Name: leveraging turbidity and thromboelastography for complementary clot characterization
Uploaded: 2020-06-04T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Leveraging Turbidity and Thromboelastography for Complementary Clot Characterization at JoVE.com

אף לא אחד .

1. הכנת תמיסת מלח מאגר פוספט (PBS)
הערה: PBS שימש לאורך כל מחקר זה כמו ההתארות לא דורשים תוספת של סידן. חשוב לציין כי בעת הוספת סידן, מנוצל לעתים קרובות כדי re-calcify מוצרי דם citrated, PBS יש להימנע כמו סידן ידוע לזרז במאגרי פוספט.
<ol><li>להפוך 0.01 M, pH 7.4 PBS מאגר על ידי ערבוב 137 mM נתרן כלוריד, 1.8 mM ?...

<ol>
	<li>Beckman, M. G., Hooper, W. C., Critchley, S. E., Ortel, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venous+Thromboembolism.+A+Public+Health+Concern.">Venous Thromboembolism. A Public Health Concern.</a> American Journal of Preventive Medicine. 38, 495-501 (2010).</li><li>Goldhaber, S. Z., Bounameaux, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+embolism+and+deep+vein+thrombosis.">Pulmonary embolism and deep vein thrombosis.</a> The Lancet. 379 (9828), 1835-1846 (2012).</li><li>Weisel, J. W., Litvinov, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+fibrin+polymerization+and+clinical+implications.">Mechanisms of fibrin polymerization and clinical implications.</a> Blood. 121 (10), 1712-1719 (2013).</li><li>Weisel, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+assembly.+Lateral+aggregation+and+the+role+of+the+two+pairs+of+fibrinopeptides.">Fibrin assembly. Lateral aggregation and the role of the two pairs of fibrinopeptides.</a> Biophysical Journal. 50 (6), 1079-1093 (1986).</li><li>Tripathi, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+evaluation+of+whole+blood+prothrombin+time+(PT)+and+international+normalized+ratio+(INR)+using+a+Laser+Speckle+Rheology+sensor.">Clinical evaluation of whole blood prothrombin time (PT) and international normalized ratio (INR) using a Laser Speckle Rheology sensor.</a> Scientific Reports. 7 (1), 1-8 (2017).</li><li>Ryan, E. A., Mockros, L. F., Weisel, J. W., Lorand, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+origins+of+fibrin+clot+rheology.">Structural origins of fibrin clot rheology.</a> Biophysical Journal. 77 (5), 2813-2826 (1999).</li><li>Carr, M. E., Hermans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+and+Density+of+Fibrin+Fibers+from+Turbidity.">Size and Density of Fibrin Fibers from Turbidity.</a> Macromolecules. 11 (1), 46-50 (1978).</li><li>Carr, M. E., Shen, L. L., Hermans, J. A. N., Chapel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mass-Length Ratio of Fibrin Fibers from Gel Permeation and Light Scattering. 16, 1-15 (1977).</li><li>Gabriel, D. A., Muga, K., Boothroyd, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Effect of Fibrin Structure on Fibrinolysis. , 24259-24263 (1992).</li><li>Wolberg, A. S., Gabriel, D. A., Hoffman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+fibrin+clot+structure+using+a+microplate+reader.">Analyzing fibrin clot structure using a microplate reader.</a> Blood Coagulation and Fibrinolysis. 13 (6), 533-539 (2002).</li><li>da Luz, L. T., Nascimento, B., Rizoli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombelastography+(TEG):+practical+considerations+on+its+clinical+use+in+trauma+resuscitation.">Thrombelastography (TEG): practical considerations on its clinical use in trauma resuscitation.</a> Scandinavian Journal of Trauma, Resuscitation and Emergency Medicine. 21 (1), 29 (2013).</li><li>Whitten, C. W., Greilich, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thromboelastography:+past,+present,+and+future+.">Thromboelastography: past, present, and future .</a> Anesthesiology: The Journal of the American Society of Anesthesiologists. 92 (5), 1223-1225 (2000).</li><li>Ranucci, M., Laddomada, T., Ranucci, M., Baryshnikova, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+viscosity+during+coagulation+at+different+shear+rates.">Blood viscosity during coagulation at different shear rates.</a> Physiological Reports. 2 (7), 1-7 (2014).</li><li>Zeng, Z., Fagnon, M., Nallan Chakravarthula, T., Alves, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+clot+formation+under+diverse+clotting+conditions:+Comparing+turbidimetry+and+thromboelastography.">Fibrin clot formation under diverse clotting conditions: Comparing turbidimetry and thromboelastography.</a> Thrombosis Research. 187, 48-55 (2020).</li></ol>

פרוטוקול זה מדגים את הניצול של שני כלים ייחודיים לאפיון קרישי דם בדיקת מודל קרישי פיברינוגן/טרומבין פשוט באמצעות רכיבים זמינים מסחרית. גם TEG וגם אסות טורביות קלות להתנהלות. הם לא רק מספקים בדיקות קריש קצה כגון היווצרות קריש מרבי (TurbTime Max ו TEGMax)וזמן היווצרות קריש דם (זמן טור...

פקקת היא היווצרות פתולוגית של קריש דם בגוף שחוסם את זרימת הדם המובילה לתמולות ותמותה גבוהות ברחבי העולם. ישנם 1-2 מקרים של פקקת ורידים ו 2-3 מקרים של פקקת המושרה מחלות כלי דם לכל 1000אנשים מדי שנה 1,,2. מוצג כאן היא שיטה מינוף טרומבולסטוגרפיה (TEG) וטורביות כדי לפקח על היווצרות קריש תחת תנאי קרישה שונים. פיברין (אוגן) הוא החלבון העיקרי האחראי על היווצרות קריש דם בגוף. בשלבים האחרונים של מפל קרישה, פיברינופטידים הם קצוצים פיברינוגן על ידי טרומבין ייזום הפולימר של מונומרים פיברין מסיסים כמו קרישמפתחת 3,,4. כדי להבין היווצרות קריש ים בפקקת פתולוגית, יש צורך לאפיין היווצרות פיברין בנסיבות קרישה מגוונות. מספר ניטור קרישים נעשה שימוש כדי ללמוד היווצרות קריש פיברין במבחנה. זמן פרותרומבין (PT/INR) וזמן טרומבופלסטיקן חלקי פעיל (aPTT) הם שני נושאים קליניים נפוצים המודדים את השלמות של מסלול קרישה ספציפי. עם זאת, הם משתמשים בזמן כמשתנה היחיד שלא נותן שום אינדיקציה של תכונות קריש פיזי5. מיקרוסקופאלקטרונים מאפשר הדמיה של המיקרו-מבנה של קריש פיברין שנוצר לחלוטין, אך אינו מספק מידע על תהליך יצירת הקריש עצמו6. בין כל ההתבטאויות, ההתבטאות הסוערת וה-TEG מציעות את היכולת לעקוב אחר מאפייני קריש דם באופן דינמי לאורך זמן. טכניקות אלה מאפשרות מידה של פרופילי קרישה מקיפים ולכן, לספק תועלת מסוימת על פני כלים אחרים אפיון קריש פיברין.
באופן ספציפי, תקרת טורבידיות (או turbidimetry קריש) משמש נרחב עבור מחקר ויישומים קליניים בשל הטמעתו פשטנית ואת הנגישות הרחבה של ספקטרומטרים במעבדות מחקר. אסייד זה מאפשר מדידה דינמית של שידור אור באמצעות קריש דם יוצר על ידי לקיחת קריאות חוזרות בודדות באורך גל מוגדר (הנפוץ ביותר באורך גל בטווח של 350 – 700 נק')7. ניתן גם להתאים את הטמפרטורה בתא הקריאה. כמו צורות ג'ל פיברין, כמות האור שעובר דרך רשת החלבון מופחתת גורם לעלייה בספיגה לאורך זמן. באופן דומה, הספיגה פוחתת כאשר רשת הקרישים מתדרדרת. ניתן בקלות לבצע את ההכפלה של Turbidity באמצעות תבנית צלחת מרובת בארות כדי לאפשר הקרנה של מדגם תפוקה גבוהה הן ב-96 ו-384 בארות. מספר מאפייני קריש ניתן לגזור עקומת מעקב turbidity (ספיגה לאורך מדידת זמן) הכוללים: מערבולת מקסימלית, זמן למערבולת מקסימלית, זמן לתחילת קריש, וקצב היווצרות קריש (Vmax). יחס מסה/אורך סיב פיברין יכול גם להיות נגזר מנתוני מערבולת גולמית כדי להעריךעובי סיבים פיברין 8,9,10.
TEG מנוצל בעיקר בסביבה הקלינית כדי להעריך את ההמוסטזיס של המטופלים ואת הליזה קריש. הוא משמש גם ביישומים כירורגיים כדי לקבוע מתי תרופות אנטי-פיברינוליטיות או מוצרי דם המוסאטיים צריך להינתן11,,12. היווצרות קריש מתרחשת בתוך TEG עם כל רכיבי קרישת ההתווספו לספל לפני החניכה של ההסתה. הספל, עם קריש דם מתפתח, מסתובב פיזית כנגד סיכה המוכנסת למרכזה וחיישן פיתול אלקטרומכני מודד את הכוח ההולך וגדל של הקריש. אסייפ זה מתבצע בדרך כלל בטמפרטורה הפיזיולוגית של 37 °C; עם זאת, ניתן לכוונן את הטמפרטורה באופן ידני על המכשיר. משרעת מקסימלית (MA), קצב תגובה (R), זמן קינטיקה (K), α-זווית (זווית) וזמן למשרעת מקסימלית (TMA) מופקים על-ידי תוכנת TEG ממעקב TEG דינמי. ערכים אלה מושווים בדרך כלל עם טווחים נורמליים קליניים כדי להעריך את מצב קרישה של המטופל. בעוד TEG הוא לא בדיוק viscometer, כפי שהוא מודד כוח קריש ביחידות מילימטר, זה מספק נתוני קריש ויסות ופונקציות חשובות ככלי קבלת החלטות קליניות יקרות ערך עבור רופאים להחליט לנהל מוצרי דם ספציפיים ולהתאים מינוןטיפולי 13. כאשר הן TEG והן מערבולת assays מנוצלים יחד, הם מספקים מידע אפיון קריש משלים כמו כוח קריש קינטיקה מופקים בקלות מ TEG ועובי סיבים פיברין ניתן לגשת על ידי מדידות turbidity אופטי.
כמו fibrin הוא מרכיב קריטי של קריש דם, אפיון קריש פיברין בתנאים מגוונים היווצרות קריש יכול לספק תובנה חשובה כיצד משתנה מסוים תורם לתהליך היווצרות קריש ומאפייני קריש דם האולטימטיבי. הבנת זה יכול לספק הדרכה לאבחון פקקת ופיתוח של טיפולית. כדי להשיג אפיון קריש פיברין מייצג יותר, פלזמה ניתן להחליף כדי לפקח על היווצרות קריש כפי שהוא דומה בתנאי קרישת vivo יותר מקרוב מאשר מערכת מודל פיברינוגן/ טרומבין פשוטה. עם זאת, בשל האופי המורכב של מפל קרישה, היווצרות קריש באמצעות פלזמה מוסיף למורכבות, מה שהופך את זה קשה יותר לבודד את ההשפעה של גורמים בודדים. שימוש במודל פיברינוגן/טרומבין פשוט מונע את הצורך ליזום את כל מפל הקרישה המאפשר בידוד של שלב היווצרות פיברין הסופי. על ידי הכללת שני רכיבים עיקריים ליצירת פיברין (פיברינוגן ותרומבין), התקנה זו יוצרת מצב היווצרות קריש מבוקר מאוד. חשוב גם לציין כי בעוד מודל קרישי דם פשוטה משמש כאן, פרוטוקול זה יכול לשמש גם כדי לאפיין קרישי דם מורכבים יותר על ידי הכללת גורמי קרישה נוספים. במחקר זה, אפיון קריש פיברין באמצעות turbidity ו TEG מתבצעים על ידי ריכוזי פיברינוגן ותרומבין שונים, כוח יוני, pH, וריכוז חלבון כולל בתמיסת קרישה לחקות שונה בנסיבות קרישת vivo14. פרטים אודות וריאציות אלה בפרוטוקול נכללו בסעיף 5.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-Well Clear Flat Bottom UV-Transparent Microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3635</td>
			<td>Non-treated acrylic copolymer, non-sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin from human serum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>A1653</td>
			<td>&#8805;96%, lyophilized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arium Mini Plus Ultrapure Water System</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>NA</td>
			<td>DI water source</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>A2153</td>
			<td>&#8805;96%, lyophilized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Cups and Pins for TEG 5000 (Clear)</td>
			<td>Haemonetics</td>
			<td>REF 6211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen, Bovine Plasma</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>341573</td>
			<td>contains more than 95% clottable protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen, Plasmingogen-Depleted, Human Plasma</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>341578</td>
			<td>Contains &#8805; 95% clottable proteins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P3813</td>
			<td>Powder, pH 7.4, for preparing 1 L solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>60130</td>
			<td>&#8805;99.5% purity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P9791</td>
			<td>&#8805;98% purity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SevenEasy pH Meter</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>S20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>71378</td>
			<td>&#8805;99.5% purity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>71636</td>
			<td>&#8805;99.5% purity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpectraMax M5 multi-detection microplate reader system</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>M5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEG 5000 Thrombelastograph Hemostasis analyzer system</td>
			<td>Haemonetics</td>
			<td>07-022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin, Bovine</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>605157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin, Human Plasma, High Activity</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>605195</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

leveraging turbidity and thromboelastography for complementary clot characterization

פקקת היא סיבת מוות מובילה ברחבי העולם. פיברין (אוגן) הוא החלבון האחראי בעיקר על היווצרות קריש דם או פקקת. לכן, אפיון היווצרות קריש פיברין הוא מועיל לחקר פקקת. טורבידיות וטרומבולסטוגרפיה (TEG) הן שניהם מנוצלים באופן נרחב במבחנה אסרות לניטור היווצרות קריש. Turbidity מודד באופן דינמי את העברת האור באמצעות מבנה קריש פיברין באמצעות ספקטרומטר והוא משמש לעתים קרובות במעבדות מחקר. TEG היא טכניקה ויסקולסטית מיוחדת המודדת ישירות את עוצמת קריש הדם והוא מנוצל בעיקר בהגדרות קליניות כדי להעריך את המוסטאזיס של המטופלים. בעזרת שני כלים אלה, מחקר זה מתאר שיטה לאפיון קריש דם במבחנה פיברין באמצעות מודל קרישי פיברינוגן/טרומבין פשוט. מגמות נתונים על פני שתי הטכניקות הושוו בתנאי קרישה שונים. קרישי פיברין אנושיים ובצק נוצרו זה לצד זה במחקר זה כמו גורמי קרישת בקרישת בקר משמשים לעתים קרובות כתחליף גורמי קרישה אנושיים בהגדרות קליניות ומחקר. התוצאות מוכיחות כי TEG ו- turbidity לעקוב אחר היווצרות קריש דם באמצעות שתי שיטות נפרדות וכאשר מנוצל יחד לספק כוח קריש משלים ומידע מבני סיבים על פני תנאי קרישה מגוונים.

הניסויים המוצגים באיור 1 הם עקומות מעקב טורבינות מייצגות של קרישי פיברין אנושיים ושורים ברמות פיברינוגן שונות. נציג TEG עקומות מעקב עבור היווצרות קריש פיברין ברמות פיברינוגן שונות מוצגים איור 2. שתי עקומות המעקב מוכיחות כי לאחר תקופת השהיה לאחר חניכת קריש ד?...

Watch this Scientific Journal Video about Leveraging Turbidity and Thromboelastography for Complementary Clot Characterization at JoVE.com

Leveraging Turbidity and Thromboelastography for Complementary Clot Characterization

פיברין אחראי על היווצרות קריש במהלך המוסטאזיס ופקקת. אסמים סוערים וhromboelastograhy (TEG) יכול להיות מנוצל ככלים סינרגטיים המספקים הערכה משלימה של קריש דם. שתי טכניקות אלה יחד יכולות לתת תובנה נוספת כיצד תנאי קרישה משפיעים על היווצרות קריש פיברין.

מינוף טורבידיות וטרומבולסטוגרפיה לאפיון קרישי דם משלימים

Thrombosis is a leading cause of death worldwide. Fibrin(ogen) is the protein primarily responsible for clot formation or&#160;thrombosis. Therefore, ...

תרומבולסטוגרפיה ומבחן ת'רוביות הן שתי שיטות פשוטות ומיוחדות לאפיון קרישי דם. טכניקות אלה יחד מציעות הבנה מקיפה יותר של האופן שבו משתני קרישה משפיעים על תכונות קריש. שתי התשקיף הזה, לא רק להציע ניתוח קריש נקודת קצה, אלא גם למשוך היווצרות קריש פיברין לאורך זמן, בניגוד לכלים רבים אחרים אפיון קריש דם טכניקות אלה יכולות לעזור לפתח פלטפורמת קריש סינתטי רלוונטי מבחינה פיזיולוגית שיכולה לספק אבחנה אמינה של המצב הפיברינוליטי של חולי פקקת כדי לפקח על טורבידיות קריש לאורך זמן, להשתמש בכל ספקטרומטר זמין מסחרית שיש לו טווח ספיגה של 350 עד 700 ננומטר.הפעל את הספקטרומטר ולפתוח את תוכנת הניתוח המתאימה. לאחר מכן בחרו לוח אחד ופתחו את לשונית הגדרות הלוח. לחץ על ABS וקינטי כדי לפקח על ספיגה דינמית לאורך זמן.בחר 550 ננומטרים בכרטיסיה אורך הגל ולאחר מכן עבור ללשונית התזמון והתאם את זמן הריצה הכולל ל- 60 דקות עם מרווח זמן של 30 שניות, בחר את הבארות המעניין על-ידי הדגשתן. פיפטה 140 microliters של PBS לתוך באר אחת של צלחת UV שקוף 96 היטב. לאחר מכן מוסיפים 10 מיקרוליטרים של תרומבין ומערבבים, מיד ליזום קרישה על ידי הוספת 50 microliters של פיברינוגן לבא ו פיפטה למעלה ולמטה חמש פעמים באמצעות התחנה הראשונה בלבד של פיפטה דואג להימנע מיצירת בועות.מניחים את הצלחת במחזיק הצלחת ולחץ לקרוא בתוכנה כדי להתחיל את קריאת turbidity. כאשר הקריאה סיימה לאחזר את נתוני העכור ולקבל עקומת מעקב עגמומיות על ידי התוויית השינוי סופג לאורך זמן, להפיק עגמומיות מקסימלית על ידי לקיחת ערך הספיגה המרבי של העקומה לאורך זמן, ולאחר מכן לחשב 90% עגמומיות מקסימלית על ידי הכפלת עשב מקסימלי על ידי 0.9. לגזור את הזמן כדי עגימות מקסימלית על ידי חישוב הזמן של אתחול קריש ל 90% עגימות מקסימלית.הפעל את thromboelastography או מנתח TEG, ולחכות לטמפרטורה להתייצב ב 37 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן לפתוח את תוכנת TEG וליצור שם ניסוי תחת סעיף מזהה. לחץ על הכרטיסיה TEG ופעל לפי ההנחיות המופיעות על המסך כדי לבצע בדיקת eTest עבור כל הערוצים. לאחר מכן מקם את הידית בחזרה למיקום העומס לאחר השלמת כל הבדיקות.לחץ על בוצע בדף המידע והקלט מידע לדוגמה עבור ערוצים בהם ייעשה שימוש. מניחים TEG לא צותת ברורה בערוץ המתאים. החלק את המוביל למעלה ולחץ על הקאפ למטה חמש פעמים כדי לתקן את הסיכה למוט פלג הגוף העליון ולאחר מכן להוריד את המוביל ולחץ את ה כלפי מטה לתוך הבסיס עד שהוא לוחץ.פיפטה 20 microliters של פתרון תרומבין לתוך TEG, ולאחר מכן ליזום קרישה על ידי הוספת 340 microliters של פיברינוגן לתוך ה כדי להשיג פתרון קרישת 360 microliter. מערבבים את תכולת ה על ידי צינור למעלה ולמטה חמש פעמים. החלק את נושאת הגביע שנטענה מעלה הזז את הידית למיקום הקריאה ולחץ על התחל בתוכנה כדי ליזום את קריאת ה- TEG.לאחר השלמת הקריאה לאחזר את הפרמטרים ולקבל עקומת מעקב TEG על ידי התוויית משרעת לאורך זמן. בחר MA כמו משרעת מקסימלית, אשר מעיד על זן קריש ו TMA כזמן משרעת מקסימלית מהתוכנה. מערבולת ייצוגית ועקומות מעקב TEG של קרישי פיברין אנושיים וחזירים ברמות פיברינוגן שונות מוצגים כאן.עקומות המעקב מראות כי לאחר תקופת השהיה לאחר התחלת קריש, קלוביות קריש או משרעת קריש עולה לאורך זמן ורמות כבויות בסוף היווצרות קריש. מערבולת מקסימלית וזמן עד מערבולת מקסימלית הם שני הפרמטרים הנגזרים מערבולת, בעוד משרעת מקסימלית וזמן משרעת מקסימלית נגזרים TEG. ברמה גבוהה יותר של פיברינוגן בתספור הקרישה כל ארבעת הערכים גדלים.מערבולת מקסימלית היא מדד אופטי של מבנה קריש, אשר מעיד על עובי סיבים פיברין וצפיפות רשת פיברין. בעוד משרעת מקסימלית היא מדד מכני המשקף זן קריש מוחלט, נלקח יחד שני הערכים לספק תובנה משלימה על מבני מיקרו קריש. הליך זה מדגים מודל קרישה פשוט יותר כדי לבחון משתנים המשפיעים בעיקר על פילמור פיברין.מודל זה יכול להיות מותאם אישית על ידי הכללת גורמי קרישה נוספים כדי ללמוד פרמטרים אחרים. מודל הקרישה ניתן לשנות בקלות באמצעות דגימות פלזמה קלינית כדי לפקח על היווצרות קריש והתפכחות בנוכחות תרופות antithrombotic. תוצאות יכולות להנחות ניהול טיפולי בחולים.

Research

JoVE Journal

Medicine

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

אפיון מנגנונים מולקולריים של<em&gt; בחי</em&gt; UVR מושרה קטרקט

Cataract is the leading cause of blindness in the world 1. The World Health Organization defines cataract as a clouding of the lens of the eye which ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

בידוד, אפיון והשוואתי התמיינות של תאי גזע אנושיים שיניים זולות נגזרה שיניים קבועות על ידי שימוש בשתי שיטות שונות

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Experimental and Imaging Techniques for Examining Fibrin Clot Structures in Normal and Diseased States

טכניקות ניסיוניות והדמיה לבחינת מבני פיברין קריש בבריאה והחולה הברית

Fibrin is an extracellular matrix protein that is responsible for maintaining the structural integrity of blood clots. Much research has been done on ...

High Throughput Characterization of Adult Stem Cells Engineered for Delivery of Therapeutic Factors for Neuroprotective Strategies

תפוקה אפיון גבוה של תאי גזע בוגרי תכנון הנדסי למשלוח גורמים טיפוליים לאסטרטגיה הגנה עצבית

Mesenchymal stem cells (MSCs) derived from bone marrow are a powerful cellular resource and have been used in numerous studies as potential candidates to ...

In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings

In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings

באפיון פונקציונלי מבחנה של עכבר המעי הגס מביא Endings

This video demonstrates in detail an in vitro single-fiber electrophysiological recording protocol using a mouse colorectum-nerve preparation. The ...

Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model

ההקמה ואפיון של UTI וCAUTI במודל עכבר

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. ...

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

אפיון רקמות לאחר שיטה חדשה חלוקה לעור מיקרו שתלי הדור

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...

Echocardiographic Approaches and Protocols for Comprehensive Phenotypic Characterization of Valvular Heart Disease in Mice

גישות פרוטוקולים אקו לאפיון פנוטיפי מקיף של מסתמית מחלות לב בעכברים

The aim of this manuscript and accompanying video is to provide an overview of the methods and approaches used for imaging heart valve function in ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

הכנה<em&gt; במבחנה</em&gt; אפיון ממוגנטים miR-modified לתאי אנדותל

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Development and Functional Characterization of Murine Tolerogenic Dendritic Cells

פיתוח ואפיון פונקציונאלי של תאים דנדריטים מאתר Tolerogenic

The immune system operates by maintaining a tight balance between coordinating responses against foreign antigens and maintaining an unresponsive state ...