Name: predicting amputation using local circulating mononuclear progenitor cells in angioplasty-treated patients with critical limb ischemia
Uploaded: 2020-09-22T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Predicting Amputation using Local Circulating Mononuclear Progenitor Cells in Angioplasty-treated Patients with Critical Limb Ischemia at JoVE.com

Авторы благодарят поддержку Институциональной программы Е015 за проект ID 356.2015.

Институциональный комитет по этике исследований из Национального центра "20 де Новиембре" ISSSTE одобрил этот перспективный протокол, все зачисленные пациенты предоставили письменное информированное согласие.
1. Оценка сосудистого блока нижних конечностей, взятия проб кров...

<ol>
	<li>Serrano-Hernando, F. J., Mart&#237;n-Conejero, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+artery+disease:+Pathophysiology,+diagnosis+and+treatment.">Peripheral artery disease: Pathophysiology, diagnosis and treatment.</a> Revista Espa&#241;ola de Cardiolog&#237;a. 60 (9), 969-982 (2007).</li><li>Agarwal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+of+re-admissions+among+patients+with+critical+limb+ischemia.">Burden of re-admissions among patients with critical limb ischemia.</a> Journal of the American College of Cardiology. 69 (15), 1897-1908 (2017).</li><li>Kolte, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thirty-day+re-admissions+after+endovascular+or+surgical+therapy+for+critical+limb+ischemia:+Analysis+of+the+2013+to+2014+nationwide+re-admissions+databases.">Thirty-day re-admissions after endovascular or surgical therapy for critical limb ischemia: Analysis of the 2013 to 2014 nationwide re-admissions databases.</a> Circulation. 136 (2), 167-176 (2017).</li><li>Rowlands, T. E., Donnelly, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medical+therapy+for+intermittent+claudication.">Medical therapy for intermittent claudication.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 34, 314-321 (2007).</li><li>Cronewett, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Acute limb ischemia and lower extremity chronic arterial disease: Rutherford's vascular surgery (8th ed.). , (2014).</li><li>Dick, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+or+endovascular+revascularization+in+patients+with+critical+limb+ischemia:+influence+of+diabetes+mellitus+on+clinical+outcome.">Surgical or endovascular revascularization in patients with critical limb ischemia: influence of diabetes mellitus on clinical outcome.</a> Journal of Vascular Surgery. 45 (4), 751-761 (2007).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty.">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li><li>Franz, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+autologous+bone+marrow+mononuclear+cell+implantation+therapy+as+a+limb+salvage+procedure+in+patients+with+severe+peripheral+arterial+disease.">Use of autologous bone marrow mononuclear cell implantation therapy as a limb salvage procedure in patients with severe peripheral arterial disease.</a> Journal of Vascular Surgery. 50 (6), 1378-1390 (2009).</li><li>Benoit, E., O'Donnell, T. F., Patel, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+autologous+cell+therapy+in+critical+limb+ischemia:+A+systematic+review.">Safety and efficacy of autologous cell therapy in critical limb ischemia: A systematic review.</a> Cellular Transplantation. 22 (3), 545-562 (2013).</li><li>Hill, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+endothelial+progenitor+cells,+vascular+function,+and+cardiovascular+risk.">Circulating endothelial progenitor cells, vascular function, and cardiovascular risk.</a> New England Journal of Medicine. 348 (7), 593-600 (2003).</li><li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+number+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+predicts+future+cardiovascular+events:+proof+of+concept+for+the+clinical+importance+of+endogenous+vascular+repair.">Reduced number of circulating endothelial progenitor cells predicts future cardiovascular events: proof of concept for the clinical importance of endogenous vascular repair.</a> Circulation. 111 (22), 2981-2987 (2005).</li><li>Smadja, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+endothelial+progenitor+cells+in+bone+marrow+are+a+biomarker+of+cell+therapy+success+in+patients+with+critical+limb+ischemia.">Early endothelial progenitor cells in bone marrow are a biomarker of cell therapy success in patients with critical limb ischemia.</a> Cytotherapy. 14 (2), 232-239 (2012).</li><li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty.">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li><li>Truong, Q. A., Januzzi, J. L., Szymonifka, J., Thai, W. E., Wai, B., Lavender, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy:+the+BIOCRT+study.">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li><li>Ding, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrosis+and+inflammatory+markers+and+long-term+risk+of+peripheral+artery+disease:+The+ARIC+study.">Fibrosis and inflammatory markers and long-term risk of peripheral artery disease: The ARIC study.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 40 (9), 2322-2331 (2020).</li><li>Potier, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+copeptin+and+risk+of+lower-extremity+amputation+in+Type+1+and+Type+2+diabetes.">Plasma copeptin and risk of lower-extremity amputation in Type 1 and Type 2 diabetes.</a> Diabetes Care. 40 (12), 2290-2297 (2019).</li><li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol.">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), 13790 (2010).</li><li>Marboeuf, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+triggers+colony+forming+endothelial+cell+mobilization+after+angioplasty+in+chronic+lower+limb+ischemia.">Inflammation triggers colony forming endothelial cell mobilization after angioplasty in chronic lower limb ischemia.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 6 (1), 195-197 (2008).</li><li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study:+Time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke.">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: Time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li></ol>

Сбор крови в точном месте сосудистого блока может показать технические трудности; Поэтому мы проводили сбор крови в непосредственной близости от сосудистого блока. Аналогичным образом, количество MPCs близко к сосудистой бляшки, как представляется, весьма динамичным и может возникнуть ...

Периферические артериальные заболевания (ПАД) характеризуются хронической и прогрессирующей сосудистой обструкцией с ограничением кровоснабжения1. В глобальном масштабе, PAD нижних конечностей затрагивает около 10% пожилого населения, в то время как до 7% таких случаев представленыампутации конечностей 2,3.
Критическая ишемия конечностей (CLI) представляет собой наиболее серьезную презентацию PAD1. Пациенты обычно испытывают боль в покое, язвы, или гангрена связано с окклюденых артерий; в то время как клинический прогноз неблагоприятный и характеризуется 30% риск ампутации конечностей и смертности в течение1 года 3,4,5.
Ангиопластика является минимально инвазивной эндоваскулярной процедурой, которая может восстановить приток крови к нижней конечности у пациентов с КЛИ; однако, некоторые пациенты неизбежно потребуется серьезная ампутация конечностей, даже после ангиопластики1,5. Раннее выявление неблагоприятных исходов после ангиопластики является весьма ценным, в связи с возможностью терапии органов.
Традиционные факторы риска могут обеспечить ограниченную прогностический способность для серьезной ампутации конечностей у пациентов с CLI, проходящих ангиопластику6. Патофизиологически-ориентированные биомаркеры представляют собой новые методы с потенциальными клиническими применениями, которые могут привести к особенно полезным при заболеваниях, связанных с сосудистойтравмой 7. В настоящее время участие сотовых популяций, владеющих эндотелиальными ремонтными свойствами, на месте атеросклеротической бляшки, всечаще признается 8,9.
Моноядерные клетки-предшественники (MPC) получены из костного мозга и имеют структурные и функциональные характеристики стволовых клеток с сосудистыми регенеративными способностями. Из-за способности MPC размножаться, мигрировать и проявлять сосудистую приверженность; эти клетки стали хорошими кандидатами, чтобы отразить эндотелиальный ремонт в ответ наишемию 10,11,12. Кроме того, непрерывный интерес к механизмам, лежащим в основе сосудистой травмы побудило изучения прогностический роль местных происходящих биомаркеров, так как они считаются отражением повреждениясосудов и ремонт 7,13,14.
Цель настоящего исследования заключается в том, чтобы описать, как определить количество МПЦ, которые циркулируют близко к сосудистой обструкции у пациентов с КЛИ, проходящих ангиопластику; и как оценить связь между МПЦ с показателями эндотелиальной дисфункции и ампутации конечностей.
По сравнению с прогнозом, основанным на сопутствующих заболеваниях и внутренних сосудистых особенностях, количество местных МЦК показывает специфическую способность прогнозировать клинический исход в отношении эндотелиальной дисфункции и ампутации конечностей. Последовательно, некоторые исследования описали прогностический роль аналогичных биомаркеров во время оценки пациентов с PAD15,16.
На основепредыдущих результатов 7, метод, описанный здесь может быть полезным для раннего выявления населения с риском неблагоприятных сосудистых исходов в нескольких клинических условиях, таких как нижние конечности и ишемической ишемии, инсульт, васкулит, венозный тромбоз и другие, связанные с сосудистой травмы и ремонта.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10735086001</td>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration Beads</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-607</td>
			<td>MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133/1 (AC133)-PE</td>
			<td>Milteny Biotec / MACS</td>
			<td>#130-080-801</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD184 (CXCR4)-PE-VIO770</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-103-798</td>
			<td>Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-601</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-FITC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-081-001</td>
			<td>The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45- VioBlue</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-092-880</td>
			<td>Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes</td>
			<td>Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td>#339651</td>
			<td>15ml conical centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytometry Tubes</td>
			<td>FALCON Corning Brand</td>
			<td>#352052</td>
			<td>5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>#161-0729</td>
			<td>Heavy metals, (as Pb) &#60;10ppm, Fe&#60;0.01%, As&#60;1ppm, Insolubles&#60;0.005%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Improved Neubauer</td>
			<td>Without brand</td>
			<td>Without catalog number</td>
			<td>Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2 EDTA Blood Collection Tubes</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>#367863</td>
			<td>Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>01-63-12-002-A</td>
			<td>Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077&#177;0.001g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>#SZBF0920V</td>
			<td>Fixation of biological samples, (powder, 95%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Transfer 1,3mL</td>
			<td>CRM Globe</td>
			<td>PF1016, PF1015</td>
			<td>The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Tubes</td>
			<td>KIMBLE CHASE</td>
			<td>45060 13100</td>
			<td>Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

predicting amputation using local circulating mononuclear progenitor cells in angioplasty-treated patients with critical limb ischemia

Критическая ишемия конечностей (CLI) представляет собой передовую стадию периферического артериального заболевания. Ангиопластика улучшает приток крови к нижней конечности; однако, некоторые пациенты необратимо прогресс к ампутации конечностей. Степень повреждения сосудов и механизмы сосудистого ремонта являются факторами, влияющими на результат постангиопластики. Моноядерные клетки-предшественники (MPC) реагируют на повреждения и ремонт сосудов, с способностью отражать сосудистые заболевания. Настоящий протокол описывает количественную оценку МПЦ, полученных из кровообращения из сосуда вблизи места ангиопластики, а также его связь с эндотелиальной дисфункцией и его прогностический способность к ампутации конечностей в ближайшие 30 дней после ангиопластики у пациентов с CLI.

Образцы крови из заблокированных артерий, на сайте, адресованном для ангиопластики, были собраны из 20 больных сахарным диабетом, в возрасте 68 лет и 10 из 20 были мужчины. Половина выборочных групп населения были курильщиками. Сосудистые поражения были в основном забил, как Резерфорд класс...

Watch this Scientific Journal Video about Predicting Amputation using Local Circulating Mononuclear Progenitor Cells in Angioplasty-treated Patients with Critical Limb Ischemia at JoVE.com

Predicting Amputation using Local Circulating Mononuclear Progenitor Cells in Angioplasty-treated Patients with Critical Limb Ischemia

Ампутация нижних конечностей может произойти даже после ангиопластики затрудненных сосудов при критической ишемии конечностей (CLI). Моноядерные клетки-предшественники (MPCs) отражают сосудистый ремонт. В настоящем протоколе описывается количественная оценка МПЦ из циркуляции, близкой к ангиопластике, и его связь с эндотелиальной дисфункцией и прогнозированием ампутации нижних конечностей.

Прогнозирование ампутации с использованием местных циркулирующих моноядерных клеток-предшественников в ангиопластике пациентов с критической ишемией конечностей

Critical limb ischemia (CLI) represents an advanced stage of the peripheral arterial disease. Angioplasty improves the blood flow to the lower limb; ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Manual Muscle Testing:  A Method of Measuring Extremity Muscle Strength Applied to Critically Ill Patients

Руководство Тестирование мышц: метод измерения силы мышц конечностей Применяют для критически больных пациентов

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, ...

Examining the Characteristics of Episodic Memory using Event-related Potentials in Patients with Alzheimer's Disease

Рассматривая характеристики Эпизодическая память с помощью связанных с событиями потенциалов у пациентов с болезнью Альцгеймера

Our laboratory uses event-related EEG potentials (ERPs) to understand and support behavioral investigations of episodic memory in patients with amnestic ...

A Research Method For Detecting Transient Myocardial Ischemia In Patients With Suspected Acute Coronary Syndrome Using Continuous ST-segment Analysis

Метод исследования для выявления преходящей ишемии миокарда у больных с подозрением Острый коронарный синдром Использование серийной ST-сегмента анализа

Each year, an estimated 785,000 Americans will have a new coronary attack, or acute coronary syndrome (ACS). The pathophysiology of ACS involves rupture ...

In vitro Method to Observe E-selectin-mediated Interactions Between Prostate Circulating Tumor Cells Derived From Patients and Human Endothelial Cells

In vitro Method to Observe E-selectin-mediated Interactions Between Prostate Circulating Tumor Cells Derived From Patients and Human Endothelial Cells

В пробирке методом наблюдать Е-селектин-опосредованных взаимодействий между простаты циркулирующих опухолевых клеток, взятых от пациентов и эндотелиальных клетках человека

Metastasis is a process in which tumor cells shed from the primary tumor intravasate blood vascular and lymphatic system, thereby, gaining access to ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Изучение рака поджелудочной железы стволовых клеток Характеристики для разработки новых стратегий лечения

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Моделирование энцефалопатия недоношенных Использование Пренатальная ишемии-гипоксии с интраамниальной липополисахарида у крыс

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

Метод Количественная верхней конечности производительности в повседневной жизни при помощи акселерометров

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

A Detailed Protocol for Physiological Parameters Acquisition and Analysis in Neurosurgical Critical Patients

Подробный протокол для физиологических параметров сбора и анализа данных в критических нейрохирургических больных

Intracranial pressure (ICP) monitoring is now widely used in neurosurgical critical patients. Besides mean ICP value, the ICP derived parameters such as ...

Objective Nociceptive Assessment in Ventilated ICU Patients: A Feasibility Study Using Pupillometry and the Nociceptive Flexion Reflex

Объективная оценка ноцицептивных в вентилируемых СИС пациентов: технико-экономическое исследование с использованием Пупиллометрия и ноцицептивных сгибания рефлекс

The concept of objective nociceptive assessment and optimal pain management have gained increasing attention. Despite the known negative short- and ...

Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients

Эндотоксин деятельности Анализ для обнаружения эндотоксемии всей крови у критически больных пациентов

Lipopolysaccharide, also known as endotoxin, is a fundamental component of gram-negative bacteria and plays a crucial role in the development of sepsis ...