Name: methylation specific multiplex droplet pcr using polymer droplet generator device for hematological diagnostics
Uploaded: 2020-06-29T14:00:00
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作者感谢加拿大国家研究理事会的财政支持。

本研究中涉及人体样本的所有实验都经过 NRC 道德委员会的批准，并且是按照 NRC 关于遵循适用研究准则并符合加拿大魁北克州法律的人类主题的政策进行的。
1. 细胞制备
<ol><li>立即将冷冻的低温在37°C的水浴中放置5分钟，解冻冷冻的人类外周血单核细胞（PBMC）。</li>
	<li>反转冷冻两次，轻轻重新悬浮细胞，并使用1 mL移液器将细胞悬浮液转移到15 mL锥形管中。</li>
	<li>将 10 mL...

<ol>
	<li>Teitell, M., Richardson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+methylation+in+the+immune+system.">DNA methylation in the immune system.</a> Clinical Immunology. 109 (1), 2-5 (2003).</li><li>Suarez-Alvarez, B., Rodriguez, R. M., Fraga, M. F., L&#243;pez-Larrea, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+methylation:+A+promising+landscape+for+immune+system-related+diseases.">DNA methylation: A promising landscape for immune system-related diseases.</a> Trends in Genetics. 28 (10), 506-514 (2012).</li><li>Su&#225;rez-&#193;lvarez, B., Raneros, A. B., Ortega, F., L&#243;pez-Larrea, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+modulation+of+the+immune+function:+A+potential+target+for+tolerance.">Epigenetic modulation of the immune function: A potential target for tolerance.</a> Epigenetics. 8 (7), 694-702 (2013).</li><li>Kondilis-Mangum, H. D., Wade, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetics+and+the+adaptive+immune+response.">Epigenetics and the adaptive immune response.</a> Molecular Aspects of Medicine. 34 (4), 813-825 (2013).</li><li>Zouali, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Autoimmune Diseases. , (2014).</li><li>Wiencke, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+DNA+methylation+specific+droplet+digital+PCR+(mdPCR)+and+real+time+qPCR+with+flow+cytometry+in+characterizing+human+T+cells+in+peripheral+blood.">A comparison of DNA methylation specific droplet digital PCR (mdPCR) and real time qPCR with flow cytometry in characterizing human T cells in peripheral blood.</a> Epigenetics. 9 (10), 1360-1365 (2014).</li><li>Hindson, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+droplet+digital+PCR+system+for+absolute+quantitation+of+DNA+copy+number.">High-throughput droplet digital PCR system for absolute quantitation of DNA copy number.</a> Analytical Chemistry. 83 (22), 8604-8610 (2011).</li><li>Pinheiro, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+droplet+digital+polymerase+chain+reaction+format+for+DNA+copy+number+quantification.">Evaluation of a droplet digital polymerase chain reaction format for DNA copy number quantification.</a> Analytical Chemistry. 84 (2), 1003-1011 (2012).</li><li>Roy, E., Galas, J. C., Veres, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermoplastic+elastomers+for+microfluidics:+Towards+a+high-throughput+fabrication+method+of+multilayered+microfluidic+devices.">Thermoplastic elastomers for microfluidics: Towards a high-throughput fabrication method of multilayered microfluidic devices.</a> Lab on a Chip. 11 (18), 3193-3196 (2011).</li><li>Roy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+cellular+lysis+to+microarray+detection,+an+integrated+thermoplastic+elastomer+(TPE)+point+of+care+Lab+on+a+Disc.">From cellular lysis to microarray detection, an integrated thermoplastic elastomer (TPE) point of care Lab on a Disc.</a> Lab on a Chip. 15 (2), 406-416 (2015).</li><li>Malic, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+subtyping+of+white+blood+cells+using+a+thermoplastic+elastomer-based+microfluidic+emulsification+device+for+multiplexed,+methylation-specific+digital+droplet+PCR.">Epigenetic subtyping of white blood cells using a thermoplastic elastomer-based microfluidic emulsification device for multiplexed, methylation-specific digital droplet PCR.</a> Analyst. 44 (22), 6541-6553 (2019).</li><li>Malic, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer-based+microfluidic+chip+for+rapid+and+efficient+immunomagnetic+capture+and+release+of+Listeria+monocytogenes.">Polymer-based microfluidic chip for rapid and efficient immunomagnetic capture and release of Listeria monocytogenes.</a> Lab Chip. 15 (20), 3994-4007 (2015).</li><li>Malic, L., Morton, K., Clime, L., Veres, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=All-thermoplastic+nanoplasmonic+microfluidic+device+for+transmission+SPR+biosensing.">All-thermoplastic nanoplasmonic microfluidic device for transmission SPR biosensing.</a> Lab Chip. 13 (5), 798-810 (2013).</li></ol>

所提出的实验协议和方法允许内部mdPCR使用制造的TPE液滴发生器、热循环器和荧光显微镜。使用软 TPE 到 TPE 粘结的制造设备提供在所有通道壁上均匀的疏水表面特性，因此最终设备不需要任何表面处理，以便后续用作液滴发生器。这种材料经常被用于护理点平台，需要与高吞吐量,制造9、10、11、12、1310,11,12<sup ...

白血球（WBC）成分分析是血液诊断中要求最多的实验室测试之一。差异白细胞计数是一系列疾病的指标，包括感染、炎症、贫血和白血病，并且作为其他几种疾病的早期预后生物标志物正在接受调查。WBC 子类型的黄金标准涉及免疫污染和/或流式细胞学，这两种均需要昂贵且易不稳定的荧光抗体，而且往往高度依赖于操作者对样品制备的熟练程度。此外，这种方法仅适用于新鲜血液样本，因此不能冷冻样品进行装运或以后分析。
表观遗传标记最近已成为研究表型变异的有力分析工具。随后，人类白细胞群被证明具有细胞系DNA甲基化模式，允许对WBC子集进行精确表征。基于表观遗传标记的亚标提供了一个有希望的替代方案，不依赖于新鲜血液样本收集或昂贵的抗体，并可被利用为疾病发病和易感性,,1，2，3，4，52的生物标志4,物。13
已对白细胞亚型基因组（CpG岛）中甲基化特定CG富产区进行广泛的基因组图谱研究，以确定白细胞亚型特有的候选表观遗传标记。由于甲基化基因区域（如CD3Z和FOXP3，分别对应于CD3+T细胞和CD4 +CD25+调节T细胞）的甲基化基因区域，PCR+协议已经开发出来。Wiencke等人已经证明了双面液滴PCR在T细胞表观遗传亚蒂的效用，结果与流动活性细胞分选（FACS）分析6高度相关。这种定量基因分析方法依靠使用微流体7、8,启用的油水中乳液，将模板核酸分子和PCR试剂分割成数千个离散的、体积定义的亚纳米光基液滴，这些液滴含有零、一个或多个目标核酸拷贝。PCR 扩增在每个单独的液滴内进行，并测量每个液滴的端点荧光强度，从而可以绝对量化样品中存在的目标。与标准 qPCR 更精确、更准确、技术更简单的液滴 PCR 已建立，因此是 T 细胞临床评估的更有利的 DNA 甲基化方法。虽然是一种迅速出现的亚分法，但缺乏多路复用表观遗传分析，以同时探测各种甲基化CpG区域。这是常规白细胞差分计数所必需的。
本文提出了一种热塑性弹性体（TPE）液滴微流体装置，用于甲基化特异性多路复用液滴PCR（mdPCR）。该技术已用于基于细胞系DNA甲基化模式，即CD3Z和FOXP3CpG区域的表观遗传变异，分别描述特定的+白细胞亚型、CD3+T细胞和CD4+CD25+T-Regs。+与TPE液滴生成装置的制造方法一起描述了DNA提取、双硫化转化和mdPCR的详细方案。该方法的代表性结果与免疫荧光染色结果相比，突出了该方法的效用。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bio-Rad, Mississauga, ON</td>
			<td>TFI0201</td>
			<td>PCR tube</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RAN Biotechnologies, Beverly, MA</td>
			<td>008-FluoroSurfactant</td>
			<td>Fluoro-surfactant</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon Quest International, Santa Clara, CA</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxford Instruments, Abingdon, UK</td>
			<td></td>
			<td>EMCCD camera</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td>
			<td>MA5-16728</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td>
			<td>22-8425-71</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellProfiler</td>
			<td></td>
			<td>Used for fluorescence image analysis</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon, Japan</td>
			<td></td>
			<td>10x objective</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA</td>
			<td>PCS-800-011</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ram&#233;-Hart Instrument Co. (Netcong, NJ)</td>
			<td>p/n 200-U1</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisher, Canada</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrocom, NJ, USA</td>
			<td>5015 and 5010</td>
			<td>Borosilicate capilary tube</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(http://definetherain.org.uk/)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamamatsu, Japan</td>
			<td>LC-L1V5</td>
			<td>DEL UV light source</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dolomite</td>
			<td>3200063</td>
			<td>Disposable fluidic tubing</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dolomite</td>
			<td>3200302</td>
			<td>Disposable fluidic tubing</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IDT, Coralville, IA</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon, Melville, NY</td>
			<td></td>
			<td>Upright light microscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytec Industries, Woodland Park, NJ</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EV Group, Sch&#228;rding, Austria</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zymo Research, Irvine, CA</td>
			<td>D5030</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photron, San Diego, CA</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IDT, Coralville, IA</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gersteltec, Pully, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td>SU-8 photoresist</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fineline Imaging, Colorado Springs, CO</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>203603</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td></td>
			<td>Used to assess droplet diameter</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anachemia, Montreal, QC</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excelitas, MA, USA</td>
			<td></td>
			<td>Broad-spectrum LED fluorescent lamp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Galenvs Sciences Inc., Montreal, QC</td>
			<td>DE1010</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexpol TPE, &#197;m&#229;l, Sweden</td>
			<td></td>
			<td>Thermoplastic elastomer (TPE)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td>
			<td>13-400-518</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon, Japan</td>
			<td></td>
			<td>Used for image acquisition</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3M, St Paul, MN</td>
			<td></td>
			<td>Carrier Oil</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td>
			<td>R37605</td>
			<td>Blue fluorescent live cell stain (DAPI)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IDEX Health &#38; Science, Oak Harbor, WA</td>
			<td>P-881</td>
			<td>PEEK fittings</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sigma-Aldrich, Oakville, ON</td>
			<td>806552</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dow Corning, Midland, MI</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThinkyUSA, CA, USA</td>
			<td>ARV 310</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ihc world, Maryland, USA</td>
			<td>IW-125-0</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinsser NA, Northridge, CA</td>
			<td>2607808</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cetoni GmbH, Korbussen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sigma-Aldrich, Oakville, ON</td>
			<td>484431</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Rad, Mississauga, ON</td>
			<td>1861096</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hitachi High-Technologies, Mississauga, ON</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon, Melville, NY</td>
			<td></td>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loctite</td>
			<td>AA 352</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methylation specific multiplex droplet pcr using polymer droplet generator device for hematological diagnostics

介绍了多路复用液滴PCR （mdPCR） 工作流程和用于确定基于表观遗传的白血球 （WBC） 差分计数的详细协议，以及热塑性弹性体 （TPE） 微流体液滴生成装置。表观遗传标记用于WBC亚标，在不同疾病中具有重要的预后价值。这是通过量化基因组中特定CG富产区的DNA甲基化模式（CpG位） 实现的。本文将外周血单核细胞（PBMC）的二硫酮处理DNA封装在液滴中，包括与WBC亚群相关的PPC根酸基点特异性的底土剂和水解荧光探针等mdPCR试剂。多路复用方法允许对许多CpG位点进行检测，而无需单独的mdPCR反应，从而利用甲基化位点表观遗传分析，更准确地对WBC子种群进行参数测定。这种精确的定量可以扩展到不同的应用，并突出临床诊断和后续预后的好处。

基于TPE的微流体液滴发生器装置是使用所述协议制造的，如图1所示。在光刻学中使用了透明面膜来获取硅 （Si） 母版。进行软光刻以获得 Si 大师的反向 PDMS 副本，该副本随后用于制造环氧模具。环氧树脂前体被倒入PDMS并固化成交联和硬化。这种模具代表 Si master 的精确复制品，对于使用热压花的热塑性塑料的后续热成型更具弹性。获得环氧树脂模具后，热塑性弹性体被浮?...

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Methylation Specific Multiplex Droplet PCR using Polymer Droplet Generator Device for Hematological Diagnostics

表观遗传标记用于白细胞（WBC）通过DNA甲基化模式的定量亚化。该协议提出了一种多路滴聚合酶链反应（mdPCR）方法，使用基于热塑性弹性体（TPE）的微流体器件进行液滴生成，从而实现WBC差分计数的精确和多路复用甲基化特异性目标定量。

甲基化特异性多路复用液滴PCR，使用聚合物液滴发生器设备进行血液诊断

A multiplexed droplet PCR (mdPCR) workflow and detailed protocol for determining epigenetic-based white blood cell (WBC) differential count is described, ...

该协议提供了一个灵活的多路复用液滴PCR工作流程，允许基于表观遗传甲基化标记的精确微分白细胞计数。这种灵活性可能有助于将 mdPCR 翻译至临床使用。该方法提供与使用免疫荧光染色方法获得的结果进行密切查询。然而，与免疫荧光染色不同，这种方法不需要新鲜血液样本或昂贵的抗体。在血液学诊断中，差分白细胞可以作为一系列疾病的指标，包括感染、炎症、贫血和白血病，并被认为是早期预测癌症生物标志物。与阿卜杜勒拉赫曼·埃尔曼扎拉维一起演示手术的将是克里斯蒂娜·纳西夫，他是NRC医疗器械研究中心我们团队的技术官员。首先将20微升蛋白质激酶K和400微升含磁珠的开结结合缓冲液与刚解冻的人类外周血单核细胞彻底混合在100微升PBS中。在室温下孵育五分钟后，将管子放在磁架上一至两分钟，然后取出上经液。将磁管从磁铁上拆下后，将DNA珠复合物重新悬浮在600微升的洗涤缓冲液中，以去除任何非具体绑定的珠子。将管子放回磁铁上，以便去除上流液，然后像刚才演示的600微升洗涤缓冲液中清洗细胞。取出上流液后，让管子在磁铁上风干一分钟，然后通过彻底混合向管中加入 100 微升洗脱缓冲液。然后，将磁管放在磁架上一到两分钟，将磁珠与被暗示的DNA分离，然后将纯化的DNA溶液转移到新的管子上。对于纯化DNA的二硫化转化，将20微升的暗示DNA样品转移到PCR管中，并将130微升的转化试剂加入管中。彻底混合后，短暂旋转管内，并在热循环器上放大DNA。在周期结束时，将600微升的结合缓冲液添加到放置在收集管中的离子色谱柱中，并将DNA添加到该柱中。多次反转管混合，全速离心30秒。丢弃收集的流量，并将 100 微升洗涤缓冲液添加到列中。如所证明，将柱子离心并再次丢弃流经。将 200 微升脱硫缓冲液添加到柱中，在室温下孵育 15 至 20 分钟，然后离心样品并丢弃流经，如所示。接下来，每次洗涤用 200 微升的洗涤缓冲液洗两次柱。第二次洗涤后，将柱转移到新的1.5毫升收集管中，并在柱膜上加入100微升PCR级水。然后，通过全速离心一分钟来检测DNA。对于液滴生成，将一微升双硫酸盐转化的DNA与新制备的探针母体混合在PCR管中，然后通过短暂的离心收集样品。使用峰值接头将一次性流体管连接到两个 250 微升体积精密玻璃注射器。预填充一个精密玻璃注射器，加注250微升含有5%面粉表面活性剂的载体油，预填充一个精密玻璃注射器，并预装50微升载波油。当两个注射器都装好了，将100微升的PCR混合物装入载油的注射器中，将一个液滴微流体装置放在装有高速摄像头的直立光显微镜的舞台上。为了实时观察和记录液滴形成，将预填充注射器放在可编程注射器泵上，并使用峰值接头将注射器的管子连接到液滴微流体装置各入口通道的管子上。将油滴发生器出口到 0.5 毫升 PCR 管内侧，将注射器泵流量调整为每分钟两微升，使液滴尺寸在收集产生的乳液之前稳定下来。缓慢而仔细地从管顶部收集乳液，将溶液的 75 微升转移到 200 微升 PCR 管中，用于热循环。然后，确认PCR管中的含油量与分散相的体积紧密匹配，防止液滴在热循环过程中凝结，将200微升管放入热循环器中。对于乳化样品的荧光成像，将 PCR 乳液转移到具有矩形轮廓的 50 微米深硅细管中，以便将液滴排列成紧密包装的单层进行成像。将毛细管固定并密封到显微镜幻灯片上后，将滑轨加载到倒置显微镜的舞台上。并在显微镜成像软件中，选择快速采集和实时拍摄，开始实时采集摄像机。然后，观察在亮场和荧光显微镜下的样品。在液滴生成和热循环之后，液滴可以引入一毫米宽、50 微米高度的玻璃毛细管中。为了获得理想的荧光图像采集液滴的单层分布，可以记录每个波长的图像。经过图像分析，可以绘制其各自荧光团中所有液滴的荧光强度，以确定正负液滴的阈值。在识别和计数后，可以计算每个液滴值的副本，并分别根据甲基化 CD3Z 和 FOXP3 拷贝确定 CD3+T 细胞和 CD4+25+ 调节 T 细胞的百分比，以及总细胞或无 C 基因每个液滴的拷贝。然后，可以使用适当的抗体将百分比值与通过免疫荧光成像获得的值进行比较。我认为，从液滴生成到热循环和最终液滴成像步骤的乳化稳定性对于获得精确、可靠和可重复的定量结果至关重要。通过定制的 PCR 组合配方进行 MD PCR 定制，可用于多种应用，包括癌症研究、传染病诊断和单细胞级别的分析。

Research

JoVE Journal

Bioengineering

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高通量微RNA分析：优化复纳升秤定量RT - PCR Fluidig​​m公司动态ArrayTM国际金融中心

The broad involvement of miRNAs in critical processes underlying development, tissue homoeostasis and disease has led to a surging interest among the ...

科研

生物工程

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The development of microfluidic platforms for performing chemistry and biology has in large part been driven by a range of potential benefits that ...

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利用微流控平台的高通量蛋白质表达发生器

Rapidly increasing fields, such as systems biology, require the development and implementation of new technologies, enabling high-throughput and ...

Fluorescence Recovery after Merging a Droplet to Measure the Two-dimensional Diffusion of a Phospholipid Monolayer

合并一个液滴后荧光恢复来衡量磷脂单层的二维扩散

We introduce a new method to measure the lateral diffusivity of a surfactant monolayer at the fluid-fluid interface, called fluorescence recovery after ...

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Circulating (of cell-free) microRNAs (miRNAs) are released from cells into the blood stream. The amount of specific microRNAs in the circulation has been ...

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Currently, many clinical diagnostic procedures are complex, costly, inefficient, and inaccessible to a large population in the world. The requirements for ...

Optimization of a Multiplex RNA-based Expression Assay Using Breast Cancer Archival Material

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一种基于液滴的单链 dna 放大术和微球 pcr 扩增法

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