeksjon, kan vi også finne andre nye mekanismer eller vertsgener involvert i HBV-infeksjon.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.45&#956;m membrane filter</td>
			<td>Millex-HV</td>
			<td>SLHU033RB</td>
			<td>Filter for HepG 2.2.15 supernatant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T-NE</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T-NE-3NRs</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>594 labeled goat against rabbit IgG</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZF-0516</td>
			<td>For immunofluorescence assay,second antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>TCP010006</td>
			<td>For co-culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra 15 ml</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC910008</td>
			<td>For concentration of HepG 2.2.15 supernatant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>ST023</td>
			<td>For immunofluorescence assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclosporin A</td>
			<td>Sangon biotech</td>
			<td>59865-13-3</td>
			<td>inhibitor of HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C1006</td>
			<td>For nuclear staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diagnostic kit for Quantification of Hepatitis B Virus DNA(PCR-Fluorescence Probing)</td>
			<td>DAAN GENE</td>
			<td>7265-2013</td>
			<td>For HBV DNA detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>HyClong</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5879</td>
			<td>For improvement of infection efficiency</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum&#65288;FBS&#65289;</td>
			<td>CLARK Bioscience</td>
			<td>FB25015</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Axio observer Z1</td>
			<td>For immunofluorescence assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HepG2-NE</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBcAg antibody</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZA-0121</td>
			<td>For immunofluorescence assay, primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZLI-9062</td>
			<td>For cell wash</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG8000</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P8260</td>
			<td>For infection medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin-Glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10378016</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transwell</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>3412</td>
			<td>For co-culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>sigma-Aldrich</td>
			<td>WXBB7485V</td>
			<td>For PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virkon</td>
			<td>Douban</td>
			<td>6971728840012</td>
			<td>Viruside</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling hepatitis b virus infection in non-hepatic 293t-ne-3nrs cells

HBV infiserer hovedsakelig humane hepatocytter, men det har også blitt funnet å infisere ekstrahepatisk vev som nyre og testis. Likevel er cellebaserte HBV-modeller begrenset til hepatomacellelinjer (som HepG2 og Huh7) som overutså en funksjonell HBV-reseptor, natriumtaurocholate co-transport polypeptid (NTCP). Her brukte vi 293T-NE-3NRs (293T overexpressing human NTCP, HNF4α, RXRα og PPARα) og HepG2-NE (HepG2 overexpressing NTCP) som modellcellelinjer.   HBV-infeksjon i disse cellelinjene ble utført enten ved hjelp av konsentrerte HBV-viruspartikler fra HepG2.2.15 eller samtidig hepG2.2.15 med målcellelinjene. HBcAg immunofluorescens for HBcAg ble utført for å bekrefte HBV-infeksjon. De to metodene som presenteres her vil hjelpe oss med å studere HBV-infeksjon i ikke-levercellelinjer.

Vi konstruerte pSIN-NTCP-EGFP plasmid som uttrykte NTCP- og EGFP-fusjon og med puromycinresistens. Plasmid ble transfected inn i HepG2 og 293T celler for å konstruere stabile cellelinjer HepG2-NE og 293T-NE uttrykker NTCP og EGFP. Plasmids (pSIN-HNF4α, pSIN-RXRα, pLV-PPARα-puro-flagg) med puromycin resistens og uttrykk ble transfected inn i 293T-NE-celler for å konstruere en stabil cellelinje som uttrykker 4 vertsgener9. Uttrykket for NTCP-EGFP kan observeres ved grønn fluorescens, og verifi...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells at JoVE.com

Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells

Dette manuskriptet beskriver en detaljert protokoll for hepatitt B-virus (HBV) infeksjon i nye konstruerte 293T-celler (293T-NE-3NRs, uttrykker menneskelig NTCP, HNF4α, RXRα og PPARα) og tradisjonelle leverceller (HepG2-NE, uttrykker menneskelig NTCP).

Modellering hepatitt B Virus infeksjon i ikke-hepatisk 293T-NE-3NRs celler

HBV mainly infects human hepatocytes, but it has also been found to infect extrahepatic tissues such as kidney and testis. Nonetheless, cell-based HBV ...

HBV viral replikering i ekstrahepatisk spiller en viktig rolle i patogenesen av ekstrahepatiske syndromer. For tiden er cellekulturmodeller for å starte ekstrahepatisk HBV-infeksjon begrenset. Vi presenterer en in vitro ikke-leverinfeksjonsmodell for å identifisere nye vertsfaktorer som påvirker HBV-replikering og undersøker HBV-relaterte nyresykdommer.Sammenlignet med tradisjonelle HBV infeksjon modeller, vi vedtatt og konstruert 293T celle linje, 293T-NE-3NR, og co-kultivert det med HepG2.2.15. HBV-infeksjon bør utføres i et biosikkerhetsnivå to eller biosikkerhetsnivå tre laboratorium. Laboratoriesikkerhetspraksis bør følges for å sikre sikkerheten til laboratoriepersonell og alle forskere bør vaksineres og oppdage HBS antistoff positivt før du utfører HBV eksperimenter.Begynn med å kultere HepG2.2.15-cellene med tanke på at cellens supernatante samt alle tips, flasker, plater og rør som kommer i kontakt med HepG2.2.15, skal være gjennomvåt i 2% virucide over natten før avhending. Fjern hetteglasset som inneholder HepG2.2.15 celler fra flytende nitrogen og tin det i skånsom virvlende i et 37 graders Celsius vannbad. Overfør cellene til en 25 centimeter firkantet vevskulturkolbe og tilsett fire milliliter med komplett kulturmedium.Kultur HepG2.2.15 celler ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid i en fuktet inkubator. Bytt medium hver tredje dag. Når du er klar, samle cellen supernatant i en 50 milliliter sentrifuge rør.Lukk lokket godt og pakk det med parafinfilm. For å fjerne cellefragmentene, filtrer HepG2.2.15 supernatant med en 0,45 mikrometermembran inn i et nytt 50 milliliter sentrifugerør. Tilsett deretter 14 milliliter filtrert supernatant til en viruskonsentratorkolonne og lukk lokket.Sentrifuger kolonnen på 3, 200 ganger g i 35 minutter i en horisontal spinnende sentrifuge og samle HepG2.2.15 supernatant konsentrat i en 1,5 milliliter tube. Kjør pcr i sanntid for å sikre at konsentrasjonen hvis HBV DNA i HepG2.2.15 supernatant konsentrat er innenfor standard kurveområdet. Fortynn konsentratet 20 ganger ved å tilsette 10 mikroliter til 190 mikroliter DMEM i et 1,5 milliliter mikrocentrifugerør.Sammen med det overnaturlige konsentratet, lag en negativ kontroll, positiv kontroll og fire fortynninger av den kvantitative referansen. Tilsett 450 mikroliter HBV DNA ekstraksjon buffer til hver prøve og sentrifuge dem på 12, 000 ganger g i fem minutter ved romtemperatur. Kombiner 27 mikroliter PCR master mix og tre mikroliter Taq polymerase enzym per prøve i PCR rør plassert på is.Tilsett deretter 20 mikroliter av sentrifugert prøve til hvert rør. Utfør sanntids-PCR i henhold til manuskriptretninger og eksporter CT-verdiene for å oppnå en standardkurve. Del HepG2.2.15 supernatant konsentrat i aliquots og lagre den på minus 80 grader Celsius til den er klar til bruk.Forbered infeksjonsmedium i henhold til manuskriptretninger. Deretter frø HepG2-NE i to brønner, 293T-NE-3NR celler i to brønner, og 293T-NE i en brønn. Inkuber cellene ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid i en fuktet inkubator i 24 timer.Etter inkubasjonen, observere cellene og fortsette med infeksjon hvis de er friske. Tilsett 500 mikroliter av infeksjonskomplekset til hver brønn og inkuber cellene i ytterligere 24 timer. Vask cellene to ganger med 500 mikroliter PBS.Legg deretter til en milliliter medium til hver brønn. Bytt mediet forsiktig annenhver dag. På dag 11 vasker cellene forsiktig to ganger med 500 mikroliter PBS og fikser cellene med iskald metanol for immunofluorescence.Frø 100, 000 celler per brønn av HepG-NE i to brønner, 293T-NE-3NRs i to brønner, og 293T-NE i en brønn av platen. Frø 100, 000 celler per brønn hepG2.2.15 i fem membraninnsatser i en egen seksbrønns plate. Inkuber cellene i 24 timer.Etter inkubasjonen, sørg for at cellene er alle tilhenger og i god tilstand. Kast mediet i seksbrønnsplaten og cellemembraninnsatsene. Plasser deretter membraninnsatsene med HepG2.2.15 i seksbrønnsplaten seeded med HepG-NE, 293T-NE-3NRs og 293T-NE.Inkuber cellene ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid i en fuktet inkubator, og endre mediet hver tredje til fjerde dag. Etter 10 dager, fjern membranen innsatser, forsiktig vaske cellene med PBS to ganger, og fikse cellene med iskald metanol for immunofluorescence. Inkubasjon med HBcAg primære antistoff og DAPI resulterte i en distinkt farging når observert med et 10X mål på et fluorescerende invertert mikroskop.Kjernefysisk lokalisering ble bekreftet ved farging med DAPI og NTCP-EGFP uttrykk ble identifisert med grønn fluorescens. Uttrykksområdene til HBcAg var plassert med rød fluorescens. Når DAPI, NTCP og HBcAg er i samme celle, er cellen infisert med HBV.Cyclosporin A-gruppen var den negative kontrollen fordi den hindrer HBV i å komme inn i celler ved å blokkere NTCP. HBcAg ble oppdaget i 293T-NE-3NRs, men ikke i 293T-NE-celler som indikerer at NTCP ikke er den eneste faktoren som er viktig for HBV-infeksjon i 293T. God cellestatus og effektiv drift er de viktigste punktene for å få vellykkede infeksjonsresultater.Skånsom vasking og endring av media etter infeksjon er også viktig. Som et alternativ, HBV infeksjon metode med hepatoma-baserte HepG2-NE celler har høyere infeksjon effektivitet enn denne metoden og er egnet for anti-HBV narkotika screening. Modellering HBV infeksjon i 293T-NE-3NR er et nyttig kompliment til den tradisjonelle cellemodellen på grunn av ikke-leverbakgrunnen til disse cellene.Denne metoden vil lette studien av HBV-infeksjon i ikke-leverceller samt vertsfaktorer som kreves for leveren av HBV.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

RNAi Screening for Host Factors Involved in Vaccinia Virus Infection using Drosophila Cells

RNAi Screening for Host Factors Involved in Vaccinia Virus Infection using Drosophila Cells

Viral pathogens represent a significant public health threat; not only can viruses cause natural epidemics of human disease, but their potential use in ...

Recombinant Retroviral Production and Infection of B Cells

The transgenic expression of genes in eukaryotic cells is a powerful reverse genetic approach in which a gene of interest is expressed under the control ...

Visualizing Dengue Virus through Alexa Fluor Labeling

The early events in the interaction between virus and cell can have profound influence on the outcome of infection. Determining the factors 
that ...

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication

En protokoll for Analysere Hepatitt C-virus Replication

Hepatitis C Virus (HCV) affects 3% of the world&#8217;s population and causes serious liver ailments including&#160;chronic hepatitis, cirrhosis, and ...

Modeling The Lifecycle Of Ebola Virus Under Biosafety Level 2 Conditions With Virus-like Particles Containing Tetracistronic Minigenomes

Modellering livssyklusen til Ebola virus Under biosikkerhetsnivå 2 forhold med viruslignende partikler som inneholder Tetracistronic Minigenomes

Ebola viruses cause severe hemorrhagic fevers in humans and non-human primates, with case fatality rates as high as 90%. There are no approved vaccines or ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Nøytrofile Isolering og analyse for å fastslå deres rolle i lymfom Cell Følsomhet for Terapeutiske midler

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle

Utvikling av en hepatitt B virus Reporter system for å overvåke tidlige stadier av Replication Cycle

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), ...

Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

Oppdagelse av lavt kopi nummer integrert virus-DNA dannet av In Vitro hepatitt B-smitte

Hepatitis B Virus (HBV) is a common blood-borne pathogen causing liver cancer and liver cirrhosis resulting from chronic infection. The virus generally ...

"Liver-on-a-Chip" Cultures of Primary Hepatocytes and Kupffer Cells for Hepatitis B Virus Infection

"Lever på-Chip" kulturer av primære hepatocytter og Kupffer celler for hepatitt B-smitte

Despite the exceptional infectivity of the hepatitis B virus (HBV) in vivo, where only three viral genomes can result in a chronicity of experimentally ...