Name: leveraging turbidity and thromboelastography for complementary clot characterization
Uploaded: 2020-06-04T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Leveraging Turbidity and Thromboelastography for Complementary Clot Characterization at JoVE.com

1. إعداد الفوسفات المالحة العازلة (PBS)
ملاحظة: تم استخدام برنامج تلفزيوني طوال هذه الدراسة حيث أن الأقوال الموصوفة لا تتطلب إضافة الكالسيوم. من المهم أن نلاحظ أنه عند إضافة الكالسيوم، وغالبا ما تستخدم لإعادة الكالسية منتجات الدم سيتrated، وينبغي تجنب برنامج تلفزيوني كما هو معرو...

<ol>
	<li>Beckman, M. G., Hooper, W. C., Critchley, S. E., Ortel, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venous+Thromboembolism.+A+Public+Health+Concern.">Venous Thromboembolism. A Public Health Concern.</a> American Journal of Preventive Medicine. 38, 495-501 (2010).</li><li>Goldhaber, S. Z., Bounameaux, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+embolism+and+deep+vein+thrombosis.">Pulmonary embolism and deep vein thrombosis.</a> The Lancet. 379 (9828), 1835-1846 (2012).</li><li>Weisel, J. W., Litvinov, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+fibrin+polymerization+and+clinical+implications.">Mechanisms of fibrin polymerization and clinical implications.</a> Blood. 121 (10), 1712-1719 (2013).</li><li>Weisel, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+assembly.+Lateral+aggregation+and+the+role+of+the+two+pairs+of+fibrinopeptides.">Fibrin assembly. Lateral aggregation and the role of the two pairs of fibrinopeptides.</a> Biophysical Journal. 50 (6), 1079-1093 (1986).</li><li>Tripathi, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+evaluation+of+whole+blood+prothrombin+time+(PT)+and+international+normalized+ratio+(INR)+using+a+Laser+Speckle+Rheology+sensor.">Clinical evaluation of whole blood prothrombin time (PT) and international normalized ratio (INR) using a Laser Speckle Rheology sensor.</a> Scientific Reports. 7 (1), 1-8 (2017).</li><li>Ryan, E. A., Mockros, L. F., Weisel, J. W., Lorand, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+origins+of+fibrin+clot+rheology.">Structural origins of fibrin clot rheology.</a> Biophysical Journal. 77 (5), 2813-2826 (1999).</li><li>Carr, M. E., Hermans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+and+Density+of+Fibrin+Fibers+from+Turbidity.">Size and Density of Fibrin Fibers from Turbidity.</a> Macromolecules. 11 (1), 46-50 (1978).</li><li>Carr, M. E., Shen, L. L., Hermans, J. A. N., Chapel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mass-Length Ratio of Fibrin Fibers from Gel Permeation and Light Scattering. 16, 1-15 (1977).</li><li>Gabriel, D. A., Muga, K., Boothroyd, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Effect of Fibrin Structure on Fibrinolysis. , 24259-24263 (1992).</li><li>Wolberg, A. S., Gabriel, D. A., Hoffman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+fibrin+clot+structure+using+a+microplate+reader.">Analyzing fibrin clot structure using a microplate reader.</a> Blood Coagulation and Fibrinolysis. 13 (6), 533-539 (2002).</li><li>da Luz, L. T., Nascimento, B., Rizoli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombelastography+(TEG):+practical+considerations+on+its+clinical+use+in+trauma+resuscitation.">Thrombelastography (TEG): practical considerations on its clinical use in trauma resuscitation.</a> Scandinavian Journal of Trauma, Resuscitation and Emergency Medicine. 21 (1), 29 (2013).</li><li>Whitten, C. W., Greilich, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thromboelastography:+past,+present,+and+future+.">Thromboelastography: past, present, and future .</a> Anesthesiology: The Journal of the American Society of Anesthesiologists. 92 (5), 1223-1225 (2000).</li><li>Ranucci, M., Laddomada, T., Ranucci, M., Baryshnikova, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+viscosity+during+coagulation+at+different+shear+rates.">Blood viscosity during coagulation at different shear rates.</a> Physiological Reports. 2 (7), 1-7 (2014).</li><li>Zeng, Z., Fagnon, M., Nallan Chakravarthula, T., Alves, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+clot+formation+under+diverse+clotting+conditions:+Comparing+turbidimetry+and+thromboelastography.">Fibrin clot formation under diverse clotting conditions: Comparing turbidimetry and thromboelastography.</a> Thrombosis Research. 187, 48-55 (2020).</li></ol>

يوضح هذا البروتوكول استخدام أداتين توصيفي جلطات مميزة اختبار نموذج مبسط لتخثر الفيبرينوجين/الجلطات باستخدام المكونات المتاحة تجارياً. كل من TEG وتكدر من السهل إجراء. أنها لا توفر فقط فحص نقطة النهاية جلطة مثل تشكيل الحد الأقصى جلطة (ماكسTurb و TEGماكس)وأوقات تشكيل جلطة(وقت Tur...

تجلط الدم هو التكوين المرضي لجلطات الدم في الجسم التي تمنع الدورة الدموية مما يؤدي إلى ارتفاع معدلات المراضة والوفيات في جميع أنحاء العالم. هناك 1 إلى 2 حالات من الجلطات الدموية الوريدية و 2 إلى 3 حالات من أمراض الأوعية الدموية الناجمة عن الجلطات لكل 1000 شخص سنويا1،2. هنا هو طريقة الاستفادة من الجلطات (TEG) والعكر لرصد تشكيل جلطة تحت ظروف تخثر مختلفة. فيبرين (ogen) هو البروتين الأساسي المسؤول عن تشكيل الجلطة في الجسم. في الخطوات النهائية من تتالي التخثر ، يتم شقوق الفيبرينوبيتيدات من الفيبرينوجين عن طريق ثرومبين بدء البلمرة من مونومرات الفيبرين غير قابلة للذوبان كما تطور الجلطة3،4. لفهم تشكيل الجلطة في تجلط الدم المرضي ، من الضروري توصيف تكوين الفيبرين في ظل ظروف تخثر متنوعة. وقد استخدمت عدة جلطة الرصد المقايسة لدراسة تشكيل جلطة الفيبرين في المختبر. Prothrombin الوقت (PT / INR) وتنشيط جزء من تخثر الوقت (aPTT) هما اختبار السريرية المشتركة التي تقيس سلامة مسار تخثر محددة. ومع ذلك، فإنها تستخدم الوقت باعتبارها المتغير الوحيد الذي لا يعطي أي إشارة إلى خصائص جلطة فيزيائية5. المجهر الإلكتروني يسمح التصور من البنية الدقيقة لجلط الفيبرين شكلت تماما ولكن لا يوفر أي معلومات عن عملية تشكيل جلطة نفسها6. من بين جميع المقايسات ، تقدم مقايسات التعكر و TEG القدرة على تتبع خصائص الجلطة ديناميكيًا مع مرور الوقت. هذه التقنيات تمكن من قياس شامل تخثر الملامح ، وبالتالي ، وتوفير بعض الفائدة على غيرها من أدوات توصيف تجلط الفيبرين.
على وجه التحديد، تستخدم على نطاق واسع لم مقايسات التعكر (أو تجلط) للبحث والتطبيقات السريرية بسبب تطبيقه التبسيطي وسهولة الوصول إلى مطياف في مختبرات البحوث. هذه المقاييس تسمح بقياس ديناميكي لـ إحالة الضوء من خلال جلطة تشكيلية من خلال أخذ قراءات متكررة فردية في طول موجة محدد (الأكثر شيوعًا عند طول الموجة في نطاق 350 – 700 نانومتر)7. ويمكن أيضا أن تكون درجة الحرارة في غرفة القراءة تعديلها. كما شكل هلام الفيبرين, يتم تقليل كمية الضوء الذي ينتقل من خلال شبكة البروتين مما تسبب في زيادة في امتصاص مع مرور الوقت. وبالمثل، يقلل الامتصاص عندما تتحلل شبكة الجلطة. يمكن بسهولة أن تكون مقايسات التعكر متعددة باستخدام تنسيق لوحة متعددة البئر للسماح لفحص عينة عالية الإنتاجية في كل من 96 - و 384-جيدا لوحات. يمكن اشتقاق العديد من خصائص الجلطة من منحنى تتبع التعكر (الامتصاص على قياس الوقت) التي تشمل: التعكر الأقصى، والوقت إلى أقصى عكرة، والوقت لتجلط بداية، ومعدل تشكيل جلطة (Vmax). ويمكن أيضا أن تستمد نسبة الألياف الفيبرين/ طول من البيانات التعكر الخام لتقدير سمك الألياف الفيبرين8,9,10.
يستخدم TEG في المقام الأول في الإعداد السريري لتقييم المرضى 'الهزات وجلط. كما أنها تستخدم عادة في التطبيقات الجراحية لتحديد متى الأدوية المضادة للfibrinolytic أو منتجات الدم hemostatic ينبغي أن تدار11,12. يحدث تشكيل الجلطات داخل كوب TEG مع إضافة جميع مكونات التخثر إلى الكأس قبل بدء الفحص. الكأس، مع جلطة متطورة، يدور جسديا ضد دبوس الذي يتم إدراجه في مركزه وجهاز استشعار التواء الكهروميكانيكية يقيس قوة اللزوجة المتزايدة من جلطة. ويتم هذا الفحص عادة في درجة الحرارة الفسيولوجية من 37 درجة مئوية; ومع ذلك، يمكن ضبط درجة الحرارة يدويا على الصك. السعة القصوى (MA) ، ومعدل التفاعل (R) ، ووقت الحركة (K) ، وα - زاوية (زاوية) ، والوقت إلى أقصى سعة (TMA) يتم استخراجها من قبل برنامج TEG من تتبع TEG الديناميكي. وعادة ما تقارن هذه القيم مع النطاقات السريرية الطبيعية لتقييم حالة تخثر المريض. في حين TEG ليست على وجه التحديد فيزيتروم، كما أنها تقيس قوة جلطة في وحدات ملليمتر، فإنه لا توفر البيانات الهامة جلطة فيزيلاستيك ووظائف كأداة قيمة صنع القرار السريري للأطباء لاتخاذ قرار لإدارة منتجات الدم محددة وضبط الجرعات العلاجية13. عندما يتم استخدام كل من TEG وتكديرية مع بعضها البعض، فإنها توفر معلومات تكميلية توصيف جلطة وقوة جلطة ويتم استخراجها بسهولة من TEG وسمك الألياف الفيبرين يمكن الوصول إليها عن طريق قياسات التعكر البصرية.
كما الفيبرين هو عنصر حاسم في تجلط الدم, توصيف تجلط فيبرين في ظل ظروف تشكيل جلطة متنوعة يمكن أن توفر رؤية قيمة في كيفية متغير معين يساهم في عملية تشكيل جلطة والخصائص النهائية جلطة. يمكن أن يوفر فهم هذا التوجيه لتشخيص الخثار وتطوير العلاجات. للحصول على توصيف جلطة الفيبرين أكثر تمثيلا، يمكن استبدال البلازما لرصد تشكيل جلطة كما يشبه في ظروف تخثر الجسم الحي بشكل أوثق من نظام نموذج الفبرينوجين / ثرومبين مبسطة. ومع ذلك ، نظرًا للطبيعة المعقدة لسلسلة التخثر ، فإن تشكيل الجلطات باستخدام البلازما يزيد من تعقيدها ، مما يجعل من الصعب عزل تأثير العوامل الفردية. استخدام نموذج مبسطة الفيبرينوجين / ثرومبين يمنع الحاجة إلى بدء تتالي تخثر كامل مما يسمح لعزل الخطوة النهائية تشكيل الفيبرين. من خلال تضمين اثنين من مكونات تشكيل الفيبرين الرئيسية (الفيبرينوجين والثرومبين)، هذا الإعداد يخلق حالة تكوين جلطة تسيطر عليها للغاية. من المهم أيضا أن نلاحظ أنه في حين يتم استخدام نموذج الجلطة المبسطة هنا، يمكن أيضا استخدام هذا البروتوكول لتوصيف الجلطات أكثر تعقيدا من خلال تضمين عوامل تخثر إضافية. في هذه الدراسة، يتم تنفيذ توصيف تجلط الفيبرين باستخدام العكرة و TEG من قبل تركيزات مختلفة من الفيبرينوجين والثرودة، والقوة الأيونية، والدرجات والدرجات الرئوية، وتركيز البروتين الكلي في محلول التخثر لمحاكاة مختلف في ظروف تخثر الجسم الحي14. وقد أدرجت في القسم 5 تفاصيل تتعلق بهذه الاختلافات في البروتوكول.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-Well Clear Flat Bottom UV-Transparent Microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3635</td>
			<td>Non-treated acrylic copolymer, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin from human serum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>A1653</td>
			<td>&#8805;96%, lyophilized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arium Mini Plus Ultrapure Water System</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>NA</td>
			<td>DI water source</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>A2153</td>
			<td>&#8805;96%, lyophilized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Cups and Pins for TEG 5000 (Clear)</td>
			<td>Haemonetics</td>
			<td>REF 6211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen, Bovine Plasma</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>341573</td>
			<td>contains more than 95% clottable protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen, Plasmingogen-Depleted, Human Plasma</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>341578</td>
			<td>Contains &#8805; 95% clottable proteins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P3813</td>
			<td>Powder, pH 7.4, for preparing 1 L solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>60130</td>
			<td>&#8805;99.5% purity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P9791</td>
			<td>&#8805;98% purity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SevenEasy pH Meter</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>S20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>71378</td>
			<td>&#8805;99.5% purity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>71636</td>
			<td>&#8805;99.5% purity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpectraMax M5 multi-detection microplate reader system</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>M5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEG 5000 Thrombelastograph Hemostasis analyzer system</td>
			<td>Haemonetics</td>
			<td>07-022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin, Bovine</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>605157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin, Human Plasma, High Activity</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>605195</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

leveraging turbidity and thromboelastography for complementary clot characterization

الجلطة هو السبب الرئيسي للوفاة في جميع أنحاء العالم. فيبرين (ogen) هو البروتين المسؤول في المقام الأول عن تشكيل الجلطة أو تجلط الدم. ولذلك، وصف تشكيل جلطة الفيبرين مفيد لدراسة تجلط الدم. يتم استخدام العكرة والجلطات (TEG) على نطاق واسع في المختبرات لرصد تشكيل الجلطة. التعكر يقيس بشكل حيوي الإرسال الضوء من خلال هيكل جلطة الليفين عن طريق مطياف وغالبا ما تستخدم في مختبرات البحوث. TEG هي تقنية اللزجة المتخصصة التي تقيس قوة تجلط الدم مباشرة وتستخدم في المقام الأول في البيئات السريرية لتقييم الهزى المرضى. مع مساعدة من هاتين الادوات, هذه الدراسة يصف طريقة لتميز جلطة في المختبر في المختبر باستخدام نموذج مبسطة الجلطات الفيبرينوجين / ثرومبين. وقد تمت مقارنة اتجاهات البيانات عبر كلتا التقنيتين في ظل ظروف تخثر مختلفة. تشكلت جلطات الفينة البشرية والبفينة جنبًا إلى جنب في هذه الدراسة حيث تستخدم عوامل تخثر البقر غالبًا كبدائل لعوامل التخثر البشرية في البيئات السريرية والبحثية. تظهر النتائج أن TEG والعكارة تتبع تشكيل جلطة عبر طريقتين متميزتين وعندما تستخدم معا توفير قوة جلطة تكميلية والألياف المعلومات الهيكلية عبر ظروف تخثر متنوعة.

التجارب الموضحة في الشكل 1 هي منحنيات تتبع التعكر التمثيلية لجلطات الـ فيبرين الإنسان والسفينية على مستويات مختلفة من الفيبرينوجين. تظهر منحنيات التتبع التمثيلي TEG لتشكيل جلطة الفيبرين على مستويات مختلفة من الفيبرينوجين في الشكل 2. كل من منحنيات التتبع تث?...

Watch this Scientific Journal Video about Leveraging Turbidity and Thromboelastography for Complementary Clot Characterization at JoVE.com

Leveraging Turbidity and Thromboelastography for Complementary Clot Characterization

فيبرين هو المسؤول عن تشكيل جلطة خلال الهباس والجلطات. يمكن استخدام المقايسات العكرة والجلطات (TEG) كأدوات تآزرية توفر تقييمًا تكميليًا للجلطة. يمكن لهذه التقنيات اثنين معا إعطاء مزيد من البصيرة في كيفية تأثير ظروف التخثر تشكيل جلطة الفيبرين.

الاستفادة من التعكر والتصوير التخثري لتوصيف الجلطات التكميلية

Thrombosis is a leading cause of death worldwide. Fibrin(ogen) is the protein primarily responsible for clot formation or&#160;thrombosis. Therefore, ...

تخثر الدم ومقايسات التعكر هما طريقتان بسيطة ومميزة لتوصيف الجلطة. توفر هذه التقنيات معًا فهمًا أكثر شمولاً لكيفية تأثير متغيرات التخثر على ميزات الجلطة. كل من هذه المقايسات، لا تقدم فقط تحليل جلطة نقطة النهاية ولكن أيضا جذب تشكيل جلطة الفيرين مع مرور الوقت، على عكس العديد من أدوات توصيف الجلطة الأخرى هذه التقنيات يمكن أن تساعد في تطوير منصة جلطة اصطناعية ذات صلة من الناحية الفسيولوجية التي يمكن أن توفر تشخيصا موثوقا للحالة اللابرينوية لمرضى تجلط الدم لرصد عكرة الجلطة مع مرور الوقت، واستخدام أي مقياس الطيف المتاحة تجاريا التي لديها مجموعة امتصاص من 350 إلى 700 نانومتر.قم بتشغيل المطياف وافتح برنامج التحليل المقابل. ثم حدد لوحة واحدة وفتح علامة التبويب إعدادات لوحة. انقر فوق ABS والحركية لمراقبة امتصاص ديناميكية مع مرور الوقت.حدد 550 نانومتر في علامة التبويب الطول الموجي، ثم التبديل إلى علامة التبويب توقيت وضبط وقت التشغيل الإجمالي إلى 60 دقيقة مع فاصل زمني من 30 ثانية، حدد الآبار من الفائدة عن طريق تسليط الضوء عليها. ماصة 140 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني في بئر واحد من الأشعة فوق البنفسجية شفافة 96 لوحة جيدا. ثم إضافة 10 ميكرولترات من ثرومبين ومزيج، والشروع فورا تخثر بإضافة 50 ميكرولتر من الفيبرينوجين إلى البئر والماصة صعودا وهبوطا خمس مرات باستخدام فقط المحطة الأولى من الماصة مع الحرص على تجنب خلق فقاعات.ضع اللوحة في حامل اللوحة وانقر فوق قراءة في البرنامج لبدء قراءة التعكر. عندما تنتهي القراءة من استرداد بيانات التعكر والحصول على منحنى تتبع التعكر عن طريق رسم تغيير الماصات مع مرور الوقت ، تستمد أقصى قدر من التعكر عن طريق أخذ أقصى قيمة امتصاص للمنحنى على مر الزمن ، ثم حساب 90 ٪ كحد أقصى التعكر بضرب التعكر الأقصى بنسبة 0.9. اشتقاق الوقت إلى التعكر الأقصى عن طريق حساب الوقت من بدء تجلط إلى 90٪ التعكر الأقصى.قم بتشغيل تحليل الجلطات أو محلل TEG، وانتظر استقرار درجة الحرارة عند 37 درجة مئوية، ثم افتح برنامج TEG وقم بإنشاء اسم تجربة تحت قسم الهوية. انقر فوق علامة التبويب TEG واتبع المطالبات التي تظهر على الشاشة لإجراء اختبار eTest لكافة القنوات. ثم ضع الرافعة مرة أخرى إلى موضع التحميل بمجرد اكتمال جميع الشيكات.انقر على تم في صفحة المعلومات وإدخال معلومات عينة للقنوات التي سيتم استخدامها. ضع كوب TEG غير المصقول في قناته المقابلة. حرك الناقل إلى الأعلى واضغط على أسفل الكأس خمس مرات لإصلاح الدبوس إلى قضيب الالتواء ثم خفض الناقل واضغط على الكأس إلى أسفل في القاعدة حتى النقرات.Pipette 20 ميكرولترات من محلول الخثار في كأس TEG ، ثم ابدأ التخثر بإضافة 340 ميكرولتر من الفيبرينوجين إلى الكأس للحصول على محلول تخثر 360 ميكرولتر. خلط محتويات الكأس عن طريق الأنابيب صعودا وهبوطا خمس مرات. حرك حامل الكوب المحملة إلى الأعلى حرك الرافعة إلى موضع القراءة وانقر فوق بدء تشغيل البرنامج لبدء قراءة TEG.بمجرد الانتهاء من القراءة استرداد المعلمات والحصول على منحنى تتبع TEG عن طريق رسم السعة على مر الزمن. انتخاب MA كما السعة القصوى، وهو ما يدل على سلالة جلطة و TMA مع مرور الوقت إلى أقصى قدر من السعة من البرنامج. يتم عرض التعكر التمثيلي ومنحنيات تتبع TEG من جلطات الفيبرين البشرية والبريينة على مستويات مختلفة من الفيبرينوجين هنا.تظهر منحنيات التتبع أنه بعد فترة التأخر التالية لبدء الجلطة ، تزداد عكرة الجلطة أو سعة الجلطة بمرور الوقت وتزداد المستويات في نهاية تشكيل الجلطة. التعكر الأقصى والوقت إلى أقصى قدر من التعكر هي المعلمتين المستمدة من العكرة، في حين يتم اشتقاق أقصى سعة والوقت إلى أقصى سعة من TEG. على مستوى أعلى من الفيبرينوجين في حل تخثر جميع القيم الأربعة زيادة.التعكر الأقصى هو مقياس بصري لهيكل الجلطة ، وهو ما يدل على سمك الألياف الفيبرين وكثافة شبكة الفيبرين. في حين أن أقصى سعة هو مقياس ميكانيكي يعكس سلالة الجلطات المطلقة ، فإن القيمتين معاً توفران رؤية مجانية حول الهياكل الدقيقة الجلطة. هذا الإجراء يوضح نموذج مبسط تخثر لدراسة المتغيرات التي تؤثر أساسا البلمرة الفيبرين.يمكن تخصيص هذا النموذج عن طريق إدراج عوامل تخثر إضافية لدراسة المعلمات الأخرى. يمكن تعديل نموذج التخثر بسهولة باستخدام عينات البلازما السريرية لرصد تشكيل الجلطة وخيبة الأمل في وجود الأدوية المضادة للثثرومبوتيك. يمكن أن توجه النتائج الإدارة العلاجية في المرضى.

Research

JoVE Journal

Medicine

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

توصيف الآليات الجزيئية لل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; الأشعة فوق البنفسجية المستحثة الساد

Cataract is the leading cause of blindness in the world 1. The World Health Organization defines cataract as a clouding of the lens of the eye which ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

العزلة، وتوصيف المقارن التمييز بين الخلايا الجذعية البشرية الأسنان اللب المستمدة من الأسنان الدائمة باستخدام طريقتين مختلفتين

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Experimental and Imaging Techniques for Examining Fibrin Clot Structures in Normal and Diseased States

تقنيات التجريبية والتصوير لدراسة الهياكل الليفين الجلطة في السليمة والمصابة الولايات

Fibrin is an extracellular matrix protein that is responsible for maintaining the structural integrity of blood clots. Much research has been done on ...

High Throughput Characterization of Adult Stem Cells Engineered for Delivery of Therapeutic Factors for Neuroprotective Strategies

عالية الإنتاجية توصيف الخلايا الجذعية البالغة المهندسة لتسليم العوامل العلاجية لاستراتيجيات اعصاب

Mesenchymal stem cells (MSCs) derived from bone marrow are a powerful cellular resource and have been used in numerous studies as potential candidates to ...

In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings

In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings

في المختبر توصيف الوظيفي للماوس القولون والمستقيم وارد النهايات

This video demonstrates in detail an in vitro single-fiber electrophysiological recording protocol using a mouse colorectum-nerve preparation. The ...

Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model

إنشاء وتوصيف UTI وCAUTI في نموذج الفأر

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. ...

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

توصيف الأنسجة بعد طريقة جديدة تصنيفها فيما يتعلق الجلد الصغرى الطعوم الجيل

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...

Echocardiographic Approaches and Protocols for Comprehensive Phenotypic Characterization of Valvular Heart Disease in Mice

النهج والبروتوكولات تخطيط صدى القلب لالشامل التوصيف المظهري لأمراض القلب الصمامية في الفئران

The aim of this manuscript and accompanying video is to provide an overview of the methods and approaches used for imaging heart valve function in ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

إعداد و<em&gt; في المختبر</em&gt; توصيف ممغنط مير تعديل الخلايا البطانية

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Development and Functional Characterization of Murine Tolerogenic Dendritic Cells

التنمية وتوصيف وظيفي للخلايا الجذعية مورين توليروجينيك

The immune system operates by maintaining a tight balance between coordinating responses against foreign antigens and maintaining an unresponsive state ...