Name: precise brain mapping to perform repetitive in vivo imaging of neuro-immune dynamics in mice
Uploaded: 2020-08-07T15:00:00
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हम इस पांडुलिपि में प्रस्तुत विचारों पर चर्चा करने के लिए Eyo प्रयोगशाला के सदस्यों को धन्यवाद देते हैं । हम वर्जीनिया विश्वविद्यालय में किपनिस लैब से डॉ जस्टिन रुस्टेनहोवेन को एनजी 2डीएसरेड चूहों ३३के उपहार के लिए धन्यवाद देते हैं । यह काम नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ न्यूरोलॉजिकल डिसऑर्डर्स एंड स्ट्रोक ऑफ नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ से यूएबीई (K22 NS104392) के वित्तपोषण द्वारा समर्थित है।

सभी कदम वर्जीनिया विश्वविद्यालय के संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा निर्धारित और अनुमोदित दिशा-निर्देशों के अनुसार हैं ।
1. कपाल खिड़की प्रत्यारोपण के लिए माउस तैयारी
नो...

वीवो दो फोटॉन इमेजिंग में आगमन ने स्वस्थ मस्तिष्क में होने वाली सेलुलर इंटरैक्शन और गतिशीलता की अधिकता का पता लगाने के अवसर खोले हैं। प्रारंभिक अध्ययनों में एक्यूट और क्रॉनिक इमेजिंग37,<sup...

केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) न्यूरॉन्स, ग्लिया और पोत से जुड़े कोशिकाओं सहित विभिन्न निवासी सेल प्रकारों के बीच बातचीत के एक जटिल परस्पर क्रिया द्वारा नियंत्रित होता है। परंपरागत रूप से, तंत्रिका कोशिकाओं का अध्ययन अलग- अलग, सह-संस्कारी1,,2,,3,,4,,5 (इन विट्रो) या उत्पादित मस्तिष्क ऊतक (पूर्व वीवो)6,7,,8,,,9,,10 संदर्भों में किया गया था। हालांकि, वीवो में बरकरार मस्तिष्क के मूल वातावरण में तंत्रिका कोशिका व्यवहार और बातचीत को और समझने की आवश्यकता है। इस प्रोटोकॉल में, हम रुचि के वीवो क्षेत्रों में मानचित्रण करने के लिए एक विधि का वर्णन करते हैं और भविष्य के इमेजिंग सत्रों में उन क्षेत्रों को ठीक से फिर से छवि देते हैं ताकि विस्तारित अवधि में विभिन्न सीएनएस सेल प्रकारों के बीच जटिल बातचीत को ट्रैक किया जा सके।
वीवो इमेजिंग दृष्टिकोणों के विकास ने तंत्रिका कार्य 11 ,12 , 13,,,1414,,15की उचित समझ के लिए महत्वपूर्ण लाभ प्रदान किया है ।15 विशेष रूप से, ये दृष्टिकोण पारंपरिक इन विट्रो और पूर्व वीवो दृष्टिकोणों पर कई फायदे प्रदान करते हैं। सबसे पहले, वीवो इमेजिंग सिस्टम में तंत्रिका नेटवर्क फिजियोलॉजी की पूरी समझ प्रदान करने के लिए सेलुलर इंटरैक्शन के पूर्ण प्रदर्शनों की सूची के साथ वैक्यूलेचर जैसे शारीरिक रूप से प्रासंगिक कोशिका और ऊतक घटक होते हैं। दूसरा, हाल के निष्कर्षों से पता चलता है कि जब उनके मूल वातावरण से हटा दिया जाता है, तो कुछ तंत्रिका कोशिकाएं (जैसे माइक्रोग्लिया) अपनी पहचान की महत्वपूर्ण विशेषताएं खो देती हैं और इस प्रकार शरीर विज्ञान16,,17 जिसे वीवो सेटिंग में संरक्षित किया जा सकता है। तीसरा, वीवो इमेजिंग सिस्टम में सीएनएस सेलुलर इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए हफ्तों से महीनों की स्थिर देशांतर जांच का अवसर प्रदान करता है। अंत में, परिधीय प्रतिरक्षा प्रणाली18,19 और माइक्रोबायोम20,,सीएनएस फिजियोलॉजी में21 से योगदान के लिए बढ़ते सबूतों को देखते हुए, वीवो सिस्टम में सीएनएस कोशिकाओं पर ऐसे योगदान और प्रभावों से पूछताछ करने के लिए एक मंच प्रदान करते हैं।, इस प्रकार, दृष्टिकोण है कि वीवो इमेजिंग में देशांतर रोजगार के लिए न्यूरो प्रतिरक्षा शरीर विज्ञान और स्वस्थ, घायल, और रोगग्रस्त राज्यों में बातचीत का अध्ययन पारंपरिक दृष्टिकोण के लिए एक महान पूरक इसके अलावा हैं ।
इस प्रोटोकॉल में, हम उदाहरण के रूप में माइक्रोग्लिया, न्यूरॉन्स और एनजी 2+ कोशिकाओं सहित मस्तिष्क में विभिन्न कोशिका प्रकारों की छवि के लिए एक विश्वसनीय दृष्टिकोण का वर्णन करते हैं। वीवो में तंत्रिका कोशिकाओं की कल्पना करने के लिए दो दृष्टिकोण विकसित किए गए हैं: पतली खोपड़ी दृष्टिकोण और एक कपाल खिड़की दृष्टिकोण के साथ खुली खोपड़ी। यद्यपि पतली खोपड़ी दृष्टिकोण उपयोग में हैं और पसंद किए जाते हैं क्योंकि वे खुले खोपड़ी दृष्टिकोण के कुछ नुकसानों जैसे ग्लियल सेल सक्रियण, उच्च-से-शारीरिक रीढ़ की गतिशीलता और विरोधी भड़काऊ एजेंटों के उपयोग को दूर करते हैं22,,23,24,,25,पतली खोपड़ी दृष्टिकोण भी कुछ महत्वपूर्ण कमियां दिखाते हैं।, सबसे पहले, पतली प्रक्रिया एक बहुत ही नाजुक प्रक्रिया है कि कई शोधकर्ताओं को सही करने के लिए मुश्किल लगता है, खासकर जब फिर से पतला आवश्यक है । यह मामला है क्योंकि प्रयोगकर्ताओं के लिए यह पता लगाना अक्सर मुश्किल होता है कि उन्होंने खोपड़ी को ~ 20 माइक्रोन गहराई तक पतला कर दिया है। दूसरा, चूहों के बीच पर्याप्त तुलना के लिए, पतले होने के लिए समान होने की आवश्यकता होगी और इमेजिंग सत्र या चूहों के बीच विभिन्न प्रकार की पतली सफलता तंत्रिका संरचनाओं के दृश्य को जटिल बना सकती है। तीसरा, जब देशांतर इमेजिंग के लिए कार्यरत है, पतली खोपड़ी के साथ जानवरों को केवल सत्र की एक सीमित संख्या के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है जब खोपड़ी के फिर से पतला कार्यरत है । आगे, के बाद से हड्डी ऊतक के कुछ अभी भी रहता है, इमेजिंग की गहराई में स्पष्टता पतली खोपड़ी अधिक सतही के महान दृश्य के लिए अनुमति दृष्टिकोण से समझौता किया जा सकता है, लेकिन गहरे क्षेत्रों के साथ ज्यादा नहीं । इस के प्रकाश में, हिप्पोकैम्पस जैसे गहरे मस्तिष्क संरचनाओं को पतला खोपड़ी दृष्टिकोण के साथ सफलतापूर्वक चित्रित नहीं किया जा सकता है। ये विचार वैकल्पिक और पूरक दृष्टिकोणों की आवश्यकता को बढ़ाते हैं जो इन चिंताओं को दूर कर सकते हैं ।
पतली खोपड़ी दृष्टिकोण के लिए वैकल्पिक, खुली खोपड़ी खिड़की प्रत्यारोपण दृष्टिकोण एक प्रक्रिया है जिसमें खोपड़ी एक ऑप्टिकली स्पष्ट ग्लास कवरस्लिप के साथ प्रतिस्थापित किया जाता है का उपयोग करता है । यह इमेजिंग सत्रों की एक के पास असीमित संख्या के लिए अनुमति देता है। इसके अलावा, ग्लास कवरलिप के साथ खोपड़ी के प्रतिस्थापन को देखते हुए, यह विधि घंटों से महीनों तक समय की व्यापक अवधि के लिए फ्लोरोसेंटली टैग की मस्तिष्क कोशिकाओं की एक स्पष्ट देखने की खिड़की के लिए अनुमति देती है और इसलिए, कोशिका गतिविधि और बातचीत का अध्ययन करने के लिए नियोजित किया जा सकता है जो शरीर विज्ञान, उम्र बढ़ने और विकृति के लिए प्रासंगिक हैं।
कुल मिलाकर, हम उन चरणों का विस्तार करते हैं जिनका पालन स्टीरियोटैक्सिक क्रैनियोटॉमी के माध्यम से पुरानी कपाल खिड़कियों को प्रत्यारोपित करने के लिए किया जा सकता है जो ब्याज के मस्तिष्क क्षेत्रों के वीवो इमेजिंग में सक्षम बनाता है। हम यह भी वर्णन करते हैं कि कैसे मोटे मस्तिष्क वास्कुलेचर या फ्लोरोसेंटी लेबल वाले डेनड्राइट्स का उपयोग ब्याज के मस्तिष्क क्षेत्रों के क्रमशः एक मोटे या ठीक नक्शे को उत्पन्न करने के लिए किया जा सकता है। इस दृष्टिकोण का उपयोग तब कई सत्रों में दोहराए जाने वाले इमेजिंग के लिए किया जा सकता है। इस तकनीक का महत्व, इसलिए, विभिन्न सेलुलर प्रकारों की व्यवस्था, आकृति विज्ञान और बातचीत सहित मस्तिष्क तत्वों में दीर्घकालिक परिवर्तन या स्टेसिस को छवि देने की क्षमता में निहित है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Coverglass (3mm)</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanoacrylate glue (Krazy Glue)</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>https://www.amazon.com/Krazy-Glue-Original-Purpose-Instant/dp/B07GSF31WZ/ref=sr_1_2?keywords=krazy+glue&#38;qid=1583856837&#38;s=pet-supplies&#38;sr=8-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Demi Ultra LED Curing Light System</td>
			<td>Dental Health Products, Inc</td>
			<td>910860-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental Drill</td>
			<td>Osada: www.osadausa.edu</td>
			<td>EXL-M40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drill Bit</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>#19008-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye Ointment</td>
			<td>Henry Schien</td>
			<td>1338333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iBond Total Etch (Primer glue)</td>
			<td>Chase Dental Supply (Heraeus Kulzer)</td>
			<td>66040094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhodamine B</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>81-88-9 (R6626)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetris Evoflow glue (Final glue)</td>
			<td>Top Dent (Ivoclar Vivadent)</td>
			<td>#595956</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wahl Brav Mini+</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>https://www.amazon.com/Wahl-Professional-Animal-BravMini-41590-0438/dp/B00IN24ILE/ref=asc_df_B00IN24ILE/?tag=hyprod-20&#38;linkCode=df0&#38;hvadid=167141013968&#38;hvpos=&#38;hvnetw=g&#38;hvrand=12368793083893626704&#38;hvpone=&#38;hvptwo=&#38;hvqmt=&#38;hvdev=c&#38;hvdvcmdl=&#38;hvlocint=&#38;hvlocphy=9008337&#38;hvtargid=pla-332197544154&#38;psc=1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

precise brain mapping to perform repetitive in vivo imaging of neuro-immune dynamics in mice

केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) को न्यूरोनल, ग्लियल, स्ट्रोमल और संवहनी कोशिकाओं के जटिल परस्पर क्रिया द्वारा विनियमित किया जाता है जो इसके उचित कार्य को सुविधाजनक बनाता है। हालांकि इन कोशिकाओं का अध्ययन इन कोशिकाओं में विट्रो में अलगाव या एक साथ पूर्व वीवो उपयोगी शारीरिक जानकारी प्रदान करता है; तंत्रिका कोशिका शरीर विज्ञान की मुख्य विशेषताएं ऐसे संदर्भों में याद किया जाएगा। इसलिए वीवो वातावरण में अपने मूल में तंत्रिका कोशिकाओं का अध्ययन करने की आवश्यकता है। यहां विस्तृत प्रोटोकॉल कृंतक प्रांतस्था में तंत्रिका कोशिकाओं के वीवो दो-फोटॉन इमेजिंग में दोहराए जाने का वर्णन करता है ताकि घंटे-घंटों से महीनों तक समय की विस्तारित अवधि में विशिष्ट कोशिकाओं की कल्पना और अध्ययन किया जा सके। हम विस्तार से एक मोटे नक्शे के रूप में घोर स्थिर मस्तिष्क vasculature के उपयोग का वर्णन या फ्लोरोसेंटी ब्याज के चुनिंदा मस्तिष्क क्षेत्रों का एक अच्छा नक्शा के रूप में dendrites लेबल । एक दृश्य कुंजी के रूप में इन नक्शे का उपयोग करना, हम दिखाते हैं कि कैसे तंत्रिका कोशिकाओं को वीवो इमेजिंग में बाद में दोहराव के लिए ठीक से जगह दी जा सकती है। फ्लोरोसेंटली-लेबल माइक्रोग्लिया, न्यूरॉन्स और एनजी 2+ कोशिकाओं के वीवो इमेजिंग के उदाहरणों का उपयोग करके, यह प्रोटोकॉल इस तकनीक की क्षमता को दर्शाता है ताकि विस्तारित समय अवधि के साथ एक ही मस्तिष्क स्थान में सेलुलर गतिशीलता के दोहराव वाले दृश्य की अनुमति दी जा सके, जो सामान्य शरीर विज्ञान या निम्नलिखित पैथोलॉजिकल अपमान में इन कोशिकाओं की संरचनात्मक और कार्यात्मक प्रतिक्रियाओं को समझने में और सहायता कर सकता है। जहां आवश्यक हो, इस दृष्टिकोण को कैल्शियम इमेजिंग के साथ तंत्रिका कोशिकाओं की कार्यात्मक इमेजिंग के साथ युग्मित किया जा सकता है। यह दृष्टिकोण वीवो में सीएनएस के विभिन्न सेल प्रकारों के बीच शारीरिक बातचीत की कल्पना करने के लिए विशेष रूप से एक शक्तिशाली तकनीक है जब आनुवंशिक माउस मॉडल या विशिष्ट रंगों को अलग फ्लोरोसेंट टैग के साथ ब्याज की कोशिकाओं को लेबल करने के लिए उपलब्ध हैं।

वीवो में माइक्रोग्लियल गतिशीलता की कल्पना करने के लिए, डबल ट्रांसजेनिक CX3CR1GFP/+:Thy1YFP चूहों का इस्तेमाल किया गया । Thy1-YFP एच लाइन का उपयोग माइक्रोग्लिया (जीएफपी) और न्यूरॉन्स (वाईएफपी) के फ्लोरेस ओवरलैप ...

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Precise Brain Mapping to Perform Repetitive In Vivo Imaging of Neuro-Immune Dynamics in Mice

यह प्रोटोकॉल एक पुरानी कपाल खिड़की प्रत्यारोपण तकनीक का वर्णन करता है जिसका उपयोग स्वस्थ और रोगग्रस्त दोनों स्थितियों में न्यूरो-ग्लियो-वैस्कुलर संरचनाओं, बातचीत और कार्य के देशांतर इमेजिंग के लिए किया जा सकता है। यह ट्रांसक्रैनियल इमेजिंग दृष्टिकोण के पूरक विकल्प के रूप में कार्य करता है, जबकि अक्सर पसंद किया जाता है, कुछ महत्वपूर्ण सीमाएं होती हैं।

चूहों में न्यूरो-इम्यून डायनेमिक्स के वीवो इमेजिंग में दोहराव करने के लिए सटीक ब्रेन मैपिंग

The central nervous system (CNS) is regulated by a complex interplay of neuronal, glial, stromal, and vascular cells that facilitate its proper function. ...

यह प्रोटोकॉल दर्शाता है कि कैसे वीवो दो-फोटॉन माइक्रोस्कोपी में विस्तारित समय अवधि में एक ही मस्तिष्क स्थान में सेलुलर गतिशीलता के दोहराव वाले दृश्यीकरण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। इस तकनीक का लाभ यह है कि, यह सीएनएस के विभिन्न सेल प्रकार के बीच व्यवस्था, आकृति विज्ञान और शारीरिक बातचीत सहित मस्तिष्क के सेलुलर तत्वों में दीर्घकालिक परिवर्तनों को छवि देना संभव बनाता है। यह तकनीक मस्तिष्क प्लास्टिसिटी और न्यूरोडिजेनरेशन के दौरान सेल-सेल इंटरैक्शन, सेल डायनामिक्स और रूपात्मक परिवर्तनों को प्राप्त करने में विशेष रूप से उपयोगी हो सकती है।एक किशोर या युवा वयस्क, चार से 10 सप्ताह पुराने, एक CX3CR1 GFP heterozygote माउस, कि 17 से 25 ग्राम वजन, एक कपाल खिड़की प्रत्यारोपण के लिए तैयार करने से शुरू करो । माउस को एनेस्थेटाइज करने के बाद, बालों को अपने सिर पर, कानों के बीच, लगभग, आंखों के स्तर से, गर्दन क्षेत्र के शीर्ष तक दाढ़ी बनाने के लिए हेयर ट्रिमर का उपयोग करें। माउस को स्टीरियोटाक्टिक सर्जरी स्टेशन, नाक शंकु में ले जाएं, और कान की सलाखों का उपयोग करके उसके सिर को स्थिर करें।प्रक्रिया के दौरान, हीटिंग पैड पर माउस बनाए रखें। तेल मरहम के साथ दोनों आंखों को चिकनाई करें, फिर 0.25% बुपिवाकेन के 100 माइक्रोलीटर इंजेक्ट करें, और चार मिलीग्राम प्रति मिलीलीटर डेक्सामेथासोन के 100 माइक्रोलीटर, चीरा साइट पर चमड़े के रूप में। आगे बढ़ने से कम से कम पांच मिनट पहले इंतजार करें।मुंडा सिर खून, बीटाडीन के तीन बारी झाड़ू के साथ, और ७०% शराब । फिर सर्जिकल ब्लेड या कैंची से मिडलाइन सिर का चीरा लगाएं। खोपड़ी क्षेत्र के पीछे से, कानों के बीच, आंखों के बीच ललाट क्षेत्र तक विस्तारित।खोपड़ी को बेनकाब करने के लिए बची हुई त्वचा को काट लें। 3% हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ खोपड़ी और अंतर्निहित खोपड़ी के बीच स्थित संयोजी ऊतक का खून करें, और मस्तिष्क क्षेत्र को स्टीरियोटाटिक निर्देशांक के साथ चित्रित करने के लिए स्थानीयकृत करें। एक गोलाकार खोलने ड्रिल, खोपड़ी में लगभग चार मिलीमीटर, एक दंत ड्रिल बिट का उपयोग कर।ड्रिलिंग के दौरान, मस्तिष्क को ठंडा करने के लिए नियमित रूप से बाँझ नमकीन और कपास झाड़ू के साथ खोपड़ी को गीला किया। हड्डी के मलबे को साफ करें, और खोपड़ी की हड्डी को नरम करें। समाप्त होने पर, खोपड़ी के इस हिस्से को नुकीले संदंश के साथ सावधानी से हटा दें।खोपड़ी को हटाने के बाद, ध्यान से एक छोटा कवर ग्लास रखें, जो क्रैनिओटॉमी में नमकीन के साथ गीला हो। बाँझ पोंछ का उपयोग करके अतिरिक्त नमकीन को सुखा लें। एक नुकीले एप्लिकेटर का उपयोग करके, खिड़की के चारों ओर साइनोएक्रिलेट गोंद लागू करें, और इसे मस्तिष्क और खोपड़ी से जुड़ने की अनुमति दें।बाकी खोपड़ी में प्राइमर गोंद लगाएं, और इसे 20 से 40 सेकंड के लिए एक इलाज प्रकाश के साथ ठीक करें। अंतिम गोंद के साथ खिड़की के चारों ओर एक अच्छी तरह से बनाएं, और इसे 20 से 40 सेकंड के लिए एक इलाज प्रकाश के साथ ठीक करें। खोपड़ी पर एक छोटे सिर की प्लेट गोंद, कॉन्ट्रालेटरल गोलार्द्ध पर, क्रैनियोटॉमी, प्राइमर गोंद के साथ, और फिर अंतिम गोंद के साथ, दोनों को 20 से 40 सेकंड के लिए इलाज करें।माउस जागने के बाद, पोस्टऑपरेटिव एनाल्जेसिया के रूप में बुप्रेनोर्फिन एसआर की एक चमड़े की खुराक इंजेक्ट करें, जो 72 घंटे के लिए पर्याप्त होगा। स्वस्थ वसूली की सुविधा के लिए अतिरिक्त नमक भोजन के साथ माउस को पुनर्जीवित करें। इमेजिंग प्रत्यारोपण सर्जरी के बाद दो सप्ताह के रूप में जल्दी के रूप में किया जा सकता है।दो फोटॉन माइक्रोस्कोप चरण पर सिर की प्लेट माउंट करने के लिए शिकंजा का उपयोग करें, जिसे एक हीटिंग प्लेट के साथ 35 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा जाना चाहिए। माउस को रक्त वाहिका डाई के 100 माइक्रोलीटर के साथ संक्षेप में इंजेक्ट करें, जैसे रोडामाइन बी धीरे-धीरे कपास झाड़ू के साथ कपाल खिड़की की सतह को साफ करें, 70% इथेनॉल में भिगोया। खिड़की पर पानी या खारा की कुछ बूंदें रखो, और समाधान में उद्देश्य लेंस कम।सुनिश्चित करें कि लेजर बंद कर दिया है के रूप में उद्देश्य कम है, और एक पाठ्यक्रम के लिए प्रमुख रक्त वाहिका स्थलों निरूपित नक्शा आकर्षित, जबकि आंख के माध्यम से देख रहे हैं । दो फोटॉन इमेजिंग के दौरान विशिष्ट क्षेत्रों की पहचान करने के लिए इस ड्राइंग का उपयोग करें। दो फोटॉन इमेजिंग का उपयोग कर फ्लोरोसेंट कोशिकाओं और जहाजों की छवियों को ले लीजिए।इमेजिंग मापदंडों के लिए पाठ पांडुलिपि देखें, उचित निर्देशांक के साथ सावधान नोट्स लें, यह सुनिश्चित करने के लिए कि सटीक क्षेत्रों को बाद में इमेजिंग के लिए फिर से देखा जा सकता है। इमेजिंग के अंत में इस प्रारंभिक इमेजिंग सत्र में देखने के कई क्षेत्रों की तरह ड्रा, मंच से माउस ले, यह संज्ञाहरण से जाग करने के लिए अनुमति देते हैं, और यह अपने घर पिंजरे में वापस । बाद के सत्रों के दौरान क्षेत्रों को फिर से इमेजिंग के लिए प्राप्त नोट्स और छवियों का उपयोग करें।इस प्रोटोकॉल का उपयोग ताइवान वाईएफपी-एच लाइन चूहों में वीवो में माइक्रोग्लियल गतिशीलता की कल्पना करने के लिए किया गया था। विशिष्ट dendrites, मस्तिष्क क्षेत्रों के ठीक मानचित्रण के लिए स्थिर स्थलों के रूप में कार्य किया । जबकि डेंड्राइट्स एक स्थिर हैं, कुछ माइक्रोग्लिया दैनिक चलते हैं।एकल ट्रांसजेनिक CX3CR1/GFP चूहों, आठ सप्ताह तक के लिए माइक्रोग्लिया का पालन करने के लिए इस्तेमाल किया गया । प्रत्येक इमेजिंग सत्र के दौरान रोडामाइन बी के इंजेक्शन का उपयोग वैक्यूलेचर को लेबल करने के लिए किया जाता था। जबकि वैक्यूलेचर स्थिर रूप से तय रहता है, माइक्रोग्लिया गतिशील होता है।CX3CR1/GFP चूहों, पहले और गंभीर बरामदगी के बाद microglia का पालन करने के लिए इस्तेमाल किया गया । संवहनी बिस्तर संरचना को बनाए रखा गया था, लेकिन माइक्रोग्लियल सेलुलर नेटवर्क, और स्थिति परिदृश्य क्षणिक था। बरामदगी के 24 से ४८ घंटे के भीतर अधिक परिवर्तन देखे गए ।डबल ट्रांसजेनिक CX3CR1/GFP और NG2DS-लाल चूहों, माइक्रोग्लिया को ट्रैक करने के लिए इस्तेमाल किया गया था, और NG2 वीवो में सकारात्मक कोशिकाओं के लिए । वैक्यूल्चर को लेबल किए बिना, माइक्रोग्लिया के साथ-साथ पोत से जुड़े परजीवी, और ओलिगोडेन्ड्रोसाइट अग्रदूत कोशिकाओं, या ओपीसी की पहचान की गई। परजीवी में लम्बी प्रक्रियाएं होती हैं जो संवहनी दीवार के साथ पालन करती हैं, और ओपीसी आम तौर पर बड़े सेल निकायों को दिखाते हैं जो मस्तिष्क परेंचिमा में रहते हैं, जो वैक्यूलेचर से दूर हैं।जब रोडामाइन बी का उपयोग किया गया था, तो परजीवी के उज्जवल फ्लोरेसेंस को इमेजिंग के दौरान इसी तरह की उमंग के बावजूद, ल्यूमिनल रोडामाइन के बेहोशी फ्लोरेसेंस से अलग किया जा सकता है। दैनिक इमेजिंग से पता चला कि परजीवी स्थिर रूप से तैनात थे, जबकि ओपीसी और माइक्रोग्लिया गतिशील थे। यह महत्वपूर्ण है कि क्षेत्र की सावधानीपूर्वक अवलोकन किया जा रहा है, एक प्रतिनिधि मानचित्र तैयार करने के लिए जो जितना संभव हो उतना सटीक है, और प्रारंभिक बिंदु के संबंध में अन्य स्थानों तक पहुंचने के लिए उठाए गए कदमों को निरूपित करें।बाद के इमेजिंग सत्रों में, ये कदम, हाथ से तैयार नक्शे, और पहले ली गई छवियां, एक ही स्थानों की बार-बार पहचान करने में महत्वपूर्ण होंगी। इस तकनीक ने शोधकर्ताओं को स्वास्थ्य और विकृति दोनों में विस्तारित समय अवधि के न्यूरॉन-ग्लियल इंटरैक्शन, न्यूरो-इम्यून इंटरैक्शन और न्यूरो-सेल गतिशीलता को स्पष्ट करने की अनुमति दी है ।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

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ल्युकोसैट घर वापस आना और प्रवासन की गैर इनवेसिव इमेजिंग Vivo में</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

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असुरक्षित चूहे में एक तरल डिम्बग्रंथि के कैंसर के Orthotopic के लिए मॉडल Vivo में ट्यूमर और ट्यूमर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के इमेजिंग निगरानी

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

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Bioluminescent बैक्टीरियल इमेजिंग<em&gt; Vivo में</em

This video describes the use of whole body bioluminesce imaging (BLI) for the study of bacterial trafficking in live mice, with an emphasis on the use of ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

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के 4D multimodality इमेजिंग<em&gt; Citrobacter rodentium</emचूहे में&gt; संक्रमण

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

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विवो इमेजिंग विधि में तीव्र और जीर्ण सूजन भेद

Inflammation is a fundamental aspect of many human diseases. In this video report, we demonstrate non-invasive bioluminescence imaging techniques that ...

Using Fluorescent Proteins to Visualize and Quantitate Chlamydia Vacuole Growth Dynamics in Living Cells

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कल्पना और quantitate फ्लोरोसेंट प्रोटीन का उपयोग<em&gt; क्लैमाइडिया</em&gt; रिक्तिका विकास की गतिशीलता जीवित कोशिकाओं में

The obligate intracellular bacterium Chlamydia elicits a great burden on global public health. C.&#160;trachomatis is the leading bacterial cause of ...

Detecting Glycogen in Peripheral Blood Mononuclear Cells with Periodic Acid Schiff Staining

समय-समय पर एसिड शिफ़ धुंधला के साथ परिधीय रक्त कोशिकाओं mononuclear में ग्लाइकोजन का पता लगाने के

Periodic acid Schiff (PAS) staining is an immunohistochemical technique used on muscle biopsies and as a diagnostic tool for blood samples. ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

न्युट्रोफिल अलगाव और विश्लेषण करने के लिए चिकित्सीय एजेंट लिंफोमा सेल संवेदनशीलता में उनकी भूमिका का निर्धारण करने के लिए

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

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गैर इनवेसिव<em&gt; विवो में</em&gt; प्रतिदीप्ति भड़काऊ एमएमपी गतिविधि के ऑप्टिकल इमेजिंग एक सक्रिय फ्लोरोसेंट इमेजिंग एजेंट का प्रयोग

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

Long-term In Vivo Tracking of Inflammatory Cell Dynamics Within Drosophila Pupae

Long-term In Vivo Tracking of Inflammatory Cell Dynamics Within Drosophila Pupae

Vivo में Drosophila प्यूपा के भीतर भड़काऊ कोशिका गतिशीलता की ट्रैकिंग लंबी अवधि

During the rapid inflammatory response to tissue damage, cells of the innate immune system are quickly recruited to the injury site. Once at the wound, ...