Name: quantification of cell-substrate adhesion area and cell shape distributions in mcf7 cell monolayers
Uploaded: 2020-06-24T13:00:00
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इस काम को पोलिश राष्ट्रीय विज्ञान केंद्र द्वारा अनुदान संख्या 2014/14/M/NZ1/00437 के तहत समर्थन दिया गया था ।

1. तैयारी कदम
<ol><li>सेल सीडिंग को मिल्फ्लूंट मोनोलेयर प्राप्त करने के लिए<ol>
<li>सीडिंग से पहले, कोलेजन I (या पसंद के अन्य ईसीएम घटक) के साथ 4-कुओं के कक्ष स्लाइड के कुओं को कोट करें। कोलेजन के लिए मैं कोटिंग, एक वा...

<ol>
	<li>Li, D. S., Zimmermann, J., Levine, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+closure+of+circular+wounds+through+coordinated+collective+motion.">Modeling closure of circular wounds through coordinated collective motion.</a> Search Results. 13 (1), 016006 (2016).</li><li>Ilina, O., Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+collective+cell+migration+at+a+glance.">Mechanisms of collective cell migration at a glance.</a> Journal of Cell Science. 122, 3203-3208 (2009).</li><li>Ladoux, B., Mege, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanobiology+of+collective+cell+behaviours.">Mechanobiology of collective cell behaviours.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 18 (12), 743-757 (2017).</li><li>Stossi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+microscopy+identifies+bisphenol+AP,+a+bisphenol+A+analog,+as+a+novel+AR+down-regulator.">High throughput microscopy identifies bisphenol AP, a bisphenol A analog, as a novel AR down-regulator.</a> Oncotarget. 7 (13), 16962-16974 (2016).</li><li>Legland, D., Arganda-Carreras, I., Andrey, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MorphoLibJ:+integrated+library+and+plugins+for+mathematical+morphology+with+ImageJ.">MorphoLibJ: integrated library and plugins for mathematical morphology with ImageJ.</a> Bioinformatics. 32 (22), 3532-3534 (2016).</li><li>Balcerak, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HAX1+impact+on+collective+cell+migration,+cell+adhesion,+and+cell+shape+is+linked+to+the+regulation+of+actomyosin+contractility.">HAX1 impact on collective cell migration, cell adhesion, and cell shape is linked to the regulation of actomyosin contractility.</a> Molecular Biology of the Cell. 30 (25), 3024-3036 (2019).</li><li>Buskermolen, A. B. C., Kurniawan, N. A., Bouten, C. V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+quantitative+analysis+of+cell,+nucleus+and+focal+adhesion+morphology.">An automated quantitative analysis of cell, nucleus and focal adhesion morphology.</a> PLoS One. 13 (3), 0195201 (2018).</li><li>Fokkelman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+adhesome+screen+identifies+critical+modulators+of+focal+adhesion+dynamics,+cellular+traction+forces+and+cell+migration+behaviour.">Cellular adhesome screen identifies critical modulators of focal adhesion dynamics, cellular traction forces and cell migration behaviour.</a> Scientific Reports. 6, 31707 (2016).</li><li>Horzum, U., Ozdil, B., Pesen-Okvur, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Step-by-step+quantitative+analysis+of+focal+adhesions.">Step-by-step quantitative analysis of focal adhesions.</a> MethodsX. 1, 56-59 (2014).</li><li>Kim, D. H., Wirtz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+adhesion+size+uniquely+predicts+cell+migration.">Focal adhesion size uniquely predicts cell migration.</a> FASEB Journal. 27 (4), 1351-1361 (2013).</li><li>Pincus, Z., Theriot, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+quantitative+methods+for+cell-shape+analysis.">Comparison of quantitative methods for cell-shape analysis.</a> Journal of Microscopy. 227, 140-156 (2007).</li><li>Tsygankov, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CellGeo:+a+computational+platform+for+the+analysis+of+shape+changes+in+cells+with+complex+geometries.">CellGeo: a computational platform for the analysis of shape changes in cells with complex geometries.</a> Journal of Cell Biology. 204 (3), 443-460 (2014).</li><li>Tiryaki, V. M., Adia-Nimuwa, U., Ayres, V. M., Ahmed, I., Shreiber, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Texture-based+segmentation+and+a+new+cell+shape+index+for+quantitative+analysis+of+cell+spreading+in+AFM+images.">Texture-based segmentation and a new cell shape index for quantitative analysis of cell spreading in AFM images.</a> Cytometry A. 87 (12), 1090-1100 (2015).</li><li>Tong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+micropatterning+reveals+the+modulatory+effect+of+cell+shape+on+proliferation+through+intracellular+calcium+transients.">Cell micropatterning reveals the modulatory effect of cell shape on proliferation through intracellular calcium transients.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1864 (12), 2389-2401 (2017).</li><li>Vartanian, K. B., Kirkpatrick, S. J., Hanson, S. R., Hinds, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell+cytoskeletal+alignment+independent+of+fluid+shear+stress+on+micropatterned+surfaces.">Endothelial cell cytoskeletal alignment independent of fluid shear stress on micropatterned surfaces.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 371 (4), 787-792 (2008).</li></ol>

सेल-सेल और सेल-सब्सट्रेट आसंजन एपिथेलियल कोशिकाओं के अंतर्निहित गुणों का गठन करते हैं और ऊतक मॉर्फोजेनेसिस और एम्ब्रिजेनेसिस में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। वयस्क ऊतकों में कोशिका परत के यांत्रि...

एपिथेलियल सेल मोनोलेयर एक सामूहिक के रूप में कार्य करते हैं जिसमें सेल-सेल और सेल-सब्सट्रेट आसंजन के साथ - साथ अनुबंधीय बल और तनाव महत्वपूर्ण मापदंडों का प्रतिनिधित्व करते हैं और उनका उचित संतुलन यूनिट 1,,2,3की समग्र अखंडता में योगदान देता है।2 इस प्रकार, इन मापदंडों का आकलन कोशिका परत की वर्तमान स्थिति स्थापित करने के तरीके का प्रतिनिधित्व करता है।
यहां वर्णित दो विधियां अनुयायी, एपिथेलियल कोशिकाओं (इस मामले में MCF7 स्तन कैंसर सेल लाइन) के कॉन्फ्लूरल मोनोलेयर के दो-आयामी विश्लेषण का प्रतिनिधित्व करती हैं। विश्लेषण जेड-एक्सिस पर विभिन्न क्षेत्रों से कॉन्फोकल छवियों (एकल जेड-स्लाइस) का उपयोग करके किया जाता है; फोकल आसंजन (एफए) माप और सेल आकार मापन के लिए एपिकल क्षेत्र के लिए एक सब्सट्रेट के पास बेसल क्षेत्र। प्रस्तुत तरीके अपेक्षाकृत सरल हैं और मानक प्रयोगशाला तकनीकों और खुले स्रोत सॉफ्टवेयर की आवश्यकता होती है। कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी इस प्रोटोकॉल के लिए पर्याप्त है, इसलिए इसे अधिक विशेष टीआईआरएफ (टोटल इंटरनल रिफ्लेक्शन फ्लोरेसेंस) माइक्रोस्कोपी को नियोजित किए बिना किया जा सकता है। इस प्रकार, प्रोटोकॉल को अपेक्षाकृत मानक प्रयोगशाला सेटिंग में लागू किया जा सकता है। हालांकि तरीकों की सटीकता सीमित है, वे फोकल आसंजन और सेल आकार में बुनियादी मतभेदों को अलग कर सकते हैं।
यहां वर्णित दोनों तरीकों में चित्रजे का उपयोग करके किए गए सेल कल्टिंग, इम्यूनोस्टेपिंग, कॉन्फोकल इमेजिंग और इमेज एनालिसिस जैसी मानक प्रायोगिक प्रक्रियाएं शामिल हैं। हालांकि, उपयुक्त कार्यों के साथ किसी भी छवि प्रसंस्करण सॉफ्टवेयर का उपयोग किया जा सकता है। प्रस्तुत तरीकों को ट्रैक और औषधीय उपचार या ंयूनतम आनुवंशिक संशोधन द्वारा दिए गए परिवर्तनों की तुलना कर सकते हैं । इन तरीकों की सीमित परिशुद्धता के कारण निश्चित मूल्यों को प्राप्त करने की सिफारिश नहीं की जाती है। कई छवियों के माप को सुविधाजनक बनाने के लिए दो स्वचालित मैक्रो शामिल किए गए थे।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A32740</td>
			<td>goat anti-rabbit, 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9434</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>ALB001.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen from calf skin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C9791-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9542</td>
			<td>1:10000 (stock 1 mg/mL in H2O), nucleic acid staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM + GlutaMAX, 1 g/L D-Glucose, Pyruvate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>21885-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10270-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Junction plakoglobin</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2309S</td>
			<td>rabbit, 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar-flow cabinet class 2</td>
			<td>Alpina</td>
			<td></td>
			<td>standard equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCF7-basedHAX1KD cell line</td>
			<td>Cell line established in the National Institute of Oncology, Warsaw, described in Balcerak et al., 2019</td>
			<td></td>
			<td>MCF7 cell line withHAX1knockdown</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCF7 cell line (CONTROL)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-22</td>
			<td>epithelial, adherent breast cancer cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus CK2 light microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paxillin</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab32084</td>
			<td>rabbit, 1:250, Y113</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phalloidin-TRITC conjugate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1951</td>
			<td>1:400 (stock 5 mg/mL in DMSO), actin labeling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTX</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T7402-1MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBST &#8211; NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBST &#8211; Trizma base</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9002-93-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM800 Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of cell-substrate adhesion area and cell shape distributions in mcf7 cell monolayers

यहां प्रस्तुत किए गए तरीके कई उचित रूप से दाग वाली कॉन्फोकल छवियों से कॉन्फ्ल्यूटी अनुयायी सेल मोनोलेयर के कुछ मापदंडों की मात्रा निर्धारित करते हैं: फोकल आसंजन की संख्या और आकार के एक समारोह के रूप में सब्सट्रेट से आसंजन, और सेल आकार, सेल आकार सूचकांक और अन्य आकार वर्णनकर्ताओं द्वारा विशेषता है। फोकल आसंजन को पैक्सिलिन स्टेनिंग द्वारा कल्पना की गई थी और सेल-सेल सीमाओं को जंक्शन प्लाकोग्लोबिन और ऐक्टिन द्वारा चिह्नित किया गया था। सेल संस्कृति और धुंधला करने के तरीके मानक थे; छवियां एकल फोकल विमानों का प्रतिनिधित्व करते हैं; छवि विश्लेषण सार्वजनिक रूप से उपलब्ध छवि प्रसंस्करण सॉफ्टवेयर का उपयोग कर किया गया था। प्रस्तुत प्रोटोकॉल का उपयोग फोकल आसंजन की संख्या और आकार और मोनोलेयर में सेल आकार वितरण में अंतर को निर्धारित करने के लिए किया जाता है, लेकिन उन्हें किसी अन्य अलग सेलुलर संरचना के आकार और आकार के परिमाणीकरण के लिए पुनर्निर्मित किया जा सकता है जिसे दाग दिया जा सकता है (उदाहरण के लिए, माइटोकॉन्ड्रिया या नाभिक)। इन मापदंडों का आकलन पालन कोशिका परत में गतिशील बलों के लक्षण वर्णन में महत्वपूर्ण है, सेल आसंजन और actomyosin संकुचन कि सेल के आकार को प्रभावित करता है सहित ।

फोकल आसंजन विश्लेषण HAX1 जीन के नॉकआउट को पहले फोकल आसंजन6को प्रभावित करने के लिए दिखाया गया था । कोशिकाओं को कोलेजन आई-लेपित सतह पर 48 एच के लिए सुक्षित किया गया था। MCF7 नियंत्रण कोशिकाओं...

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Quantification of Cell-Substrate Adhesion Area and Cell Shape Distributions in MCF7 Cell Monolayers

लेख 1 के मात्राकरण का वर्णन करता है) फोकल आसंजन और 2 की आकार और संख्या) सेल आकार सूचकांक और एमसीएफ 7 कोशिकाओं के कन्फ्यूल मोनोलेयर की कॉन्फोकल छवियों से इसका वितरण।

एमसीएफ7 सेल मोनोलेयर्स में सेल-सब्सट्रेट आसंजन क्षेत्र और सेल आकार वितरण का मात्राकरण

The methods presented here quantify some parameters of confluent adherent cell monolayers from multiple appropriately stained confocal images: adhesion to ...

यह प्रोटोकॉल अपनी दो-आयामी छवि से अंतरकोशिकीय संरचना के क्षेत्र, परिधि और आकार के मात्राकरण को सक्षम बनाता है। यह तकनीक त्वरित और आसान है, केवल मानक प्रयोगशाला सेटिंग्स और एक कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप की आवश्यकता होती है और ओपनसोर्स सॉफ्टवेयर का उपयोग करता है। प्रक्रिया का प्रदर्शन अन्ना Balcerak, मेरी प्रयोगशाला से एक पीएचडी के छात्र होगा ।एक ३७ डिग्री सेल्सियस और पांच डिग्री कार्बन डाइऑक्साइड इनक्यूबेटर में एक 24 घंटे की संस्कृति के लिए एक चार अच्छी तरह से कोलेजन एक लेपित चैंबर स्लाइड में संस्कृति माध्यम प्रति अच्छी तरह से ०.५ मिलीलीटर में पांचवीं कोशिकाओं के लिए चार बार 10 बोने से शुरू करो । अगली सुबह, कम से कम 90% कॉन्फ्लूंट मोनोलेयर की उपस्थिति को सत्यापित करने के लिए एक ऑप्टिकल उल्टे माइक्रोस्कोप का उपयोग करें और एकल जेड-स्लाइस छवियों को प्राप्त करने के लिए एक कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप का उपयोग करें। फोकल आसंजन विश्लेषण के लिए, इमेजजे में छवियों को खोलें और पिक्सल में इमेज स्केल सेट करने के लिए विश्लेषण, स्केल सेट, स्केल और ग्लोबल का चयन करें।फाइलनेम और माप विकल्पों में रुचि के क्षेत्र के क्षेत्र को शामिल करने के लिए, विश्लेषण और माप सेट करने पर क्लिक करें और क्षेत्र की जांच करें और लेबल विकल्प प्रदर्शित करें। पृष्ठभूमि को घटाना, प्रक्रिया का चयन करें और पृष्ठभूमि को घटाएं। रोलिंग बॉल के दायरे को 50 पिक्सल तक सेट करें और स्लाइडिंग पैराबोलॉयड चेक करें।ब्याज के सबसे छोटे क्षेत्र के क्षेत्र का निर्धारण करने के लिए, सबसे छोटे एकल फोकल आसंजन की रूपरेखा तैयार करें और क्षेत्र को मापने के लिए विश्लेषण और उपाय पर क्लिक करें। जब ब्याज के कम से कम 20 क्षेत्रों का चयन किया गया है और मापा गया है, गणना और प्राप्त परिणामों के मतलब को बचाने के लिए। ऊपरी सीमा को एक विशिष्ट सेल क्षेत्र के 25% तक सेट करें।बाइनरी, क्लिक इमेज, एडजस्ट और थ्रेसहोल्ड को इमेज प्रदान करने और डिफ़ॉल्ट, काले और सफेद और अंधेरे पृष्ठभूमि की जांच करने के लिए। रुचि के क्षेत्रों की संख्या और क्षेत्रों को मापने के लिए, कण का विश्लेषण और विश्लेषण करें और पिक्सेल इकाइयों की जांच करें, परिणाम प्रदर्शित करें, स्पष्ट परिणाम और संक्षेप में प्रस्तुत करें। सारांश विंडो से स्लाइस, काउंट और कुल क्षेत्र औसत आकार डेटा को पसंद के डेटा प्रबंध कार्यक्रम में स्थानांतरित करें।फोकल आसंजन क्वांटिफिकेशन के लिए, फोकल आसंजन इमेजजे मैक्रो खोलें और ब्याज पैरामीटर के सबसे छोटे क्षेत्र के क्षेत्र के रूप में ब्याज के सबसे छोटे क्षेत्र के क्षेत्र में प्रवेश करें। मैनुअल या ऑटो के लिए सीमा प्रकार मूल्य सेट करें और परिवर्तनों को बचाने के लिए। इसके बाद इमेजजे से मैक्रो को कॉल करें और प्रोसेस होने के लिए इमेज को सिलेक्ट करें ।मैनुअल सेल आकार विश्लेषण के लिए, एक उपयुक्त छवि प्रसंस्करण सॉफ्टवेयर प्रोग्राम में एक छवि खोलें और मापा जाने वाले मापदंडों का चयन करें। पसंद के जंक्शन प्रोटीन द्वारा चिह्नित सेल सीमाओं को मैन्युअल रूप से चित्रित करने के लिए फ्रीहैंड चयन उपकरण का उपयोग करें। चुने हुए मापदंडों की गणना प्रत्येक सेल के लिए स्वचालित रूप से की जाएगी।जब सभी कोशिकाओं को रेखांकित किया गया हो, तो प्रबंधक में संपादित, चयन और जोड़ें। निर्बाध सीमाओं के साथ केवल पूरी तरह से दिखाई देने वाली कोशिकाओं का चयन किया जाना चाहिए। माप बनाने के लिए, ब्याज प्रबंधक और क्लिक उपाय के क्षेत्र के बाएं बॉक्स में प्रदर्शित होने वाले सभी नंबरों को चिह्नित करें।परिणाम बॉक्स में दिखाई देंगे और पसंद की स्प्रेडशीट के लिए आयात किया जा सकता है। स्वचालित कोशिका विश्लेषण बड़ी संख्या में कोशिकाओं के परिमाणीकरण की सुविधा प्रदान करता है। हर नए सेल प्रकार के लिए, पहले मापदंडों को स्थापित करने के लिए मैक्रो चलाते हैं।जब मैक्रो समाप्त हो गया है, सेट सेल आकार सीमाओं का चयन करें । सबसे छोटी और सबसे बड़ी कोशिकाओं और क्लिक उपाय के लेबल पर क्लिक करें। सबसे छोटी सेल और सबसे बड़ी सेल चर के मूल्य निर्धारित करें और परिवर्तनों को बचाएं।सभी मैक्रो खिड़कियों को बंद करें और ग्रेस्केल में संसाधित होने वाली छवि का चयन करें। इसके बाद मैक्रो फिर से चलाएं। मैक्रो परिणामों की एक तालिका प्रदान करेगा जिसमें सेल आकार सूचकांक, आस्पेक्ट रेशियो और ब्याज चयन सूची डेटा के क्षेत्र शामिल हैं।यहां, अंतिम गिने गए रूपरेखा और फोकल आसंजन के ओवरले सहित इमेजजे के साथ गिना जाने वाले फोकल आसंजन की प्रतिनिधि छवियां नियंत्रण और नॉकडाउन सेल लाइनों दोनों के लिए मूल छवि के साथ रेखांकित करती हैं। जैसा कि इस विश्लेषण में दर्शाया गया है, नॉकडाउन कोशिकाओं ने प्रति कोशिका आसंजन की अधिक संख्या के साथ-साथ आसंजन का प्रदर्शन किया जो नियंत्रण सेल लाइन कोशिकाओं की तुलना में आकार में बड़े होते हैं। इन छवियों में, अनुपचारित और कीमोथेरपी के प्रतिनिधि क्षेत्रों में सेल मोनोलेयर का इलाज किया जाता है।रूपरेखा कोशिकाओं को उनके सेल आकार सूचकांक मूल्यों के अनुसार चिह्नित किया गया था, उदाहरण के लिए इस विश्लेषण में पिछले बिन में वृद्धि और अनुपचारित नियंत्रणों की तुलना में दवा-उपचारित कोशिकाओं के लिए मुख्य चोटियों का सपाट दिखा। प्रत्येक कोशिका संस्कृति के लिए एक आवृत्ति वितरण और संचयी वितरण उत्पन्न किया जा सकता है। मोनोलेयर के ग्रेस्केल इमेजिंग ने कोशिका आकार सूचकांक के सापेक्ष आवृत्ति वितरण का खुलासा करते हुए 12 क्षेत्रों से 512 कोशिकाओं के विश्लेषण और मात्राकरण की अनुमति दी।इस प्रोटोकॉल के काम करने के लिए, सर्वोत्तम संभव गुणवत्ता की छवियों का उपयोग करना महत्वपूर्ण है। उचित सेल सीडिंग, धुंधला, और इमेजिंग पर्याप्त प्रयोगात्मक गुणवत्ता की छवियों को सुनिश्चित करना चाहिए।

Research

JoVE Journal

Biology

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