Name: modeling hepatitis b virus infection in non-hepatic 293t-ne-3nrs cells
Uploaded: 2020-06-05T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells at JoVE.com

Detta arbete stöddes av National Natural Science Foundation of China (nr 81870432 och 81570567 till X.L.Z.), (nr 81571994 till P.N.S.), Forskningsfonden för internationella unga forskare (nr 81950410640 till W.I.); Li Ka Shing Shantou University Foundation (nr. L1111 2008 till P.N.S.). Vi vill tacka prof. Stanley Lin från Shantou University Medical College för användbara råd.

Kultur, insamling av supernatants från HepG2.2.15 celler och HBV infektion bör utföras i biosäkerhet nivå II (P2) eller biosäkerhet nivå III (P3) laboratorium enligt biosäkerhet vägledning i landet. Laboratoriesäkerhetsrutiner bör följas för att garantera laboratoriepersonalens säkerhet, och alla bör vaccineras och detekteras HBsAb-positiva innan HBV-experiment utförs. Observera cellernas tillstånd vid varje steg innan du fortsätter till nästa steg. Humana serumprover användes i enlighet med det godk?...

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+hepatitis+report,+2017.">Global hepatitis report, 2017.</a> World Health Organization. , (2017).</li><li>Yoffe, B., Burns, D. K., Bhatt, H. S., Combes, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+hepatitis+B+virus+DNA+sequences+in+patients+with+acute+hepatitis+B+infection.">Extrahepatic hepatitis B virus DNA sequences in patients with acute hepatitis B infection.</a> Hepatology. 12, 187-192 (1990).</li><li>Mason, A., Wick, M., White, H., Perrillo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+replication+in+diverse+cell+types+during+chronic+hepatitis+B+virus+infection.">Hepatitis B virus replication in diverse cell types during chronic hepatitis B virus infection.</a> Hepatology. 18, 781-789 (1993).</li><li>Yan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+taurocholate+cotransporting+polypeptide+is+a+functional+receptor+for+human+hepatitis+B+and+D+virus.">Sodium taurocholate cotransporting polypeptide is a functional receptor for human hepatitis B and D virus.</a> eLife. 1, 00049 (2012).</li><li>Tang, H., McLachlan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+regulation+of+hepatitis+B+virus+by+nuclear+hormone+receptors+is+a+critical+determinant+of+viral+tropism.">Transcriptional regulation of hepatitis B virus by nuclear hormone receptors is a critical determinant of viral tropism.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 1841-1846 (2001).</li><li>Sells, M. A., Chen, M. L., Acs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+hepatitis+B+virus+particles+in+Hep+G2+cells+transfected+with+cloned+hepatitis+B+virus+DNA.">Production of hepatitis B virus particles in Hep G2 cells transfected with cloned hepatitis B virus DNA.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84, 1005-1009 (1987).</li><li>Sells, M. A., Zelent, A. Z., Shvartsman, M., Acs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicative+intermediates+of+hepatitis+B+virus+in+HepG2+cells+that+produce+infectious+virions.">Replicative intermediates of hepatitis B virus in HepG2 cells that produce infectious virions.</a> Journal of Virology. 62, 2836-2844 (1988).</li><li>Watashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclosporin+A+and+its+analogs+inhibit+hepatitis+B+virus+entry+into+cultured+hepatocytes+through+targeting+a+membrane+transporter,+sodium+taurocholate+cotransporting+polypeptide+(NTCP).">Cyclosporin A and its analogs inhibit hepatitis B virus entry into cultured hepatocytes through targeting a membrane transporter, sodium taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP).</a> Hepatology. 59, 1726-1737 (2014).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defined+host+factors+support+HBV+infection+in+non-hepatic+293T+cells.">Defined host factors support HBV infection in non-hepatic 293T cells.</a> Journal of Cell and Molecular Medicine. 24, 2507-2518 (2020).</li><li>Xia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell-derived+hepatocytes+as+a+model+for+hepatitis+B+virus+infection,+spreading+and+virus-host+interactions.">Human stem cell-derived hepatocytes as a model for hepatitis B virus infection, spreading and virus-host interactions.</a> Journal of Hepatology. 66, 494-503 (2017).</li><li>Ortega-Prieto, A. M., Cherry, C., Gunn, H., Dorner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Model+Systems+for+Hepatitis+B+Virus+Research.">In Vivo Model Systems for Hepatitis B Virus Research.</a> ACS Infectious Diseases. 5, 688-702 (2019).</li><li>Liang, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B:+the+virus+and+disease.">Hepatitis B: the virus and disease.</a> Hepatology. 49, 13-21 (2009).</li><li>Nie, Y. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recapitulation+of+hepatitis+B+virus-host+interactions+in+liver+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Recapitulation of hepatitis B virus-host interactions in liver organoids from human induced pluripotent stem cells.</a> EBioMedicine. 35, 114-123 (2018).</li><li>Nishinakamura, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+kidney+organoids:+progress+and+remaining+challenges.">Human kidney organoids: progress and remaining challenges.</a> Nature Reviews Nephrology. 15, 613-624 (2019).</li></ol>

Här introducerar vi protokoll för HBV infektion i icke-lever 293T-NE-3NRs och hepatoma-baserade HepG2-NE celler. 293T-NE-3NR var lämpliga för HBV-infektion vid både hög och låg GEq. Följande kritiska åtgärder måste beaktas när du använder vårt protokoll. Cellstatus är en viktig faktor för en lyckad infektion. Infektionsmediet måste ändras i tid efter den inledande perioden av HBV-infektion. 293T-NE-3NRs celler är vanligtvis bräckliga efter infektion med hög viral titers. Därför måste dessa celler ...

Hepatit B påverkar livet för mer än 2 miljarder människor och är ett av de största hoten mot folkhälsan. Cirka 257 miljoner människor är kroniskt smittade med hepatit B-virus (HBV) över hela världen, vilket orsakar en stor börda för samhället1. Hepatocyter är inte de enda celler som smittats av HBV och andra celler i icke-levervävnad, såsom njure och testikel, är också smittade av detta virus2,3. För närvarande HBV infektion cellmodeller är begränsade till mänskliga hepatocyter med endast några icke-lever celllinje modeller. Detta hämmar studien av HBV-infektion och HBV-relaterad patologi av icke-levervävnader. Här presenterar vi protokoll för att studera HBV infektion i icke-lever 293T celler samt i hepatoma-baserade celler.
Natriumtaurocholate co-transporterar polypeptid (NTCP) är en funktionell receptor för human hepatit B och hepatit D-virus4. Hepatocyte nukleära faktor 4α (HNF4α), retinoider X receptor α (RXRα) och peroxisome proliferator-aktiverad receptor α (PPARα) är leverberikade transkriptionsfaktorer som begränsar viral tropism av HBV. De har verifierats för att främja HBV pregenomisk RNA-syntes och stödja HBV-replikering i en nonhepatoma cellinje5. Vi konstruerade tre olika cellinjer, HepG2 cellinjer uttrycker NTCP (HepG2-NE), 293T cellinje uttrycker NTCP (293T-NE) och 293T cellinje uttrycker fyra värdgener; NTCP, HNF4α, RXRα och PPARα (293T-NE-3NRs). Två metoder för HBV-infektion utvecklades baserat på 293T-NE-3NRs (figur 1). Den första metoden använder inympning i 293T-NE-3NRs med hög viral genomekvivalens (hög GEq (150), DMSO och PEG8000) för 24 h. Den andra metoden använder co-odling 293T-NE-3NRs med HepG2.2.15, som kan producera HBV partiklar (låg GEq (ca 1,83) utan DMSO och PEG8000), vilket nära efterliknar naturliga förhållanden.
HepG2.2.15 celler kommer från HepG2 linjen och kroniskt utsöndr infektiös HBV, samt subvirala partiklar i odlingsmediet6,7. Cyclosporin A (CsA) är ett immunsuppressivt kliniskt används för undertryckande av xenograft avslag. Studier har visat att CsA hämmar HBV inträde i odlade hepatocyter genom att hämma transportören verksamhet NTCP och blockerar bindning av NTCP till stora kuvert proteiner8.
HepG2-NE celler användes som positiv kontroll medan CsA behandlade celler användes som negativ kontroll. Genom att jämföra med de positiva och negativa kontrollgrupperna kan vi ta reda på vilka värdgener som spelar en avgörande roll i HBV-infektion. Dessutom, genom detta läge av HBV infektion, kan vi också hitta andra nya mekanismer eller värd gener som deltar i HBV infektion.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.45&#956;m membrane filter</td>
			<td>Millex-HV</td>
			<td>SLHU033RB</td>
			<td>Filter for HepG 2.2.15 supernatant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T-NE</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T-NE-3NRs</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>594 labeled goat against rabbit IgG</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZF-0516</td>
			<td>For immunofluorescence assay,second antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>TCP010006</td>
			<td>For co-culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra 15 ml</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC910008</td>
			<td>For concentration of HepG 2.2.15 supernatant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>ST023</td>
			<td>For immunofluorescence assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclosporin A</td>
			<td>Sangon biotech</td>
			<td>59865-13-3</td>
			<td>inhibitor of HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C1006</td>
			<td>For nuclear staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diagnostic kit for Quantification of Hepatitis B Virus DNA(PCR-Fluorescence Probing)</td>
			<td>DAAN GENE</td>
			<td>7265-2013</td>
			<td>For HBV DNA detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>HyClong</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5879</td>
			<td>For improvement of infection efficiency</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum&#65288;FBS&#65289;</td>
			<td>CLARK Bioscience</td>
			<td>FB25015</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Axio observer Z1</td>
			<td>For immunofluorescence assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HepG2-NE</td>
			<td>Laboratory construction</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Cell model for HBV infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBcAg antibody</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZA-0121</td>
			<td>For immunofluorescence assay, primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ZSGB-BIO</td>
			<td>ZLI-9062</td>
			<td>For cell wash</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG8000</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P8260</td>
			<td>For infection medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin-Glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10378016</td>
			<td>For culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transwell</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>3412</td>
			<td>For co-culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>sigma-Aldrich</td>
			<td>WXBB7485V</td>
			<td>For PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virkon</td>
			<td>Douban</td>
			<td>6971728840012</td>
			<td>Viruside</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling hepatitis b virus infection in non-hepatic 293t-ne-3nrs cells

HBV infekterar främst mänskliga hepatocyter, men det har också visat sig infektera extrahepatic vävnader såsom njure och testikel. Icke desto mindre, cell-baserade HBV modeller är begränsade till hepatoma cellinjer (såsom HepG2 och Huh7) överuttryck en funktionell HBV receptor, natrium taurocholat samtransport polypeptid (NTCP). Här använde vi 293T-NE-3NRs (293T overexpressing human NTCP, HNF4α, RXRα och PPARα) och HepG2-NE (HepG2 overexpressing NTCP) som modellcelllinjer.   HBV infektion i dessa cellinjer utfördes antingen med hjälp av koncentrerade HBV virus partiklar från HepG2.2.15 eller co-odling HepG2.2.15 med målet cellinjer. HBcAg immunofluorescens för HBcAg utfördes för att bekräfta HBV infektion. De två metoder som presenteras här kommer att hjälpa oss att studera HBV infektion i icke-lever cellinjer.

Vi konstruerade pSIN-NTCP-EGFP plasmid uttrycker NTCP och EGFP fusion och med puromycin motstånd. plasmid var transfected i HepG2 och 293T celler att konstruera stabila cellinjer HepG2-NE och 293T-NE uttrycker NTCP och EGFP. Plasmider (pSIN-HNF4α, pSIN-RXRα, pLV-PPARα-puro-flag) med puromycinresistens och uttryck transfekterades i 293T-NE-celler för att konstruera en stabil cellinje som uttrycker 4 värdgener9. Uttrycket av NTCP-EGFP kan observeras genom grön fluorescens och verifieras av qP...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells at JoVE.com

Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells

Detta manuskript beskriver ett detaljerat protokoll för hepatit B-virus (HBV) infektion i nya konstruerade 293T celler (293T-NE-3NRs, uttrycker mänskliga NTCP, HNF4α, RXRα och PPARα) och traditionella leverceller (HepG2-NE, uttrycker mänskliga NTCP).

Modellering hepatit B virusinfektion i icke-lever 293T-NE-3NRs Celler

HBV mainly infects human hepatocytes, but it has also been found to infect extrahepatic tissues such as kidney and testis. Nonetheless, cell-based HBV ...

HBV viral replikation i extrahepatic spelar en viktig roll i patogenesen vid extrahepatic syndrom. För närvarande cellkultur modeller för start extrahepatic HBV infektion är begränsade. Vi presenterar en in vitro icke-lever infektion modell för att identifiera nya värd faktorer som påverkar HBV replikation och undersöka HBV-relaterade njursjukdomar.Jämfört med traditionella HBV-infektionsmodeller antog vi och konstruerade 293T cellinje, 293T-NE-3NR, och samkulturerade den med HepG2.2.15. HBV-infektion ska utföras i en biosäkerhet nivå två eller biosäkerhet nivå tre laboratorium. Laboratoriesäkerhetspraxis bör följas för att garantera säkerheten för laboratoriepersonal och alla forskare bör vaccineras och upptäcka HBS-antikroppsasitivt innan HBV-experiment ska utföras.Börja med att kultföra HepG2.2.15-cellerna med tanke på att cellens supernatant samt alla tips, kolvar, plattor och rör som kommer i kontakt med HepG2.2.15 bör blötläggas i 2%virucide över natten före bortskaffande. Ta bort injektionsflaskan som innehåller HepG2.2.15-celler från flytande kväve och tina den i varsam virvlande i ett 37 graders Celsius vattenbad. Överför cellerna till en 25 centimeter kvadratisk vävnadsodlingskolv och tillsätt fyra milliliter komplett odlingsmedium.Odla HepG2.2.15-cellerna vid 37 grader Celsius och 5 %koldioxid i en befuktad inkubator. Byt medium var tredje dag. När du är klar, samla cellen supernatant i en 50 milliliter centrifugrör.Stäng locket ordentligt och linda in det med paraffinfilm. För att ta bort cellfragmenten, filtrera HepG2.2.15 supernatant med ett 0,45 mikrometermembran till ett nytt centrifugeringsrör på 50 milliliter. Tillsätt sedan 14 milliliter filtrerade supernatant till en viruskoncentratorkolumn och stäng locket.Centrifugera kolonnen vid 3, 200 gånger g i 35 minuter i en horisontell snurrande centrifug och samla in HepG2.2.15 supernatantkoncentratet till ett 1,5 milliliterrör. Kör realtids-PCR för att säkerställa att koncentrationen om HBV-DNA i supernatantkoncentratet HepG2.2.15 ligger inom standardkurvans intervall. Späd koncentratet 20-faldig genom att lägga till 10 mikroliter till 190 mikroliter av DMEM i en 1,5 milliliter mikrocentrifugrör.Tillsammans med supernatantkoncentratet, förbereda en negativ kontroll, positiv kontroll, och fyra utspädningar av den kvantitativa referensen. Tillsätt 450 mikroliter av HBV DNA-extraktionsbuffert till varje prov och centrifugera dem vid 12, 000 gånger g i fem minuter vid rumstemperatur. Kombinera 27 mikroliter av PCR master mix och tre mikroliter av Taq polymeras enzym per prov i PCR-rör placeras på is.Tillsätt sedan 20 mikroliter av det centrifugerade provet till varje rör. Utför realtids-PCR enligt manuskriptriktningar och exportera CT-värdena för att erhålla en standardkurva. Dela upp Supernatantkoncentratet HepG2.2.15 i alikvoter och förvara det på minus 80 grader Celsius tills det är klart att användas.Förbered infektionsmedium enligt manuskriptriktningar. Därefter utsäde HepG2-NE i två brunnar, 293T-NE-3NR celler i två brunnar, och 293T-NE i en brunn. Inkubera cellerna i 37 grader Celsius och 5%koldioxid i en befuktad inkubator i 24 timmar.Efter inkubationen, observera cellerna och gå vidare med infektion om de är friska. Tillsätt 500 mikroliter av infektionskomplexet till varje brunn och inkubera cellerna i ytterligare 24 timmar. Tvätta cellerna två gånger med 500 mikroliter PBS.Tillsätt sedan en milliliter medium till varje brunn. Byt medium försiktigt varannan dag. Dag 11, tvätta försiktigt cellerna två gånger med 500 mikroliter pbs och fixera cellerna med iskall metanol för immunofluorescens.Frö 100, 000 celler per brunn av HepG-NE i två brunnar, 293T-NE-3NRs i två brunnar, och 293T-NE i en brunn av plattan. Frö 100, 000 celler per brunn av HepG2.2.15 i fem membraninsatser i en separat sex-brunnsplatta. Inkubera cellerna i 24 timmar.Efter inkubationen, se till att cellerna är alla anhängare och i gott tillstånd. Kassera mediet i sex-brunnsplattan och cellmembraninläggen. Placera sedan membraninsatserna med HepG2.2.15 i sex-brunnsplattan som är seedade med HepG-NE, 293T-NE-3NRs och 293T-NE.Inkubera cellerna i 37 grader Celsius och 5%koldioxid i en befuktad inkubator, ändra mediet var tredje till fyra dagar. Efter 10 dagar, ta bort membranet skär, försiktigt tvätta cellerna med PBS två gånger, och fixera cellerna med iskall metanol för immunofluorescens. Inkubation med HBcAg primära antikroppen och DAPI resulterade i en distinkt färgning när observerats med en 10X objektiv på en fluorescerande inverterad mikroskop.Kärnteknik lokalisering bekräftades genom färgning med DAPI och NTCP-EGFP uttryck identifierades med gröna fluorescens. Uttrycket platser för HBcAg var belägna med röda fluorescens. När DAPI, NTCP och HBcAg är i samma cell har cellen framgångsrikt infekterats med HBV.Gruppen Cyclosporin A var den negativa kontrollen eftersom den förhindrar att HBV kommer in i celler genom att blockera NTCP. HBcAg upptäcktes i 293T-NE-3NRs, men inte i 293T-NE celler som anger NTCP är inte den enda faktor som är väsentliga för HBV infektion i 293T. Bra cellstatus och effektiv drift är de viktigaste punkterna för att få framgångsrika infektionsresultat.Skonsam tvättning och byte av media efter infektion är också viktigt. Som ett alternativ har HBV-infektionsmetod med hepatomabaserade HepG2-NE-celler högre infektionseffektivitet än denna metod och är lämplig för anti-HBV-läkemedelsscreening. Modellering HBV infektion i 293T-NE-3NR är en användbar komplimang till den traditionella cellen modellen på grund av att icke-lever bakgrund av dessa celler.Denna metod kommer att underlätta studiet av HBV-infektion i icke-leverceller samt värdfaktorer som krävs för lever av HBV.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

RNAi Screening for Host Factors Involved in Vaccinia Virus Infection using Drosophila Cells

RNAi Screening for Host Factors Involved in Vaccinia Virus Infection using Drosophila Cells

RNAi screening för Host faktorer som Vaccinia Virus Infektion med Drosophila Celler

Viral pathogens represent a significant public health threat; not only can viruses cause natural epidemics of human disease, but their potential use in ...

Recombinant Retroviral Production and Infection of B Cells

Rekombinant retroviral Produktion och infektion av B-celler

The transgenic expression of genes in eukaryotic cells is a powerful reverse genetic approach in which a gene of interest is expressed under the control ...

Visualizing Dengue Virus through Alexa Fluor Labeling

Visualisering Dengue genom Alexa Fluor Labeling

The early events in the interaction between virus and cell can have profound influence on the outcome of infection. Determining the factors 
that ...

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Efter Cell-öde i<em&gt; E. E. coli</em&gt; Efter infektion av fag lambda

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication

Ett protokoll för Analysera hepatit C-virus replikering

Hepatitis C Virus (HCV) affects 3% of the world&#8217;s population and causes serious liver ailments including&#160;chronic hepatitis, cirrhosis, and ...

Modeling The Lifecycle Of Ebola Virus Under Biosafety Level 2 Conditions With Virus-like Particles Containing Tetracistronic Minigenomes

Modellering livscykel Ebola Virus Under skyddsnivå 2 Villkor Med virusliknande partiklar innehållande Tetracistronic Minigenomes

Ebola viruses cause severe hemorrhagic fevers in humans and non-human primates, with case fatality rates as high as 90%. There are no approved vaccines or ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Neutrofil Isolering och analys för att fastställa deras roll i lymfom Cell Känslighet för terapeutiska medel

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle

Utveckling av en hepatit B-virus Reporter system för att övervaka de tidiga stadierna av replikationscykeln

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), ...

Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

Identifiering av låg exemplar nummer integrerat virus-DNA bildas av In Vitro hepatit B-infektion

Hepatitis B Virus (HBV) is a common blood-borne pathogen causing liver cancer and liver cirrhosis resulting from chronic infection. The virus generally ...

"Liver-on-a-Chip" Cultures of Primary Hepatocytes and Kupffer Cells for Hepatitis B Virus Infection

”Levern-på-ett-Chip” kulturer av primära hepatocyter och Kupffers celler för hepatit B virusinfektion

Despite the exceptional infectivity of the hepatitis B virus (HBV) in vivo, where only three viral genomes can result in a chronicity of experimentally ...