Name: plasmodium falciparum gametocyte culture and mosquito infection through artificial membrane feeding
Uploaded: 2020-07-03T15:30:00
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Los autores agradecen a Bloomberg Philanthropies por el apoyo financiero al Instituto de Investigación de la Malaria Johns Hopkins (JHMRI). Este trabajo no habría sido posible sin la experiencia proporcionada por las instalaciones centrales de insectos y parasitología de JHMRI.

Las colecciones de sangre que se describen a continuación han sido aprobadas por la Junta de Revisión Institucional de la Universidad Johns Hopkins. P. falciparum se cultiva en glóbulos rojos frescos en condiciones estériles en una instalación de nivel de bioseguridad 2 (BSL2) y se utiliza precaución para manipular materiales biológicos. Después de cada paso que involucra sangre o productos sanguíneos, cada vajilla de plástico o cristalería se enjuaga con lejía al 10% dentro de la capucha antes de su...

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	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=World+Malaria+Report.">World Malaria Report.</a> World Health Organization. , (2018).</li><li>Sinden, R. E., Smalley, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gametocytogenesis+of+Plasmodium+falciparum+in+vitro:+The+cell-cycle.">Gametocytogenesis of Plasmodium falciparum in vitro: The cell-cycle.</a> Parasitology. 79 (2), 277-296 (1979).</li><li>Sinden, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+Development+of+Malarial+Parasites.">Sexual Development of Malarial Parasites.</a> Advances in Parasitology. 22, 153-216 (1983).</li><li>Joice, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+falciparum+transmission+stages+accumulate+in+the+human+bone+marrow.">Plasmodium falciparum transmission stages accumulate in the human bone marrow.</a> Science Translational Medicine. 6 (244), 5 (2014).</li><li>Abdulsalam, A. H., Sabeeh, N., Bain, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immature+Plasmodium+falciparum+gametocytes+in+bone+marrow.">Immature Plasmodium falciparum gametocytes in bone marrow.</a> American Journal of Hematology. 85 (12), 943 (2010).</li><li>Ghosh, A. K., Jacobs-Lorena, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+sporozoite+invasion+of+the+mosquito+salivary+gland.">Plasmodium sporozoite invasion of the mosquito salivary gland.</a> Current Opinion in Microbiology. 12 (4), 394-400 (2009).</li><li>Bennink, S., Kiesow, M. J., Pradel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+malaria+parasites+in+the+mosquito+midgut.">The development of malaria parasites in the mosquito midgut.</a> Cellular Microbiology. 18 (7), 905-918 (2016).</li><li>Trager, W., Jenson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultivation+of+malarial+parasites.">Cultivation of malarial parasites.</a> Nature. 273 (5664), 621-622 (1978).</li><li>Duffy, S., Loganathan, S., Holleran, J. P., Avery, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+production+of+Plasmodium+falciparum+gametocytes+for+malaria+drug+discovery.">Large-scale production of Plasmodium falciparum gametocytes for malaria drug discovery.</a> Nature Protocols. 11 (5), 976-992 (2016).</li><li>Delves, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Routine+in+vitro+culture+of+P.+Falciparum+gametocytes+to+evaluate+novel+transmission-blocking+interventions.">Routine in vitro culture of P. Falciparum gametocytes to evaluate novel transmission-blocking interventions.</a> Nature Protocols. 11 (9), 1668-1680 (2016).</li><li>Habtewold, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streamlined+SMFA+and+mosquito+dark-feeding+regime+significantly+improve+malaria+transmission-blocking+assay+robustness+and+sensitivity.">Streamlined SMFA and mosquito dark-feeding regime significantly improve malaria transmission-blocking assay robustness and sensitivity.</a> Malaria Journal. 18 (1), 24 (2019).</li><li>Demanga, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+sexual+stage+malaria+gametocytes+in+a+Wave+Bioreactor.">The development of sexual stage malaria gametocytes in a Wave Bioreactor.</a> Parasites and Vectors. 10 (1), 216 (2017).</li><li>Brockelman, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditions+favoring+gametocytogenesis+in+the+continuous+culture+of+Plasmodium+falciparum.">Conditions favoring gametocytogenesis in the continuous culture of Plasmodium falciparum.</a> Journal of Eukaryotic Microbiology. 29, 454-458 (1982).</li><li>Meibalan, E., Marti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+malaria+transmission.">Biology of malaria transmission.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 7, (2017).</li><li>Essuman, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+gametocyte+biomarker+for+superior+molecular+detection+of+the+plasmodium+falciparum+infectious+reservoirs.">A novel gametocyte biomarker for superior molecular detection of the plasmodium falciparum infectious reservoirs.</a> Journal of Infectious Diseases. 216 (10), 1264-1272 (2017).</li><li>Sim&#245;es, M. L., Mlambo, G., Tripathi, A., Dong, Y., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+regulation+of+plasmodium+is+anopheles+species+specific+and+infection+intensity+dependent.">Immune regulation of plasmodium is anopheles species specific and infection intensity dependent.</a> mBio. 8 (5), 01631 (2017).</li><li>Oakley, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+analysis+based+detection+of+Plasmodium+falciparum+development+in+Anopheles+stephensi+mosquitoes.">Transcriptome analysis based detection of Plasmodium falciparum development in Anopheles stephensi mosquitoes.</a> Scientific Reports. 8, 11568 (2018).</li><li>Saraiva, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromobacterium+spp.+mediate+their+anti-Plasmodium+activity+through+secretion+of+the+histone+deacetylase+inhibitor+romidepsin.">Chromobacterium spp. mediate their anti-Plasmodium activity through secretion of the histone deacetylase inhibitor romidepsin.</a> Scientific Reports. 8, 6176 (2018).</li><li>Tao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex-partitioning+of+the+Plasmodium+falciparum+stage+V+gametocyte+proteome+provides+insight+into+falciparum-specific+cell+biology.">Sex-partitioning of the Plasmodium falciparum stage V gametocyte proteome provides insight into falciparum-specific cell biology.</a> Molecular and Cellular Proteomics. 13 (10), 2705-2724 (2014).</li><li>Grabias, B., Zheng, H., Mlambo, G., Tripathi, A. K., Kumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+enhanced+chemiluminescent-ELISA+for+the+detection+of+Plasmodium+falciparum+circumsporozoite+antigen+in+midguts+of+Anopheles+stephensi+mosquitoes.">A sensitive enhanced chemiluminescent-ELISA for the detection of Plasmodium falciparum circumsporozoite antigen in midguts of Anopheles stephensi mosquitoes.</a> Journal of Microbiological Methods. 108, 19-24 (2015).</li><li>Ferrer, P., Vega-Rodriguez, J., Tripathi, A. K., Jacobs-Lorena, M., Sullivan, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimalarial+iron+chelator+FBS0701+blocks+transmission+by+Plasmodium+falciparum+gametocyte+activation+inhibition.">Antimalarial iron chelator FBS0701 blocks transmission by Plasmodium falciparum gametocyte activation inhibition.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (3), 1418-1426 (2015).</li><li>Sanders, N. G., Sullivan, D. J., Mlambo, G., Dimopoulos, G., Tripathi, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gametocytocidal+screen+identifies+novel+chemical+classes+with+Plasmodium+falciparum+transmission+blocking+activity.">Gametocytocidal screen identifies novel chemical classes with Plasmodium falciparum transmission blocking activity.</a> PLoS One. 9 (8), 105817 (2014).</li><li>Lindner, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomics+and+proteomics+reveal+two+waves+of+translational+repression+during+the+maturation+of+malaria+parasite+sporozoites.">Transcriptomics and proteomics reveal two waves of translational repression during the maturation of malaria parasite sporozoites.</a> Nature Communications. 10, 4964 (2019).</li><li>McLean, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+Transmission-Competent+Human+Malaria+Parasites+with+Chromosomally-Integrated+Fluorescent+Reporters.">Generation of Transmission-Competent Human Malaria Parasites with Chromosomally-Integrated Fluorescent Reporters.</a> Scientific Reports. 9, 13131 (2019).</li><li>Espinosa, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolytic+Cleavage+of+the+Plasmodium+falciparum+Circumsporozoite+Protein+Is+a+Target+of+Protective+Antibodies.">Proteolytic Cleavage of the Plasmodium falciparum Circumsporozoite Protein Is a Target of Protective Antibodies.</a> Journal of Infectious Diseases. 212 (7), 1111-1119 (2015).</li><li>Swearingen, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrogating+the+Plasmodium+Sporozoite+Surface:+Identification+of+Surface-Exposed+Proteins+and+Demonstration+of+Glycosylation+on+CSP+and+TRAP+by+Mass+Spectrometry-Based+Proteomics.">Interrogating the Plasmodium Sporozoite Surface: Identification of Surface-Exposed Proteins and Demonstration of Glycosylation on CSP and TRAP by Mass Spectrometry-Based Proteomics.</a> PLoS Pathogens. 12 (4), 1005606 (2016).</li><li>Ifediba, T., Vanderberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+in+vitro+maturation+of+Plasmodium+falciparum+gametocytes.">Complete in vitro maturation of Plasmodium falciparum gametocytes.</a> Nature. 294 (5839), 364-366 (1981).</li><li>Miura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inter-laboratory+comparison+of+standard+membrane-feeding+assays+for+evaluation+of+malaria+transmission-blocking+vaccines.">An inter-laboratory comparison of standard membrane-feeding assays for evaluation of malaria transmission-blocking vaccines.</a> Malaria Journal. 15, 463 (2016).</li><li>Miura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qualification+of+Standard+Membrane-Feeding+Assay+with+Plasmodium+falciparum+Malaria+and+Potential+Improvements+for+Future+Assays.">Qualification of Standard Membrane-Feeding Assay with Plasmodium falciparum Malaria and Potential Improvements for Future Assays.</a> PLoS One. 8 (3), 57909 (2013).</li></ol>

Los métodos descritos aquí se han utilizado con éxito en el Instituto de Investigación de la Malaria Johns Hopkins durante más de10 años 15,16,17,18,19,20,21,22. Los gametocitos producidos mediante este protocolo se han utilizado para ensayos gametoci...

La malaria es causada por parásitos Plasmodium y se transmite a sus huéspedes vertebrados a través de la picadura infecciosa de mosquitos Anopheles hembra. Según el informe de la Organización Mundial de la Salud (OMS) de 2019, se estima que hubo 405.000 muertes, de un total de 228 millones de casos de malaria1. La mayoría de las muertes relacionadas con el paludismo se concentraron en la región de África, especialmente entre los niños menores de cinco años. Si bien la tasa general de incidencia de la malaria ha disminuido a nivel mundial desde 2010, en los últimos años la disminución se ha estancado y se necesitan urgentemente estrategias de control adicionales para eliminar la enfermedad.
Las etapas sanguíneas asexuales cíclicas de los parásitos de la malaria causan patogénesis de la enfermedad y un pequeño subconjunto de estos se diferencian en gametocitos femeninos y masculinos. Los gametocitos de Plasmodium falciparum son únicos en la naturaleza, ya que tardan de 7 a 10 días en desarrollarse a través de cinco etapas morfológicamente distintas. Los gametocitos inmaduros de los estadios I a IV se secuestran en el parénquima de la médula ósea y permanecen en gran medida ausentes de la circulación periférica2,3,4,5. Los eritrocitos infectados con gametocitos maduros en estadio V se liberan en el torrente sanguíneo y circulan libremente para ser absorbidos por los mosquitos. Una vez dentro del intestino medio del mosquito, los gametocitos se activan, a través de un cambio de temperatura y exposición al ambiente del intestino medio, se transforman en gametos femeninos y masculinos y comienzan el desarrollo de las etapas del mosquito, que culmina con las etapas infecciosas de los esporozoítos en las glándulas salivales del mosquito6,7.
Desde que Trager y Jenson8 describieron un método estandarizado para cultivar P. falciparum,los estudios sobre las etapas sanguíneas asexuales han avanzado mucho. Sin embargo, la falta de un sistema de cultivo confiable para las etapas sexuales ha dificultado el estudio de los gametocitos de P. falciparum, la biología de la transmisión y las etapas de los mosquitos. En los últimos años, se han publicado varios métodos que han ayudado a los laboratorios a establecer cultivos de gametocitos9,10,11,12. Este manuscrito describe un protocolo estandarizado y confiable para cultivar gametocitos de P. falciparum que puede representar un recurso valioso para la comunidad de investigación de la malaria. Este método permite la producción robusta de gametocitos maduros e infecciosos que, junto con un protocolo estandarizado de alimentación de mosquitos, da como resultado una infectividad de mosquitos altamente confiable. Estos métodos se establecieron para mantener el suministro ininterrumpido de gametocitos y parásitos en etapa de mosquito. En este manuscrito, describimos un protocolo exhaustivo de cultivo de gametocitos(Figura 1),preparación de comederos de membrana de vidrio e infección de mosquitos utilizando estos alimentadores de membrana(Figura 2),disección del intestino medio(Figura 3)y glándula salival de mosquitos(Figura 4),y cuantificación de la infección en mosquito después de la disección de intestino medio y glándula salival.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Sugar solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10ml serological pipet</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>357551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml serological pipet</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>357521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 ml serological pipet</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>357535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37&#176;C Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml conical tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5ml serological pipet</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>357543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well tissue culture plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9&#34; glass pipet</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-678-6B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anopheles Mosquitoes</td>
			<td>JHMRI, Insectary core</td>
			<td></td>
			<td>We use A. stephensi or A. gambiae (keele)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell counter</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulating water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine tip forceps</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geimsa stain</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>GS1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass desiccator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass membrane feeder</td>
			<td>Chemglass Life Sciences</td>
			<td>CG183570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-552-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H6648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Blood O+</td>
			<td>JHU</td>
			<td></td>
			<td>Wash RBCs three times with RPMI and refrigerate at 50% heamatocrit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum O+</td>
			<td>Interstate blood bank</td>
			<td></td>
			<td>Pool at-least 6 units of serum from different donors and freeze down aliquots at -20&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypoxanthine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H9337</td>
			<td>Make 500x stock in 1M NaOH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mercurochrome</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M7011</td>
			<td>Prepare 1% stock solution in PBS that can be diluted to 0.1% when needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Pipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Any microscope with 10x, 40x and 100x objective will work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito cups</td>
			<td>Neptune cups</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetylglucosamine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A3286</td>
			<td>Optional and needed only when pure gametocytes are required.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Netting</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Make sure it can contain mosquitoes and allow blood feeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>249964</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmodium falciparum NF54</td>
			<td>BEI Resources</td>
			<td>MRA-1000</td>
			<td>Freeze down large numbers of early passage culture to make sure you have a constant supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CV-041-CV</td>
			<td>Media contains glutamine and HEPES</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide warmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6297</td>
			<td>Optional for media, add only when using malaria gas mix during culture incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xanthurenic Acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D120804</td>
			<td>For flagellation media</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

plasmodium falciparum gametocyte culture and mosquito infection through artificial membrane feeding

El paludismo sigue siendo uno de los problemas de salud pública más importantes, causando una morbilidad y mortalidad significativas. La malaria es una enfermedad transmitida por mosquitos transmitida a través de una picadura infecciosa del mosquito Anopheles hembra. El control de la malaria eventualmente se basará en una multitud de enfoques, que incluyen formas de bloquear la transmisión hacia, a través y desde los mosquitos. Para estudiar las etapas de los mosquitos de los parásitos de la malaria en el laboratorio, hemos optimizado un protocolo para cultivar gametocitos Plasmodium falciparum altamente infecciosos, una etapa del parásito requerida para la transmisión del huésped humano al mosquito vector. Los gametocitos de P. falciparum maduran a través de cinco pasos morfológicamente distintos, lo que toma aproximadamente 1-2 semanas. El cultivo de gametocitos descrito en este protocolo se completa en 15 días y son infecciosos para los mosquitos desde los días 15-18. Estos protocolos fueron desarrollados para mantener un ciclo continuo de infección de gametocitos competentes y para mantener el suministro ininterrumpido de las etapas del mosquito del parásito. Aquí, describimos la metodología del cultivo de gametocitos y cómo infectar a los mosquitos con estos parásitos utilizando alimentadores de membrana de vidrio.

Aquí presentamos los resultados de una serie de alimentaciones de membrana utilizando cultivos de gametocitos de P. falciparum NF54 generados utilizando el protocolo anterior (ver (Figura 5). El cultivo de gametocitos se inició con aproximadamente un 0,5% de cultivo asexual de etapa mixta en el Día 0, que creció a un pico de parasitemia de aproximadamente el 15% en el Día 4 y el Día 5. Como se muestra en la Figura 5A en esta alta parasitemia, los ...

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Plasmodium falciparum Gametocyte Culture and Mosquito Infection Through Artificial Membrane Feeding

Las investigaciones detalladas sobre las etapas de los mosquitos de los parásitos de la malaria son fundamentales para diseñar estrategias efectivas de bloqueo de la transmisión. Este protocolo demuestra cómo cultivar eficazmente gametocitos infecciosos y luego alimentar a estos gametocitos a los mosquitos para generar etapas de mosquito de P. falciparum.

Plasmodium falciparum Cultivo de gametocitos e infección por mosquitos a través de la alimentación artificial por membrana

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White adipose tissue (WAT) dysregulation plays a central role in development of insulin resistance and type 2 diabetes (T2D). To develop new treatments ...

Large-Scale Preparation of Synovial Fluid Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes by 3D Bioreactor Culture

Preparación a gran escala de exosomas derivados de células madre mesenquimales del líquido sinovial mediante cultivo de biorreactores 3D

Exosomes secreted by mesenchymal stem cells (MSCs) have been suggested as promising candidates for cartilage injuries and osteoarthritis treatment. ...

Mosquito-Associated Virus Isolation from Field-Collected Mosquitoes

Aislamiento de virus asociados a mosquitos de mosquitos recolectados en el campo

With the broad application of sequencing technologies, many novel virus-like sequences have been discovered in arthropods, including mosquitoes. The two ...