Name: assessing the expression of major histocompatibility complex class i on primary murine hippocampal neurons by flow cytometry
Uploaded: 2020-05-19T15:00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing the Expression of Major Histocompatibility Complex Class I on Primary Murine Hippocampal Neurons by Flow Cytometry at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل من قبل NIA R00 AG053412 (KEF).

<ol>
	<li>Galea, I., Bechmann, I., Perry, V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+immune+privilege+(not).">What is immune privilege (not).</a> Trends in Immunology. 28 (1), 12-18 (2007).</li><li>Morimoto, K., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+Immune+System+in+the+Development+of+the+Central+Nervous+System.">Role of the Immune System in the Development of the Central Nervous System.</a> Frontiers in Neuroscience. 13, 916 (2019).</li><li>Klein, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroinflammation+During+RNA+Viral+Infections.">Neuroinflammation During RNA Viral Infections.</a> Annual Review of Immunology. 37, 73-95 (2019).</li><li>Janeway, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+T+cell+receptor+as+a+multicomponent+signalling+machine:+CD4/CD8+coreceptors+and+CD45+in+T+cell+activation.">The T cell receptor as a multicomponent signalling machine: CD4/CD8 coreceptors and CD45 in T cell activation.</a> Annual Review of Immunology. 10, 645-674 (1992).</li><li>Peaper, D. R., Cresswell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+MHC+class+I+assembly+and+peptide+binding.">Regulation of MHC class I assembly and peptide binding.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 24, 343-368 (2008).</li><li>Donaldson, J. G., Williams, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+Assembly+and+Trafficking+of+MHC+Class+I+Molecules.">Intracellular Assembly and Trafficking of MHC Class I Molecules.</a> Traffic. 10 (12), 1745-1752 (2009).</li><li>Charles, A., Janeway, J., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell-mediated+cytotoxicity.">T cell-mediated cytotoxicity.</a> Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. 5th edition. , (2001).</li><li>Guidotti, L. G., Chisari, F. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noncytolytic+control+of+viral+infections+by+the+innate+and+adaptive+immune+response.">Noncytolytic control of viral infections by the innate and adaptive immune response.</a> Annual Review of Immunology. 19, 65-91 (2001).</li><li>Chevalier, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurons+are+MHC+class+I-dependent+targets+for+CD8+T+cells+upon+neurotropic+viral+infection.">Neurons are MHC class I-dependent targets for CD8 T cells upon neurotropic viral infection.</a> PLoS Pathogens. 7 (11), 1002393 (2011).</li><li>Shrestha, B., Diamond, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+CD8++T+Cells+in+Control+of+West+Nile+Virus+Infection.">Role of CD8+ T Cells in Control of West Nile Virus Infection.</a> Journal of Virology. 78 (15), 8312-8321 (2004).</li><li>Plaisted, W. C., Weinger, J. G., Walsh, C. M., Lane, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+mediated+suppression+of+neurotropic+coronavirus+replication+in+neural+precursor+cells.">T cell mediated suppression of neurotropic coronavirus replication in neural precursor cells.</a> Virology. 449, 235-243 (2014).</li><li>Marten, N. W., Stohlman, S. A., Zhou, J., Bergmann, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+virus-specific+CD8++-T-cell+expansion+and+trafficking+following+central+nervous+system+infection.">Kinetics of virus-specific CD8+ -T-cell expansion and trafficking following central nervous system infection.</a> Journal of Virology. 77 (4), 2775-2778 (2003).</li><li>Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHC+class+I:+an+unexpected+role+in+neuronal+plasticity.">MHC class I: an unexpected role in neuronal plasticity.</a> Neuron. 64 (1), 40-45 (2009).</li><li>Corriveau, R. A., Huh, G. S., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+class+I+MHC+gene+expression+in+the+developing+and+mature+CNS+by+neural+activity.">Regulation of class I MHC gene expression in the developing and mature CNS by neural activity.</a> Neuron. 21 (3), 505-520 (1998).</li><li>Goddard, C. A., Butts, D. A., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+CNS+synapses+by+neuronal+MHC+class+I.">Regulation of CNS synapses by neuronal MHC class I.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (16), 6828-6833 (2007).</li><li>Needleman, L. A., Liu, X. B., El-Sabeawy, F., Jones, E. G., McAllister, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHC+class+I+molecules+are+present+both+pre-+and+postsynaptically+in+the+visual+cortex+during+postnatal+development+and+in+adulthood.">MHC class I molecules are present both pre- and postsynaptically in the visual cortex during postnatal development and in adulthood.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (39), 16999-17004 (2010).</li><li>Syken, J., Grandpre, T., Kanold, P. O., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PirB+restricts+ocular-dominance+plasticity+in+visual+cortex.">PirB restricts ocular-dominance plasticity in visual cortex.</a> Science. 313 (5794), 1795-1800 (2006).</li><li>Atwal, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PirB+is+a+functional+receptor+for+myelin+inhibitors+of+axonal+regeneration.">PirB is a functional receptor for myelin inhibitors of axonal regeneration.</a> Science. 322 (5903), 967-970 (2008).</li><li>Takai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paired+immunoglobulin-like+receptors+and+their+MHC+class+I+recognition.">Paired immunoglobulin-like receptors and their MHC class I recognition.</a> Immunology. 115 (4), 433-440 (2005).</li><li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synapse+elimination+and+learning+rules+co-regulated+by+MHC+class+I+H2-Db.">Synapse elimination and learning rules co-regulated by MHC class I H2-Db.</a> Nature. 509 (7499), 195-200 (2014).</li><li>Ribic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+regulation+of+MHC+class+I+expression+in+the+developing+primary+visual+cortex+of+the+common+marmoset+monkey.">Activity-dependent regulation of MHC class I expression in the developing primary visual cortex of the common marmoset monkey.</a> Behavioral and Brain Functions. 7, 1 (2011).</li><li>Sahu, M. P., Nikkil&#228;, O., L&#229;gas, S., Kolehmainen, S., Castr&#233;n, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+primary+neurons+from+rat+hippocampus+and+cortex.">Culturing primary neurons from rat hippocampus and cortex.</a> Neuronal Signaling. 3 (2), (2019).</li><li>Gordon, J., Amini, S., White, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+overview+of+neuronal+cell+culture.">General overview of neuronal cell culture.</a> Methods in Molecular Biology. 1078, 1-8 (2013).</li><li>Zhang, X., Hu, D., Shang, Y., Qi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+induced+pluripotent+stem+cell+neuronal+models+to+study+neurodegenerative+diseases.">Using induced pluripotent stem cell neuronal models to study neurodegenerative diseases.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molecular Basis of Disease. 1866 (4), 165431 (2020).</li><li>Berry, B. J., Smith, A. S. T., Young, J. E., Mack, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+and+Current+Challenges+Associated+with+the+Use+of+Human+Induced+Pluripotent+Stem+Cells+in+Modeling+Neurodegenerative+Disease.">Advances and Current Challenges Associated with the Use of Human Induced Pluripotent Stem Cells in Modeling Neurodegenerative Disease.</a> Cells, Tissues, Organs. 205 (5-6), 331-349 (2018).</li><li>Ho, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Guide+to+Single-Cell+Transcriptomics+in+Adult+Rodent+Brain:+The+Medium+Spiny+Neuron+Transcriptome+Revisited.">A Guide to Single-Cell Transcriptomics in Adult Rodent Brain: The Medium Spiny Neuron Transcriptome Revisited.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 12, 159 (2018).</li><li>Panchision, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+Flow+Cytometric+Analysis+of+Central+Nervous+System+Tissue+Reveals+Novel+Functional+Relationships+Among+Cells+Expressing+CD133,+CD15,+and+CD24.">Optimized Flow Cytometric Analysis of Central Nervous System Tissue Reveals Novel Functional Relationships Among Cells Expressing CD133, CD15, and CD24.</a> Stem Cells. 25 (6), 1560-1570 (2007).</li><li>Snaidero, N., Simons, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelination+at+a+glance.">Myelination at a glance.</a> Journal of Cell Science. 127 (14), 2999-3004 (2014).</li><li>Martin, D., Xu, J., Porretta, C., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurocytometry:+Flow+Cytometric+Sorting+of+Specific+Neuronal+Populations+from+Human+and+Rodent+Brain.">Neurocytometry: Flow Cytometric Sorting of Specific Neuronal Populations from Human and Rodent Brain.</a> ACS Chemical Neuroscience. 8 (2), 356-367 (2017).</li><li>Lv, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+MHC+Class+I+Expression+Is+Regulated+by+Activity+Driven+Calcium+Signaling.">Neuronal MHC Class I Expression Is Regulated by Activity Driven Calcium Signaling.</a> PLoS One. 10 (8), 0135223 (2015).</li><li>Barco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiling+of+facilitated+L-LTP+in+VP16-CREB+mice+reveals+that+BDNF+is+critical+for+the+maintenance+of+LTP+and+its+synaptic+capture.">Gene expression profiling of facilitated L-LTP in VP16-CREB mice reveals that BDNF is critical for the maintenance of LTP and its synaptic capture.</a> Neuron. 48 (1), 123-137 (2005).</li><li>Glynn, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHCI+negatively+regulates+synapse+density+during+the+establishment+of+cortical+connections.">MHCI negatively regulates synapse density during the establishment of cortical connections.</a> Nature Neuroscience. 14 (4), 442-451 (2011).</li><li>Facci, L., Skaper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Rodent+Cortical,+Hippocampal,+and+Striatal+Neurons.">Culture of Rodent Cortical, Hippocampal, and Striatal Neurons.</a> Methods Molecular Biology. 1727, 39-47 (2018).</li></ol>

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

يصف هذا البروتوكول تشريح وثقافة الخلايا العصبية فرس النهر الأولية من جراء الفئران قبل الولادة في اليوم الجنيني 18. استخدام الخلايا العصبية الأولية المستزرعة من القوارض هي واحدة من المنهجيات الأساسية التي وضعت في علم الأعصاب الحديث22. على الرغم من أن خطوط الخلايا الخالدة يمكن أن نموذج جوانب معينة من الخلايا العصبية, طبيعتها كخلايا مشتقة من الورم, الفشل في تطوير محاور عصبية محددة, واستمرار انقسام الخلايا يثير الشكوك حول ما إذا كانت خلاصة بأمانة خصائص الخلايا العصبية ما بعد ميتوتيك في الجسم الحي23. بديل آخر للخلايا العصبية الأولية هو استخدام الخلايا الجذعية المستحثة من قبل الإنسان (HiPSCs). التكنولوجيا لاستخدام HiPSCs، وخاصة تلك التي هي مشتقة من المريض، تقدمت بسرعة في السنوات الأخيرة24. ومع ذلك، لا تزال هناك قيود على العمل مع HiPSCs بما في ذلك التباين بين خطوط الخلية، وعدم النضج الوظيفي، والاختلافات في التشكيلات اللاجينية25. على الرغم من أن هناك أيضا قيود على العمل مع النموذج الاختزالي للخلايا العصبية القوارض الأولية، تحتفظ الخلايا العصبية المستزرعة طبيعة ما بعد ميتوتيك من الخلايا العصبية في الجسم الحي. أيضا، أدوات البيولوجيا الجزيئية توسعية والتعديلات الوراثية المتاحة للفئران تفضل استخدام الخلايا العصبية الأولية على HiPSCs للعديد من التطبيقات، ودراسات الماوس يمكن ترجمتها بسهولة إلى الكائن الحي أكثر تعقيدا في الجسم الحي دون أن تفقد النظام الوراثي التجريبي. لهذه الأسباب، يستخدم العديد من الباحثين الخلايا العصبية القوارض الأولية للتحقق من الجوانب الرئيسية، إن لم يكن الجزء الأكبر، من أبحاثهم.
لبعض المقايسات, ويمكن تحليل الخلايا العصبية مباشرة بعد عزلة من الدماغ ex vivo. وهذا أمر مرغوب فيه بشكل خاص للتجارب التي تشمل الفئران البالغة التي يمكن أن تخضع لظروف تجريبية محددة أو التي قد تعتمد على تفاعلات أنواع خلايا متعددة؛ ومع ذلك، هناك العديد من القضايا التي تحد من نوع التحليلات التي يمكن القيام بها. ومن الصعب تقنيا لإعداد تعليق خلية واحدة من الخلايا العصبية من أدمغة الفئران الكبار لأن الخلايا العصبية مترابطة بشكل فريد وensheathed من قبل المايلين26. الطرق غير الأنزيمية لتريتور الأنسجة غير فعالة في فصل الأنسجة وتسبب موت الخلايا ، في حين أن الاستعدادات الأنزيمية غالبا ما تلتصق مستضدات سطح الخلية27. وعلاوة على ذلك، في حين المايلين غائبة إلى حد كبير من الفئران الجنينية، فإنه يشكل حوالي 20٪ من الدماغ البالغ، ويمكن أن يضعف عزل الخلايا قابلة للحياة وعرقلة تحليل قياس التدفقالخلوي 28. العديد من التقنيات التي تم تطويرها في نهاية المطاف تجريد الخلايا العصبية من السيتوسول وترك الصغيرة, الهيئات الخلية المستديرة التي تتكون في المقام الأول من نواة29. على الرغم من أن هذا مقبول لبعض التحليلات، وهذا ليس مناسبا لقياس التعبير عن البروتين السيتوبلازمي أو خارج الخلية. وعلاوة على ذلك، يسمح نظام ثقافة الخلايا الاختزالية باختبار أسئلة ميكانيكية محددة على مقياس زمني أقصر مما هو ممكن في كثير من الأحيان مع نظام في الجسم الحي.
كما هو موضح في هذا البروتوكول هي أساليب لتحفيز التعبير MHCI الدوائية مع IFNβ، وتكميم التعبير MHCI خارج الخلية عن طريق قياس التدفق الخلوي. التحفيز من قبل IFNβ هو عنصر تحكم إيجابي مفيد لاختبار الظروف التجريبية الأخرى، ولكن يمكن ملاحظة أن IFNа وحمض كاينيك يمكن أن تحفز أيضا التعبير MHCI في الخلايا العصبية9،30، في حين يقلل tetrodotoxin التعبير MHCI14. اعتمدت الطرق السابقة للكشف عن التعبير MHCI على التهجين في الموقع والتحليل الكيميائي المناعي14،15،20،31. في حين أن المقايسات المستندة إلى الحمض النووي الريبي ، مثل التهجين في الموقع وqRT-PCR ، يمكن أن تحدد التعريب الصدغي ، وخصوصية نوع الخلية ، ومستويات النسخ الجيني ، فإن هذه المقايسات لا يمكنها تقييم ترجمة البروتين أو نقله إلى غشاء البلازما. يمكن للتحليل المناعي الكيميائي والغربي أن يحدد الاختلافات في التعبير عن البروتين وتوطين الخلايا المحتمل ولكن يمكن أن يكون من الصعب تحديده بدقة. وعلاوة على ذلك، فإن العديد من الأجسام المضادة MHCI تعترف بالهيكل الثالث للمجمع، وهي حساسة للغاية للتغيرات التركيبية. وبالتالي البيرميلات أو الظروف النافورة يؤدي إلى فقدان النشاط المناعي MHCI32. تستخدم الطريقة المعروضة هنا في الاحتواء المناعي الموقعي ل MHCI ، والذي يسمح بالاعتراف بالبروتين من قبل الجسم المضاد في تشكيله الأصلي ، تليها طرق التثبيت والتأهيل.
مع تعديلات طفيفة، يمكن استخدام الأساليب الموصوفة هنا زراعة مجموعات الخلايا العصبية الأخرى أو لتقييم التعبير عن البروتينات خارج الخلية الأخرى ذات الاهتمام. وأشار في هذا البروتوكول هي التعديلات السهلة التي يمكن إجراؤها من أجل زراعة الخلايا العصبية القشرية, ولكن الأساليب المذكورة هنا يمكن أن تستخدم أيضا لثقافة مجموعات الخلايا العصبية الأخرى, مثل الخلايا العصبية سترياتال33. وعلاوة على ذلك، على الرغم من أن هذا البروتوكول يحدد الاحتواء المناعي ل MHCI و NeuN، يمكن تحديد علامات خلوية أخرى بطريقة مماثلة. بشكل عام ، يمكن التعامل مع العلامات خارج الخلية مثل MHCI ويمكن التعامل مع العلامات داخل الخلايا مثل NeuN. ومع ذلك ، تجدر الإشارة إلى أنه خلال خطوة الانفصال الخلوي ، يتم قطع الإسقاطات المحورية من سوما. لأن استراتيجية gating المحددة هنا شاشات الحطام الخلوي ويركز على علامة نواة الخلايا العصبية نيون، قد لا يتم الكشف عن البروتينات التي يتم التعبير عنها حصرا في التوقعات المحورية.
حتى وقت قريب, ويعتقد أن الخلايا العصبية للتعبير عن MHCI فقط استجابة للتلف, عدوى, أو تحفيز السيتوكين في المختبر من أجل إشراك CD8 السامة للخلايا+ T الخلايا9. وقد أوضح بحث جديد وظيفة أخرى من MHCI في تنظيم الاتصالات متشابك خلال التنمية13. يستخدم البروتوكول الموصوف هنا IFNβ لتحفيز تعبير MHCI في الخلايا العصبية المستزرعة من النوع البري ، ولكن يمكن استخدام طرق مماثلة مع مجموعة متنوعة من المحفزات الخلوية أو التعديلات الوراثية لاختبار فرضيات محددة. ستمكن هذه الطريقة الباحثين من التحقيق في الآليات الجزيئية التي تنظم التعبير MHCI ، مما سيحسن فهم الدور الثنائي ل MHCI على هاتين الوظيفتين الخلويتين المتميزتين.

كان يعتقد أن الجهاز العصبي المركزي (CNS) كان يعتقد ذات مرة أنه خال من المراقبة المناعية ، ويشار إليه باسم "المناعة المتميزة1". ومن الواضح الآن أن هذا الامتياز لا يعادل الغياب المطلق للمكونات المناعية ، بل هو تنظيم متخصص يعمل على الحد من الأضرار المرتبطة بعلم الأمراض المناعية1. في الواقع، التواصل بين الجهاز العصبي المركزي والجهاز المناعي هو محادثة مستمرة ضرورية لتنمية الدماغ السليمة والاستجابة للعدوى2،3.
كبرى الجسيمات المعقدة الهستوبوليتيتي من الفئة الأولى (MHCI) هي بروتينات متعددة النسل وتعدد الأشكال عبر المعادن اشتهرت بوظيفتها في تقديم الببتيدات المضادة للجينات إلى خلايا CD8+ T أثناء العدوى4. تتكون مجمعات MHCI الكلاسيكية من سلسلة α عبر الميمبران وسلسلة ضوء خارج الخلية ، تسمى β2-microglobulin. سلسلة α يحتوي على الأخدود متعدد الأشكال الذي يربط الببتيد المضادة للجينات للعرض5. التعبير السليم من MHCI على الغشاء خارج الخلية يتطلب عمل منسق من المرافقين الجزيئية في reticulum endoplasmic لضمان للطي السليم للسلسلة α وβ2-microglobulin جنبا إلى جنب مع تحميل ليغاند الببتيد تقارب عالية5. مرة واحدة فقط يتم تجميعها مجمعات MHCI، يتم تصديرها من reticulum endoplasmic إلى غشاء البلازما6. عند الاشتباك من مستقبلات الخلايا التائية cognate مع مجمع MHCI محملة الببتيد، CD8+ T الخلايا التوسط قتل الخلايا عن طريق الإفراج عن حبيبات الليسيت التي تحتوي على perforin و granzymes أو عن طريق تحفيز موت الخلايا المبرمج من خلال ملزمة مستقبلات فاس على غشاء الخليةالمستهدفة 7. بالإضافة إلى ذلك، تنتج خلايا CD8+ T السيتوكينات، مثل إنترفيرون غاما (IFNа) وعامل نخر الورم ألفا (TNFα)، والتي يمكن أن تنشط آليات مضادة للفيروسات في الخلايا المصابة دون آثار الاعتلال الخلوي8،9. بالنسبة للعديد من الفيروسات العصبية، CD8+ T الخلايا ضرورية لمسح العدوى من الجهاز العصبي المركزي10،11،12.
كان يعتقد سابقا أن الخلايا العصبية التعبير عن MHCI فقط في ظل ظروف الضرر, العدوى الفيروسية, أو مع تحفيز السيتوكين في المختبر. في الآونة الأخيرة، وقد حددت البحوث دورا للتعبير العصبية من MHCI في إعادة عرض متشابك واللدونة13،14. على الرغم من أن الآليات الدقيقة الكامنة وراء تنظيم المشبك ليست مفهومة جيدا، تشير البيانات إلى أن يتم تنظيم مستوى التعبير MHCI من قبل النشاط متشابك15،16. فرضية واحدة تفترض أن الخلايا العصبية التعبير عن مستقبلات تشبه الغلوبولين المناعي B (PirB) presynaptically, الذي يربط MHCI عبر متشابك13,17. هذا التفاعل يبدأ سلسلة الإشارات من قبل PirB التي تعارض المسارات المشاركة في إعادة عرض متشابك, وبالتالي تعزيز وتحقيق الاستقرار في اتصال متشابك17,18,19. في غياب نشاط الخلايا العصبية، وانخفض التعبير MHCI14، وفقدان النتائج MHCI في القضاء على المشبك معيبة والدوائر متشابك غير منظم20،21.
يستخدم المقايسة الموصوفة هنا ، والتي تم تكييفها من Chevalier et al.9، تحليل التدفق الخلوي لتقييم تعبير البروتين خارج الخلية كميا عن MHCI على الثقافات الأولية للخلايا العصبية فرس النهر مورين. يوضح هذا البروتوكول التقنيات الأولية لاستئصال الأنسجة النهرية الدقيقة من جراء الفئران الجنينية. ثم تفاصيل عمليات الانزيمية والميكايكية تفكك الأنسجة في تعليق خلية واحدة وأساليب للحفاظ على الثقافات في المختبر. لأنها لا تنقسم، بمجرد أن تكون في الثقافة، يجب أن تكون مطلية الخلايا العصبية في طبق وكثافة مناسبة لنقطة النهاية التجريبية الخاصة بهم. بعد ذلك ، يحدد خطوات لتحفيز تعبير MHCI مع الإنترفيرون بيتا (IFNа) ، ووضع العلامات المناعية ل MHCI وعلامة النوى العصبية NeuN ، وتحليل الخلايا عن طريق قياس التدفق الخلوي. وأخيرا، فإنه يصف إجراءات لتقييم بيانات قياس التدفق الخلوي لتحديد الخلايا العصبية الإيجابية MHCI وتحديد مستوى التعبير MHCI. كما لوحظ في هذا البروتوكول هي التعديلات الصغيرة التي يمكن إجراؤها من أجل زراعة الخلايا العصبية القشرية بالإضافة إلى أو بدلا من الخلايا العصبية فرس النهر. يمكن تعديل هذا البروتوكول بسهولة لاختبار فرضيات محددة باستخدام الاختلافات الجينية أو العلاجات الدوائية.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 ml Microcentrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td>Laboratory Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm sterile culture dish</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB012924</td>
			<td>Tissue Culture Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml Centrifuge Tubes</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>21-103</td>
			<td>Laboratory Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml centrifuge tube</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>21-108</td>
			<td>Laboratory Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500 mM EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9260G</td>
			<td>FACS Buffer Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP82031Gal</td>
			<td>Tissue Culture Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well U-bottom plate</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>25-221</td>
			<td>Flow Cytometry Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504044</td>
			<td>Neuron Culture Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borate Buffer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>28341</td>
			<td>Tissue Culture Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate Glass Pasteur Pipette</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>13 678 20C</td>
			<td>Laboratory Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Dissociation Buffer</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>13 151 014</td>
			<td>Flow Cytometry Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>90083</td>
			<td>Dissociation Solution Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dPBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-235</td>
			<td>Tissue Culture Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91150-20</td>
			<td>Dissection Tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91197-00</td>
			<td>Dissection Tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26140079</td>
			<td>Tissue Culture Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91113-10</td>
			<td>Dissection Tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91460-11</td>
			<td>Dissection Tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fix and Perm Cell Permeabilization Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>GAS003</td>
			<td>Flow Cytometry Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Neuron Culture Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hibernate-E Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1247601</td>
			<td>Neuron Culture Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instant Sealing Sterilization Pouches</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>181254</td>
			<td>Tissue Culture Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Interferon Beta</td>
			<td>PBL Assay Science</td>
			<td>12405-1</td>
			<td>Flow Cytometry Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Mark Anti-NeuN-PE Antibody, clone A60</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>FCMAB317PE</td>
			<td>Flow Cytometry Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal Media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103049</td>
			<td>Neuron Culture Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pacific Blue anti-mouse H-2Kb Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>116513</td>
			<td>Flow Cytometry Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain Solution</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS003126</td>
			<td>Dissociation Solution Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15714</td>
			<td>Fixative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Neuron Culture Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-D-Lysine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7280</td>
			<td>Neuron Culture Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Pattern Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91100-12</td>
			<td>Dissection Tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo dissection microscope</td>
			<td>Swift</td>
			<td>M29TZ-SM99CL-BTW1</td>
			<td>Dissection Tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91401-10</td>
			<td>Dissection Tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer Pipets</td>
			<td>Corning</td>
			<td>357575</td>
			<td>Laboratory Supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TruStain FcX (anti-mouse CD16/32) Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>101319</td>
			<td>Flow Cytometry Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8154-100ML</td>
			<td>Tissue Culture Supplies</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing the expression of major histocompatibility complex class i on primary murine hippocampal neurons by flow cytometry

تدعم الأدلة المتزايدة فرضية أن التفاعلات العصبية المناعية تؤثر على وظيفة الجهاز العصبي في كل من الحالات الهوستاتيكية والباثولوجية. وظيفة مدروسة جيدا من الدرجة الأولى المعقدة الهستو التوافق الرئيسية (MHCI) هو تقديم الببتيدات المستمدة من الخلايا إلى الجهاز المناعي التكيفي، لا سيما في الاستجابة للعدوى. في الآونة الأخيرة وقد ثبت أن التعبير عن جزيئات MHCI على الخلايا العصبية يمكن تعديل التغيرات التي تعتمد على النشاط في الاتصال متشابك خلال التنمية الطبيعية والاضطرابات العصبية. أهمية هذه الوظائف لصحة الدماغ يدعم الحاجة إلى الفحص الحساس الذي يكشف بسهولة التعبير MHCI على الخلايا العصبية. هنا نحن نصف طريقة للثقافة الأولية للخلايا العصبية فرس النهر مورين ومن ثم تقييم التعبير MHCI عن طريق تحليل تدفق الخلايا الخلوية. يتم استئصال قرن آمون مورين من جراء الفئران قبل الولادة في اليوم الجنيني 18. يتم فصل الأنسجة إلى تعليق خلية واحدة باستخدام التقنيات الأنزيمية والميكايكية، ثم استزراعها في وسائط خالية من المصل تحد من نمو الخلايا غير العصبية. بعد 7 أيام في المختبر ، يتم تحفيز تعبير MHCI عن طريق علاج الخلايا المستزرعة دوائيا مع الإنترفيرون بيتا. تسمى جزيئات MHCI في الموقع بأجسام مضادة موسومة بالفلورسنت ، ثم يتم فصل الخلايا بشكل غير أنزيمي إلى تعليق خلية واحدة. لتأكيد هوية الخلايا العصبية، يتم إصلاح الخلايا مع بارافورمالديهايد، permeabilized، ووصفت مع الأجسام المضادة الموسومة الفلورية التي تعترف مستضد النووية العصبية نيون. ثم يتم قياس التعبير MHCI على الخلايا العصبية عن طريق تحليل تدفق القياسات الخلوية. يمكن بسهولة التلاعب بالثقافات العصبية إما عن طريق التعديلات الوراثية أو التدخلات الدوائية لاختبار فرضيات محددة. مع تعديلات طفيفة، يمكن استخدام هذه الأساليب زراعة مجموعات الخلايا العصبية الأخرى أو لتقييم التعبير عن البروتينات الأخرى ذات الاهتمام.

باستخدام الإجراء المعروض هنا ، تم تشريح أنسجة فرس النهر من جراء الفئران قبل الولادة في اليوم الجنيني 18. تم فصل الأنسجة إلى تعليق خلية واحدة باستخدام الطرق الأنزيمية والميكايكية ، ثم تم استزراعها في 12 لوحة بئر تم علاجها مسبقا ب poly-D-lysine. بعد 7 أيام في المختبر، عولجت الخلايا مع 100 U/mL من IFNβ أو وسائل الإعلام فقط لمدة 72 ساعة، مما حفز التعبير عن MHCI. كانت الخلايا العصبية ملطخة في الموقع لMHCI قبل أن يتم فصلها بشكل غير أنزيمي إلى تعليق خلية واحدة. تم إصلاح الخلايا العصبية و permeabilized، ثم ملطخة داخل الخلايا لعلامة نواة الخلايا العصبية نيون. تم تقييم العينات عن طريق قياس التدفق الخلوي وتم تحليل البيانات باستخدام البرامج المرتبطة بها. تم تحديد الخلايا العصبية من خلال gating متسلسلة من مجموع الأحداث لاستبعاد الحطام الخلوي وdededts (الشكل 1A, B). تم تحديد الخلايا العصبية بشكل نهائي من قبل NeuN الإيجابية (الشكل 1C). تم تحليل خلايا NeuN+ كذلك ل MHCI الإيجابية عن طريق رسم الخلايا على المدرج التكراري مع عدد الخلايا التي تم تطبيعها إلى الوضع على المحور ص وفلورسيون MHCI على المحور س. تم رسم بوابة MHCI+ عند النقطة التي اختلفت فيها القمم الإيجابية والسلبية(الشكل 1D). من هذا, النسبة المئوية الخلايا العصبية إيجابية لتلطيخ MHCI (الشكل 1E) وكثافة الفلورسينس المتوسط (MFI; الشكل 1F) تم حسابها. تظهر النتائج أن العلاج IFNβ رفع بشكل كبير النسبة المئوية للخلايا العصبية إيجابية لتلطيخ خارج الخلية من MHCI، فضلا عن مستوى التعبير، كما هو مبين من قبل MFI. وقد تم إجراء التحليل الإحصائي والتمثيل البياني باستخدام البرمجيات الإحصائية المتاحة تجاريا.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61436/61436fig1v2.jpg"> الشكل 1: استراتيجية الصياغة التمثيلية والتحديد الكمي لل MHCI. عولجت الخلايا العصبية فرس النهر الأولية مع 100 U/mL من IFNβ أو وسائل الإعلام فقط. بعد 72 ح, كانت ملطخة الخلايا العصبية خارج الخلية مع المحيط الهادئ الأزرق المقترن MHCI (1 ميكروغرام / مل H2-Kب),ثم وصفت داخل الخلية مع PE-اقتران NeuN (1:100 تخفيف). تم تقييم الفلورسينس الخلوي عن طريق قياس التدفق الخلوي، وتم تحليل البيانات. (أ)تم رسم إجمالي الأحداث كما SSC-A (سجل) مقابل FSC-A (خطي)، وبوابات الخلايا (P1) لاستبعاد الحطام. (ب)ضمن السكان P1، تم رسم الخلايا كما FSC-H (خطي) مقابل FSC-A (خطي) لبوابة السكان خلية واحدة. (C) ضمن مجموعة خلايا مفردة، تم رسم الخلايا SSC-A (سجل) مقابل NeuN-PE (سجل). تم بوابات نيون+ الخلايا لتحديد الخلايا العصبية. (د)ضمن مجموعة الخلايا العصبية، تم رسم الخلايا على مخطط بياني مع MHCI-PacBlu على المحور س وأرقام الخلايا تطبيع إلى وضع على المحور ص. تم رسم بوابة أفقية لتحديد نسبة الخلايا العصبية الإيجابية لتلطيخ MHCI. (E) تحديد كمي من النسبة المئوية MHCI+ من نيون+ الخلايا في وسائل الإعلام فقط والخلايا العصبية IFNβ المعالجة. (F)تحديد كمي لشدة الفلورسينس المتوسطة (MFI) من MHCI على نيون+ الخلايا في وسائل الإعلام (أسود) والخلايا العصبية (الحمراء) المعالجة IFNа. تم حساب الأهمية الإحصائية عن طريق اختبار t غير المدفوع. **، ص < 0.01. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61436/61436fig1v2large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="4">الخلايا العصبية نمو وسائل الإعلام (50 مل)</td>
		</tr>
<tr>
<td>الكاشف</td>
			<td>التركيز النهائي</td>
			<td>تركيز المخزون</td>
			<td>ل 50 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td>ملحق B27</td>
			<td>2%</td>
			<td>100%</td>
			<td>1.0 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td>إل-الجلوتامين</td>
			<td>2 مليون متر</td>
			<td>200 متر م</td>
			<td>0.5 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td>البنسلين ستربتوميسين</td>
			<td>100 U/مل</td>
			<td>10,000 U/ml</td>
			<td>0.5 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td>وسائل الإعلام العصبية</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>48.0 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4"></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">العازلة FACS (500 مل)</td>
		</tr>
<tr>
<td>الكاشف</td>
			<td>التركيز النهائي</td>
			<td>تركيز المخزون</td>
			<td>ل 500 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td>مصل الأبقار الجنينية</td>
			<td>2%</td>
			<td>100%</td>
			<td>10 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td>EDTA</td>
			<td>1 مليون متر</td>
			<td>500 مليون متر</td>
			<td>1 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td>dPBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>489 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4"></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">حل الانفصال باباين</td>
		</tr>
<tr>
<td>الكاشف</td>
			<td>التركيز النهائي</td>
			<td>تركيز المخزون</td>
			<td>ل 1 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td>تعليق باباين</td>
			<td>20 U/مل</td>
			<td>1000 U/مل</td>
			<td>0.020 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td>DNase I</td>
			<td>2.5 U/مل</td>
			<td>2500 U/مل</td>
			<td>0.001 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td>إسبات-E</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1.0 مل</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">ملاحظة: يختلف حجم حل فصل باباين المطلوب اعتمادا على عدد الأدمغة الجنينية التي يتم تشريحها. إعداد 0.5 مل لكل دماغ للخلايا العصبية فرس النهر أو 1.0 مل لكل دماغ للخلايا العصبية القشرية.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">ملاحظة: إعداد حل الانفصال عن طريق دوامة تعليق papain في السبات-E لمدة 3 دقائق. بعد حل الباباين تماما، إضافة DNase I. لا دوامة DNase I.</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 1: وسائط الإعلام والحلول.

Watch this Scientific Journal Video about Assessing the Expression of Major Histocompatibility Complex Class I on Primary Murine Hippocampal Neurons by Flow Cytometry at JoVE.com

Assessing the Expression of Major Histocompatibility Complex Class I on Primary Murine Hippocampal Neurons by Flow Cytometry

يصف هذا البروتوكول طريقة لزراعة الخلايا العصبية الأولية فرس النهر من دماغ الفأر الجنيني. ثم يتم تقييم التعبير عن فئة معقدة الهستوناتية الرئيسية الأولى على السطح خارج الخلية من الخلايا العصبية المستزرعة عن طريق تحليل التدفق الخلوي.

تقييم التعبير عن الهستو التوافق الكبرى مجمع الفئة الأولى على الخلايا العصبية الأولية مورين فرس النهر عن طريق قياس التدفق الخلوي

Increasing evidence supports the hypothesis that neuro-immune interactions impact nervous system function in both homeostatic and pathologic conditions. A ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

تحليل التدفق الخلوي للخلايا المناعية وفي الفئران Aortas

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

الإنسان في المختبر قمع وأداة الكشف عن الاعتراف للدولة في وقت مبكر من الخلل المناعي

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry

دراسة التوتة اختيار الإيجابية والسلبية من قياس التدفق الخلوي

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign  antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the  T cell ...

Detection of Fluorescent Nanoparticle Interactions with Primary Immune Cell Subpopulations by Flow Cytometry

الكشف عن جسيمات متناهية الصغر نيون التفاعل مع مجموعات سكانية فرعية خلية المناعة الأولية من قبل التدفق الخلوي

Engineered nanoparticles are endowed with very promising properties for therapeutic and diagnostic purposes. This work describes a fast and reliable ...

In Situ Detection of Autoreactive CD4 T Cells in Brain and Heart Using Major Histocompatibility Complex Class II Dextramers

In Situ Detection of Autoreactive CD4 T Cells in Brain and Heart Using Major Histocompatibility Complex Class II Dextramers

في الكشف الموضعي للخلايا CD4 T Autoreactive في الدماغ والقلب عن طريق التوافق النسيجي الرئيسية الدرجة الثانية مجمع Dextramers

This report demonstrates the use of major histocompatibility complex (MHC) class II dextramers for detection of autoreactive CD4 T cells in situ in myelin ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

مضان تنشيط الفرز الخليوي لتنقية الخلايا الجذعية بلازماوية الشكل من الفأر نخاع العظم

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

تقييم الشبكية دبقية أكلة وظيفة<em&gt; في فيفو</em&gt; باستخدام الفحص القائمة على الخلوي التدفق

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

مضان القائم على النورامينيداز تثبيط الفحص لتقييم مدى حساسية فيروسات الأنفلونزا إلى والنورامينيداز المانع فئة من الأدوية المضادة للفيروسات

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

العزلة والثقافة في المختبر من البلاعم السنخية مورين والبشرية

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Characterization of Human Monocyte Subsets by Whole Blood Flow Cytometry Analysis

وصف مجموعات فرعية الوحيدات البشرية بالدم كله يتدفق التحليل الخلوي

Monocytes are key contributors in various inflammatory disorders and alterations to these cells, including their subset proportions and functions, can ...